维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
浙江大学生物化学实验甲 维生素C的定量测定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法)
2、维生素C的测定原理
• 根据维生素C的还原性可测定其含量，常用2，6-二 氯酚靛酚测定法。还原性抗坏血酸能还原染料2，6 二氯酚靛酚，本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中， 2，6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
• 因此，当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时， 维生素C尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被
还会给滴定终点的观察造成困难。
3、材料与试剂
⑴、实验材料
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
• 橘子、青椒等。 ⑵、试验试剂
• 标准抗坏血酸溶液和2，6-二氯酚靛酚溶液配制时的
注意事项参P162。
4、操作方法
• 操作步骤及注意事项参P162-P163。
5、实验结果及处理
• 准确纪录所称青椒的克数； • 仔细观察滴定终点，准记录滴定所用 2，6-二氯酚 靛酚的毫升数，代入下列公式计算维生素C的含量：
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
• 滴定终点：当溶液从无色转变成微红色（15s内不 消退）时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，
此时即为滴定终点。
• 2，6-二氯酚靛酚滴定法的特点：简便，快速，比较 准确，适用于许多不同类型样品的分析。缺点是不 能直接测定样品中的氧化型抗坏血酸，并且，易受 其它还原物质的干扰，如果样品中含有色素类物质，
维生素C的定量测定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）
（VA-VB）×C×T 维生素C含量（mg/100g样品）= D×W × 100
• VA：滴定样品所耗用的染料的平均体积（ml） • V Ｂ ：滴定空白对照所耗用的染料的平均体积（ml）
• C：样品提取液的总体积（ml）
生物化学实验：维生素C定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
ʺ目的要求
学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法
ʺ实验原理
还原性Vc + 氧化性染料
氧化性Vc + 还原性染料
粉红色 (中性和碱性)
无色
•Vc放在滴定瓶中 •2,6-二氯酚靛酚放在微量滴定管中 •终点前, 2,6-二氯酚靛酚全部被还原为无色
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
•终点时, 剩下有2,6-二氯酚靛酚.呈现粉红色
【取10ml 1%草酸作空白对照 【用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V2
V1 - V2相当于0.1mg抗坏血酸
四、 样品抗坏血酸液的滴定V3
【取滤液10ml(相当于样品Vc的1/10)置100ml锥形瓶中
【 用微量滴定管以0.01% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并 保持15s不褪色即达终点，得到V3。
ʺ试剂和器材
一、试剂
•2%草酸溶液: 草酸2g溶于100ml蒸馏水中。 •1%草酸溶液: 草酸1g溶于100ml蒸馏水中。 •标准抗坏血酸溶液（0.1mg/ml）: 准确称取50mg纯抗坏血
酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于1%草酸溶 液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用 前配制。
ʺ操作方法
一、提取 •水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸
吸干表面水分
•称取5g蔬菜或水果，剪碎,加入少量(1-3ml) 2%草酸，用研 钵研磨至浆状，倒入至100ml的容量瓶中，往研钵中加入少 量多次2%草酸，把研磨后的样品完全转移，并定容至100ml 容量瓶中（研磨，转移，定容）。
五、2%草酸的滴定V4
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法
实验三维生素C的定量测定二氯靛酚滴定法This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020实验三 维生素C 的定量测定（2，6-二氯靛酚滴定法）一、原理维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C ，当样品中的维生素C 被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。
二、 实验仪器新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗三、实验试剂1、标准抗坏血酸溶液：准确称取50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至500毫升，即浓度为0.1mg/ml ，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克 NaHCO 3的热水中，冷却后加水稀释至500毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。
（4℃约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
四、实验步骤（一）提取水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入100毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。
（二）滴定1、标定2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空白对照V 2，用已标定的2，6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。
果蔬中维生素C的提取和定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
果蔬中维生素C的提取和定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)【实验目的】1.学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法.2.了解蔬菜,水果中维生素C含量情况.【实验原理】维生素C具有很强的还原性.还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚(DCIP),本身则氧化为脱氢型.在酸性溶液中,2,6-二氯酚靛酚呈红色,还原后变为无色.因此,当用此染料滴定含有维生素C的酸性溶液时,维生素C尚未全部被氧化前,则滴下的染料立即被还原成无色.一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时,则滴下的染料立即使溶液变成粉红色.所以,当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化,此时即为滴定终点.如无其它杂质干扰,样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸量成正比.【仪器和试剂】一,试剂2%草酸溶液，1%草酸溶液，0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液（每次临用时,以标准抗坏血酸溶液标定）.二,材料:水果,蔬菜三,仪器烧杯，玻棒，吸量管，长颈漏斗，漏斗架，白纱布，滤纸，容量瓶，滴定管, 锥形瓶.【操作方法】一、标准溶液标定1. 配制标准抗坏血酸溶液(1mg/mL) 准确称取100mg纯抗坏血酸(应为洁白色,如变为黄色则不能用)溶于1%草酸溶液中,并稀释至100mL,贮于棕色瓶中,冷藏.最好临用前配制。
2. 标准溶液标定准确吸取标准抗坏血酸溶液1mL置250mL锥形瓶中,加9mL 1%草酸,以0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色,并保持15秒不褪色,即达终点.由所用染料的体积计算出1mL染料相当于多少毫克抗坏血酸（以T表示）。
3. 取10mL 1%草酸作空白对照,按以上方法滴定。
二、样品测定1．果蔬中Vc的提取与测定：水洗干净待测的新鲜蔬菜或水果,吸干表面水分.称取20g,置于200mL烧杯中，加入30mL 2%草酸,研磨成浆状,以四层纱布过滤至100mL小烧杯中，再以快速滤纸过滤至锥形瓶中。
然后以0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至溶液呈淡红色,并保持15秒不褪色,即达终点。
实验三维生素C的定量测定(2,6-二氯靛酚滴定法)
实验三维生素C 的定量测定（2, 6-二氯靛酚滴定法）一、 原理维生素c 又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料 2，6-二氯靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。
在酸性溶液中，2, 6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。
因此可用 2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素 C ,当样品中的维生素C 被 完全还原后，在滴加过量的 2, 6-二氯靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。
如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2, 6-二氯靛酚的量与样品中所含有维生素 C 的量成正比。
二、 实验仪器新鲜水果、吸管、容量瓶、滴定装置、锥形瓶、研钵、漏斗三、 实验试剂1、 标准抗坏血酸溶液：准确称取 50毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至 500毫升，即浓度为0.1mg/ml , 贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。
2、 2%草酸溶液：草酸2克，溶于100毫升蒸馏水中。
3、 1%草酸溶液：1克草酸溶于100毫升的蒸馏水中。
4、 0.01% 2,6-二氯酚靛溶液：溶50毫克2,6-二氯酚靛于300毫升含有104毫克NaHCO s 的热水中，冷却后加水稀释至500 毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。
（4C 约可保存1周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。
四、 实验步骤（一） 提取水洗净新鲜的蔬菜（水果），用吸水纸吸干表面水分，然后称取 5克剪碎加2%的草酸5毫升，置研钵中研成浆，倒入 100 毫升的容量瓶内，用2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤。
（二） 滴定1、 标定2, 6-二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准抗坏血酸溶液1ml 和9ml 1%草酸于50ml 锥形瓶1中，同时量取10ml 1%草酸加入另一个50ml 锥形瓶2中作空 白对照V 2,用已标定的2 , 6-二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15秒不退色。
记录所用的毫升数，计算每毫升 2, 6-二氯酚靛酚所 能氧化抗坏血酸的毫克数（K ）。
2、 样品的测定：取50ml 锥形瓶2个，分别加入滤液10ml （V 3）,用已标定的2, 6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持 15秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过2mi n ,记录两次滴定所得的结果，求平均值 V ’。
2_6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C
2,6-二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C目的和要求掌握2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。
原理维生素C (Vc)又称抗坏血酸(ascorbic acid)。
最初于1928年从牛的肾上腺皮质中提取出结晶物，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效。
氧化型2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，还原型2,6-二氯酚靛酚无色。
当用此染料滴定含有Vc的酸性溶液时，在Vc 未全部氧化前，滴下的染料立即被还原成无色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的Vc刚刚被氧化完全，从滴定时2,6一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中Vc的含量。
操作步骤1. 样液制备称取苹果和青椒各5g，分别加少量2%草酸(1%草酸因浓度太低而不能抑制抗坏血酸氧化酶作用)用研钵磨成浆，漏斗(+脱脂药棉)过滤，滤液转入25ml容量瓶后用2%草酸定容。
2. 标准液滴定准确吸取0.1mg/ml的标准抗坏血酸溶液各1.0ml，分置两个100ml锥形瓶中，加入1%草酸9.0ml，用微量滴定管以0.1%的2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即为终点。
由所用染料的体积计算出T值(平均值)，即1ml染料相当于多少mg的Vc。
3. 样液滴定准确吸取已制备的样品滤液各两份，每份10.0ml分别放入两个100ml锥形瓶内，滴定方法同前注意：1. 滴定过程宜迅速，一般不超过2min，因为样品中某些杂质亦能还原二氯酚靛酚，尽管其还原能力较弱且还原速度较Vc更慢2. 滴定所用染料宜控制于1~4ml，如果样品含Vc含量过高/低，可酌量增/减样液3. 样品提取液应避免日光直射，否则会加速Vc氧化计算m = VT /m0 × 100式中m：100g样品中含Vc的质量(mg)V：滴定时所用去染料体积(ml)T：每毫升染料能氧化Vc质量数(mg/ml)m0：10ml样液含样品之质量数(g)试剂和器材试剂1. 2%草酸溶液：草酸2g溶于100ml蒸馏水中。
实验11维生素C的定量测定(2_6_氯酚靛酚滴定法)
（2,6-二氯酚靛酚滴定法）
关于维生素C的常识
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少 它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年 来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化 学致癌物的阻断作用。
维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于 水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多 水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、 洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。
贮于棕色瓶中冷藏（4℃）约可保存一周。每次临用时，以标准
抗坏血酸溶液标定。
二、材料 橙子、小白菜等。
三、器材 锥形瓶四、提取 水洗干净削皮的橙子或去叶的小白菜，用纱布或吸水
纸吸干表面水分。然后称取270 g橙子和180 g小白菜梗， 分别加入600 ml 2%草酸，置组织搅碎机打成浆状，纱布 过滤，滤液平分为三份，放置备用。
（mg/ml）； m0：10ml样液相当于含样品之质量数（g）。
知识回顾 Knowledge Review
10倍，吸取10ml小白菜汁以2%草酸稀释2倍。各取10ml 滤液，分别放入2个锥形瓶内，滴定方法同前。每个样品 重复滴定两次。
七、计算
m=VT/m0 x 100
上式中： m：100g样品中含抗坏血酸的质量（mg）； V：滴定时所用去染料体积数（ml）； T：每毫升染料能氧化抗坏血酸质量数
五、标准液滴定
准确吸取标准抗坏血酸溶液0.1ml置100ml锥形瓶中， 加9.9ml 1%草酸，用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚 溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。由所 用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸。 重复两次。
维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)一、目的要求:(1)学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C含量的原理和方法。
(2)了解蔬菜、水果中维生素C含量情况。
(3)熟悉微量滴定法的基本操作过程。
二、实验原理:维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C时则会出现坏血病，因而维生素C又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶(抗坏血酸氧化酶)可以催化维生素C氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚(DCPIP)是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图:当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色;当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
三、实验材料、主要仪器和试剂:1(实验材料:多种蔬果(西红柿、尖椒、绿豆芽等)2(主要仪器:(1)天平 (2)研钵1(3)容量瓶(50mL) (7)漏斗(4)刻度吸管(5mL，10mL) (8)脱脂纱布(9)滤纸 (5)锥形瓶(100mL)(6)微量滴定管(3mL)3(试剂:(1)2, HCl)标准抗坏血酸溶液精确称量抗坏血酸(应为洁白色，如变为黄色则不能用)(2 25mg，溶于25ml 4,HCl中，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用前配制，此溶液每ml 中含抗坏血酸0.5mg，。
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2009.10-12
医药学院生物化学实验课件
思考题
1. 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定 含量的优 二氯酚靛酚滴定法测定Vc含量的优 二氯酚靛酚滴定法测定 缺点? 缺点 2. 此实验测定误差的可能来源 此实验测定误差的可能来源?
2009.10-12
医药学院生物化学实验课件
的定量测定(2,6-二氯 实验十一 维C的定量测定 的定量测定 二氯 酚靛酚滴定法) 酚靛酚滴定法
中国海洋大学医药学院
2009.10-12
医药学院生物化学实验课件
实验目的
掌握2,09.10-12
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实验原理
维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯靛 酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。 在酸性溶液中，2，6-二氯靛酚成红色，被还原后变为无色。 因此可用2，6-二氯靛酚滴定样品中含有的维生素C，当样品 中的维生素C被完全还原后，在滴加过量的2，6-二氯靛酚， 溶液变为淡红色，即为终点。 如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯靛酚的量 与样品中所含有维生素C的量成正比。
2009.10-12
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O C HO HO H HO C O C C C CH2OH
Cl
+O
Cl
N
OH H OH
+ Cl
还原型抗坏血酸
O C O O 氧化型脱氢 H 抗坏血酸 HO C O C C
2，6－二氯酚靛酚（红色） 二氯酚靛酚（红色）
O Cl
N
O
蓝色)
Cl
+
O Cl
N H
还原型2 二氯酚靛酚（无色） OH 还原型2，6－二氯酚靛酚（无色）
C CH2OH
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实验仪器
新鲜水果 吸管 容量瓶 滴定装置 锥形瓶 研钵 漏斗
2009.10-12
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实验试剂
1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。 2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸馏水。 3、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液，并 稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液浓度 此溶液浓度 0.1mg/ml. 4、0.1%2，6-二氯靛酚溶液：称取500mg2，6-二氯靛酚溶于300ml含有 104mg碳酸氢钠的热水中，冷却，加蒸馏水并稀释至500ml，滤去不溶 物，贮于棕色瓶中，冷藏。
2009.10-12
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实验步骤
1.样品中抗坏血酸的提取： 样品中抗坏血酸的提取： 样品中抗坏血酸的提取 将水果用水洗干净，用滤纸吸取表面水分。然后称取 20g，加入20ml 2%草酸，用研钵研磨，四层纱布过滤， 滤液备用。纱布可用少量2%草酸洗几次，合并滤液， 滤液总体积定容至50ml。
2009.10-12
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2.滴定 滴定
1) 标准液的滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml 于100ml锥形瓶中，加9ml1%草酸溶液，用2，6-二氯 靛酚滴定至淡红色。滴定终点要保持15秒钟。有所用 2，6-二氯靛酚的体积算出1ml染料相当于多少毫克抗 坏血酸。 2) 样品液的滴定：准确吸取滤液两份，每份10ml，分 别放入两个100ml锥形瓶中，滴定方法同上(另取10ml 1%草酸作空白对照滴定)。
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实验注意事项
滴定过程要迅速,一般不应超过2 滴定用染料应1 1.滴定过程要迅速 ,一般不应超过2min, 滴定用染料应1ml之间 否则应改变样品量或将提取液适当稀释； 之间, 4ml之间,否则应改变样品量或将提取液适当稀释； 整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化； 2.整个操作过程中要迅速，避免还原型抗坏血酸被氧化； 在处理各种样品时，如遇有泡沫产生， 3.在处理各种样品时，如遇有泡沫产生，可加入数滴辛醇 消除； 消除； 测定样液时，需做空白对照， 4.测定样液时，需做空白对照，样液滴定体积扣除空白体 积。 5.样品提取液应避免阳光直射。
2009.10-12 医药学院生物化学实验课件
结果计算
式中： 为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数； 式中： VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数； 为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数 VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数； 为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数； 为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数 C为样品提取液的总毫升数； 为样品提取液的总毫升数； 为样品提取液的总毫升数 D为滴定时所取的样品提取液毫升数； 为滴定时所取的样品提取液毫升数； 为滴定时所取的样品提取液毫升数 T为1ml染料能氧化抗坏血酸毫克数 染料能氧化抗坏血酸毫克数; 为 染料能氧化抗坏血酸毫克数 W为待测样品的重量（g）。 为待测样品的重量（ ）。 为待测样品的重量