维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法
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实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法
一、测定原理
2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。抗坏血酸分子中存在烯醇式结构(HO —C═C—OH),因而具有很强的还原性,还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。
2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色,在中性或碱性溶液中呈蓝色。因此,当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时,被还原后红色消失成为无色的衍生物,可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。
还原型抗坏血酸还原染料后,本身被氧化为脱氢抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化时,滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时,表示抗坏血酸全部被氧化,此时即为滴定终点。根据滴定消耗染料标准溶液的体积,可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。
在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。
反应式如下:
二、实验仪器与试剂
1.仪器
组织捣碎机;水果刀;
托盘天平;精密天平;称量纸;卷纸;台式离心机;电炉;吸耳球;玻璃棒;
蒸馏水,蒸馏水洗瓶;记号笔、标签纸、定性滤纸;
20cm镊子;5ml、10ml移液管、(微量)酸式滴定管、漏斗;漏斗架;
50ml、250ml、 500ml 、1000ml烧杯;
10ml 、500 ml、1000 ml量筒;100ml具塞量筒(或普通量筒);
100mL、250mL棕色容量瓶;50ml或100ml三角烧瓶。
2.原料及试剂
本实验材料是,用水均为蒸馏水,试剂纯度均为分析纯度。
(1)2%草酸溶液:草酸20g溶于700ml蒸馏水中,稀释至1000ml。
(2)1%草酸溶液:取上述2%草酸溶液450ml,稀释至900ml。
(3)抗坏血酸标准溶液:
称取抗坏血酸20mg,用适量1%草酸溶液溶解后,移入100mL棕色容量瓶中,并以1%草酸溶液定容,振摇混匀,备用。
(4)0.02% 2,6-二氯酚靛酚溶液:
称取碳酸氢钠52.2mg,溶解在200mL沸水中。再称取2,6-二氯酚靛酚49.2mg,溶于上述碳酸氢钠溶液中。冷后,过滤于250ml棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀备用。
临用前标定:
取2mL浓度为0.2mg/ml的抗坏血酸标准溶液于三角瓶中,加1%草酸5mL,摇匀,用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微红色,15s不褪色即为终点,并计算如下:每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=C×V1/V2。
式中:C----抗坏血酸的浓度(mg/ml)= 0.2
V1----抗坏血酸的量(ml)=2
V2----消耗染料溶液的量(ml)=31.84
得出T=0.2×2/31.84=1.26×10﹣2
三、实验步骤
1. 取200g新鲜橙子(去皮、去核),置于1000ml烧杯内,称重。
2.将样品倒入组织捣碎机,加入等量2%草酸(W∶V),加盖旋紧,匀浆5min。
3. 取出匀浆物质。
4.称取30g匀浆物质于50ml小烧杯中编号,记录。
5. 用少量1%草酸将称取的匀浆物质倒入100ml容量瓶中,并用1%草酸反复洗涤烧杯(3次),其洗涤液一并移入,并用1%草酸定容到100ml。
6.加塞后将匀浆物质与1%草酸充分混合,静置10min。
7.取上述溶液过滤或离心。
8. 用移液管吸取10ml滤液置于三角烧瓶内,加入10ml 1%草酸(2个平行样品,编号);用
移液管吸取10ml蒸馏水,加入10ml 1%草酸(空白对照)。
9. 加1ml氯仿,将2,6二氯酚靛酚染料滴定至终点(淡粉红色,15s不褪色或观察氯仿层
呈现淡红色。),记录染料消耗量。
10. 计算每100g样品中维生素C的含量(ml)及平行样品误差范围,公式如下:
维生素C含量(ml/100g)=[(V1-V2)×T/W]×100
式中:V1----滴定样品时耗去的染料溶液的量(ml)
V2----滴定空白时耗去的染料溶液的量(ml)
T ---- 1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数
W ----滴定时所取的滤液中,含样品的量(g)
四、实验结果、数据计算与分析
维生素C含量(ml/100g)=[(V1-V2)×T/W]×100=36.13
《食物成分表》(全国平均值)中橙子的VC含量约33mg/100g。比测定值略小。
五、注意事项及说明
(1) 某些水果、蔬菜(如橘子、西红柿等)浆状物定容时泡沫太多,可加数滴丁醇或辛醇消
泡。
(2)大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶,因此,抗坏血酸的测定应采用新
鲜样品并尽快用2%草酸溶液制成匀浆以保存维生素C。
(3) 样品的提取液制备和滴定过程,要避免阳光照射和与铜、铁器具接触,以免抗坏血酸被
破坏。
(4) 整个操作过程要迅速,防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定
所用的染料不应小于1ml或多于4ml,如果样品含维生素C太高或太低时,可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。
(5) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下,干扰物反应进行得很慢。
2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用。
(6) 干扰滴定因素有:样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚,但反应速度均较抗坏血酸慢,
因而滴定开始时,染料要迅速加入,而后尽可能一点一点地加入,并要不断地摇动三角瓶,直至呈粉红色,于15s内不消退为终点。
(7) 提取的浆状物如不易过滤,亦可离心,留取上清液进行滴定。
(8)市售2,6-二氯酚靛酚质量不一,以标定0.4mg抗坏血酸消耗2mL左右的染料为宜,可根据标定结果调整染料溶液浓度。
(9)使用酸式滴定管要注意排尽气泡。实验过程中要保证两个开关不同时开启,且保证漏斗
里必须要有溶液。