高效液相色谱-串联质谱法检测水产品中三聚氰胺残留的比较研究
高效液相色谱和超高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺含量的对比
定样品中氮原子含量来间接推算出蛋白质含量的，而此方法无法 流速 0.5mL/min；柱温 40℃；波长 240nm；进样量 0.5µL。
识别氮的来源，蛋白质的平均含氮量为 16%，而是三聚氰胺含氮
3.2 对照品溶液的制备
量高达 66.67%，少量添加即可大大提高产品的含氮量，不法商人
准确称取 100mg 三聚氰胺标准品于 100mL 容量瓶，用甲醇
和 95.3%（RSD=0.48，n=6）。结论UPLC 法与 HPLC 法相比在具 士梅特勒 )；超纯水仪 ( 美国密理博）。
备准确可靠、重复性好的同时，更加快速、灵敏、并且大大减少
2.2 试剂
了有机溶剂的消耗，因此可以成功替代 HPLC 法测定三聚氰胺的
三聚氰胺对照品（CAS108-78-01, 纯度大于 99.0%）、甲醇（色
2 材料
（2.1mm×100mm,1.7µm）; 以离子对试剂缓冲溶液与乙腈为流
2.1 仪器
动相（95:5）；流速 0.5mL/min。结果 两种方法所得含量测定结
岛津 LC_20AB 型高效液相色谱仪（日本 岛津）；Waters
果一致。HPLC 法和 UPLC 法回收率分别为 92.9%(RSD=0.84，n=6) AcquityUPLC超高效液相色谱仪 ( 美国沃特世 )；AG285型天平 ( 瑞
3.4 方法学考察 3.4.1 线性关系考察 HPLC 方法：按“3.1.1”项下色谱条件，浓度由低到高依次 进样 10.0µL，以峰面积（Y）- 浓度（X）作图，得到标准曲线回 归方程 y=1.69×105+3.07×105,r2=0.9989, 三聚氰胺在 0.2 ～ 30µg/ mL 内呈良好线性关系。 UPLC 方法：按“3.1.2”项下色谱条件，浓度由低到高依次 进样 0.5µL，以峰面积（Y）- 浓度（X）作图，得到标准曲线回归 方程：y=1.84×103+1.35×103,r2=0.9999, 三聚氰胺在 0.2 ～ 30µg/ mL 内呈良好线性关系。 3.4.2 精密度试验 HPLC 方法：取“3.2”项下对照品溶液，以 10.0µL 进样量，
高效液相色谱—质谱联用技术测定食品中有害物质残留分析方法的研究
高效液相色谱—质谱联用技术测定食品中有害物质残留分析方法的研究一、本文概述高效液相色谱—质谱联用技术（HPLCMS）是一种广泛应用于食品安全领域的分析手段，其结合了高效液相色谱的分离能力和质谱的鉴定与定量能力，为食品中有害物质残留的检测提供了一种高效、准确的方法。
本文旨在探讨HPLCMS技术在食品中有害物质残留分析方法研究中的应用和发展。
本文将介绍HPLCMS技术的基本原理及其在食品分析中的重要性。
接着，将详细阐述该技术在检测食品中特定有害物质，如农药残留、重金属、非法添加剂等的应用案例。
本文还将讨论HPLCMS技术在实际应用中面临的挑战，包括样品前处理、方法开发、定量准确性和仪器灵敏度等方面。
文章将展望HPLCMS技术在未来食品安全监测中的潜在发展趋势，以及如何通过技术创新进一步提升分析方法的效能和适用性。
通过对HPLCMS技术在食品中有害物质残留分析方法研究的深入探讨，本文期望为食品安全监管机构、食品生产企业以及相关科研工作者提供有价值的参考和指导，共同促进食品安全保障水平的提升。
二、高效液相色谱—质谱联用技术原理高效液相色谱质谱联用技术（LCMS）是一种将液相色谱（LC）和质谱（MS）技术相结合的分析方法。
它通过液相色谱技术对样品进行分离，然后利用质谱技术对分离后的组分进行检测和分析。
液相色谱分离是基于样品中各组分在流动相和固定相之间的分配差异。
样品溶液通过高压泵进入色谱柱，流动相携带样品通过固定相。
由于不同组分在两相中的分配系数不同，它们在色谱柱中的移动速度也不同，从而实现分离。
分离后的组分按顺序从色谱柱中流出。
分离后的组分进入质谱仪后，首先被离子化，产生带电的离子。
这些离子通过质量分析器，根据质荷比（mz）进行分离。
检测器检测到不同质荷比的离子，并记录其相对丰度。
通过分析质谱图，可以确定样品中各组分的分子质量、结构信息以及相对含量。
LCMS技术具有高分离能力、高灵敏度、高选择性和结构分析能力等特点，可以用于食品中有害物质残留的分析，如农药、兽药残留、违禁物质和有害添加剂等。
超高效液相色谱_串联质谱法测定原料乳和奶粉中三聚氰胺的含量
需要选择合适的色谱柱。 该试验在研究过程中， 考察了 Waters 公司的 ACQUITY UPLCTM BEH HILIC 柱（2.1 mm× 50 mm i.d.，1.7 μm）和日本资生堂的 CAPCELL PAK CR1∶4 柱（2.0 mm×100 mm i.d.，5 μm）。 Waters 公司的 HILIC 柱采 用乙腈和纯水作为流动相标准溶液能够获得较好的色谱 峰，信噪比较高，而流动相中加入甲酸、乙酸、乙酸铵都会使 响应值降低，这与文献 ［4］报道一致，但是用于样品分析时， 离子抑制很严重， 这可能是由于三聚氰胺在HILIC 柱几乎 无保留，与杂质同时流出，离子受到抑制有关。 日本资生堂 的 CAPCELL PAK CR 1∶4 柱的填料是 C18 填料和阳离子交 换填料按照 1∶4 混合而成，由于三聚氰胺是强极性化合物， 在该柱上的保留主要与阳离子交换填料有关，因此，流动相 的酸碱度跟三聚氰胺在该柱上的保留时间密切相关。 该研 究过程中， 使用 CAPCELL PAK CR 1∶4 柱， 用乙腈和 0.01 mol/L 乙酸铵溶液（等体积混合）作为流动相，流速为 0.3 ml/ min，调整流动相的酸碱度，得到三聚氰胺的保留时间与 pH 值的关系（见表 3）。 由于加大流动相中有机相的比例会加 速三聚氰胺的洗脱， 该研究最终选择了 pH 值=4.4 乙酸铵 溶液和乙腈进行梯度洗脱 （见表 1），即保证了目标峰不受 杂质峰的干扰，而且能够出峰较快、节约分析时间。
0.01 mol/L 乙 酸 铵 溶 液 （pH 值=4.4），梯 度 洗 脱 ，洗 脱 程 序 用。
见表 1。 柱温 30℃，进样量 10 μl。
1.4.2 奶粉的提取方法 准确称取 2 g 奶粉于 50 ml 圆底
表 1 梯度洗脱程序
高效液相色谱法测定水产品中三聚氰胺的含量
A b s tra c t: The a na ly tic a l m e thod of m e lam ine in fis he ry p rod uc ts b y ion - p a ir re ve rs e d - p ha s e h ig h p e rfo rm a nc e liq u id c h rom a tog rap h w a s e s ta b lis he d 1The s am p le s w e re e x tra c te d w ith tric h lo roa c e tic a c id a nd z inc a c e ta te b y the u ltra s on ic w a ve1The n the e x tra c ts w e re c e n trifug a lize d , p u rifie d w ith the c a tion e xc ha ng e c o lum n1The a na ly te w e re e lu te d b y am m on ia m e tha no l, re c ons titu te d b y m e tha no l- w a te r a fte r d rie d und e r n itrog e n1The s am p le s w e re re a d y fo r d e te rm ina tion us ing e x te rna l s ta nd q ua n tita tion1The c a lib ra tion c u rve s s how e d g ood line a rity in the ra ng e of 015～10010m g / kg fo r m e lam ine1The c o rre la tion c oe ffic ie n t w a s 0199991The re c ove rie s w e re 8716%～9413% a t sp ik ing le ve ls 012～1010m g / kg 1The re la tive s ta nd a rd d e v ia tions w e re 319%～711% 1The d e te c tion lim it of m e lam ine w a s 012m g / kg 1 Ke y wo rd s: H PLC; fis he ry p rod uc ts; m e lam ine 中图分类号 : TS25417 文献标识码 : A 文 章 编 号 : 1002- 0306 (2010) 04- 0361- 04
高效液相色谱法检测三聚氰胺分析方法的探索
８ ０ ： ２ ０ ，８ ５ ： １ ５ ，８ ９ ： １ １ ，８ ８ ： １ ２ ，９ ０ ： １ ０进 行 测 定 。
结果 表明 ，缓冲溶 液与 乙腈 的比例为 ８ ８ ： １ ２ 时 ，三聚氰 胺的 出峰位 置 ，峰 形适宜且无 其 他杂峰干扰 。三聚氰胺 高效液 相色谱 图见 图
长。
表 １ 三聚氰胺标液连续进样数据 进样 保 留时间 峰面积 （ 次 数 （ ｍ Ａ Ｕ ＊ ｓ ）
ｍｉ ｎ）
１ ２ ３ ４ ５ ６ １ ４ ． ３ ４ ３ １ ４ ． ２ ５ ０ １ ４ ．１ ９ ６ １ ４ ． ｔ ８ ９ １ ４ ．１ ９ ７ １ ４ ． ２ ０ ４ ３ ０ ８ ７ ． ２ ０ ８ ７ ４ ３ ０ ８ ６ ． ９ ０ ６ ９ ８ ３ ０ ８ ６ ． １ ３ ３ ５ ４ ３ ０ ８ ２ ． ８ ３ ２ ５ ２ ３ ０ ８ ３ ． ８ ９ ９ ６ ６ ３ ０ ８３ ． ２７ ８ ３２
Ｎ 、 ， Ｎ
ｌ
ｌ ｌ
图 ２ 三聚氰胺标准 曲线
２ ． ７ 重 现性 实验
丫
ＮＨ２
１ 、实验部分
１ ． １ 主 要 仪 器 与 试 剂
Ａｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｅ ｓ １ ２ ６ ０ ＨＰ Ｌ Ｃ，柱 子 型
按 照 上 述 优 化 后 的色 谱 条 件 ，将 ４ Ｏ ￣ ｇ ／ ｍ Ｌ的三聚氰胺标液连续进样 ６ 次， 得 到三 聚 氰 胺 的 峰 面积 测 定 值 的 相 对 标 准 偏 差 （ ＲＳ Ｄ）分别为 ０ ． ０ ６％，保 留时 间的相对标
试 验 与检 测
高效液相色谱法检测三聚氰胺分析方法的探索
７ 秦喜玲 ２ 秦 引弟 ３ 赵芳
亲水作用色谱-串联质谱法测定化妆品中三聚氰胺残留量
摘 要 ： 立 了化 妆 品 中 三 聚 氰 胺 的 亲 水 作 用 色 谱 一 谱 联 用 （ Ｉ Ｉ — ／ ） 测 方 法 。 样 品 经 三 氯 乙 酸 溶 液 提 取 建 质 Ｈ Ｌ Ｃ ＭＳ ＭＳ 检
（ 溶 性 样 品 再 经 正 己烷 萃 取 ） ， 混 合 型 阳 离 子 交 换 （ Ｘ） 相 固 相 萃 取 柱 富 集 净 化 ， ５ｍｍｏ 脂 后 用 ＭＣ 反 用 ＶＬ乙 酸 铵 水 溶 液 （ ０ １ 甲 酸 ） 乙腈 作 为 流 动 相 ， 含 ．％ 和 以梯 度洗 脱方 式 在 ＺＣＨＩＩ Ｉ — ＬＣ色 谱 柱 上 实 现 分 离 ， 电喷 雾 离 子 源 正 离 子 以 （ Ｓ ） Ｅ Ｉ 模式 进 行 质谱 分 析 。 三 聚 氰胺 在 Ｏ ０ ．２～０５ｍｇ Ｌ范 围 内呈 良 好 线 性 关 系 ， 关 系 数 为 ０ ９８５ 方 法 的 检 ． ／ 相 ． ９ ；
ｕ ｙ ｔ ｅｍｉｅ — ｄ ａ ｉｎ ｅ ｃ ａ ｇ ＭＣＸ）ｓ ｌ — ｈ ｓ ｘ ｒ ｃｉ ｎ （ Ｐ ｐ ｂ ｈ ｘ ｄ ｍｏ ｅｃ ｔｏ ｘ ｈ ｎ ｅ（ ｏｉ ｐ ａ ｅｅ ｔａ ｔｏ Ｓ Ｅ）ｃ ｒｒｄ ｅ ｄ ａ ｔｉ ｇ ．Ａ Ｉ Ｚ Ｃ—
Ｈ Ｉ Ｃ ｏ ｕｎ ａ ｅ ｆ ｈｅ ｅ ｒ ｔｏｎ ｙ ｒ ｉ ｎｔ ｅ ｕｔｏｎ， ａ ａ ｅ ｅ ｔｏｓ ａ ｏ ｔａ ＬＩ ｃ ｌ ｍ ｗ ｓ ｕｓ ｄ ｏｒ ｔ ｓ ｐａ ａ ｉ ｂ ｇ ａｄ ｅ ｌ ｉ ｎｄ ｎ ｌ ｃ ｒ ｐｒ ｙ ｉ ｎ ｒ ｐ
０ ０ ／ ｏ０ ５ ｍｇ Ｌ ｗ ｉ ｏ ｒ ｌｔ ｎ ｃ ｅ ｃｅ ｔｏ ． ９ ． Ｔ ｅ ｌ ｔｏ ｅ ｅ ｔ ｎ （ ０Ｄ ， ． ２ ｍｇ Ｌ ｔ ． ／ ｔ ａ ｃ ｒｅａ ｉ ｏ ｆ ｉｎ ｆ ９ ８５ ｈ ｏ ｉ ０ ｈ ｉ ｆｄ ｔ ｃｉ ｍｉ ｏ Ｌ
高效液相色谱_串联质谱法同时测定水产品中8类38种兽药残留_熊春兰
Simultaneous Determination of 8 Kinds of 38 Veterinary Drug Residues in Aquatic Products by High Performance Liquid Chromatography Coupled with Tandem Mass Spectrometry
类、磺胺增效剂、林可胺类、硝基咪唑类、喹
用 1% 乙酸乙腈溶液提取，经冷冻离心分离和正己烷净化后， HPLC － MS / MS 进行测定，基质曲线外标法定 量。在电喷雾正离子模式下，以多反应监测（ MRM） 方式采集数据进行定性与定量分析 。38 种兽药在水产品 中的基质溶液标准曲线线性系数（ r） 均大于 0. 99 ； 在 4 个不同浓度加标水平下，平均回收率为 43% ～ 123% ； 日内相对标准偏差（ RSD） 为 1. 0% ～ 26. 4% ，日间 RSD 为 1. 6% ～ 28. 9% ； 定量下限（ LOQ，S / N≥10 ） 为 5 ～ 20 μg / kg。方法简单、快速、可靠，可用于水产品中兽药多残留的快速筛查 。 关键词： 高效液相色谱 － 串联质谱法； 水产品； 限用兽药； 多残留； 快速筛查 中图分类号： O657. 63 ； TQ460. 72 文献标识码： A 文章编号： 1004 － 4957 （ 2013 ） 02 － 0193 － 07 doi： 10. 3969 / j. issn. 1004 － 4957. 2013. 02. 009
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分析测试学报
第 32 卷
伴随着兽药在畜牧业中的广泛应用和人们对其相关危害的深入认识 ， 动物性食品中兽药残留成为 食品安全领域的热点和焦点。在我国，滥用、 乱用限用药物、 非法使用禁用药物等现象屡禁不止， 已 成为导致我国动物源性食品中兽药残留超标的主要原因 ， 引发了畜禽产品消费安全和食品贸易争端等 ［1 ］ 严重后果 。喹诺酮类、大环内酯类、磺胺类、 磺胺增效剂、 林可胺类、 硝基咪唑类、 喹 啉类和多 肽类等化合物目前在畜牧水产养殖方面使用较多 ， 滥用这些药物易造成畜水产品的严重污染， 通过食 物链可在人体内蓄积，并具有导致过敏反应和使人体产生抗药性等副作用。 世界各国对此有严格的限
HPLC-MSMS 内标法测定液体乳中的三聚氰胺
分析检测HPLC-MS/MS内标法测定液体乳中的三聚氰胺周慧敏（大连市检验检测认证技术服务中心，辽宁大连 116630）摘 要：本方法以三氯乙酸和甲醇作为萃取试剂，经亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白，通过高效液相色谱-串联质谱仪，采用电喷雾正离子化模式（ESI+）和多反应检测（MRM），以三聚氰胺13C3为内标测定液体乳中的三聚氰胺。
该方法可准确测定液体乳中的三聚氰胺且有很好的线性关系，相关系数大于0.99，最低定量限为0.01 mg/kg，加标回收率在82.8%～102.3%。
本方法适用于液体乳中三聚氰胺的检测。
关键词：液体乳；三聚氰胺；高效液相色谱-串联质谱法；内标法Determination of Melamine in Liquid Milk by HPLC-MS / MS with Internal Standard MethodZ HOU Huimin(Dalian Center for Certification and Food and Drug Control, Dalian 116630, China) Abstract: In this method, trichloroacetic acid and methanol are used as extraction reagents, protein is precipitated by potassium ferrocyanide and zinc acetate, and melamine in liquid milk is determined by high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry with electrospray spray positive ionization mode (ESI+) and multiple reaction detection (MRM) using melamine 13C3 as internal standard. The method can accurately determine melamine in liquid milk and has a good linear relationship. The correlation coefficient is greater than 0.99, the minimum detection limit is 0.01 mg/kg, and the recovery is 82.8%～102.3%. Experiments show that the method is suitable for the detection of melamine in liquid milk.Keywords: liquid milk; melamine; high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry; internal standard method三聚氰胺，简称三胺，学名三氨三嗪，是一种氮杂环有机化工原料，广泛用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气和医药等行业。
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三聚 氰 胺 （ ｌ ｎ ）是 一 种 三 嗪 类 含 氮 杂 ｍｅ ｍｉ ａ ｅ
环有 机化合 物 （ １ ，又 名 三 胺 、蜜 胺 、三 聚 氰 图 ）
酰胺 、氰脲 三酰胺 等 。作 为一 种用途 广泛 的基本 有 机化工 中间产 品 ，三聚氰胺 被广 泛应 用于塑 料 、涂
Ｃｏ ｐ ｒ ｔｖ ｔ ｄ ｎ ｄ ｔ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｅ ａ ｎ ｎ ｍ ａ ａ ｉ ｅ ｓｕ ｙ ｏ ｅ ｅ ｍ ｎ ｔｏ ｆ ｍ ｌ ｍ ｅ ｉ ｉ ａ ｕ ｔｃ ｐ ｏ ｕ ｔ ｙ ＬＣ－ Ｓ Ｍ Ｓ ｑ ａ ｉ ｒ ｄ ｃ ｓ ｂ Ｍ ／
Ｚ Ａ ｏｇ ａ ，Ｌ ｈｇａ ｇ Ｈ Ｏ Ｄ ｎ ｈｏ Ｉ ｉ ｎ ，ＨＵ Ｎ ｅ Ａ Ｇ Ｊ ｌｎ Ｈ Ｎ Ｐ ｉ Ｚ ｕ Ａ Ｇ Ｋ ，Ｙ Ｎ ｉ ａ ，Ｃ Ｅ ｅ ｉ ｎ ｊ
Ｖｏ． １ ６．Ｎｏ ３ຫໍສະໝຸດ ． Ｊｎ ｕ ．，２ １ ００
高效 液 相 色谱 一 串联 质 谱 法 检 测 水 产 品 中
三聚氰胺 残 留的 比较研 究
赵东豪 ，黎智广 ，黄 珂 ，杨金兰 ，陈培基
（ 中国水产科学研 究院南海水产研究所 ，广东 广州 ５ ００ ） １３ ０ 摘要 ：该研究利用高效液相色谱 ． 串联质谱法 （ ＣＭＳ ＭＳ Ｌ — ／ ）检测水产品中的三聚氰胺 ，分别 比较 Ｃ。 、氰基柱 。 柱 （ Ｎ）和强阳离子交换与反相 Ｃ ｃ 混合 填料柱 （ Ｒ）３ 色谱柱及其相对应 的流动相对三聚氰胺 的保 留和分离效 ｃ 种 果 。结果显示 ，以 甲醇和 ５ｍ ｉ ｍｏ 的挥发性离子对试剂全氟庚酸作 为流动相 ，采用梯度洗脱 ，三聚氰胺在 ｃ。 中 。 柱 能得到较好地保 留和分离。该研究拓宽 了 ｃ 。 柱在药物残留分析 中的应用范 围。方法成 本低 、灵敏度高 、稳定性
第 ６卷第 ３ 期
２ ０年 ６月 ０１ ｄｉ ０ ３ ６／． ｓ． ６ ３— ２ ７ ２ １．３ ０ ６ ｏ：１．９ ９ ｊｉ ｎ １７ ２ ２． ００ ０ ．０ ｓ
南 方 水 产
Ｓ ｕ ｈ Ｃｈｎａ Ｆｉｈｅｉ ｓＳｃｅ ｃ ｏ ｔ ｉ ｓ ｒｅ ｉ ｎ ｅ
和 重 现 性 良好 ，适 用 于水 产 品 中三 聚 氰 胺 的残 留检 测 。
关键词 ：三聚氰胺 ；高效液相色谱一 串联质谱法 ；水产 品；残 留检测
中图 分 类 号 ：Ｔ ５． Ｓ２ ４７ 文献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１７ ２ ２ ６ ３— ２ ７一 （０ ０ ３— ０ ２ ０ ２ １ ）０ ０ ３ — ４
Ｋ ｅ ｏ ｄｓ ｍｅ ａ ｉｅ； ｌｑ ｄ ｃ ｏ ｔｇ ａ ｙ ｔｎｄ ｍ ａ ｓｓ ｃｒ ｍｅｒ ｙｗ ｒ ： ｌ ｎ ｍ ｉｕｉ ｈｒ ｍａｏ ｒ ｐｈ ａ ｅ ｍ ｓ ｐｅ ｔｏ ｔｙ； ａ ｕａｉ ｒ ｄｕ ｔ ｒｓｄｕ ｅｅ ｍｉ ａｉ ｎ ｑ ｔｃ ｐ ｏ ｃｓ； ｅ ｉ ｅ ｄ ｔｒ ｎ ｔｏ
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