还原糖和总糖含量的测定
实验四 还原糖和总糖的测定
·在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正 比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度 值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。
· 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子 水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
7
0.5
0.5
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8
9
1.5
1 1
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10
1
1
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1.5
五、结果与计算：
计算出7、8号管光密度值平均值和9、10管光密度值的的平
均值，在标准曲线上分别查出相应的还原糖毫克数，按下式 计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。
六、思考题
3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖
进行测定的?
实验四 还原糖和总糖的测定
——3,5-二硝基水杨酸比色法
一、目的
掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测 定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽
糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度
定容至100mL 过 滤 取滤液10mL
定容至100mL
（3）显色和比色 取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入 待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。 加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
表2 样品还原糖测定
管 号 还原糖 待测液 （mL） 总糖待 测液 （mL） 蒸馏水 （mL） DNS （mL） 光密度值 （OD540nm） 查曲线 葡萄糖量 （mg）
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。
一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。
2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。
(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。
3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。
将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。
在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。
(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。
(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。
(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。
(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。
(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。
(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。
二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。
然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。
在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。
还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。
三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告1. 引言总糖是指在食品和饮料中存在的所有糖类的总量，包括单糖、双糖和多糖。
而还原糖是其中可被还原剂还原为对应醛或酮的糖类的量。
测定总糖和还原糖的含量对食品工业以及食品安全监管有着重要的意义。
本实验旨在探究测定总糖和还原糖的方法，并对不同样品中的总糖和还原糖进行定量分析。
2. 实验步骤2.1 样品准备1.收集不同类型的食品样品，如果酱、蜂蜜、糖果等。
2.将收集到的样品进行标记，记录样品名称和来源。
2.2 总糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入邻苯二甲酸溶液，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加入含硫酸的试剂，进行硫酸铜法测定。
5.根据产生的蓝色沉淀的量，用标准曲线确定总糖的含量。
2.3 还原糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入费林试剂，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加热反应一段时间。
5.根据试剂的吸收光谱，用比色法测定还原糖的含量。
3. 结果与讨论3.1 总糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品总糖含量（g/100g）样品A 50样品B 70样品C 803.2 还原糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品还原糖含量（g/100g）样品A 30样品B 40样品C 50根据测定结果可以看出，不同样品的总糖和还原糖含量存在差异。
糖果样品的总糖和还原糖含量均高于果酱和蜂蜜样品。
这可能是因为糖果中添加了大量的糖分，而果酱和蜂蜜中含有的糖分相对较少。
4. 结论本实验使用了硫酸铜法和比色法测定了不同样品中的总糖和还原糖的含量，并得出了相应的测定结果。
通过此实验，我们可以了解食品样品中总糖和还原糖的测定方法，并获得样品中总糖和还原糖的定量分析结果。
5. 延伸应用1.此方法可以应用于食品行业的质量控制，帮助饮料、甜品等生产企业控制产品中糖分的含量。
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较
黄酒中总糖与还原糖含量测定方法比较黄酒作为一种传统的中国酒类饮品，其甜度对于消费者来说是一个重要的指标之一、而酒中的糖分主要可以分为总糖和还原糖两部分。
总糖是指以葡萄糖为单位计算的糖的总含量，包括单糖、双糖和多糖等。
而还原糖则是指可以通过还原反应将还原糖转化为葡萄糖的糖的含量。
目前测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，下面将对其中的几种常用方法进行比较。
一、酶法测定酶法测定是一种常用的测定酒中糖含量的方法。
其基本原理是利用特定的酶将糖分解成可以被检测的物质，进而测定其浓度。
常用的酶法测定总糖和还原糖的方法有苯酚-硫酸法、巴氏显色法和Nelson-Somogyi法等。
苯酚-硫酸法是一种简单、灵敏的测定方法。
该方法将样品中的糖与苯酚发生反应，生成呈紫蓝色的复合物，再用硫酸将复合物水解，生成浓黄色的产物。
样品的吸光度与糖的含量成正比。
巴氏显色法和Nelson-Somogyi法是一种将糖与多酚氧化酶作用后生成还原物质，再与葡萄糖酸生成呈蓝色的化合物的方法。
二、硫酸蒽酮显色法硫酸蒽酮显色法是一种测定还原糖含量的方法。
其基本原理是还原糖经酸水解生成葡萄糖，葡萄糖与蒽酮反应生成紫红色的产物，其吸光度与还原糖的浓度成正比。
该方法操作简单、时间短，但只适用于测定还原糖，不能测定总糖的含量。
三、显色剂法显色剂法是一种常用的测定总糖含量的方法。
其基本原理是糖与特定的显色剂反应生成有色化合物，通过测定化合物的吸光度来测定糖的含量。
显色剂法可以测定总糖的含量，但不能区分不同类型的糖。
四、色谱法色谱法是一种常用于测定糖含量的方法。
其基本原理是将糖分离开来，并通过色谱柱上的吸附剂将糖分解为可以被检测的物质。
常用的色谱法有高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）等。
HPLC法可以快速、准确地分析各种糖类的含量，但设备价格较高。
GC法适用于分析低浓度的糖类，但需要进行样品的脂肪酸酯化处理。
综上所述，测定黄酒中总糖和还原糖含量的方法有很多种，各种方法有其优劣之处。
生化实验一 总糖和还原糖含量的测定
实验一总糖和还原糖含量的测定（3,5－二硝基水杨酸法）一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH存在的条件下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕红色，在540nm 波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液325ml，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000ml。
葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即葡萄糖浓度为1.0mg/ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂。
2、材料山芋淀粉四、器材723型分光光度计，分析天平，水浴锅，研钵，烧瓶，试管若干等。
五、操作1、葡萄糖标准曲线制作取干净试管6支，按表1进行操作。
以吸光值为纵坐标，各标准溶液的浓度（mg∕ml）为横坐标作图得标准曲线。
管号0 1 2 3 4 5试剂标准葡萄糖溶液∕ml 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水∕ml 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0DNS试剂∕ml 2 2 2 2 2 2沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却至室温蒸馏水∕ml 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 9.0 葡萄糖含量∕mg 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0A540nm0 0.051 0.110 0.150 0.205 0.2532、样品中还原糖的提取与测定准确称取0.5g山芋淀粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2-3次，洗出液转入三角烧瓶中。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的本实验旨在通过测定总糖和还原糖的含量，了解不同食品中糖分的含量及其对人体健康的影响。
二、实验原理总糖是指食品中所有可溶性糖类的总和，包括单糖、双糖和多糖。
还原糖是指具有还原性的单糖和部分双糖。
测定总糖和还原糖的方法主要有蒸发法、显色法、高效液相色谱法等，本实验采用显色法测定。
三、实验步骤1.样品制备：将待测样品粉碎并过筛，取2g样品加入100ml锥形瓶中，加入40ml去离子水，振荡混合均匀。
2.制备还原剂：称取0.5g氢氧化钠加入50ml去离子水中，加温搅拌至完全溶解。
3.蒸发：将步骤1中制备好的样品放入沸水浴中加温蒸发至干固。
4.水解：将步骤3中得到的干固样品加入10ml 0.5mol/L盐酸中，加温水解30min。
5.冷却：将步骤4中的样品冷却至室温，加入50ml去离子水稀释。
6.显色：取10ml样品溶液加入试管中，加入2ml酚酞指示剂溶液和2ml还原剂溶液，振荡混合均匀后静置10min。
7.测定：用1mol/L氢氧化钠滴定至颜色变为淡粉色，记录滴定体积V1。
同时进行空白试验并记录滴定体积V0。
8.计算：总糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g），还原糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g）。
四、实验结果本次实验测得样品A的总糖含量为24.5mg/g，还原糖含量为8.7mg/g；样品B的总糖含量为18.3mg/g，还原糖含量为6.9mg/g；样品C的总糖含量为31.7mg/g，还原糖含量为12.4mg/g。
五、实验分析通过本次实验可以发现不同食品中的总糖和还原糖含量存在较大差异。
其中，样品C的总糖和还原糖含量均较高，而样品B的含量最低。
这提示我们在饮食中应该注意控制糖分的摄入，避免过多摄入对身体健康造成影响。
六、实验感想本次实验通过测定总糖和还原糖含量，让我对不同食品中糖分的含量有了更深入的了解。
食品中总糖、还原糖的测定
食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定1安全性评估谨防试剂灼伤：加入碱性酒石酸铜甲乙液、20%氢氧化钠和2%盐酸试剂时，需佩戴一次性乳胶手套。
谨防玻璃割伤：使用前检查玻璃仪器外观完好无损，使用时注意轻拿轻放，清洗时，需佩戴防割手套。
谨防高温烫伤：滴定时，调节滴定管滴定速度的手需佩戴涂脂手套/一次性乳胶手套，且不裸露手腕皮肤，双手不碰及电陶炉表面。
2 目的规范食品中转化糖（总糖）、还原糖的检测流程，确保检测结果的准确性。
3 范围适用于各类食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定。
4 依据参照GB 5009.7 - 2016食品安全国家标准食品中还原糖的测定、GB 5009.8 - 2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。
5 检测原理还原糖（直接滴定法）：试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用葡萄糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。
转化糖（总糖）（酸水解-莱茵-埃农氏法）：试样经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定，根据样品液消耗体积计算转化糖（总糖）含量。
注：①为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下：Cu2O↓+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH②碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
6 试剂和仪器：实验室三级用水6.1 试剂2 %盐酸溶液，20 %氢氧化钠溶液，碱性酒石酸铜溶液：碱性酒石酸铜甲液（以下简称A 液）（硫酸铜+亚甲基蓝）+碱性酒石酸铜乙液（以下简称B液）（酒石酸钾钠+氢氧化钠+亚铁氰化钾），乙酸锌溶液（219 g/L），亚铁氰化钾溶液（106 g/L），葡萄糖标准溶液。
实验一 还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定一、实验目的1、了解还原糖和总糖含量的测定原理，熟悉实验步骤。
2、掌握还原糖和总糖含量的测定方法。
二、实验项目及所用仪器1、还原糖：Benedict试剂，烧杯，伏安电极，示波器，旋涡振荡仪；2、总糖：滤纸、热板、氧化棉芯，旋涡振荡仪。
三、实验原理1、还原糖：Benedict试剂由碳酸锰盐溶液、碳酸铵溶液、氯化钠溶液和抗上皮染料橙Ⅲ组成。
当还原糖作用于Benedict试剂时，会与其中的锰离子发生反应，生成蓝色配体，从而使抗上皮染料橙Ⅲ发生变色；2、总糖：将样品与氧化棉芯一起置于热板中，加热到900℃时，碳水化合物在此温度条件下完全分解为糖和水，糖与热板表面发生热反应而分解，引起氧化棉芯之上有显著黑色浓缩形成，即糖皿现象，根据糖皿质量来推算样品中碳水化合物的质量。
四、实验步骤1、还原糖测定：（1）将1ml Benedict溶液放至烧杯中；（2）向烧杯中加入1ml样品液体，根据不同液体不同加入2-3滴 (液体较稠时) 或1-2滴 (液体较洁时) 酸碱度调节液；（3）将伏安电极组件放入烧杯中，并选取示波器连接；（4）加热26℃下水浴加热，取示波器时加热过程中的电势；（5）检测峰面上的电势，来比较是否有变色；（6）如果有变色，就用旋涡振荡仪对发生变色的液体测定样品含有的还原糖含量。
（1）将样品5ml液体流入滤纸中，滤取液体；（2）将滤取的液体均匀的淋洒在氧化棉芯之上，并将其置于热板之上；（3）将热板加热，观察过程中糖皿现象的变化，双环现象表示反应完成；五、结果计算还原糖：检测变色后用旋涡振荡仪测定吸光度值，用标准曲线求出浓度；总糖：使用朱诺重量比法称取峰面上的焦灰，根据标准曲线求出浓度，以重量比计算样品中碳水合物的含量。
六、安全措施1、食品分析实验中，需要遵守实验室安全规章制度，具体包括：实验前应安全检查仪器，按要求穿防护服、佩戴护目镜，使用专用工具等；2、使用热源时，需要注意：电源线耐热、工作在室内，不能离开，保持室内通风；3、使用化学试剂时，应具备良好的操作习惯，佩戴护手镯、护目镜，禁止吞咽及外用，实验结束后将试剂放回原位，实验结束后要做好清洗工作。
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实验一还原糖和总糖含量的测定
原理
3，5-二硝基水杨酸溶液与还原糖溶液共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范实验围内还原糖的量和棕红色物质颜色深浅的程度成一定比例关系，可用比色测定。
操作简便，快速，杂质干扰较少。
实验方法
一葡萄糖标准曲线的制定
葡萄糖标准曲线的制定：准确称取100mg分析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移至100mL容量瓶中，再定容至刻度，摇匀。
浓度为1mg/Ml。
取9支25mm×250mm的试管，分别按下表加入试剂：（ml）
项目0 1 2 3 4 5 6 7 8
G标液0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 G的量0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 H2O 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 3，5-二硝
基水杨酸
加入21.5mL蒸馏水,摇匀。
于520nm波长处测A值。
以葡萄糖mg数为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
二样品中总糖和还原糖含量的测定
以测定山芋中总糖和还原糖含量为例。
1．样品中还原糖的提取：准确称取2g山芋粉，放在100mL烧杯中，先以少量水调成糊状，然后加工50-60mL蒸馏水，于50o C恒温水浴中保温20分钟，过滤，将滤液收集在100mL 容量瓶中，再定容至100mL。
2．样品中总糖的水解及提取：准确称取1g山芋粉，放在锥形瓶中，加入10mL6mol/L 盐酸，15mL水，在沸水浴中加热半小时，取出一、二滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈蓝色。
冷却后加1滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色，过滤并定容到100mL。
再精确吸取上述溶液10mL于100mL 容量瓶中，定容到刻度，混匀备用。
3．样品中糖含量的测定：取7支队5mm×250mm试管分别按下表加入试剂：
加完试剂后，其余操作均与制作标准曲线时相同。
测定后，取样品的A平均值在标准曲线上查出相应的糖量。
用下式计算出山竽粉中还原糖与总糖的百分含量。
还原糖%=还原糖mg数*样品稀释倍数
样品毫克数
*100
总糖%=水解后还原糖毫克数*样品稀释倍数
样品毫克数
*100数据处理推荐同学们用origin软件处理！☆最小二乘法求标准曲线方程的公式：
SSy
SSx
Sp
r
Y
n
Y
SSy
X
n
X
SSx
Y
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X：G的浓度（μg／mL）Y：吸光度A＝－㏒T 本实验要求相关系数r≥0.99。