两种磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白

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磁分离酶联免疫法检测AFP

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ＲｅｕｔＥｔｂｓｅｅＭＡＡｆｒｄｔｉｇＡＦｕｃｓｆｌ．ｈｍｉｖｔｆｈＩｔｏａ．ＵｍｌｔｅｌｅａｇｓｌｓｓｌｈｄｔＩｏｅｃｎＰｓｃｅｓｌＴｅｓｔｉｏｅＭＡＡｍｅｈｄｗｓ０２Ｉ／，ｈｎａｒｎｅａｉｈｔｕｙｏｉｙｔｉｒ
（．１首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心，北京１０５；．０００２北京倍爱康生物技术有限公司；
３安阳市肿瘤医院检验科）．
摘要：目的建立检测甲胎蛋白（Ｆ）ＡＰ的磁分离酶联免疫法（ｇｅｃａｍｔｉｍｎａｓｙＭＡＡ。方法Ｍａｎｔｆｉｕｏｓ，Ｉ）ｉｙｍａ
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１７－— ４２ — 。 —
文章编号：０７２７２０）Ｉ４７４１０ —４８（０８ｌ一１２ —０
磁分离酶联免疫法检测ＡＰＦ
韩金利一周亚莉张国军王雅杰方，，，，，芳吕虹耿会娟张，，，果刘振世陈立杰康熙雄，，，
Ｗ２—５０Ｕ／，ｅｉｔ－ｄｉｔｒａｓｙｖｒｔｎｗｒ．％一９．％ａｄ１６一９．ｓａ０．１Ｉｍｌｔｒａｅ－ａａｉｉｅｅ５５ｈｎａｎｎｓａｏ３ｎ．％７％ｒｓｅｔｅｙｔｅａｄｔｎａｄｄｌ — ｅｐｃｖｌ，ｄｉｏｉｉｈｉｎｕ

细胞与分子免疫学：酶联免疫吸附试验(ELISA)——测甲胎蛋白(AFP)

常用的ELISA方法包括：间接法、双抗体夹心法、竞争法等。
一、ELISA双抗体夹心法测AFP原理
用抗AFP抗体包被固相载体，加入待检标本，标本中的AFP与固相载体上的抗体结合，再加入酶标记的抗AFP抗体，形成抗体-抗原酶标抗体复合物，加底物显色，颜色的深浅与相应AFP的量呈正相关。
二、试剂材料
2、37℃反应20min。
3、洗涤：各孔加入2滴洗涤液，混匀后倾去，用DW或自来水加满各孔，甩掉，反复5次，最后在吸水纸上拍干酶标板。
4、每孔加入酶结合物2滴（37℃孵育15min）
5、洗涤：重复步骤“3”
6、显色：每孔加底物和显色液各1滴，轻轻振摇，室温暗处避光显色5min，加入2M H2SO4 100l（2滴）终止反应。
1、AFP检测试剂盒 2、AFP参考标准液（0、25、50、100、200、
400ng/ml）。 3、DW 4、终止液（2M H2SO4）。 5、酶标测定仪、37℃温箱。 6、微量加样器、滴管、吸水纸等。
三、方法
1、加样：取一条包被好的酶标板（7孔），标记后，第1-6 孔分别加入AFP参考标准液（0、25、50、100、200、 400ng/ml）各100l。第7孔加入样品100l。
7、在波长（450nm）用酶标仪测OD值
四、结果判断
用酶标仪进行比色，以0 ng/ml标准孔为空白孔，在波长450nm处分别读取各标准孔和样本孔OD值，以OD值为横坐标，AFP含量为纵坐标，在半对数坐标纸上画出标准曲线，以测定孔的OD值在标准曲线上查出相应标本的AFP含量。
参考范围：正常成人AFP含量＜20ng/ml。
酶联免疫吸附试验（ELISA） ——测甲胎蛋白（AFP）
原理：
抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍保持其活性；抗原或抗体与酶交联成酶标抗原或抗体后，仍分别保持其免疫活性和酶活性。

不同方法检测正常人群血清甲胎蛋白比较

ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆＡＦＰｗｉｔｈｌｉｔｔｌｅｄｉｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅａｎｄＥＬＩＳＡａｓｓａｙ，ａｎｄｓｐｅｃｉｉｆｃｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ，ａｌｐｈａ－ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎｌｐａｈａ－ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｗｉｔｈｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｓｍｏｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｂｌｏｏｄｅｎｚｙｍｅｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ａｌｐｈａ — ｆｔｏｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｃｈｅｍｉｃｌａ
用化学发光法定量检测ＡＦＰ，可保证排除ＡＦＰ假阳性。
【关键词】甲胎蛋白；酶联免疫吸附试验；化学发光法
ＴｈｅＣｏｍｐａｒａｂｉｌｉｔｙｏｆＡＦＰｉｎＨｅａｌｔｈｗｉＨＥＮＷｅｉ－ｗｅｎ，ＬＩＵＸｕｅ —ｈｕｉ，ＷＵＬｉ —ｍｅｉ，ｅｔａｌＪｆＭｅｄｉａｌｅＩｎｎｏｖａｔｉｏｎｏｆ
ａｎｄｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅ２０００ｓｅｒｕｍｓａｍｐｌｅｓｏｆｐｈｙｓｉｃａｌｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＡＦＰｕｓｅｄＥＬＩＳＡａｎｄｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｔｅｓｔｍｅｔｈｏｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔ：１７ｃａｓｅｓｏｆＡＦＰｂｙＥＬＩＳＡａｓｓａｙｐｏｓｉｔｉｖｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓ，ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＡＦＰａｂｏｖｅｔｈｅ

两种方法检测血清甲胎蛋白的比较研究

1.1.3仪器与试剂实验组为苏州长光华医EVERESYS A1800化学发光测定仪，试剂为配套甲胎蛋白(AFP)测定试剂盒；对照组为瑞士Roche cobas e602电化学发光免疫分析仪，试剂为Roche配套甲胎蛋白(AFP)电化学发光法试剂盒。校准品分别为长光华医及Roche的专用校准品，质控品均为Roche提供的冻干质控品。
两种方法检测血清甲胎蛋白的比较研究
摘要】目的：通过对本实验室内使用的化学发光法和电化学发光法系统对血清中甲胎蛋白（AFP）含量进行测定比对，探讨二者间结果是否具有可比性。方法：根据美国国家实验室标准委员（NCCLS）的EP9-A2文件，收集50例本院就诊患者及健康体检人群血清标本，以Rochee602电化学发光免疫分析仪为对比仪器（x），长光华医A1800化学发光测定仪为实验仪器（y），同时检测血清中AFP的含量，分析两种化学发光仪测定结果之间的相关性和2种方法检测结果的一致性。结果：2种仪器测定的结果具有良好相关性(r=0.996)，一致率为94%。结论：在严格按照操作规程进行检测的前提下，2种方法测定结果基本一致，实验仪器能基本满足临床检测需要。
1.3.2绘制散点图散点图Y轴：实验方法每样本双份测定的均值；X轴：对比方法每样本双份测定的均值。
1.3.3线性回归方程和相关系数(r)采用SPSS19.0软件对测定结果数据进行统计分析，以对比方பைடு நூலகம்为x变量，实验方法为y变量，得出线性回归方程Y=bX+a及相关系数r；并计算出在医学决定水平处（Xc），两种方法的预期偏差[4]。
1.2.4样本测定按EP9-A2文件的要求，每天测定8份样本，分别用实验组方法和对照组方法进行双份测定，连续测定7d。测定时先对样本用1至8号排序，按顺序1～8测定第1次，顺序8～1测定第2次。测定在2h内完成[4]。

两种磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白

两种磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白徐兵;徐如梅;张建钫;沈菁;石英;伍严安【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2010(031)011【摘要】目的改进磁分离酶联免疫法(MEIA).方法采取预加微量标本、将磁铁置于微孔条侧壁和扣除上清液A值法,改良MEIA并建立了"差异磁分离酶联免疫法"(differential magnetic enzyme immunoassay,DMEIA).求DMEIA法的线性范围、回归方程、变异系数(CV),比较了MEIA和DMEIA配对检测100份血清AFP 结果差异.结果 DMEIA法检测AFP的回归方程Y=3.94X+16.45,r=0.992,线性范围5～500 ng/mL,批内CV=7.7%,批间CV=8.5%;DMEIA法和MEIA法测定血清AFP值差异无统计学意义(t检验,P>0.05),直线回归方程Y=3.418X+70,r=0.981,两法相关良好;检测原倍高浓度AFP时DMEIA法未出现(MEIA法出现)hook效应.结论 DMEIA法可克服hook效应,可用普通微孔板和酶标仪比色,可省去洗涤步骤,检测AFP结果(<500 ng/mL时)与MEIA法无明显差异.【总页数】3页(P1260-1261,1264)【作者】徐兵;徐如梅;张建钫;沈菁;石英;伍严安【作者单位】福州市传染病医院肝病研究所,福州,350025;福建省立医院检验科,福州,350001;福建省立医院检验科,福州,350001;福建省立医院检验科,福州,350001;福建省立医院检验科,福州,350001;福建省立医院检验科,福州,350001【正文语种】中文【中图分类】R446.61【相关文献】1.磁分离酶联免疫法检测IL-4方法的建立 [J], 王东琳;朱勇;李琦;刘振世;谢晶;欧阳为明;金伯泉2.差异磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的研究 [J], 徐兵;陈纯美;徐如梅;张建钫;伍严安3.磁分离酶联免疫法检测AFP [J], 韩金利;陈立杰;康熙雄;周亚莉;张国军;王雅杰;方芳;吕虹;耿会娟;张果;刘振世4.磁分离酶联免疫法检测SCC-Ag的方法学研究 [J], 周敏;陆仁飞;杨旻5.酶联免疫法与电化学发光法检测血清甲胎蛋白肿瘤标志物结果的对比分析 [J], 李勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甲胎蛋白测定方法

甲胎蛋白测定方法
甲胎蛋白是宫内妊娠期间表现为显著升高的一种细胞囊性蛋白，它可以在血液和尿液中检测出，由于其在精确诊断妊娠的期间可以起到非常重要的作用，因此检测甲胎蛋白的方法一直以来都是非常普遍的。

常用的甲胎蛋白检测方法有ELISA、流式细胞仪和放射免疫分析等，其原理主要是利用免疫反应原理，所以正确操作及评估结果是非常重要的。

(1) ELISA：ELISA即酶联免疫吸附分析，是一种检测甲胎蛋白浓度的定量检测方法。

ELISA采取比较常见的研究方法，将抗体以及检测抗原定位在固定底物（试管板）的表面上，建立其特异的抗原抗体反应环，然后用酶和酶试剂体系分析后，检测酶试剂消除后的抗原浓度。

(2) 流式细胞仪：流式细胞仪是一种能够检测微量吞噬性细胞因子，如甲胎蛋白在血液核心内的浓度的检测方法。

该检测原理基于混合抗体反应，混合到样本中的标记同抗体与细胞内抗原结合，可以显示出被检测物质在核心内的浓度。

(3) 放射免疫分析：放射免疫分析是一种采用放射性标记的抗体，检测甲胎蛋白在体内的浓度的检测方法。

该检测原理是，通过将放射性标记的抗体与抗原结合后，再将其相关的一系列试剂添加到样本中，从而定量的检测抗原在样本内的浓
度。

磁分离酶联免疫法检测AFP

磁分离酶联免疫法检测AFP韩金利;陈立杰;康熙雄;周亚莉;张国军;王雅杰;方芳;吕虹;耿会娟;张果;刘振世【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2008(012)011【摘要】目的建立检测甲胎蛋白(脚)的磁分离酶联免疫法(Magnetic affinity inmlunoassay,MAIA).方法采用双抗体夹心法,用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)分别标记识别不同表位的两种抗AFP单克隆抗体(mAb)4A3和5H7,以偶联羊抗Frrc mAb包被的免疫磁珠作为固相载体,单磷酸酚酞(phenolphthalein monophosphate,PMP)做显色底物,建立检测AFP的MAIA法.结果成功实现了用MAIA法对AFP的定量检测,其检测灵敏度0.2IU/ml,线性范围0.2-510IU/ml,批内CV5.5%-9.3%,批间CV1.6%-9.7%.添加回收率101.4%-104.9%,稀释回收率78.3%-123%.与雅培AxSYM及i2000的检测结果对比,相关系数分别为0.984和0.985.结论 MAIA法的性能优于现有的ELISA和RIA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的AFP测定试剂盒.【总页数】4页(P1427-1430)【作者】韩金利;陈立杰;康熙雄;周亚莉;张国军;王雅杰;方芳;吕虹;耿会娟;张果;刘振世【作者单位】首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;安阳市肿瘤医院,检验科,北京,100050;北京倍爱康生物技术有限公司,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心,北京,100050;北京倍爱康生物技术有限公司,北京,100050【正文语种】中文【中图分类】R392-33【相关文献】1.两种磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白 [J], 徐兵;徐如梅;张建钫;沈菁;石英;伍严安2.差异磁分离酶联免疫法检测血清甲胎蛋白的研究 [J], 徐兵;陈纯美;徐如梅;张建钫;伍严安3.磁分离酶联免疫法检测SCC-Ag的方法学研究 [J], 周敏;陆仁飞;杨旻4.化学发光免疫法与酶联免疫法检测AFP的比较 [J], 赵德臣;张瑜5.酶联免疫法和化学发光免疫法检测血清AFP的比较 [J], 洪霞;吴红波因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

甲胎蛋白发光法和酶免法

甲胎蛋白发光法和酶免法甲胎蛋白发光法和酶免法，这俩玩意儿听起来很高大上，但其实说起来也没那么复杂。

甲胎蛋白，咱们简称“AFP”，是咱们体内一种很重要的蛋白质，通常在胎儿发育的时候会高产，而成年人身体里要是发现它过多，嘿，那可能就有点问题了。

这时候，医生可就得拿出一些工具来，帮你测测到底咋回事。

发光法就是其中之一，听上去是不是挺神秘？其实就是利用一些化学反应，能够在你样本里发出亮闪闪的光，想想就像在黑暗中找星星一样。

咱们只要照一照，就能看到那微弱的光，嘿，这就意味着咱们的AFP 水平了。

接着咱们说说这个酶免法，听着像是个高深的科学名词，其实也不难懂。

酶免法就像在做一道美味的菜，咱们需要一些“调味料”，这些调味料就是酶。

酶的好处在于，它们能加速反应，让测试更迅速、更准确。

这个方法就是通过抗体和抗原之间的亲密接触，酶会在其中发挥作用，产生一种信号，咱们再根据这个信号就能知道AFP的含量，哎呀，这样一来，结果不仅快，还很靠谱。

你可能会想，哎呀，做这个检测是不是很麻烦呢？其实并不是。

发光法和酶免法在实验室里都挺流行的，操作简单得很。

技术人员只要跟着流程走，像是过家家一样，几步就能完成。

其实做这类检测的过程，就像是在进行一场小小的科学实验，每一步都有它的意义和乐趣。

你可能在旁边等着，像个观众，看到那些试剂在试管里翻滚，心里也是挺好奇的。

再说了，随着科技的发展，这俩方法也在不断改进。

比如说，发光法的灵敏度越来越高，能检测到更低浓度的AFP，简直是给了咱们更大的安全感。

想想看，以前可能需要多大剂量才能检测到，现在只要一点点，就能了解情况。

这就像是咱们的手机，现在拍照都能拍出电影般的效果，真是越来越神奇了。

还有就是酶免法的速度，嘿，真的是快得让人惊讶。

以前可能得等几天，才能拿到结果，现在动动手指，几小时内就能知道结果，简直是效率满分啊！就像是网购一样，快递小哥把包裹送到门口，让你心里乐开了花。

不过，任何事物都有两面性，甲胎蛋白检测虽然有了这些先进的方法，但也不是绝对的。

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改良ＭＥＡ并建立了“ Ｉ差异磁分离酶联免疫法 ”ｄｆｒｎａｍａｎｔｎｙｅｉ（ｉｅｅｔｌｇｅｃｅｚｍｆｉｉｍｍｕｏｓａ，ＭＥＡ）ｎａｓｙＤＩ。求ＤＭＥＡ法的线性范围、Ｉ回归方程、异系数（、，变ｃ，比较了ＭＥＡ和Ｄ）ＩＭＥＡ配对检测１０份血清ＡＦＩ０Ｐ结果差异。结果ＤＭＥＡ法检测ＡＰ的回归方ＩＦ程ｙ一３９Ｘ＋１．５ｒ．９，性范围５５０ｎ／，内Ｃ．４６４，一０９２线～０ｇｍＬ批Ｖ＝７７，问Ｃ．％批Ｖ＝８５；ＭＥＡ法和ＭＥＡ法测定血清．ＤＩＩＡＦＰ值差异无统计学意义（检验，＞Ｏ０）直线回归方程ｙ一３４８ｆＰ．５，．１ｘ＋７，一０９１两法相关良好；测原倍高浓度ＡＰ时０ｒ．８，检Ｆ
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１６・２０
国际检验医学杂志２１年ｕ月第３００１卷第１期１
ＩｔａｄＮｖｍｅ００Ｖ１１Ｎｏ１ｎＬｂＭｅ，ｏｅｂｒ１，ｏ．，．１Ｊ联免疫法检测血清甲胎蛋白
ｖｉｕｓａｅ，ｚｏ５０５ＣｈｎｔｏｓＤｉｅｓｓＦｕｈｕ３０２，ｉａ；
２ＤｅａｔｎｆＨｎｃｌＬｂａｏｙ，ｊａｏｉｃａｓｉａ，ｚｏ５０１Ｃｉａ．ｐｒｍｅｔＣｉａａｏｔｒＦｕｉｎＰｒｖｎｉｌＨｏｐｔｌＦｕｈｕ３００，ｈｎ）ｏ［ｓｒｃ］ＯＩｅｔｅＴｏｉｒｖｇｅｃｅｚｍｅｉＡｂｔａｔｂｃｉｊｖｍｐｏｅｍａｎｔｎｙｍｍｕｏｓａ（ｉｎａｓｙＭＥＩ．ｔｏｓＢｙｐｅａｄｎｃｏｑａｔｙｏａＡ）Ｍｅｈｄｒ－ｄｉｇｍｉｒ— ｕｎｉｆｓｍ— ｔ
徐兵，徐如梅张建钫沈菁石英伍严安，，，，
（．州市传染病医院肝病研究所福州３０２；．建省立医院检验科福州３００）１福５０５２福５０１
【要】目的摘改进磁分离酶联免疫法（ＥＡ）ＭＩ。方法采取预加微量标本、磁铁置于微孔条侧壁和扣除上清液Ａ值法，将
ｐｌｐｔｎｈｅｍａｅｉｒｂｅｉｅｔｅｍｉｒｗｅｌｄｄｕｔｎｈｅＡｇｕｒｓｏｈａｔａｕｒｔｎｔ “ｄｉｆｒｎｔａｇｎｅｉｅ，ｕｔｉｇｔｇｎｔｃｂａｓｄｈｃｏｌｓ，ｅｃｇｔｆｉｉｅｆｔｅｐｒｉｌｓｐｅｎａａｔ，ｈｅｆｅｅｉｌｍａｔｃ
ｅｚｍｅｉｎｙｍｍｕｏｓａ ”（ｎａｓｙＤＭＥＡ）ｗａｓａｈｈｄ０ｎｕｄｅｅｕｓｍｐｅｒｅｔｄｆｒｑａｔａｉｅａａｙｉｏＰｂＩｓｅｔｂｓｅ．ｅｈｎｒｄｓｒｍａｌｓｗｅｅｔｓｅｏｕｎｉｔｖｎｌｓｓｆＡＦｙｔＤＭＥＩａｄＭＥ１ＲｅｕｔＦｒｄｔｃｉｎｏＰｂＡｎＡ．ｓｌｏｅｅｔｆＡＦｖＤＭＥＡ，ｈｅｒｓｉｎｅｕｔｎｉＹ一３９Ｘ＋ｌ．５ｒ０９２ｔｅｈｅｒｓｏＩｔｅｒｇｅｓｏｑａｏｓｉ．４６４，一．９，ｈｎａ
文献标识码：Ａ
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文章编号：６３４３（００１ — ２００１７ — １０２１）１１６－３一
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Ｄｅｅｔｏｎｏｌｈａｆｔｒｔｉｎｓｒｔｃｉｆａｐｅｏｐｏｅｎｉｅｕｍｉｈｔｎｄｆｍａｎｅｉｎｙｅｉｗｔｗｏｋｉｓｏｇｔｃｅｚｍｍｍｕｏｓａｎａｓｙ
ＤＭＥＡ法未出现（Ｉ法出现）ｏｋ效应。结论ＩＭＥＡｈｏＤＭＥＡ法可克服ｈｏ效应，用普通微孔板和酶标仪比色，省去洗涤步Ｉｏｋ可可
骤，测ＡＰ结果（５０ｎ／检Ｆ＜０ｇｍＬ时）ＭＥＡ法无明显差异。与Ｉ
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【关键词】酶免疫技术；甲胎蛋白类；化学发光；对比研究
ＤＯＩ１．９９ｊｉｓ．６３４３．００１．２：０３６／．ｓｎ１７一１０２１．１０５－
中图分类号：４６６Ｒ４．１