用吐温20改进骨髓细胞染色体制备方法
小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进
小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进刘庆军;孙永君【摘要】我们在细胞生物学实验教学中对小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法实验操作做了一些改进:由传统的取小鼠后腿骨改为取四肢骨,提高了实验材料的利用率；由注射器法收集骨髓细胞改为震荡器法收集骨髓细胞,使收集细胞的实验操作更加简便、安全,而且大大提高了骨髓细胞的收得率,同时明显增加染色体中期分裂相的细胞数,由对照组中的每视野中的中期分裂相细胞2～4个提高到5～9个,极大提高了实验教学的效果.【期刊名称】《山东轻工业学院学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(026)004【总页数】2页(P64-65)【关键词】小鼠;骨髓细胞染色体;标本;改进【作者】刘庆军;孙永君【作者单位】山东轻工业学院食品与生物工程学院,山东济南250353;山东轻工业学院食品与生物工程学院,山东济南250353【正文语种】中文【中图分类】Q2-06小鼠骨髓细胞染色体标本制备是细胞生物学实验教学中一个经典而常规的实验教学项目，染色体是细胞分裂时期(体细胞的有丝分裂和生殖细胞的减数分裂)遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果。
染色体是有机体遗传信息的载体，对染色体的研究在生物进化、发育、遗传传和变异中有十分重要的作用。
处于分裂期的细胞经秋水仙素或秋水仙胺处理，由于阻断了纺锤丝微管的组装，使细胞分裂停止于中期，此时染色体达到最大收缩，具有典型的形态［1］。
本实验所用的小鼠骨髓细胞有高度的分裂活性并且数量非常多，经秋水仙素处理后，可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗、固定、浸片染色等处理，便可制作较好的小鼠骨髓细胞染色体标本。
1 实验用品1.1 器材解剖板、解剖剪、大小镊子、吸管、离心管、培养皿、量筒、预冷载玻片、酒精灯、普通天平、擦镜纸、HZS－H型恒温水浴箱、TDL－5型离心机、SK－1型振荡混匀器。
1.2 试剂秋水仙素200 μg/mL、0.075 mol/L KCl低渗液、甲醇乙酸(3∶1)固定液、Giemsa 染液、0.85% 生理盐水、香柏油、香柏油清洗剂(无水乙醇:无水乙醚=1∶1)1.3 材料小白鼠(KM洁净级，约25 g)2 实验方法［2，3］2.1 秋水仙素处理取骨髓前3 h先给小鼠腹腔注入秋水仙素，每只小鼠注射200 μg/mL浓度的秋水仙素0.4 mL。
pbst中吐温20的作用
pbst中吐温20的作用PBST（磷酸盐缓冲生理盐水）是一种常用的缓冲液，经常在生物学、分子生物学、免疫学等领域中用作实验中的溶液或试剂。
吐温20（Tween 20）则是一种非离子表面活性剂，具有良好的增溶、分散和乳化性能。
PBST中加入吐温20的目的是为了改善其溶解能力和稳定性，并增强与生物样品的相容性，提高试剂与目标分子的结合效率和检测灵敏度。
以下是PBST中吐温20的主要作用：1.增强稀溶液的稳定性：PBST中加入吐温20后，可以增加试剂或溶液的稳定性，防止试剂的沉淀和结晶。
2.增强试剂与生物样品的相容性：在生物学实验中，涉及到对蛋白质、细胞和细胞器等生物样品的处理。
敏感的生物样品通常需要在一定的缓冲液中进行处理，而PBST中的吐温20可以增加溶液与生物样品之间的相容性，减少可能对生物样品造成的损伤。
3.增强抗原和抗体之间的结合能力：在免疫学实验中，PBST中添加吐温20可以促进抗原和抗体之间的结合，提高抗体结合分子的检测灵敏度。
吐温20作为表面活性剂，可以减小非特异性结合，同时提高特异性结合，增加试剂与目标物质之间的亲和性。
4.减少非特异性结合：非特异性结合是在实验中经常遇到的问题之一、PBST中加入吐温20可以减少非特异性结合的发生，提高实验的特异性，减少干扰因素。
5.增强离子束制备试剂的效果：在离子束制备的过程中，PBST中的吐温20可以起到增溶的作用，提高离子束制备试剂的有效含量，加强离子束制备试剂对靶物质的捕获效果。
总之，PBST中吐温20的加入在各个实验条件下可以发挥相应的作用，从而提高实验的效果和结果的准确性。
它们的使用广泛且多样化，可以根据实验的具体需求进行调整和优化。
动物骨髓细胞染色体的制备
8、吸去上层固定液，视管底细胞多少加入少量新配制 的 固 定 液 ， 将 细 胞 团 快 轻 轻 吸 打 成 悬 液 。 （ 0.20.5mL）
低渗 蒸发
实验用品
1．器材：解剖器具、注射器（2ml） 、离心机、 刻度离心管、玻璃吸管、载玻片、盖玻片、显 微镜、恒温水浴锅等；
2．试剂 0.01%秋水仙素溶液、固定液（甲醇： 冰醋酸＝3：1）、0.4%KCl低渗溶液、Giemsa 染液、0.01M磷酸缓冲液(PH6.8)、0.85%生理 盐水、2%柠檬酸钠等。
4、将细胞悬液转入尖底离心管中，配平后，以 1000rmp离心8min，弃去上清液，留沉淀。
5、加入8ml 0.4%KCL溶液，吸打混合均匀，随即将 离心管置于26℃（小鼠为37℃）水浴中低渗45分钟。 （细胞膨胀，使滴片时细胞膜破碎，染色体分散）
6、预固定：加入2mL新鲜固定液，混匀，以1000rpm 离心8min。
可在1～1.5m间进行预实验，用1.5m较 好。
实验报告
记录所观察蟾蜍骨髓细胞染色体的数目和形态。 说明在骨髓细胞染色体的制备过程中的关键步骤，
秋水仙素对染色体制备的影响？ 你制备的蟾蜍染色体标本，分裂相是否多，染色
体分散程0转/分，离心8分钟，弃上清，加入固定液， 混匀后，室温放置30分钟，离心后，向沉淀中加 入0.5 ml预冷的固定液，将细胞重悬。
预冷的玻片
滴片后，将片子晾干，滴加适量Giemsa染 液染色15分钟，弃去染液，水洗，镜检。
结果显示
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。
2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。
3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。
二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。
骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗传学提供信息。
作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。
三、实验步骤1. 实验前准备工作（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。
（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。
（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。
（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。
（5）按实验方案准备各种试剂和设备。
（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。
2. 骨髓细胞的采集（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。
（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。
（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。
3. 细胞的处理（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。
使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。
（2）添加培养基到细胞培养物中，以充分覆盖细胞。
（3）将板加入约为35℃，5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中，进行配队。
（4）半小时后使用显微镜检查细胞的附着，然后循环补充适量接种。
在24小时之前，每隔2小时更换于第一个。
4. Gimsa染色法（1）准备细胞标本：从培养基中取出涂片架，然后“组织培养板”模式的检测做法，将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。
小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进
小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕【摘要】目的改进小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备的方法,以利于在实验教学中应用.方法设定不同浓度梯度的秋水仙素,分别作用于小鼠4小时和14小时,调整低渗液浓度及低渗时间、预固定和固定时间、离心速度及离心时间、滴片高度等,制作出分散良好、形态清晰的染色体标本.结果经过多次反复实验比较,秋水仙素注射剂量为10 μg/g BW作用4小时和5μg/gBW作用14小时,低渗液处理15分钟,预固定2分钟,固定10分钟,2500转/分,离心5分钟,滴片高度50～80 cm,可获得理想的实验结果.结论改进后的实验方法不仅能有效地缩短实验操作时间,而且可以提高实验教学质量,可应用于相关实验教学.【期刊名称】《卫生职业教育》【年(卷),期】2015(033)018【总页数】2页(P101-102)【关键词】小鼠;骨髓细胞;中期染色体;制备方法【作者】刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕【作者单位】遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041【正文语种】中文【中图分类】G424.31染色体的结构和数目是研究生物体遗传、变异、发育等的基础［1］，染色体制备对人类遗传病的研究和诊断有着非常重要的意义［2］，也是进行染色体原位杂交、染色体畸变、染色体核型分析和显带分析等研究的重要基础。
制备小鼠染色体标本是各大农业、生物和医学院校细胞生物学、遗传学、医学遗传学等实验课程中重要的实验内容之一。
通过实验，学生可了解小鼠染色体的数目及形态特征，掌握中期染色体制备的实验原理和方法。
该实验操作步骤简单，但每个步骤稍有不慎将导致实验失败，不能在镜下观察到清晰的、分散好的中期染色体。
另外，实验要求提前对实验动物进行预处理，因此对实验课程开设的时间有所限制。
三项条件改变制备小鼠骨髓细胞染色体的分析
三项条件改变制备小鼠骨髓细胞染色体的分析
李芳;王文青
【期刊名称】《青海医学院学报》
【年(卷),期】1990(000)002
【摘要】小鼠骨髓细胞染色体制备技术是一种常用的教学及科研实验手段。
目前,在制备小鼠骨髓细胞染色体过程中所采用的条件如秋水仙素量、骨髓冲洗液,低渗液等各不一致。
为此,我们做了此三项条件改变的情况下小鼠骨髓细胞染色体制备实验。
【总页数】3页(P153-155)
【作者】李芳;王文青
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R329－33
【相关文献】
1.小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进 [J], 刘庆军;孙永君
2.小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进 [J], 刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕
3.小鼠骨髓细胞染色体G显带制备实验的问题与改进 [J], 李栋;张亚龙;刘俊;徐艳岩
4.小鼠骨髓细胞有丝分裂染色体标本制备方法的优化 [J], 高振华;吴浩浩;赵志辉;
许英梅;Aguzey Harry;程贵兰;生冉;许嫣红
5.小鼠骨髓细胞染色体制备实验优化与探索 [J], 雷宇华; 赵娟; 廖峥嵘; 赵俊霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
吐温20制备工艺-概述说明以及解释
吐温20制备工艺-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述是文章引言的一部分，主要介绍吐温20制备工艺这个主题的背景和重要性。
我们可以按照以下方式编写概述部分的内容：在工业应用领域中，吐温20（又称为聚乙烯醇-聚丙烯醇共聚物或PVP-PVA共聚物）是一种重要的功能性高分子材料。
其独特的化学结构和优异的性能使得吐温20在医药、食品、纺织等许多领域具有广泛的应用前景。
吐温20具有一系列独特的特点，如高稳定性、可调节性和生物相容性。
这使得它成为一种理想的控释材料、药物载体、抗菌材料以及纤维增强剂。
然而，要实现这些应用，制备高质量的吐温20材料是至关重要的。
本文旨在探讨吐温20的制备工艺，并介绍其中关键的步骤和参数。
通过深入研究各种制备方法，我们可以更好地了解吐温20材料的性质和应用潜力。
同时，本文还将对吐温20制备工艺的未来发展进行展望，探讨可能的改进和创新。
通过本文的阅读，读者将能够全面了解吐温20的特点、用途以及制备工艺的重要性。
希望本文能够为相关领域的研究人员和工程师提供有用的参考，并为吐温20的应用和开发提供新的思路和方法。
1.2 文章结构文章结构部分的内容应该是对整篇文章的结构进行说明和概括。
下面是一个可能的编写内容：文章结构：本文分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分主要对本文的主题进行引言，并概述了吐温20的制备工艺的重要性和应用价值。
正文部分主要包括吐温20的特点、用途和制备工艺三个方面的内容。
在吐温20的特点部分，将介绍吐温20的化学结构、物理性质以及与其他材料的比较等内容。
在吐温20的用途部分，将详细介绍吐温20在化妆品、医药等领域的广泛应用。
在吐温20的制备工艺部分，将重点介绍吐温20的合成方法和制备工艺流程，并对吐温20的制备技术进行深入分析和讨论。
结论部分主要对本文进行总结，并展望吐温20制备工艺的发展前景。
在总结吐温20的重要性部分，将总结吐温20在化妆品和医药领域的广泛应用，以及吐温20制备工艺研究的重要性。
染色体的制备方法
染色体的制备方法
染色体的制备方法主要有以下几种：
1. 细胞培养法：通过细胞培养的方法，从活体或死体组织中获得细胞，然后使用染色体解链剂和有机溶剂处理细胞，使其逐渐膨胀、变形和破裂，最终释放出染色体。
2. 细胞分离法：通过细胞分离的方法，从组织或器官中获得单个细胞，然后使用低渗透压溶液处理细胞，使其逐渐肿胀、破裂，最终释放出染色体。
3. 放射线照射法：通过将细胞暴露在放射线（通常是X射线或γ射线）下，使染色体发生断裂和破裂，然后使用染色体解链剂溶解细胞核膜和蛋白质，最终得到染色体。
4. 高压法：通过将细胞置于高压环境中，如用注射器将细胞悬浮液喷射到高压室中，或使用高压装置将细胞悬浮液注入对高压有抵抗能力的微孔滤纸上，然后用染色体解链剂处理细胞，最终释放出染色体。
5. 集落法：将细菌或酵母等微生物的细胞培养在富含染色体的培养基上，然后使用染色体解链剂处理细胞，最终从细胞中释放出染色体。
这些方法各有优点和局限性，选择合适的染色体制备方法要根据研究目的和样本
的特点来确定。
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临床 检 验 杂 志 ２ ０ ０ ２年 第 ２ ０卷 第 ６期
Ｃ ｉｅｅ ｏ ｒａ ｏ ｌ ｉ ｌ ａｏａｏｙＳ ｉ ｃ ，０ ２ Ｖｏ．０， ｏ ６ ｈｎｓ ｕｎ ｌ ｆ ｉ ｃ ｂ ｒｔｒ ｃ ｎ ｅ２ ０ ， １２ Ｎ ． Ｊ Ｃｎ ａＬ ｅ
２ ３０．
物 需 要 抽 干后 用 流 动 相 复 溶 再 进 样 检 测 ； 者 虽 反 后
应 时 间较 长 ， 试 剂 简单 稳 定 、 需 临 时 配 制 ，衍 生 但 不 产 物 可 直 接 进 样 分 析 。 比较 衍 生 产 物 在 ２ ０ ２ ４ ０ 、１ 、
平 均 回收 率 ９ ．８ 。 ７ １％
检 测 血 清 中 氨 基 酸 需 先 去 除 蛋 白 ， 脊 液 中 蛋 脑
白含 量 低 ， 们 将 沉 淀 蛋 白 标 本 与 不 沉 淀 蛋 白标 本 我 同 时 进 行 衍 生 ， 比较 检 测 Ｇｌ 果 ， 明 显 差 别 ； 并 ｎ效 无 且 不 经 沉 淀 蛋 白 过 程 ， ｎ无 损 耗 、 稀 释 ， 以 选 Ｇｌ 无 所 择 脑 脊 液 不 沉 淀 蛋 白直 接 衍 生 的方 法 。 常 温 下 Ｇ ｎ不 稳 定 ， 分 解 为 谷 氨 酸 和 焦 谷 氨 ｌ 易
２ ７ 参 考 值 及 临床 应 用 用 本 法 测 定 ２ 例 阑 尾 炎 ． ０ 手 术 病 人 腰 麻 时 脑 脊 液 标 本 中 谷 氨 酰 胺 含 量 作 为 对
照组 ； 时 测 定 神 经 系 统 感 染 病 人 （ 菌 性 脑 膜 炎 、 同 细
脑 脊 液 中 氨 浓 度 升 高 ， 脊 液 中 Ｇｌ 升 高 ， 者 呈 脑 ｎ也 二
酸 ， 检 脑 脊 液 标 本 应 及 时 测 定 ， 一２ ℃ 冷 冻 保 送 或 ０
存， 以免 影 响 检 测 效 果 。
脑 组 织 可借 Ｇｌ 移 酶 ， 氨 基 酸 代 谢 过 程 中 ｎ转 将
脱 氨 基 作 用 产 生 的 游 离 氨 合 成 Ｇｌ ， 消 除 氨 对 中 ｎ以 枢 神 经 系 统 的 毒 性 作 用 ； 、 功 能 不 全 患 者 ， 及 肝 肾 血定结 果 ｎ测
（ ｐｎ ｌＬ ） ｊ± ａ ｏ／ ＇
轻 度 升 高 ［， 。 测 定 脑 脊 液 中 Ｇｉ 量 对 于 脑 、 、 ５］ ６ ｎ含 肝
肾病 的诊 断 和 治 疗 有 重 要 的 意 义 。
参 考 文献 ：
［ ］ 慧玲 ， 国安 ， 书 宝 ．毛 细 管 电 泳 在 神 经 科 学 研 究 中 应 用 １黄 罗 单 ［］ Ｊ ．国外医学 ．检验 与生物 化学 分册 ，０ １ ２ （ ） ５ —８． ２ ０ ，２ ２ ：７５ ［］ ２ 孙生 才 ， 冰 ．毛 细管 电泳在 临 床诊 断上 的应用 ［］ 色谱 ，９ ６ 张 Ｊ １９ ，
１ （ ） ３ ３ ３ ６． ４ ５ ：７ —７
３ Ｂ ｒｑ ｉｔ ， ｌ ｎＳ Ｄ，Ｅ ｎ ］ ｅｇ ｕｓ ＪＧｉ ｍａ ｗｉｇＧ，ｅ ａ ．Ａ ａｙｉ ｏ ｕ ｎ ｃｒ— ｔ １ ｎ ｌｓ ｆ ｍａ ｅｅ ｓ ｈ
ｂ ｏ ｐ ｎ ｌｆｕｄ ｂ ａ ｉ ａ ｙ ｅ ｅ ｔ ｏ ｈ ｒ ｓ ｓ ｗｉｈ ｌｓ ｒ ｉ ｄ ｃ ｄ ｆｕ ｒ ｓ． ｒ ｓ ｉ ａ ｉ ｙ ｃ ｐ ｌ ｒ ｌ ｃ ｒ ｐ ｏ ｅ ｉ ｔ ａ ｅ —ｎ ｕ ｅ ｌ ｏ ｅ ． ｌ ｌ
２ ５ 最 低 检 测 浓 度 以 信 噪 比 （ ） ． Ｓ ＝２时 浓 度 为 最 低 检 测 浓 度 ， 度 为 ｌ ￣ ｌＬ 浓 １ｆ ｍｏ／ 。
２６ 干 扰 实 验 ．
脑 脊 液 中其 他 氨 基 酸 含 量 较 低 ， 甚
至 低 于最 低 检 测 浓 度 ， 常 不 能 被 检 出 ； 白质 分 子 通 蛋 量 大 ， 移 慢 （ ｉ） 与 Ｇｌ 离 良好 ， 对 本 实 迁 ＞５ｒ ｎ ， ａ ｎ分 也 验 没 有 干 扰 。本 法 检 测 脑 脊 液 中 Ｇｉ 有 特 异 性 。 ｎ具
ｃｎｅｄ ｔｃｉｎ［］ ｎ ａ Ｃ ｅ １９ ｅ ｃ ｅｅｔ ｏ Ｊ ．Ａ ｌ ｈ ｍ，９ ４，６ （ ０ ：５ ２３ １ ． ６ ２ ） ３ １ －５ ８
３ 讨 论
［］ 同 ， ４沈 王镜 岩 ， 赵邦悌 ， ．生 物 化学 ［ ］ 等 Ｍ ．第二 版 ．北 京 ：高等
教 育 出 版 社 ，１ ９ １ ６ １ ７ ９ ０． １— １ ．
平 行 关 系 。严 重 细 菌性 脑 膜 炎 患 者 脑 脊 液 中 Ｇｌ ｎ也
病 毒 性 脑 炎 ） 脊 液 标 本 中 Ｇｌ 度 ，结 果 见 表 １ 脑 ｎ浓 。
统 计 结 果 显 示 病 毒 性 脑 炎组 与 对 照 组 比较 无 显 著 差 异（ Ｐ＞０ ０ ） 细 菌 性 脑 膜 炎 组 与 对 照 组 比较 有 显 ．５ ， 著差异 （ Ｐ＜０ ０ ） ．５ 。
３３ ５
同时间分别测定 １ ０次 得 批 间 ＣＶ６ １ 。 ．％
收 值 最 大 。所 以选 择 ＤＮＦ Ｂ衍 生 Ｇｌ ２ ４ｎ 波 长 ｎ，１ ｍ
检测 。
２４ 回收率实验 ．
在 已 知 Ｇｉ 度 的 混 合 脑 脊 液 ｎ浓
标 本 中 分 别 加 入 ６ ． ４ ５ ０ ｆ ｌＬ 的 Ｇｌ ０ ８、 ０ ． ￣ ／ ｍｏ ｎ标 准 品 ， 行 回 收 实 验 ， 收 率 分 别 ９ ． ２ 、７ ３ ％ ， 进 回 ７ ０ ％ ９ ．６
我 们 比较 了邻 苯 二 甲 醛 、 硫 氰 酸 苯 酯 、 异 ＤＮＦ Ｂ 三种 衍 生 方 法 ， 两 种 方 法 试 剂 不 稳 定 ， 且 衍 生 产 前 并
［］ ５ 康格非 ．临 床生 物 化 学 ［ ］ Ｍ ．北 京 ： 民卫 生 出版 社 ， ９ ５ ２ ０ 人 １９ ．２ —