离子交换层析技术在多糖分离纯化中的应用
离子交换技术在多糖分离纯化中的应用

然大分子物质 ,是 自然 界 中含量 最丰富 的生物聚合 物 , 为构成生命 的分子基础之一 ,是所有生命 有机体 的重要
组 成成 分 与维 持 生 命 所 必须 的结 构 材 料 。 近 2 ,随 0a来
能 ,特别是对机体免疫功能的作用 。
多糖 的研 究 虽 然 较 生 命 中其 他 3大 类 物 质 ( 白 蛋
维普资讯
河北农业科学 ,20 ,1 ( ) 6 0 8 2 7 :18—19,12 6 7 Junl f e e A r utrl c ne ora o bi gi l a Si cs H c u e
责多 糖 分 离 纯 化 中 的应 用
多糖也称多聚糖 ,是 由很多个单糖单 位构成 的糖类
物 质 ,来 自于 动 物 细胞 膜 和 植 物 、微 生 物 细 胞 壁 中 的 天
免疫促进 剂而引起 了医药界 的广泛关注 ,并逐渐认识到 多糖及复合物分子具有极其重要 的生物功能 。越来越多
的研 究 证 明 ,多 糖 具 有 复 杂 的 多 方 面 的 生 物 活 性 和 功
工业 手段 之一 。且 近 年来 在 多糖 的分 离纯 化 中应用 广 泛 。
要的生理功能及其广泛 的应用被不断挖掘 ,引起 了人们
越来越大 的兴趣 ,现在 多糖 已成为天然药 物及保健品研
发中的重要组成部分。据不完全统计 ,目前全球至少有
3 0余个多糖 正在 分别进 行正规 的抗 肿瘤 、抗艾 滋病 及 糖尿病治疗 等临床 试验 ,20 0 2年 全球 糖类 药物及保 健 品的销售额 己超过 13亿 美元 。有 学者说 “ 1 纪 的 9 2 世 头 2 ,是 多糖 的时代 ” 。多糖 的结构 及其功 能的研 0 a … 究己成为继蛋 白质和核酸研究之后探索生命 奥秘 的第 三 里程碑 。作为药物的多糖在治疗肿瘤 时 ,不 像一 般化疗
deae纤维素柱层析多糖原理

DEAE纤维素柱层析是一种常用的离子交换色谱技术,用于多糖的分离和纯化。
其原理基于离子交换体对溶液中带电离子的吸附和解吸作用。
具体原理如下:
1. DEAE纤维素柱:DEAE纤维素是一种带有正电荷的离子交换介质,具有许多二级胺基团。
这种柱材与带负电荷的多糖分子发生静电相互作用。
2. 样品加载:将混合溶液中含有多糖的样品加载到DEAE纤维素柱上。
多糖与柱子表面的二级胺基团之间发生静电作用,带负电荷的多糖被柱子捕获。
3. 洗脱梯度:通过改变洗脱缓冲液的离子强度或pH值,使得多糖以不同的速率从柱子上洗脱。
一般采用梯度洗脱,即逐渐增加洗脱缓冲液中的盐浓度或调节pH值,以逐步将多糖从柱子上解吸下来。
4. 分离和纯化:根据多糖在DEAE纤维素柱上的亲和性差异,它们在洗脱梯度中以不同的速率逐渐分离。
带有较低亲和性的多糖会被较早洗脱,而带有较高亲和性的多糖则会在较高盐浓度或pH值条件下才从柱子上洗脱。
通过DEAE纤维素柱层析,可以实现多糖的粗分离和初步纯化。
这种方法可用于生物医药、食品工业等领域中对多糖的分离、纯化和研究。
重要多糖分离纯化方法及应用实例

证实了LNTⅠb 为蛋白多糖的假设.
实验结论:
1 利用超滤法快速分离多糖的不同组分,再分别对这些组分利用DEAE‐52 纤维素层析进一步 纯化,最后用Sephadex G‐200 凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶连续电泳检测多糖纯度. 建立了 一套高效快速的香菇多糖提取方法. 通过上述方法,从香菇浓缩液中纯化的LNTⅠb 的多糖 含量为95.55%. 2 通过Sephadex G‐200 凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶连续电泳检测,可以证实LNTⅠb 为蛋 白多糖.
20098??volume30???多糖分离纯化方法及应用实例???多糖的应用现状?????近20?年来随着天然药物化学药理研究的不断深入即分析手段突飞猛进的发展多糖的研究引起了国内外许多学者极大的兴趣
2009‐8 volume30
多糖分离纯化方法及应用实例
多糖的应用现状
近 20 年来,随着天然药物化学、药理研究的不断深入即分析手段突飞猛进的发展,多糖 的研究引起了国内外许多学者极大的兴趣。研究表明, 多糖具有复杂的多方面的生物活性 和功能,特别是对机体免疫功能的作用。现在多糖已成为天然药物及保健品研发中的重要组 成部分。
多糖分离纯化实例 香菇多糖的分离纯化研究
实验流程: 香菇浓缩液 离心
超滤(100kDa、5kDa) 醇200 凝胶层析
多糖含量的测定 多糖组分纯度检测 实验结果
1、 超滤结果 通过两次不同分子量的超滤膜的分离,可以从香菇出多糖中分离出两个组分:LNTⅠ
上海办事处: 地址:上海张江益丰路 55 弄春港丽园 67 号 201 室 邮编:201203 电话:021-58950178 传真:021-58950178
透析、超滤及超速离心
选用不同规格的超滤膜和透析带进行超滤和透析,以及一定条件下的超速离心操作,可按分子 大小差异把多糖样品分级。超滤和透析更常用于除去小分子物质。
多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展

多糖提取纯化化学修饰和抗氧化性研究进展多糖是一类含有多个糖基的生物高分子化合物,广泛存在于植物和动物体内。
多糖具有多种生理功能,如调节免疫系统、抗氧化、抗菌、抗肿瘤等。
多糖的提取纯化、化学修饰和抗氧化性研究对于开发多糖的生物活性和应用具有重要意义。
多糖的提取和纯化是多糖研究的基础工作。
传统的多糖提取方法包括浸提法、酶解法和离子溶液沉淀法等。
浸提法是将原料与溶剂接触,在适当条件下提取多糖。
酶解法是通过适当的酶对原料进行酶解,从而获得多糖。
离子溶液沉淀法是利用离子溶液与多糖反应,形成离子复合物,再通过沉淀和洗涤等步骤获得纯净的多糖。
还有一些新型的多糖提取方法,如超声波辅助法、微波辅助法和离子液体辅助法等。
这些新型的提取方法能够更高效、更快速地提取多糖,并且能够减少对环境的污染。
多糖的纯化是为了去除多糖样品中的杂质,提高多糖的纯度。
目前常用的纯化方法有超滤、透析、凝胶渗透层析和离子交换层析等。
超滤是利用超滤膜的筛分作用,将多糖和较小分子的杂质分离。
透析是通过半透膜的选择性渗透,将多糖和低分子物质分开。
凝胶渗透层析是利用凝胶颗粒的孔隙大小分离不同分子大小的物质。
离子交换层析是通过阳离子交换剂和阴离子交换剂对多糖样品进行交换,从而实现多糖的分离纯化。
化学修饰是将多糖分子与化学试剂反应,改变多糖的化学结构和性质。
常用的化学修饰方法有酯化、醚化、羧化、硫酸化和甲基化等。
酯化是将多糖中的羟基与酸反应,形成酯键的修饰方法。
醚化是将多糖中的羟基与醚试剂反应,形成醚键的修饰方法。
羧化是将多糖中的羟基与羧基试剂反应,形成酯键或酰胺键的修饰方法。
硫酸化是将多糖中的羟基与硫酸试剂反应,形成硫酸酯的修饰方法。
甲基化是将多糖中的羟基与甲基试剂反应,形成甲基基团的修饰方法。
化学修饰能够改变多糖的理化性质和生物活性,拓宽多糖的应用领域。
多糖的抗氧化性是指多糖对有害自由基的清除能力和抑制氧化反应的能力。
多糖的抗氧化性主要通过两种方式实现:直接清除自由基和间接抑制氧化反应。
多糖分离纯化

多糖分离纯化一、概述多糖是一类高分子化合物,具有复杂的结构和多样的功能,广泛存在于生物体内。
多糖的分离纯化是研究其结构和性质、开发应用的前提和基础。
本文将介绍多糖分离纯化的方法及其优缺点。
二、多糖分离纯化方法1. 溶液沉淀法溶液沉淀法是一种常用的多糖分离纯化方法。
该方法基于不同多糖在不同浓度下溶解度不同的原理,通过控制溶液中某些成分(如盐类)浓度来使目标多糖沉淀。
该方法操作简单,但需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解,并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法离子交换色谱法是一种利用固定在固相上带电基团与目标多糖间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团(如硫酸基、羧基等)的多糖。
该方法分离效果好,但需要对固相的选择和操作条件进行优化。
3. 凝胶过滤色谱法凝胶过滤色谱法是一种利用多孔凝胶作为分离介质,目标多糖根据其大小在凝胶中进行分离的方法。
该方法适用于具有不同分子量的多糖,且操作简单、分离效果较好。
但由于凝胶孔径大小限制,对于较小或较大的多糖可能无法有效分离。
4. 亲和层析法亲和层析法是一种利用目标多糖与特定配体间相互作用实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有特定结构或功能的多糖,如具有特异性结合蛋白质、抗原表位等。
该方法操作简单、分离效果较好,但需要对配体选择和操作条件进行优化。
5. 聚焦电泳法聚焦电泳法是一种利用电场作用将目标多糖在pH梯度中移动并实现分离纯化的方法。
该方法适用于具有不同等电点或带电性质的多糖。
该方法分离效果好、可同时实现高效分离和纯化,但需要对pH梯度的选择和操作条件进行优化。
三、多糖分离纯化方法的优缺点1. 溶液沉淀法优点:操作简单,无需昂贵设备。
缺点:需要对目标多糖在不同条件下的溶解度有较为准确的了解,并且会受到其他成分影响。
2. 离子交换色谱法优点:分离效果好,适用于具有明显电荷差异或含有特定官能团(如硫酸基、羧基等)的多糖。
多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定

多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定以多糖的分离纯化及其纯度鉴别与分子量测定为题,本文将介绍多糖的分离纯化方法、纯度鉴别和分子量测定的原理和技术。
一、多糖的分离纯化方法多糖是一类由多个糖基组成的生物大分子,其结构复杂多样。
为了研究多糖的性质和功能,需要将多糖与其他杂质分离开来并纯化。
常用的多糖分离纯化方法包括离心沉淀、凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等。
离心沉淀是一种简单有效的多糖分离纯化方法。
通过调节离心速度和时间,可以使多糖与其他杂质沉淀分离,然后将上清液取出,即可得到相对纯净的多糖溶液。
凝胶层析是一种常用的多糖分离纯化方法。
凝胶层析根据多糖分子的大小和形状,利用凝胶的孔隙大小选择性地分离多糖。
常用的凝胶材料有琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶等。
离子交换层析是一种利用多糖与离子交换树脂之间的电荷相互作用进行分离的方法。
树脂表面带有正负电荷,多糖分子根据其电荷性质与树脂发生吸附和解吸作用,从而实现分离纯化。
亲和层析是一种利用多糖与特定的亲和配体之间的特异性结合进行分离的方法。
常见的亲和配体有金属离子、抗体、受体等。
通过与亲和配体结合,多糖可以被选择性地吸附在亲和树脂上,其他杂质则被洗脱,从而实现纯化。
二、多糖的纯度鉴别多糖的纯度鉴别是判断多糖溶液中是否存在杂质的过程。
常用的纯度鉴别方法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外-可见光谱、红外光谱等。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
通过在凝胶中施加电场,多糖分子根据其大小和电荷性质在凝胶中迁移,从而实现分离和鉴定。
紫外-可见光谱是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
多糖溶液在紫外-可见光谱范围内有特征性的吸收峰,通过测量多糖溶液在不同波长下的吸光度,可以判断多糖溶液中是否存在杂质。
红外光谱是一种常用的多糖纯度鉴别方法。
不同多糖具有特征性的红外吸收峰,通过测量多糖溶液的红外光谱,可以判断多糖溶液中是否存在杂质。
三、多糖的分子量测定多糖的分子量是衡量多糖结构大小的重要指标。
多糖分离纯化

多糖分离纯化1. 概述多糖是由许多重复单元组成的生物大分子,具有广泛的生物功能和应用价值。
多糖的分离纯化是从混合物中分离出目标多糖并提高纯度的过程。
本文将介绍多糖分离纯化的常用方法和技术,以及其在食品、药品和生物工程等领域的应用。
2. 多糖的分离方法多糖的分离方法主要包括溶剂沉淀、离子交换、凝胶过滤、超滤、逆流层析、电泳和气相色谱等。
下面将分别介绍这些方法的原理和应用情况。
2.1 溶剂沉淀溶剂沉淀是利用溶剂的物理性质,如极性和温度等,使多糖在溶液中发生相分离的方法。
通常采用醇类溶剂,如乙醇或异丙醇。
溶剂沉淀适用于多糖与其他溶质的溶解度差异较大的情况,但纯度较低。
2.2 离子交换离子交换是利用离子交换树脂上的功能基团与多糖分子间发生离子交换反应的方法。
树脂的功能基团可以选择性吸附或释放多糖分子。
离子交换适用于多糖的分子量差异较大的情况,例如海藻酸和壳聚糖的分离。
2.3 凝胶过滤凝胶过滤是利用凝胶的孔隙结构将分子按大小分离的方法。
多糖分子较大,可以被凝胶孔隙排除,而小分子可以通过凝胶透过。
凝胶过滤常用于多糖与其他小分子的分离,如蛋白质和核酸。
2.4 超滤超滤是利用超滤膜的孔隙结构将溶液分离的方法。
超滤膜的孔径可以根据需要选择,通常是分子量截留范围在1 kDa至100 kDa之间。
超滤适用于多糖与其他大分子的分离,如蛋白质和核酸。
2.5 逆流层析逆流层析是利用多糖与填料间的亲和作用进行分离的方法。
填料可以是具有特定亲和性的配体,如亲和树脂。
逆流层析适用于分子间相互作用较强的多糖分离。
2.6 电泳电泳是利用电场作用将分子按电荷和大小进行分离的方法。
多糖可根据电荷差异选择合适的电泳方法,如聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳。
电泳在多糖的分子量分析和负载量测定中广泛应用。
2.7 气相色谱气相色谱是利用样品在气相载体中的分配和迁移以实现分离的方法。
多糖需要经过甲硅烷衍生化处理后才可以进行气相色谱分析。
气相色谱适用于多糖的含量测定和结构分析。
多糖的分离纯化

1.2.2 离子交换层析鹿茸多糖初级分离纯化采用DEAE-52 离子交换柱。
称取鹿茸多糖80mg,溶于10mL 蒸馏水中,4000r /min 离心10min,取上清液样,依次用蒸馏水,0.3、0.5、0.7、1mol /L NaCl 溶液梯度洗脱,流速控制为0.5mL /min,分管收集,每管5mL,苯酚硫酸法跟踪检测多糖含量,绘制洗脱曲线,合并同一吸收峰的洗脱液,蒸馏水透析24h,减压浓缩,冷冻干燥,即得DEAE-52 纯化多糖。
1.2.3 凝胶排阻层析鹿茸多糖进一步分离纯化采用Sepharose CL-6B 凝胶排阻层析柱。
将经DEAE-52 分离后的多糖溶于蒸馏水,浓度为10mg /mL,以2mL /次上样,蒸馏水洗脱,流速控制为30mL /h,每管5mL,苯酚硫酸法跟踪检测,绘制洗脱曲线,收集、合并相同洗脱组分,透析,冷冻干燥即得SepharoseCL-6B纯化多糖。
1.2.4 鹿茸多糖紫外扫描将Sepharose CL-6B 纯化后精制多糖配成一定浓度溶液,190~400nm 下进行紫外光谱扫描,以蒸馏水作空白。
2.2.4粗多糖的分离纯化2.2.4.1粗多糖的离子柱层析取水提粗多糖样品和碱提水溶性多糖样品溶于蒸馏水中,配制成20mg/mL的溶液,4000印m离心10min,取上清液用DEAE一SepharoseFastFlow离子柱层析(2.6-40cm)进行初步分离,上样量为25mL"首先以蒸馏水洗脱,再用0.1,0.2,0.4,0.6,2mol几的NaCI进行梯度洗脱,自动部分收集仪分步收集流分,洗脱液每10mL收集一管,苯酚硫酸法检测,根据糖显色反应结果合并相同流分"2.2.4.2多糖的凝胶柱层析采用AK认explorer层析系统,Sephaeryl S100一1000凝胶柱层析对样品进行纯化"洗脱条件:凝胶柱Sephacryl S100-1000(2.6X100cm);洗脱液:蒸馏水;流速:1mL/min;样品浓度:10m留mL,上样体积5mL;洗脱液以5mL/管收集,示差折光检测器和苯酚硫酸法检测,以吸光度对洗脱体积作图。
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CM—se pha r os e —CL一6B离子交换柱对脱乙酰度80%、质量浓度为 2.5mg,mL的壳聚糖溶液进行洗脱,起始缓冲液为0.05mol /L、pH 5.3
乙酸一Z眉受钠缓冲液。到}『生梯度劳洲,不含NaCI和含2 mol/LNaCI
通过热水提取、离子交换层析和凝胶层析,从菊花( Chr ysa n— t he mummor.fo¨umRama t )中分离得到一个新的多糖。具体的分离 提纯步骤为:4.5kg菊花经95%Et OH脱脂,接着用100L热水萃取
参数,在溶液中壳聚糖分子上带有正电荷的量与壳聚糖的脱乙酰度有
26cm x26cm) ,先用0.01 mol /L磷酸缓;中液( pH6.0) 洗脱,再以
关,而离子交换层析色谱是根据被分离分子的电荷差异来进行分离的,
0—1.0mol ILNa Cl 磷酸缓冲 液(pH6.0),进 行直线梯度洗脱, 流速为
司波 赵佳
( 宿迁市产品质量监督检验所,江苏宿迁223800)
∥哺要】 离子交换县析(10n- exchal l gcchromat ography,简写rEC) 是发展最早的层祈技术之《7目蔷,:岛子交换层析已成为蛋白质芬菇”‘
‘纯化中最常用的手段。统计显示,在蛋白质的纯化方案中,使用到离 子交换层析的占75%,其次是使用亲争层析和凝胶过滤层析。但同时j
为此,通i 丑I 研究离子交换层析色谱分离壳聚糖的方法,以期分离出分子 链E含有不同电荷量的壳聚糖,即分离出不同脱乙酰度的壳聚糖组分。
1DmL/mi no将所得多糖组分分别减压浓缩后用Sephacr yl S- 200HR 凝胶层析(2.6c m×93c m) 进一步纯化,流动相为0.1mol /LNaCI 溶
离子交换色谱柱CM—s e pha r os e —CL一6B对壳聚糖分离纯化条
液,流速为2.OmI/mi n,分步收集,用苯酚一硫酸法检测多糖峰。将
件 选择:
收集到的各多糖组分浓缩后经Sephade xG一25Fi ne 凝胶层析( 2.6cm
1)不同 离子交换柱柱 长分离壳聚 糖采用离子 强度线性梯度 ,即
2.6c m、高30c mo
透色谱 纯化。
柱体积流量为2mL/mi no直径2.6c m、高50c m茬J E_E样液体积
总之,离子 交换层析法在多糖分离 提纯上有着广泛的应 用。目前
为1 00mL:直径2.6cm、高30cm柱七样液体积为50mLo
已有较多相 关报导,例如在低聚木 糖,低聚果糖,枸杞多 糖,海带多
脱出的壳聚 暗割量躺。 聚糖在起始缓冲液洗脱时,洗脱出的壳聚糖量较低,在高离子强度处洗
离子交换层析色谱法用于红毛五加多糖的纯化:
纯化 中也 得到了 一定的 应用 。
将1 gAHP( 红毛五加多糖) 溶于40mLQ01 mol / L磷酸缓冲液
由于壳聚糖脱乙酰度和相对分子质量是与壳聚糖应用相关的重要
( pH 6- 0) 中,过滤后上DEAE—cel l ul os e32离子交换柱( OH型,
柱,线性梯度洗脱时洗脱体积的增加有利于壳聚糖的分离:用离子交换 色谱法分离不同脱乙酰度壳聚糖时,高脱乙酰度壳聚糖较低脱乙酰度壳
中最常用的手段,统计显示,在蛋白质的纯化方案中,使用到离子交换 层析的占75 %,其次是使用亲和层析和凝胶过滤层析。
但同时离子交换层忻_在除蛋白质以外物质( 如多糖、核酸) 的分离
。( 2】王岸娜.王璋。许时婴.离子交换层析色谱法分离壳聚糖田.无锡轻工大学》
学报,2 003 .
7,
7【3l 孙志贤,王升启.林汝仙.现代生物化学理论与研究技术【M】- 军事医学科’‘/
学出 版聿土 .199 5.
x30cm)脱盐,乙醇 沉淀。沉淀依次用无水乙醇、丙酮 、乙醚洗涤后,
0.05mol /L、pH5.3乙酸一乙酸钠缓冲液,含Na CI浓度02mol l Lo
真空 干燥 得多糖 纯品 。
分别用直径2.6 cm、高50 cm,直径2.6 c m、高30 c m的
离子交换层析色谱法用于菊花中新多糖的提取:
的0.05mol /L、pHS.3乙酸一乙酸钠缓冲液各 200mLo不同柱高洗脱
( 3X5h) ,得粗多糖3789;109粗多糖用Sevag方法去除蛋白,然后
时体积流量:直径Z6cm、高50cm柱体积流量为1 mL/mi n; 直径
采用DEAE一纤维素柱用水洗 提;洗出液需透 析;最后渗析液经 凝胶渗
离子交换吕析在除蛋白质以外物质( 如多糖、核酸) 的分离纯化中也得到了一定的应用。
.,侈蝴】离子交换层析;分离;纯化
~,。¨Biblioteka ,’r ‘+
‘ 一‘’ 』 一4
,‘
。
离子交换层析( 10n—exchangechr omat ogr aphy,简写IEC) 是 发展最早的层析技术之一。目前,离子交换层析已成为蛋白质分离纯化
52乙酸一乙酸钠缓冲液,线性梯度洗脱时,不含NaCI和含2mol l L
NaCI 的0.05mol l L、pH5.3乙酸一乙酸钠缓冲液各200mLo洗脱时 体积流量为 2mL/mi no
3) 不同洗脱液洗脱体积分离壳聚糖直径2.6 cm、高30 cm
CM—s epha r os e—CL一6B离子 交换柱在线性梯度洗脱时, 用不同的洗 脱液体形】对脱乙酚度为8 0%的壳聚糖进行分离。
以上实验研究了离子交换色谱法分离壳聚糖的条件,实验结果表 明,离子交换色谱可以有效的分离壳聚糖。采用线性梯度洗脱时,直径
相同的柱子,长的离子交I 赃有利于壳聚糖的分离;对同—根离子交换
[ 参考文献】
?叠
:【1J 1许 凤清,娶 皓海带多糖 的研究进 展【『】 .中国中 医药信息 杂志,2005.
,0
目前离子交换层析已成为蛋白质分离纯化色谱法分离不同脱乙酰度壳聚糖时高脱乙酰度壳聚糖较低脱乙酰度壳中最常用的手段统计显示在蛋白质的纯化方案中使用到离子交换聚糖在起始缓冲液洗脱时洗脱出的壳聚糖量较低在高离子强度处洗层析的占75其次是使用亲和层析和凝胶过滤层析
应用科技
离 子 交换 层 析 技 术在 多 糖 分离 纯 化 中 的应 用
2) 不同脱乙酰度壳聚糖的分离用直径2.6 cm、高30 cm CM—s ephar os e— CL一6B离子交换柱 对质量浓度2.5mg/mL,脱乙酰
糖,龙须 菜多糖,紫 芝多糖等分离 提纯的步骤中 均用到离子交 换层析 法,并达到了各自要求的分离提纯效果。
度分别为80%、90%的壳聚糖进行分离。缓冲液为Q05mol /L、pH