新生儿溶血病的实验室检查复习过程
溶血检查步骤
溶血检查步骤
溶血检查是一种检查红细胞膜完整性的常规检查之一，其主要步骤如下：
1. 采集血样：用无菌技术采集3-5ml的静脉血样，放入干净的试管中。
2. 标本处理：将采集得到的血样放置在室温下，待血液凝固后，用离心机离心10分钟，将血清和红细胞分离开。
3. 准备溶血试剂：将0.9%的氯化钠溶液加热至37℃，作为溶血试剂备用。
4. 加入溶血试剂：将离心后的红细胞沉淀中加入适量的溶血试剂，轻轻振动混合。
5. 孵育：将试管放置在37℃恒温水浴中孵育30分钟。
6. 观察结果：孵育后观察，如出现溶血现象，则说明红细胞膜有破损或缺陷，不能完全抵抗溶血试剂的作用。
需要注意的是，溶血试验是一种半定量检测方法，不同的检测条件和试验操作可能会对结果产生影响，因此，不同的实验室可能会有不同的标准和参考范围，需要根据具体情况进行解读。
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程
新生儿溶血病血清学检查标准操作规程(一)检验目的检测孕妇产前与其丈夫ABO及Rh血型相容性、孕妇IgG 抗体效价、产后新生儿体内不相容抗体存在情况、新生儿与产妇之间血型相容性，为新生儿溶血病的预防、诊断及治疗提供可靠的实验室依据。
(二)检验原理新生儿溶血病是由母婴血型不合，母亲体内与新生儿红细胞抗原不配合的IgG性质的血型抗体进入新生儿体内，破坏新生儿或胎儿红细胞而引起，可发生在胎儿期和新生儿早期，溶血严重者可出现死胎而流产，存活者则有不同程度的新生儿黄疸。
新生儿溶血病产前诊断方法主要包括检测胎儿父母的ABO及Rh血型、孕妇不规则抗体筛查、外周血抗A ／抗B或Rh抗体效价来判断新生儿溶血病发生的可能性及严重程度；新生儿溶血病产后诊断主要包括母子ABO及RhD 血型鉴定试验、新生儿标本三项试验，为临床诊断及进一步采取治疗手段提供可靠的依据。
(三)适用范围适用于新生儿溶血病产前、产后血型血清学试验。
(四)设备性能参数参见血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Ortho BioVue离心机及各全自动血型／配血系统使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材血清学专用离心机、达亚美ID离心机、达亚美ID 孵育器、强生Or-tho BioVue离心机、塑料软试管、塑料硬质试管(75mmXl2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液枪、一次性移液枪头。
2.试剂DiaMed ABO／RhD血型卡、OrthoBioVueABO ／RhD血型卡、抗A、抗B血清、Rh分，型血清、生理盐水、抗球蛋白试剂(市售单克隆)、抗体筛查试剂红细胞、抗体鉴定试剂红细胞、致敏的阳性对照细胞(自制)。
(六)标本要求1.夫妇标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
2.患儿标本EDTA-K2或EDTA-K3抗凝全血≥3ml(手工操作时也可以使用不抗凝标本)，经B600-A型离心机在 1 760g条件下，离心5分钟，离心后无明显乳糜。
新生儿溶血病产前产后检测操作步骤
产前血型血清学检查标本要求：夫妻双方抗凝血2ml（尽量要求父亲抗凝血2ml，非必要），母亲促凝血3-5ml（血清）。
第一步：取两个试管分别标记 A 和BA管 700 μL生理盐水 B管（从A管取200 μL混合液+100 μL母亲血清混匀再加入200 μL血浆IgM稀释液）混匀 B管封口绑紧37℃温育1小时。
第二步:紧接着做父母ABO血型、RH型和母亲的不规则抗体。
第三步：取六个试管，分别标记123456，每管里面加200 μL盐水（父亲AB型需要同时做IgG抗A效价和IgG抗B,各做1次）。
第四步：等B管温育时间到了，从B管吸200微升到1管，混匀后从1管吸200 μL到2管........从5管吸200 μL到6管，依次添加稀释（倍比稀释）。
第五步：取不规则卡标记好 6 5 4 3 2 16 5 4 3 2 11.所有孔先分别加入50 μL父亲（与父亲同型）的0.8%红细胞悬液。
2.然后每孔再依次加入相对应管号里面的稀释液50 μL（防止交叉污染，从浓度最低往最高依次加）。
第六步：1.放到37℃温箱温育15分钟。
2.离心5分钟，取出判读结果。
注：判读结果往前推一位（例如6号孔是阳性，就报5号管是阳性）。
母亲RhD阴性血型，不用加入血浆IgM稀释液，不用37℃温育1小时。
直接第二步同上。
产后血型血清学鉴定标本要求：新生儿抗凝血2-3ml第一步：1.收到标本之后离心2分钟，取两个空试管，标记红细胞1和血浆2。
红细胞1 血浆22.将离心好的血样中血浆全部吸入空试管2中，剩余的红细胞吸入另一空试管1中。
3.向试管1中加3000μL生理盐水，进行洗涤，洗涤红细胞三次后，取压积红20μL+2480μL盐水加入新的试管中配制成0.8%红细胞。
（剩余的压积红留着做放散液）。
第二步;直抗试验、血型试验取0.8%红细胞50μL分别加入血型卡和不规则抗体卡中（只加一个孔）做好标记，直接离心五分钟看结果。
第三步：游离试验、放散试验1.取试管1中压积红1000μL+盐水1000μL（1:1适量配比）。
新生儿溶血病(HDN)免疫血液学试验标准检测流程
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
❖ 二、ABO、Rh（D）血型鉴定
❖⒈ 选用经国家批准且批批检测合格的 单克隆抗-A、抗-B、抗-D(IgM)和A、B 型标准试剂红细胞。
❖⒉ ABO血型鉴定：母亲血样做正反定型； 患儿血样只做正定型。推荐使用试管法 和微柱凝胶血型卡，不推荐使用纸片或 玻片法。
HDN换血治疗中血液及血型选择标准
HDN产前免疫血液学试验检测标准
❖ （1）第一次检测，一般可在妊娠第1216周进行，以此作为抗体基础水平。如 果检测到ABO以外抗体，或高效价的IgG 抗A（B）抗体，建议每月复查一次。
❖ （2）第二次检测在妊娠28-30周做，以 后每隔2-4周重复测定一次，了解抗体 增加速度。抗体效价上升快，提示HDN 的可能性大。
❖ 二、证实患儿血清中是否有来自于 母亲的抗体；
❖ 三、患儿红细胞是否被来自母亲的 免疫性抗体所致敏。
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 一、标本要求 ❖ ⒈ 采样时间建议： ❖ （1）可疑ABO不合HDN患儿血清学
检查最好在出生后1-7天之内； ❖ （2）可疑Rh等其他血型系统血型
不合应在出生后尽早为好。
❖ 二、试剂与设备（查看Word文件） ❖ 三、检测方法 ❖ ⒈ 产妇血样检测： ❖ 同《HDN产前免疫血液学试验》孕妇血
样检测条目。 ❖ ⒉ 患儿血样检测： ❖ （1）红细胞：ABO正定型、RhD血型
HDN产后免疫血液学试验检测标准
❖ 说明：新生儿ABO定型，多数专家 认为反定型没有意义。
❖ （2）红细胞直接抗人球蛋白试验 （DAT）：
国内外进展 ❖⒉ 研讨：
（1）研讨内容： ① 样本采集 ② 实验项目及操作 ③ 结果判定或解释
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程
输血科新生儿溶血病血型血清学检查标准操作规程1、目的：规范血液免疫学产前检查操作，确保试验过程及结果的准确性与可靠性。
2、范围：本规程适用于实验室血液免疫学产前检查试验操作。
3、职责：经授权的血型实验室试验人员负责血液免疫学产前检查试验过程及报告的发出。
4、原理孕妇和丈夫ABO血型不合（O/A、O/B、O/AB、A/B、A/AB、B/A、B/AB）时，孕妇体内的IgG抗A（B）可能会引起新生儿溶血病的发生。
本试验通过检测孕妇血清中有无IgG性质的抗A（B）抗体及其效价（应用巯基试剂破坏IgM抗体，检测IgG抗体效价）即可预测ABO系HDN发生的可能性。
应用筛选红细胞可检测孕妇血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，确定抗体的特异性，进一步检测非ABO系新生儿溶血病。
5、所需设备、材料或试剂：37℃恒温水浴箱、细胞洗涤离心机、抗-A抗-B血型定型试剂（单克隆抗体）、抗-D RH血型定型试剂（单克隆抗体）、凝聚胺介质试剂、抗人球蛋白试剂（抗-IgG、C3d）、（A、B、O）型标准红细胞悬液（2—5%）、商品化筛选细胞、谱细胞、2—ME试剂、12×75mm试管、塑料滴管。
6、检测环境条件：温度：18—25℃；湿度：30—70%7、标本要求7.1标本接收在接收标本时，应尽可能的了解、核对、记录患者的相关资料，包括受血者姓名、年龄、性别、临床诊断、输血史、用药史、妊娠史、标本编码等；7.2检验人员收到被检者产前检查申请按照申请单内容在试管上做标记(用记号笔在试管上标明被检者姓名、性别)，保留申请记录。
7.3按照要求进行血液采集。
将采好的血液沿试管壁注入已标识的抗凝试管中，反复颠倒混匀，放入2-8℃冰箱待用。
并填写《外来标本交接记录》及相关记录。
7.4标本的种类与数量：产前检查需送夫妇血样，血样均需抗凝（EDTA抗凝），女（母）5ml，男3ml。
7.5标本的保存与处理：完成所有试验内容后，要仔细核对实验结果，发出实验报告后，将实验所用的标本原始送检管存于2-8℃冰箱内至少7天以便进行查找和核对，之后交由单位相关部门统一处理。
新生儿溶血病检测作规程
新生儿溶血病检测操作规程一、项目名称、检验方法名称1.项目名称：新生儿溶血病检测（包括直接抗人球蛋白试验、游离试验和放散试验三项）2.检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1.试剂卡品牌：美国强生奥索2.代号：BioVue-po1yCassettes3.包装规格：400卡/箱试剂卡（707300）；100卡/箱试剂卡（707350）4.试剂成分:抗人球蛋白（1gG,C3b∕C3d）检测卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液,其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1%叠氮钠,0.0IM的EDTA.成分描述第1〜6柱：抗人球蛋白、抗抗一IgG（兔）-IgG.-C3d；多特异性抗一C3b（鼠单克隆）（克隆F7G3）抗一C3d（鼠单克隆）（克隆C4C7）FD&C1#蓝色染料FD&C5#黄色染料5.试剂的储存与效期：储存条件：2〜25。
C环境保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVUe专用离心机；BiOVUe专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2—8。
C保存。
六、试剂准备：抗人球蛋白（IgG,C3b∕C3d）检测卡为即用型产品。
试剂卡应在铝箔开启后一小时内使用。
试剂卡经过运输颠簸后，需倒置一下，然后重新离心以备用。
LAB精选新生儿溶血病检测操作规程D
新生儿溶血病检测操作规程1原理新生儿溶血病一般特指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病（HDN），可由多种原因引起。
临床常见的是ABO、Rh等血型系统。
胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体所包被，并在婴儿的网状内皮系统内受到免疫性破坏。
2试剂和材料2.1母亲血样3-5ml，患儿抗凝血3-5ml2.2抗人球蛋白试剂（包括广谱、IgG、C3）、2-Me应用液、抗-A、抗-B、抗-D、抗-C、抗-c、抗-E血清试剂2.35?、B、O型标准红细胞悬液3方法主要以三项试验为主①患儿直接抗人球蛋白试验②患儿游离抗体试验③吸收放散试验3.1ABO新生儿溶血病检测ABO新生儿溶血病主要是由于胎儿红细胞A或B抗原与来自母体的抗A或抗B 抗体反应的结果。
以母亲为O型，胎儿为A型或B型的发病率为最高。
3.1.1母、子（父）红细胞ABO血型鉴定（参照ABO血型鉴定）3.1.2子红细胞试验3.1.2.1子红细胞直接抗人球蛋白试验RBC生理盐水洗3遍，配成5%RBC悬液，取小试管加1滴2-5%子RBC，加多特异性抗球蛋白1滴，混匀离心看结果。
3.1.2.2子红细胞抗体放散试验：取经盐水洗涤的患儿压积RBC0.5-1ml,加等量盐水于试管中，56℃水浴，不断振摇10分钟，然后置于56℃温水离心管内，立即以1300g离心5分钟，吸取上清液备用。
取3只试管,标记Ac、Bc、Oc，将放散液分为3份分别加入3个小试管中，分别加2-5%A、B、O细胞1滴，37℃水浴1小时（加PEG缩短至5分钟），取出后用生理盐水洗涤3遍，倒尽盐水，各加抗多特异性抗球蛋白1-2滴，混匀离心看结果。
3.1.2.3子血清中游中游离抗体检查取3支小试管标明Ac、Bc、Oc，每管加患儿血清2-4滴，分别加入2-5%A、B、O指示红滴，混匀后离心，看结果。
如有凝集，说明有相应盐水抗体，不凝集将试1细胞盐水悬液．管放入37℃水浴1小时（加PEG5分钟）后，用生理盐水洗3遍，吸尽盐水后，每管加多特异性抗球蛋白1滴，离心看结果。
新生儿溶血病血清学检查操作规程
新生儿溶血病血清学检查操作规程原理新生儿溶血病是由母婴血型不合引起，可见于ABO、Rh及MN等血型系统。
胎儿和新生儿红细胞被来自母亲的IgG抗体包被，并在婴儿的单核-巨噬细胞系统（网状内皮系统）受到免疫性破坏，出现溶血，表现出相应的症状。
病情严重程度因个体差异、抗体类型、抗体效价等不同而异。
目的规范新生儿溶血病血清学检查操作；查找新生儿溶血病发生的原因，协助临床进行实验室诊断及治疗；保证临床用血的安全性和有效性。
职责输血科技术人员负责新生儿溶血病血清学检查。
适用范围母婴血型不合引起的新生儿溶血病的血标本。
支持文件《中国输血技术操作规程》（血站部分）.天津：天津科学技术出版社1997《输血技术学》第2版.北京：人民卫生出版社，2002《输血科（血库）工作手册》莞市中心血站2006材料或设备1、材料抗-A、抗-D定型试剂、抗球蛋白试剂、ABO反定型试剂红细胞、筛选细胞、谱细胞、生理盐水、新生儿静脉血、产妇及患儿父亲血标本2、设备血清雪专用离心机、电热恒温水浴箱、水浴振荡仪、显微镜、小试管、滴管、小玻棒操作步骤一、血标本采集及处理采集患儿及其父亲与母亲血标本各3-5ml，分离出血清，配制3%-5%红细胞盐水悬液。
如果患儿血标本为不抗凝血，则在一小玻璃漏斗颈部置一适当大小的棉球上，一边加生理盐水，一边用玻棒挤压血块，收集漏斗下面的红细胞悬液。
二、患儿血标本具体操作执行《ABO和Rh血型鉴定操作规程》。
ABO血型测定只做正定型。
1、直接抗球蛋白试验具体操作执行《抗球蛋白操作试验规程》中的直接抗球蛋白试验部分。
2、游离抗体检测⑴、取小试管3支，分别标明A、B、O细胞，每管加患儿血清2滴，再分别加入3%-5%的A、B、O、反定型试剂红细胞悬液1滴。
⑵、37℃致敏1h后取出，若发生凝集，不必继续往下做。
⑶、若不凝集，用盐水充分洗涤3次反应物后加入抗球蛋白血清1滴。
1300g离心15s，轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集反应，记录结果。
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新生儿溶血病的实验
室检查
精品文档
在我国诊断新生儿溶血病的实验室检查主要是三项试验（直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、放散试验），
直接抗球蛋白试验主要检测新生儿红细胞是否被来自母亲IgG抗A（B）所致敏；游离抗体试验是患儿血清的IgG抗A（B）来自母亲，如果新生儿血清中发现与其红细胞不配合的IgG抗A(B)时，表明婴儿体内有抗体，可能受害；
放散试验采用的是试管抗球蛋白技术和微柱凝胶技术，
用放散液与标准ABO型红细胞反应，（与O型红细胞反应视做阴性对照）均无凝集者，表明未查出抗体，
A型新生儿红细胞放散液只与标准A型红细胞凝集，表明放散液检出抗-A，而B型新生儿红细胞放散液只与标准B型红细胞凝集，表明放散液检出抗-B，
而A型新生儿红细胞放散液与标准B型红细胞凝集或B型新生儿红细胞放散液与标准A型红细胞凝集,表明放散液中检出抗-A，B。
我们采用微柱凝胶技术对我院541例母婴血型不合且有严重的新生儿黄疸或高胆红素血症患儿的血标本进行了三项试验，结果表明：ABO母婴血型不合新生儿溶血病（HDN）171例，其中OA115例，OB56例。
ABO溶血病因红细胞的抗体结合较少，直接抗球蛋白试验常为阴性或弱阳性，血清游离抗体阳性，抗体释放试验阳性。
Rh溶血病直接抗球蛋白试验强阳性，游离抗体强阳性，抗体释放试验强阳性。
我院新生儿科对溶血严重的患儿及时进行了换血治疗（ABO溶血采用O型洗涤红细胞+AB血浆的血液，Rh溶血采用ABO血型同患儿，Rh血型同母亲的血液）微柱凝胶技术用于新生儿溶血病的检测，方法简便、快速、判断结果标准，可成为医院实验室常规检测方法。
实验室能为临床快速准确提供试验报告，有利于患儿的早期诊断、早期治疗，对提高新生儿健康水平有很重要的意义。
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