液相色谱串联质谱联用技术-实验指导(许煊炜)

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液相色谱串联质谱法测定姜中噻虫嗪残留量的不确定度评定

分析检测液相色谱串联质谱法测定姜中噻虫嗪残留量的不确定度评定苏仁剑（广东宏科检测技术有限公司，广东惠州 516100）摘要：目的：评定液相色谱串联三重四极杆质谱法（LC-MS/MS）测定生姜中噻虫嗪残留量的不确定度。

方法：通过建立测量不确定度数学模型，对标准溶液配制、样品前期处理、样品称量、拟合标准曲线及样品重复性测量等不确定度的主要分量进行分析，评定检验检测过程中产生的不确定度。

结果：当生姜中噻虫嗪的残留量测定结果为0.21 mg·kg-1时，扩展不确定度为0.018 8 mg·kg-1（95%的置信区间下），噻虫嗪残留量可表示为（0.21±0.018 8）mg·kg-1，k=2。

结论：该评定方法可用于液相色谱串联三重四极杆质谱法测定生姜中噻虫嗪残留量的不确定评价。

关键词：液相色谱串联质谱法；噻虫嗪；生姜；不确定度Evaluation of Uncertainty in the Determination of Thiacloprid Residues in Ginger by Liquid Chromatography Tandem MassSpectrometrySU Renjian(Guangdong Hongke Testing Technology Co., Ltd., Huizhou 516100, China) Abstract:Objective: To evaluate the uncertainty of liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry (LC-MS/MS) for the determination of thiacloprid residues in ginger. Method: By establishing a mathematical model of measurement uncertainty, the main components of uncertainty such as standard solution configuration, sample pre-processing, sample weighing, fitting standard curve and sample repeatability measurement were analyzed to evaluate the uncertainty generated in the process of inspection and detection. Result: When the residual determination of thiacloprid in ginger was 0.21 mg·kg-1, the expanded uncertainty was 0.018 8 mg·kg-1 (at 95% confidence interval), and the residual amount of thiacloprid can be expressed as (0.21±0.018 8) mg·kg-1, k=2. Conclusion: This evaluation method can be used for the uncertainty evaluation of the determination of thiacloprid residues in ginger by liquid chromatography tandem triple quadrupole mass spectrometry.Keywords: liquid chromatography tandem mass spectrometry; thiacloprid; ginger; uncertainty噻虫嗪，别名阿克泰，为高效低毒类杀虫剂，属全新结构烟碱类药物，对害虫有触杀、胃毒和内吸活性，多以土壤灌根和叶面喷雾方式除虫。

超高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中的展青霉素

超高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中的展青霉素1.引言1.1 概述概述部分的内容可以如下所示：概述展青霉素作为一种广泛应用于医药和农业领域的抗生素，其在果汁中的检测具有重要的意义。

果汁作为一种常见的饮料，其质量的好坏直接关系到消费者的健康。

因此，对果汁中展青霉素的快速、准确和可靠的检测方法的研究具有重要的实际应用价值。

本文主要介绍了一种基于超高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中展青霉素的方法。

超高效液相色谱-串联质谱法具有分离效果好、灵敏度高、定量准确等优点，能够有效地应用于展青霉素的检测。

通过对方法的优化和样品的处理，可以获得较高的检测灵敏度和准确度。

文章结构本文主要分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分旨在对文章的研究背景和意义进行介绍，以及概述本文的结构。

正文部分主要分为超高效液相色谱-串联质谱法、展青霉素的特性以及果汁中展青霉素的检测方法三个方面进行详细阐述。

结论部分主要对实验结果进行分析，并评价所使用方法的可行性，最后探讨了对果汁质量控制的意义。

目的本文的目的是研究和提出一种高效、可靠的检测果汁中展青霉素的方法，以提供给相关工业和监管部门作为果汁质量控制的辅助手段。

通过该方法的应用，可为果汁生产企业提供及时、准确的检测结果，从而保证产品质量，确保消费者的健康和安全。

通过本文的研究和探索，希望能够为果汁生产企业提供一种有效的展青霉素检测方法，为果汁质量控制提供科学依据，促进果汁工业的可持续发展。

1.2 文章结构文章结构部分的内容可以包括以下内容：文章的结构部分旨在对整篇文章的组织和内容进行简要介绍，为读者提供一个大致了解文章结构的导引。

本文的结构分为引言、正文和结论三个部分。

引言部分包括概述、文章结构和目的三个方面。

首先，通过概述部分，介绍了超高效液相色谱-串联质谱法在果汁中展青霉素检测方面的重要性和应用前景。

其次，文章结构部分将详细描述整篇文章的组织和内容，以帮助读者更好地理解文章的框架。

液相色谱串联质谱法测定果蔬中氟啶虫酰胺及其代谢产物残留量

析方法。样品用磷酸盐缓冲液两次提取，离心后合并提取液调节ｐ值至１～．，然后用乙酸乙酯提取。提取液旋转Ｈ．２５０浓缩蒸干后，用流动相定容，过滤膜后进行液相色谱串联质谱分析。采用ＡｑｉＢＨＣ８色谱柱分离。０１ｃｕｙＥ１ｔ．％甲酸水一甲醇作为流动相进行梯度洗脱，电喷雾正离子（Ｓ＋模式电离，多反应监测（Ｍ）模式检测．外标法定量。氟ＥＩ）ＭＲ啶虫酰胺、ＴＮＦＧ、ＴＮＦＡ和ＴＮ — Ｍ的检出限分别为０１、０２、０３ＦＡＡ．７．０．５和０６￣／ｇ．ｇ。在添加浓度５０００ｇｇ范０ｋ．２０．ｔ／０￣ｋ
４ｔｆｏｍｔｙｉｏｎａｉ（ＦＡ）和４ｔｆｏｏｔｙｎｃｔａｉｅ（ＦＡＡ１同时测定的液相色谱串联质谱分一ｒｕｒｅｌｃｔｉｉｏｈｎｉｃｃＴＮｌｄ一ｒｕｒｍｅｌｉｉｍｄＴＮ — Ｍ）ｉｌｈｏｎ
１材料与方法
１１仪器与试剂．
ＷａｒＵＬｅｏＭＴＳ超高效液相色ｔｓＰＣＸｖＴＱＭｅ
谱串联质谱仪（国Ｗａｅｓ司）美ｒ公ｒ．配置电喷雾离
子源；Ｕｔ — ｙｒｘＴ５型匀质器（国）ｉｍａｌａＴｒａ２ｒ德；Ｓｇ
ＮＡ．ＴＮ和ＴＮＡ标准品．ＨｙｓｉｕｅＦＧＦＡ— ＭａａｈＰｒＣｅｉａＩｄｔ．甲醇（ｒｋｈｍｃｌｎ．ＬｄＭｅｃ）和甲酸（ｅｉ）Ｔｄａ

高效液相色谱电喷雾串联质谱联用测定植物源性蛋白中三聚

高效液相色谱－电喷雾串联质谱联用测定植物源性蛋白中三聚氰胺残留丁涛 1，李建忠 2，徐锦忠 1，沈崇钰 1，吴斌 1，陈惠兰 1，李淑娟 2，刘飞 3（1. 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，南京，210001；2.中国检验检疫科学研究院，北京，100025；3. 赛默飞世尔科技（上海）有限公司）摘要：研究报导了高效液相色谱－电喷雾串联质谱联用（HPLC/MS/MS）测定植物源性蛋白中三聚氰胺残留的方法。

三氯乙酸溶液沉淀样品中的蛋白，同时提取目标分析物，强阳离子固相萃取柱进一步富集净化后，利用电喷雾串联质谱进行检测。

检测低限为0.5 μg/kg，添加回收率84 ～ 98％之间（基质匹配曲线校正），相对标准偏差（RSD）在1.8 ％～ 7.4 ％。

2007年3月中旬以来，美国发生多起宠物猫、狗中毒死亡事件。

美国食品药品管理局(FDA)从江苏和山东两家公司出口美国的部分小麦蛋白粉和大米蛋白粉中检出三聚氰胺成分，并初步认定为宠物食品中含有的大量三聚氰胺是导致猫、狗中毒死亡的原因。

三聚氰胺(melamine)简称三胺(结构式见图一)，是一种重要的氮杂环有机化工原料。

这种化学品常被用于生产塑料、胶水和阻燃剂，在部分亚洲国家，它也被用以制造化肥。

同时三聚氰胺也是一种名为灭蝇胺的农药的代谢产物[1]。

三聚氰胺是一种禁止用于宠物食品及动物饲料的化学物质，为提高宠物饲料中蛋白质测定含量而加入大量三聚氰胺后，动物食用可发生肾衰竭并导致死亡[1]。

目前测定三聚氰胺的检测方法包括气相色谱法[2]、气质联用法[3-4]、液相色谱－紫外或二极管阵列和串联质谱检测方法[5-8]。

气质联用方法需要衍生化，过程比较繁琐。

液相色谱配合紫外或二极管阵列由于其无需衍生化是目前最为常用的检测方法。

高效液相色谱串联质谱方法灵敏度高、抗干扰能力高，在部分实验室做为确证方法使用。

由于三聚氰胺一直作为灭蝇胺的代谢产物来测定，因此测定基质以农作物为主，国内外还没有关于植物源性蛋白中三聚氰胺的检测方法。

超高效液相色谱串联质谱同时测定雷公藤药材中5个有效成分

超高效液相色谱串联质谱同时测定雷公藤药材中5个有效成分该文建立了超高效液相色谱电喷雾串联三重四级杆质谱同时测定雷公藤药材中5种有效成分的方法，并比较了不同产地及来源的雷公藤药材中5种有效成分的含量差别。

以乙腈2%甲酸铵水为流动相洗脱，Waters ACQUITY UPLCCSHC18S柱（21 mm×100 mm，17 μm），以电喷雾离子源为接口，正离子模式扫描，质谱多反应监测（MRM）模式检测。

结果表明，5种有效成分在各自线性范围内线性关系良好（r>0997 8），加样回收率在9672%～1032%，RSD 为10%～24%。

该研究所建立的方法稳定性、精密度、重复性良好，适用于雷公藤中有效成分的含量测定；不同来源的雷公藤药材中成分含量差异显著，雷公藤药材的质量和安全性亟待提高，而对雷公藤药材实施多指标的含量控制是保证其临床药用安全可控的必要途径。

标签：超高效液相色谱电喷雾串联三重四级杆质谱；雷公藤；昆明山海棠；有效成分；含量测定[Abstracts]This paper is aimed to develop a method for the determination of five effective components in medicinal material of Tripterygium using ultra performance liquid chromalography coupled withelectrospray ionization tandem mass spectrometry（UPLCESIMS/MS），which then was used to study their contents in raw materials from different areas and different sourcesThe separation was performed on a Waters ACQUITY UPLCCSHC18S column（21 mm×100 mm，17 μm），usingacetonitrile02% ammonium formateaqueous solutionas mobile phase The target components were detected in multiplereactionmonitoring（MRM）mode by mass spectrometry with electrospray ionization （ESI）source operated in positive ionization mode The quantitative results showed that good linearity wasachievedin their respective linear ranges and fine determination coefficient （r>0997 8），and the overall recoveries ranged from 9672%1032% with the RSD ranging from 10%24%The methodissensitive and accurate，and suitable for the effective components quantification in medicinal material of Tripterygium；contents of five effective components from different sources vary significantly，so the quality and safety of medicinal material of Tripterygium needs to be improved It is very important to control the quality with multiindex for clinic safety[Key words]UPLCESIMS/MS；Tripterygium wilfordii；Tripterygium hypoglaucum；effective components；content determinationdoi：10.4268/cjcmm20160817雷公藤属植物是重要的药用植物，民间多做杀虫剂使用，20世纪60年代因试用其治疗麻风反应效果显著，引起广泛关注，并相继开展了系统的研究，发现其有强大的抗炎、免疫抑制、抗肿瘤、抗生育等多种药理作用，目前被广泛在应用于难治的类风湿关节炎、肾病综合症、红斑狼疮、皮肌炎、大疱性皮肤病等，同样对各型银屑病也有显著的疗效[13]。

10-液相色谱串联质谱联用技术-实验指导[许煊炜]

（2）利用液相色谱串联质谱联用仪快速测定水果中7种农药的残留量。

吉林农业大学农业部参茸质检中心2017.03实验一 AB Sciex Qtrap 4500 三重四级杆/离子阱液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用一 .实验目的和意义通过学习液质联用仪的构成和使用方法，及其在定性、定量分析中的应用，培养学生使用液质联用仪进行仪器分析的能力，并培养学生严谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告和良好的实验习惯（准备充分、操作规范，记录简明，台面整洁、实验有序，良好的环保和公德意识）。

（一）检测仪器1、仪器名称高效液相色谱串联质谱联用仪（简称LC-MS-MS）。

型号：4500 QTRAP（美国Applied Biosystems公司）。

2、仪器组成液相色谱部分：岛津 LC-30A，配有在线脱气机、超高压二元泵、自动进样器；串联质谱部分： QTRAP4500，配有ESI离子源、串联四级杆/线性离子阱。

高效液相色谱-串联质谱法测定金线莲中七种农药残留量

小，色泽模糊的两个点说明苍耳子油中这两种成分含量较少。

而以V（石油醚）：V（乙醚）=7：为展开剂，展开苍耳子油所得薄层色谱板只有一个比较大、色泽明亮的点，因此可以得岀苍耳子油中可能含有一种成分。

与图1相比较可以得出V （石油醚）：V（乙醚）=7：为展开剂比V（石油醚）：V（乙醚）=7：为展开剂展开苍耳子油效果较好。

因此可以进一步进行单体分离研究。

参考文献4〕杜汉军•苍耳子油提取工艺的优化及其氧化稳定性4〕贵州农学,251199（249）：296-498.〔2〕王艳珍，黄文灿,赵明智，等•响应面法优化超声波提取苍耳子油工艺4〕食品研究与开发921291（r76）:/-^.4〕赵文英，朱庆书，岳莉，等.苍耳子油提取动力学研究及模型建立4〕林产化学与工业,2919,39（1538：7393.4〕汝绍刚,赵文英,朱庆书,等•苍耳子油回流提取工艺优化及其动力学研究4〕化学工业与工程,2912,29：33944〕朱庆书，朱兆友,赵星星，等•苍耳子油提取工艺的比较研究4〕青岛科技大学学报（自然科学版）,2569,39（122：299/〔6〕吴彩霞，方敏，余贤旺，等.基于正交设计与BP神经网络优化制备纳米WC-MgO复合粉末〔J〕.世界有色金属,252S85：3499.〔7〕刘磊磊，李立，瞿利民，等.正交实验优化柚皮中柚皮苷的超声辅助双水相提取工艺〔J〕食品工业科技,2918,39（4158：125929-177.4〕赵文英，朱庆书，金宏，等•超声波法提取苍耳子油4〕青岛科技大学学报（自然科学版8,2908,rl5：3699.〔9〕赵文英，朱庆书，金青，等•微波辅助提取苍耳子油的研究〔〕〕食品科技,2008,r29：212-414高效液相色谱-串联质谱法测定金线莲中七种农药残留量吴丽群，何文胜，罗明可，陈文婷(福建生物工程职业技术学院，福建福州372022)摘要：目的建立高效液相色谱-串联质谱法同时测定金线莲中戊唑醇、精甲霜灵、甲基托布津、茚虫威、吡蚜酮、克百威、灭线磷的残留量。

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（2）利用液相色谱串联质谱联用仪快速测定水果中7种农药的残留量。

（一）检测仪器1、仪器名称高效液相色谱串联质谱联用仪（简称LC-MS-MS）。

型号：4500 QTRAP（美国Applied Biosystems公司）。

在离子源中，各组分以ESI或APCI方式电离，被加速后进入质量分析器。

4500QTRAP 的质量分析器主要由Q1、Q2、Q3三组四级杆串联组成。

Q1可将分子离子按质荷比（m/z）大小分开；Q2是碰撞室，可将母离子进一步破碎为碎片离子；Q3具有四级杆和线性离子阱两种功能，作为四级杆时可将分子离子或碎片离子按质荷比大小分开，作为离子阱还可富集离子从而提高检测灵敏度。

各组分的不同离子在质量分析器中被破碎、分离，并按质荷比大小依次抵达监测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质谱图。

4500QTRAP通过串联四级杆/线性离子阱两种不同质谱技术的结合，可以在单次分析中对复杂样本中的单个成分同时进行定性和定量，也可以对多个化合物进行定量分析。

整台仪器的控制、数据采集、数据处理、结果输出均由PC计算机Windows操作系统支持下的Analyst软件控制完成。

（二）样品1、样品要求本仪器适合分子量在5 ~ 1700 amu范围内的有机样品的定性及定量分析。

待测样品必须能溶解于水或其它有机溶剂中。

若样品或配制的样品溶液发生沉淀、挥发、变质等异常现象时，应重新取样或重新配制溶液。

2、试剂要求所有的试剂均选用色谱纯级，所用水的电导率应大于18KΩ。

流动相必须用0.2µm 或0.45µm滤膜过滤后方可使用。

3、分离条件要求在液相色谱仪上确定分离条件，使待测组分能完全分离，且该色谱条件中流动相不应含有不挥发性盐，如磷酸盐。

（三）、操作步骤实施检测操作的人员，必须熟悉该仪器的操作规程，仪器的工作状态、包括检测灵敏度和分辨率，必须满足检测项目的要求。

1、开机前准备开机前应检查仪器室内电、气的供应情况及空调机的工作状态是否稳定，检查真空机械泵泵油是否需要更换。

只有当UPS工作正常，Gas1/Gas2、Curtain Gas和Exhaust Gas的压力分别稳定在0.35、0.35和0.7 Mpa，环境温度为10~30℃，相对湿度小于70%时才能开机。

2、开机1) 打开真空机械泵上的电源开关。

2) 真空机械泵继续工作至少15分钟后，打开MS电源主开关。

3) 等真空度达到2×10-5Torr（绿色指示灯不闪）后，打开PC计算机电源3、仪器调谐（四）、方法建立1.在Analyst软件Tools菜单中选择Project→Create Project。

在Project name项下输入新建的Project 名称。

注意，不要点选窗口中的其他按钮！点击OK，确认新建Project。

2.在Analyst软件界面下，双击导航栏内Hardware Configuration。

在弹出窗口中选择MassOnly，点击Activate Profile，激活MassOnly（只联接质谱主机）。

3.在导航栏内单击Tune and Calibrate，进入调谐模式。

点击上方工具条中的T钮。

此时，应注意到主机有“扑”声音，表明进入调谐状态。

此时右下角质谱状态显示绿色。

双击Manual Tuning，进入质谱参数设置及运行窗口。

4.使用1mL玻璃进样针吸取适当标准溶液，置于进样针座上。

点击MS Method下拉菜单，选择Syringe Pump Method，设定针泵流速Flow Rate为10μL/min。

5.点击Start Syringe Pump按钮开针泵进样。

6.返回MS Method，选择扫描模式Scan Type为Q1 MS，设定扫描速度Scan Rate为10Da/s，设定扫描范围Start——Stop设定为50——化合物分子量。

DP预输入60。

7.点击start开始采集数据。

运行稳定后，注意观察是否有预期的母离子出现，并控制其响应值在约E4以下。

点击stop，选择第一个峰（后面是同位素峰）的平稳段，双击，选中母离子。

点击右键，选择Delete Pane。

8.设定Scan type为产物离子扫描Product Ion（Ms2），扫描速度200Da/s，选择扫描正/负离子，输入母离子（product of），设定扫描范围start——stop为50——MW+20，覆盖可能的子离子质量范围，点击compoud标签，设定（DP）60，（CE）5。

9.点击start，开始采集数据，注意观察是否有预期的母离子出现。

手动调节CE，以5eV为步长，逐渐增加。

每次增加后稍作等待，直至目标化合物的子离子清晰看见。

选择平稳的一段，双击，选择子离子。

10.选择Scan Type为MRM。

设定参数表格中的Q1对应的母离子，Q3对应的子离子，time（ms）为50，ID值设为名称1（定量），名称2（定性）。

11.点击Edit Ramp，在Parameter下选择Collision Energy，点击OK。

点击start开始采集数据，记录每个MRM通道的最佳CE电压。

在MRM参数设定表中，右键点击。

选择Collision Energy CE，调出表格中的CE列，输入每个MRM通道的最佳CE电压值，精确到个位数。

重复以上步骤，在Parameter项下选择Declustering Potential，优化并保存DP。

完成后选择菜单File/Save保存采样方法，[文件名].dam。

（五）LCMS方法的建立：1、连接仪器：打开HPLC质谱电源，将HPLC系统接上柱子，将6号出口管线与离子源连好。

调离子源喷雾针位置到2mm处，双击Hardware Configure，在硬件配置菜单下单击LCMS ( 液相与质谱联用)，单击Activate profile激活仪器，会听到笛的一声，说明仪器已经连接上。

2、确认液质同步：选择项目（之前优化方法的时候已经建立的项目）；双击Build acquisition method新建方法，弹出新建方法模板。

在模板左侧点击acquisition method，模板右边显示对应的参数，确认synchronization mode选择LC Sync,表示液质同步。

3、设置MRM参数：点击方法模板左侧的MRM, 在模板右侧Scan Type下选择MRM；在polarity 下选择化合物极性：Positive(正离子)、Negative（负离子）；Duration为15min(与液相分离相同的时间)；表格中Q1：母离子分子量，Q3(Da)：子离子分子量，Time（msec）：50，ID栏：化合物名称（离子对名称后空格加1为定量，空格加2为定性），在表格中右键分别单击DP、CE，点击工具栏的OPEN打开之前优化的方法参数，调出DP,CE值，选中整行，Ctrl+c(复制)参数，关闭窗口，再Ctrl+v(粘贴)参数）；最后点击Edit parameter设置离子源参数：Source/Gas项用以下推荐值：CUR 35，IS:5500(正离子) 或-4500（负离子），TEM 600，GS1 60，GS270，点击OK。

4、设置液相参数：点击模板左边的shimadzu LC system，①在右边的pumps栏下，设置stop time（运行时间）为15min，flow流速为1mL/min，A为水相设为95%，B为有机相设为5%（设置时改B，A自动），泵最大压力为50；点击time program设置液相梯度：例咪唑类梯度设置：②接着在右边的Auto sampler栏下，设置清洗时间，在Rinse mode 下选择Before and after(前后都洗)，并设置清洗时间为5s，清洗液用50%甲醇水。

最后点击保存按钮,在保存窗口输入该方法的名称。

（五）数据处理双击打开Multiquilt，选择项目，点击File下的荧光棒型图标，点击sample，选择需要的标准品和样品数据，点击next，create new method，为方法命名，点击next，选择一个有代表性的样品（一般选择浓度较大的标品数据），设置分组（同一物质定量离子和定性离子设置为一组），并指定内标，next，对每个物质进行积分。

设置积分参数：CausianSmoth（平滑）：一般是0，如有毛刺可改成1或2；Expeceted Time（保留时间）:一般不动Expected time范围：一般30s，表示在保留时间±15s范围最小峰宽最小峰高背景噪音扣除：可调整目标峰基线以下被积分的面积，比例越高积分越往下，必要时调整。

分峰因子：峰有分叉时设置，如有两个分叉，设置为2，峰分叉不能大于2单位：设置单位，勾选Apply units to all可将此单位用于所有化合物点击next，点击finish。

在新跳出窗口内将标准品选定，输入浓度。