实验室常用实验方法
生物中的重要实验方法及应用
生物中的重要实验方法及应用生物实验是生物学领域中的重要研究方法之一，它能够帮助科学家们深入地了解生物的结构、功能和行为，以及生物体内各种生物分子的相互作用和调控机制。
在实验室中，科学家们运用各种实验方法，通过对生物进行各种控制和观察，来揭示生物学的奥秘。
本文将介绍一些生物学中常用的实验方法及其应用。
一、光学显微镜技术光学显微镜是生物学实验中最基本的工具之一。
它能够放大样本并观察其细节结构，帮助科学家们研究细胞的组织结构、细胞器的形态和分布等。
通过光学显微镜可以观察到生物体微观结构的形态特征，如细胞核、细胞质、细胞壁等。
光学显微镜还可以结合染色技术用于观察细胞内各种生物大分子的位置和表达水平，如蛋白质、核酸、糖类等。
这些信息可以帮助研究者了解细胞内的分子调控机制和信号传导途径，以及细胞在生命过程中的功能。
二、分子生物学技术分子生物学是研究生物体内分子结构和功能的重要分支学科。
在分子生物学实验中，科学家们通过核酸（DNA和RNA）的提取、纯化和扩增等技术，来研究生物体内的基因结构和表达规律。
这些技术包括PCR反应、DNA测序、电泳分离等。
通过PCR技术可以扩增目标DNA片段，从而实现对基因的快速检测和分析。
而DNA测序技术可以帮助科学家们确定DNA序列，进一步揭示基因的功能和作用机制。
电泳技术则可以将DNA或RNA按照大小进行分离和检测。
分子生物学技术的应用非常广泛，例如在基因工程中，科学家们可以利用分子克隆技术将目标基因插入到目标生物体中，从而实现对生物体的基因改造。
三、蛋白质分离与鉴定技术蛋白质是生物体内重要的功能分子，它们参与了细胞代谢、信号传导、基因调控等生命过程。
对于蛋白质的分离和鉴定是研究蛋白质功能和作用机制的关键一步。
电泳技术是蛋白质分离与鉴定的常用方法之一。
通过电泳，可以将蛋白质按照大小、电荷等特性进行分离，进而研究其结构和功能。
在电泳分离的基础上，科学家们可以通过Western blotting技术检测目标蛋白质的存在和表达水平，并用于研究蛋白质的相互作用和调控机制。
实验室中常用什么方法比较水果中维生素 C 的含量
实验室中常用什么方法比较水果中维生素C 的
含量
实验室中常用的方法之一是用碘标定法或二苯胺法来测定水果中维生素C的含量。
这些方法的基本原理是利用维生素C和碘或二苯胺之间的化学反应来测量维生素C的含量。
1. 碘标定法：在这种方法中，首先将样品中的维生素C与碘酸钾反应生成碘，剩余的碘用含有淀粉的碘化钾溶液滴定。
当维生素C完全消耗时，溶液会变为蓝色。
通过测量消耗的碘的量，可以计算出维生素C的含量。
2. 二苯胺法：在这种方法中，维生素C与二苯胺反应生成一种带有色素的产物，可以通过光度计测量其吸光度来确定维生素C的含量。
这些方法都是常用的标准化学分析方法，可以在实验室中快速、准确地测定水果中维生素C的含量。
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临床科研常用实验室技术及研究策略
临床科研常用实验室技术及研究策略
临床科研中常用的实验室技术包括但不限于以下几种：
1. 基因测序技术：用于检测和识别基因序列中的变异，以及研究基因与疾病之间的关联。
2. 蛋白质组学技术：用于研究蛋白质的表达、修饰和功能，从而了解蛋白质在疾病发展中的作用。
3. 免疫学技术：包括抗体检测、抗原抗体反应的检测、免疫细胞的鉴定和功能分析等。
4. 细胞培养技术：用于研究细胞生长、分化、凋亡等过程，以及药物筛选和毒性测试等。
5. 动物模型技术：通过建立动物模型来模拟人类疾病，用于研究疾病的发病机制、药物筛选和治疗效果等。
在临床科研中，这些实验室技术常常与研究策略结合使用。
以下是一些常用的研究策略：
1. 观察法：观察法是一种基本的研究策略，通过对研究对象进行观察和记录，收集数据并进行分析，以了解疾病的症状、体征和病情发展。
2. 随机对照试验：随机对照试验是一种常用的临床研究方法，将受试者随机分为试验组和对照组，给予不同的干预措施，比较两组的结果，以评估干预措施的有效性和安全性。
3. 队列研究：队列研究是一种观察性研究方法，将人群按照是否暴露于某因素或按照不同暴露水平分为队列，追踪各队列的结局并比较其差异，以评估暴露因素与结局的关系。
4. 病例对照研究：病例对照研究是一种回顾性研究方法，通过比较病例组和对照组的暴露因素，分析暴露因素与疾病的关系。
5. 横断面研究：横断面研究是一种在特定时间点对特定人群的调查方法，通过收集数据并分析各种因素与疾病的关系。
这些实验室技术和研究策略在临床科研中发挥着重要作用，可以帮助科研人员深入了解疾病的发病机制、探索新的治疗方法、评估治疗效果等，为提高人类健康水平提供有力支持。
高中14种常见物质实验室制法
高中14种常见物质实验室制法1、实验室制取氢气(H2）⑴反应原理:Zn+H2SO4 === ZnSO4+H2↑⑵发生装置:固+液−→气(启普发生器）⑶净化方法:浓硫酸（除水蒸气）⑷收集方法：排水集气法/向下排空气法⑸尾气处理：无⑹检验方法：①点燃，淡蓝色火焰,在容器壁上有水珠②能使灼烧的CuO由黑色变为红色，气体产物使白色的CuSO4粉末变蓝2、实验室制取一氧化碳（CO）⑴反应原理：HCOOH−浓硫酸/∆→CO↑＋H2O⑵发生装置：固+液−∆→气（分液漏斗、圆底烧瓶）⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气）⑷收集方法:排水法⑸尾气处理:点燃法/收集法(塑料袋）⑹检验方法：①点燃,淡蓝色火焰,无水珠，产生的气体能使澄清石灰水变浑浊。
3、实验室制取二氧化碳（CO2)⑴反应原理：CaCO3＋2HCl===CaCl2＋CO2↑＋2H2O⑵发生装置：固+液−→气（启普发生器）⑶净化方法：饱和NaHCO3 溶液（除HCl)、浓硫酸（除水蒸气）⑷收集方法:向上排空气法/排饱和NaHCO3 溶液法⑸尾气处理：无⑹检验方法:①通入澄清石灰水变浑浊，继续通又变澄清②能使燃烧的木条熄灭4、实验室制取甲烷（CH4)⑴反应原理:CH3COONa＋NaOH −CaO/∆→CH4↑＋Na2CO3⑵发生装置：固+固−∆→气⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气）⑷收集方法：排水集气法/向下排空气法⑸尾气处理:无⑹检验方法:①点燃，淡蓝色火焰,燃烧产物是H2O和CO25、实验室制取乙烯（C2H4）⑴反应原理：CH3CH2OH −浓硫酸/170℃→CH2=CH2↑＋H2O⑵发生装置：液+液−∆→气（分液漏斗、圆底烧瓶）⑶净化方法:NaOH溶液（除SO2、SO3）、浓硫酸（除水蒸气）⑷收集方法：排水集气法⑸尾气处理：无⑹检验方法：①点燃,明亮的火焰，冒黑烟，燃烧产物是H2O和CO26、实验室制取乙炔（C2H2）⑴反应原理：CaC2＋2H2O −→ CH≡CH↑＋Ca（OH）2⑵发生装置:固+液−→气（分液漏斗、圆底烧瓶）⑶净化方法:CuSO4溶液、浓硫酸（除水蒸气）⑷收集方法:排水集气法/向上排空气法⑸尾气处理：无7、实验室制取氨气（NH3）⑴反应原理:2NH4Cl＋Ca（OH）2CaCl2＋2NH3↑＋2H2O⑵发生装置：固+固−∆→气⑶净化方法：碱石灰（除水蒸气）⑷收集方法：向下排空气法⑸尾气处理：水（防倒吸装置)⑹检验方法：①湿润的红色石蕊试纸变蓝8、实验室制取一氧化氮(NO）⑴反应原理：3Cu＋8HNO3 (稀)===== 3Cu（NO3）2＋2NO↑＋4H2O⑵发生装置：固+液−→气⑶净化方法:浓硫酸（除水蒸气）⑷收集方法：排水集气法⑸尾气处理：收集法（塑料袋)⑹检验方法：①无色气体，暴露于空气中立即变为红棕色9、实验室制取二氧化氮（NO2）⑴反应原理：Cu＋4HNO3(浓) =====Cu（NO3)2＋2NO2↑＋2H2O⑵发生装置:固+液−→气⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气）⑷收集方法：向上排空气法⑸尾气处理:碱液吸收（3NO2+H2O===2HNO3+NO ; NO+NO2+2NaOH===2NaNO2+H2O ）10、实验室制取硫化氢（H2S)⑴反应原理：FeS＋2HCl −→ H2S↑＋FeCl2⑵发生装置：固+液−→气(启普发生器)⑶净化方法:饱和NaHS（除HCl）,固体CaCl2(除水蒸气)⑷收集方法：向上排空气法⑸尾气处理:CuSO4溶液或碱液吸收（H2S+2NaOH=== Na2S+H2O或H2S+NaOH=== NaHS+H2O）⑹检验方法：①湿润的蓝色石蕊试纸变红②湿润的醋酸试纸黑11、实验室制取二氧化硫（SO2）⑴反应原理：Na2SO3＋H2SO4=====Na2SO4＋SO2↑＋H2O⑵发生装置：固+液−→气(分液漏斗、圆底烧瓶）⑶净化方法：浓硫酸(除水蒸气）⑷收集方法：向上排空气法⑸尾气处理：碱液吸收（SO2+2NaOH=== Na2SO3+H2O）⑹检验方法：①能使品红溶液褪色,加热后又恢复原色12、实验室制取氧气（O2）⑴反应原理：2KClO3−二氧化锰/∆→2KCl＋3O2↑⑵发生装置：固＋固−∆→气⑶净化方法：浓硫酸（除水蒸气）⑷收集方法：排水法/向上排空气法⑸尾气处理：无⑹检验方法：①能使带火星的木条复燃13、实验室制取氯气（Cl2）⑴反应原理：MnO2＋4HCl(浓）MnCl2＋Cl2↑＋2H2O⑵发生装置：固＋固−∆→气⑶净化方法:饱和食盐水(除HCl）、浓硫酸(除水蒸气）⑷收集方法：向上排空气法/排饱和食盐水法⑸尾气处理:碱液吸收（Cl2+2NaOH=== NaCl+NaClO+H2O ）⑹检验方法:①能使湿润的碘化钾淀粉试纸变蓝14、实验室制取氯化氢（HCl)⑴反应原理:2NaCl＋H2SO4Na2SO4＋2HCl↑⑵发生装置：固＋液−∆→气⑶净化方法:浓硫酸(除水蒸气）⑷收集方法:向上排空气法⑸尾气处理：水（防倒吸装置）⑹检验方法：①能使湿润的蓝色石蕊试纸变红②靠近浓氨水冒白烟。
物理实验方法
物理实验的方法有哪些1 控制变量法：这个应该是最常见的实验方法。
例如，在“探究压强与哪些因素有关”、“探究电流与电阻的关系”、“研究弦乐器的音调与弦的松紧、长短和粗细的关系”等实验中都用到了该实验方法。
2 类比法：例如，在学习电流时，为了更好地理解，与生活中熟悉的水流作类比。
实验+推理法：有些理论只有在理想空间里才能通过实验得出，此时，我们可以在现实条件实验的基础上推导出来这些理论。
例如，在初二我们学过牛顿第一定律：一切物体在没有受到力的作用时，总保持静止状态或匀速直线运动状态。
我们知道，物体在运动过程中必定会受到阻力作用，但是我们通过多次实验，可以推出这一结论。
3 描述法：例如，在生活中是不存在光线的，我们为了更好地学习光，才引进了“光线”这一词。
4 转换法：例如，我们在学习“声音是振动产生的”这一知识时，我们把音叉的微小振动转换为乒乓球的摆动。
使实验现象更为明显。
5 模型法：我们在学习原子结构时，为了更好地认识原子的内部结构，用太阳系模型代表原子结构。
扩展资料：物理实验是初高中阶段物理课程中包含的相关实验，包括电学实验、力学实验、热学实验、光学实验等等，常用于验证物理学科的定理定律。
实验物理是相对于理论物理而言，理论物理是从理论上探索自然界未知的物质结构、相互作用和物质运动的基本规律的学科。
理论物理的研究领域涉及粒子物理与原子核物理、统计物理、凝聚态物理、宇宙学等，几乎包括物理学所有分支的基本理论问题。
而实验物理主要是从实验上来探索物质世界和自然规律。
实验室使用守则1、为保护实验仪器和保持环境卫生，学生必须脱鞋进入实验室。
2、实验室是全校师生进行实验教学和科研活动的场所，学生进入实验室后要保持肃静，遵守纪律。
3、做实验前，认真听教师讲解实验目的、步骤、仪器的性能操作、方法和注意事项，认真检查所需仪器设备是否完好齐全，如有缺损要及时向教师报告。
4、实验时要遵守操作规程，按照实验步骤认真操作。
5、实验时要注意安全，防止意外发生。
实验室制取二氧化碳的方法
实验室制取二氧化碳的方法
制取二氧化碳的实验室方法有多种。
下面将介绍几种常用的方法。
1.酸与碱反应法：
将酸和碱按适当的配比混合，然后通入一定量的冷水，产生大量的气体。
将气体通过通气管引入盛有冷却剂的集气瓶中，并使气体冷却凝结下来。
冷凝后的液体就是二氧化碳。
2.碳酸盐与酸反应法：
将碳酸盐与酸反应制备二氧化碳是较为常用的方法之一。
首先，取适量的酸（如稀盐酸）放入集气瓶中，再加入含有碳酸盐的物质，如碳酸氢钠（小苏打），两者反应后即产生二氧化碳。
气体通过集气瓶的通气口进入集气瓶内。
3.热分解法：
将适量的碳酸盐样品（如碳酸钠或碳酸氢钠）放入玻璃试管中，加热试管使其发生热分解反应。
反应产物中产生大量的二氧化碳气体，可以通过连接在试管口上的集气瓶进行收集。
4.发酵法：
将适量的有机物质（如蔗糖、果糖等）溶解在水中制备好发酵液，然后加入适量的酵母或其他发酵产物，将反应容器密封。
在一定的温度和适宜的环境条件下，酵母（或其他微生物）分解有机物，产生二氧化碳和酒精。
二氧化碳气体可以通
过管道引入收集瓶中。
需要注意的是，实验室制取二氧化碳过程中，应当采取适当的安全防护措施，确保操作人员的安全。
同时，在进行实验之前，应仔细准备实验所需的试剂和设备，并对实验条件进行充分的调整和控制，以确保实验能够取得预期的结果。
总之，通过酸与碱反应、碳酸盐与酸反应、热分解和发酵等方法都可以在实验室中制取二氧化碳。
这些方法都比较简单易行，能够满足实验要求。
实验室技术
四川省广元市语文中考模拟试卷（五）姓名:________ 班级:________ 成绩:________一、基础及运用部分 (共9题；共50分)1. （2分）(2018·徐州) 下列词语中字形和划线字的字音全都正确的一项是（）A . 媲（pì）美对称（chèn）重峦叠障养精蓄锐B . 剽（b iāo）悍良莠（yǒu）莫衷一是冲耳不闻C . 憎（zēng）恶缄（jiān）默人才辈出心无旁骛D . 戏谑（xuè）着（zháo）落销声匿迹走投无路2. （2分）下列词语中划线字注音、字形完全正确的一项是（）A . 渊博（yuān）精僻（pì）诓骗（kuāng）脂粉（zhǐ）B . 彷徨（páng）拜佛（fó）玄虚（xuán）抠门儿（kōu）C . 咀嚼（jué）狡黠（jié）聪颖（yǐng）瘠梁（jǐ）D . 傅彩（bó）阐证（chǎn）汲取（jī）泛滥（làn）3. （2分）下列句中加线词语感情色彩发生变化的一项是（）A . 在游戏时他制作了各式各样粗糙的像车、船、风车之类的小玩意儿。
B . 可是这儿却偏有一个青年学生，倔强到敢于用自己的实际观察来检验他的教授们的那些教条。
C . 这种狂妄行为必须加以制裁——为了大学的声名，也为了有益于他的灵魂。
D . 伽利略的教授们拒绝发给他医生文凭，因此他就离开了比萨大学。
4. （2分） (2017七下·兴化月考) 下面句子没有语病的一项是（）A . “道德讲堂”增加了与会者发言环节，每位发言者发言时间最多不超过30分钟左右。
B . 为降低交通噪音对环境的影响，我国科研人员制定了总平面防噪音方案。
C . 随着电脑文字录入技术的应用，使人们逐渐不喜欢用笔写字了。
D . 报刊、电视、网络等宣传媒体，更有责任作出表率，杜绝用字不规范现象不再发生。
生物学的实验方法
生物学的实验方法在生物学的研究中，实验方法是获取可靠数据和有效结论的关键。
通过实验，科学家可以观察和测量生物体的行为、特征和反应，从而深入了解生物学的各个方面。
本文将介绍一些常见的生物学实验方法，用于研究生物体的结构、功能和相互作用。
一、观察实验法观察实验法是最常用的实验方法之一，它基于科学家对生物体的观察和记录。
这种方法适用于研究生物体的外部特征、行为模式和变化过程。
科学家通过裸眼观察、显微镜观察或摄影记录来进行观察实验。
观察实验法可以提供直观的数据和图像，帮助科学家识别和描述生物体的特征。
例如，科学家可以用显微镜观察细胞的结构、形状和运动。
通过记录细胞核的数量、色素颗粒的分布和细胞器的活动，科学家可以进一步研究细胞的功能和作用机制。
二、野外观察实验法野外观察实验法是在自然环境中观察和研究生物体的方法。
它通常用于研究生物体的生态特征、行为习性和适应能力。
科学家可以选择特定的野外场地进行观察，记录生物体的数量、分布、迁徙和互动模式。
举例来说，科学家可以在森林中进行鸟类的观察实验。
他们可以记录鸟类的食物来源、栖息地需求和种群密度，从而了解鸟类在特定环境中的生存状态和适应能力。
三、实验室培养实验法实验室培养实验法是将生物体或其组织在受控条件下进行培养和观察的方法。
这种方法适用于研究生物体的生长、发育、代谢和适应能力等方面。
实验室培养实验法可以控制环境条件，排除其他因素的干扰，从而得到更精确的实验结果。
举个例子，科学家可以在培养皿中培养细菌，观察它们的生长速度和菌落形态的变化。
通过调整培养基的成分、温度和pH值等条件，科学家可以研究细菌的营养需求和生长适应性。
四、分离与纯化实验法分离与纯化实验法是将混合物中的不同成分分离并纯化的方法。
在生物学研究中，科学家常常需要从组织、细胞或混合液中分离出特定的生物分子或化合物，以便研究它们的性质和功能。
一个典型的实验是DNA的提取与纯化。
科学家可以通过一系列的处理步骤，如细胞破碎、蛋白质消化和染色体剪切，将DNA从细胞中分离出来。
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总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。
若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。
在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。
1.提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞；2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30C下放置5分钟；3.在上述EP管中，按照每1ml TRIZOL加0.2ml氯仿的量加入氯仿，盖上EP管盖子，在手中用力震荡15秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3分钟后，12000g（2℃～8℃）离心15分钟；4.取上层水相置于新EP管中,按照每1ml TRIZOL加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇，在室温下（15℃～30℃）放置10分钟,12000g（2℃～8℃）离心10分钟；5.弃上清，按照每1ml TRIZOL加1ml 75%乙醇进行洗涤，涡旋混合，7500g（2℃～8℃）离心5分钟，弃上清；6.让沉淀的RNA在室温下自然干燥；7.用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。
PCR实验室常用DNA聚合酶有三种：TaKaRa Taq TM，TaKaRa E X Taq TM和Pyrobest TM DNA Polymerase。
TaKaRa Taq TM 是一般的DNA聚合酶，保真性较差，但价钱便宜，一般用于基因表达的检测等。
TaKaRa E X Taq TM是具有Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶，具有一定的保真性，而且其扩增得到的PCR产物3’端附有一个“A”碱基，如果希望直接将产物克隆到T-vector可以用此酶。
Pyrobest TM DNA Polymerase也是具有Proof reading 活性的耐热性DNA聚合酶，其特点是保真性极高，扩增得到的PCR产物为平滑末端。
如果进行基因的扩增请使用此酶。
1.按下列组成在PCR反应管中调制反应液：TaKaRa Taq TM或TaKaRa E X Taq TM的配方Pyrobest TM DNA Polymerase的配方①反应总体积根据实际情况进行调控，可以做20~50µl以节约试剂；②将上表各成分加入到0.2ml或0.5ml灭菌的PCR薄壁管中；③如果不用PCR仪的加热盖，在反应混合液的上层加30 ~50µl 的矿物油防止样品在PCR的过程中蒸发；2.按以下程序进行PCR扩增。
PCR反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异，在实际操作中需根据具体的情况以及PCR结果而进行优化。
反应结束后，抽取扩增样品5µl，用琼脂糖凝胶电泳分析扩增结果，用DNA marker判断扩增片段的大小或冷冻保存，以备以后分析使用。
RT-PCRProtocol: TaKaRa One Step RNA PCR Kit (AMV)1.按下列组成在PCR反应管中调制反应液1.反应总体积根据实际情况进行调控，可以做20~50µl以节约试剂；2.将上表各成分加入到0.2ml或0.5ml灭菌的PCR薄壁管中；3.如果不用PCR仪的加热盖，在反应混合液的上层加30 ~50µl 的矿物油防止样品在PCR的过程中蒸发；2．按以下条件进行反应反应结束后，抽取扩增样品5µl，用琼脂糖凝胶电泳分析扩增结果，用DNA marker判断扩增片段的大小或冷冻保存，以备以后分析使用。
琼脂糖核酸电泳1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净，放在制胶平板上，封闭模具边缘，架好梳子；2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶：准确称量琼脂糖干粉，加入到配胶用的三角烧瓶内，定量加入电泳缓冲液（一般20~30 ml）；3.放入到微波炉内加热熔化。
冷却片刻，加入一滴荧光染料，轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液，倒入电泳槽中，待其凝固；4.室温下30~45分钟后凝胶完全凝结，小心拔出梳子，将凝胶安放在电泳槽内；5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液，其量以没过胶面1mm为宜，如样品孔内有气泡，应设法除去；6.在DNA样品中加入10³体积的载样缓冲液（loading buffer），混匀后，用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内；7.接通电源，红色为正极，黑色为负极，切记DNA样品由负极往正极泳动 (靠近加样孔的一端为负)。
一般60～100V电压，电泳20～40min即可；8.根据指示剂泳动的位置，判断是否终止电泳；9.电泳完毕，关上电源，在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置，并与核酸分子量标准Marker比较被扩增产物的大小。
胶回收纯化DNA1.琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到EP管中，称琼脂糖带的重量；2.按照每100mg加400µl的量加入binding buffer，放入到EP管振荡器中，45℃～55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都溶解（大概要5分钟）；3.取出纯化柱，将上述溶解液转移至柱中，室温下放置2分钟，8,000rpm 离心1分钟，弃EP管中的液体，将纯化柱放回EP管中；4.加500µl的wash buffer至柱中，8,000rpm 离心1分钟。
弃管中的溶液；5.重复操作4步的操作1次，最后将纯化柱放入EP管中10,000rpm离心30秒，除去痕量的wash buffer；6.将纯化柱放入一个新的EP管。
加30~40µl H2O或者elution buffer至纯化柱膜的中央，在37℃或50℃下放置2分钟，10,000rpm离心1分钟洗脱DNA，将EP管中的DNA溶液放在-20℃保存。
7.注：若想要不电泳而直接纯化DNA溶液，只需要在第2步中按100µl液量加400µl的binding buffer,其余的步骤不变。
大肠杆菌质粒DNA的提取（碱裂解法）此方法适用于小量质粒DNA的提取提取的质粒DNA可直接用于酶切PCR扩增。
1.取1.5ml细菌培养物于EP管中，4000rpm离心1分钟，弃上清液，使细菌沉淀尽量干燥；2.将细菌沉淀重悬于用冰预冷的100 µl溶液I (50 mmol/L葡萄糖，10 mmol/L EDTA pH 8.0，25 mmol/LTris-HCl pH 8.0) 中，剧烈振荡；3.加入200 µl新配制的溶液II(0.2 mol/L NaOH，1％SDS（m/v）)，盖紧EP管口，快速颠倒离心管5次，以混合混合物，确保离心管的整个内表面与溶液II接触，不要涡旋，置于冰浴中；4.加入150 µl预冷溶液III(每100 ml 的溶液III中含60 ml 5 mol/L 乙酸钾，11.5 ml冰乙酸，28.5ml H2O)，盖紧EP管口，反复颠倒数次，使溶液III在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，之后将管置于冰上3~5分钟；5.在最大转速下离心5min，取上清液于另一新EP管；6.用两倍体积的乙醇室温沉淀双链DNA，振荡混合于室温放置2分钟，最大转速离心5分钟；7.小心吸去上清液，将离心管倒置于滤纸上，以使所有液体都流出，在将附于管壁的液滴除尽；8.加1ml 70％乙醇洗涤沉淀，振荡混合，用12,000g离心2分钟，弃上清，将开口的EP管置于室温使乙醇挥发，直至EP管中内没有可见的液体存在（5～10分钟），用适量的ddH2O溶解；9.用0.5µl的RNase 37℃温育5~10分钟；10.电泳鉴定。
乙醇沉淀DNA1.加入1/10体积的乙酸钠（3 mol∕L，PH=5.2）于DNA溶液中充分混匀，使其最终浓度为0.3 mol∕L；2.加入2倍体积用冰预冷的乙醇混合后再次充分混匀置于-20℃中15~30分钟；3.12,000 g离心10分钟，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；4.加入1/2离心管容量的70％乙醇，12000g离心2分钟，小心移出上清液，吸去管壁上所有的液滴；5.于室温下将开盖的EP管的置于实验桌上以使残留的液体挥发至干；6.加适量的ddH2O溶解DNA沉淀。
酶切1.酶切前确定待切样品的浓度, 并选择合适的限制性内切酶和配套Buffer。
2.在离心管中加入如下成分：10³Buffer 1μl待切样品 xμl酶 0.5-1μl加水补足10μl3.混匀样品并短暂离心使样品沉于管底。
4.将离心管置于37℃中温育1-3hr，若待切样品为PCR产物，则可将反应时间适当延长。
5.用未酶切的质粒作为对照，琼脂糖电泳鉴定酶切结果。
注：当酶切样品用于回收而不是鉴定时，可按比例适当加大反应体积。
双酶切可选用二者活性都较高的Buffer或者通用Buffer，但要注意不能有星反应。
）连接1.连接前先电泳确定待连接载体与片段的浓度。
2.在离心管中加入如下成分：10³连接Buffer 1μl待连接的样品（胶回收产物或PCR产物，载体与片段的mol比为1∶3-5）连接酶0.5-1μl加水补足10μl3.混匀样品并短暂离心使样品全部沉于管底。
4.将离心管置于连接酶要求的温度孵育适当的时间（根据不同公司的酶的要求而定，一般为22℃ 1-3hr或16℃连接过夜）。
连接完的样品可直接用于转化，也可放4℃冰箱短期保存。
感受态细胞的制备1.挑取适当菌株的E.coli单菌落接种于2ml SOB培养液中，37℃摇床过夜。
2.取0.5-1ml过夜培养的菌液转种到50ml SOB中，18℃剧烈震荡，直到A600达到0.6。
3.将培养物转移到50ml离心管中，4℃ 4,000rpm/min离心10min。
同时在冰浴上配置TB溶液。
4.弃上清，将离心管倒置于滤纸上，使培养液被吸干。
5.取1ml刚配的TB溶液打散菌体沉淀，再加入15ml TB（1/3体积的起始培养液），冰浴10-15min，4℃4,000rpm/min离心10min。
6.弃上清，沉淀重悬于4ml TB（1/12.5体积的起始培养液），冰浴10min。
7.加入280μl DMSO，缓缓滴入并轻轻摇晃，使其充分混合均匀，冰浴10min。
8.将菌液分装于EP管中，-80℃或液氮冻存。
9.取两管感受态细胞分别加入1μl无菌ddH2O（阴性对照）和1μl纯质粒（阳性对照）进行转化（见后），以检测感受态的质量。
阴性对照平板上应该无菌落生长，阳性对照平板上菌落数目的多少显示感受态效率的高低。
SOB的配制：蛋白胨 20g酵母提取物 5gNaCl 0.58gKCl 0.186g100³Mg++溶液 10ml溶解并加水定容至1L，121℃³20min高压蒸汽灭菌100³Mg++溶液：MgCl2﹒6H2OMgSO4﹒7H2O溶解并加水定容至100ml，121℃³20min高压蒸汽灭菌TB溶液的配制：1M KCl 5ml0.55M MnCl2 2ml0.5M CaCl2 0.6ml0.1M K-Pipes(pH 6.7) 2mlddH2O 10.4mlTotal 20ml注：上述溶液均需高压蒸汽灭菌处理0.1M K-Pipes(pH=6.7)的配制：称取3.02g Pipes粉末溶于80ml dd H2O中，此时粉末不能完全溶解，用10N KOH或KOH固体调节PH 值，只有当PH接近6.7时粉末才能完全溶解，此时当小心少量地加入KOH直至达到所需PH值。