白血病淋巴瘤讲义免疫分型
白血病免疫分型的诊断标准
9．白血病免疫分型的诊断标准9．1 急性淋巴系白血病（ALL）9．1．1急性B淋巴系白血病（B-ALL）9．1．1．1MIC 标准:B 祖细胞ALL: CD19+,TdT+,CD10-,CIg-.sIg-Common ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg-,sIg-Pre-B- ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg+,sIg-B-ALL : CD19+,TdT-,CD10-,cIg-,sIg+9．1．1．2 欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-B-ALL: (BⅠ型):CD19+,CD22+Common ALL:(BⅡ型):CD19+,CD22+,CD10+Pre-B-ALL: (BⅢ型):CD19+,CD22+,CyIgM+，成熟B-ALL:(BⅣ型)：CD19+，CD22+，Kappa/Lambda+9．1．2急性T淋巴系白血病（T-ALL）9．1．2．1MIC 标准:T祖细胞型: CD2-T成熟细胞型: CD2+9．1．2．2 Reinheiz 标准:早期胸腺细胞Ⅰ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71+普通胸腺细胞Ⅱ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71-,CD4+,CD8+,CD1+ 胸腺髓质细胞Ⅲ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD3+,CD4+,CD8+,CD1- 9．1．2．3欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-ALL:(TⅠ型):CD3+,CD7+Pre-T-ALL(TⅡ型):CD3+,CD2+,CD5+,CD8+皮质-T-ALL(TⅢ型):CD3+,CD1a+成熟-T-ALL(TⅣ型):CD3+,CD1a+,anti-TCRα/β+ 或γ/δ+9．3．急性髓性白血病(AML)能亚型常表达抗原M0 CD11b,CD13或CD33M1 CD13 CD15 CD33 CD34 HLA-DRM2 CD11b CD13 CD15 CD33 •CD34 •HLA-•DR •CD56 CD19M3 CD11b CD13 CD15 CD33 CD34M4 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M5 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M6 血型糖蛋白A CD13 CD33 CD34M7 CD41 CD61 CD13 CD33 CD34 因子Ⅷ相关抗原10．各型白血病及淋巴瘤免疫分型特点10．1 急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）10．1．1 M0：有低的(Side scatter ,SSC)和Forward scatter（FSC)。
急性白血病免疫学分型
（一）急性淋巴细胞白血病按免疫标志分为非T细胞型和T细胞型。
前者又可分为无标志性急淋（Null-ALL）普通型急淋（Common-ALL）、前B细胞型急淋（Pre-B-ALL）和B细胞型急淋（B－ALL）4个亚型；T细胞型又分为不成熟胸腺细胞型（immature T-ALL），普通的胸腺细胞型（eommon T-ALL）和成熟胸腺细胞型（mature T-ALL）。
见表5－3－1 和表5－3－2. 表5－3－1 急性T淋巴细胞白血病（T－ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征CD7CD5CD2CD1CyCD3SmCD3CD4CD8Ⅰ幼稚胸腺细胞型immature T-ALL+-/+-/+--/+---Ⅱ普通胸腺细胞型common T-ALL+++++-/+++Ⅲ成熟胸腺细胞型 mature T-ALL+++-+/-++/--/+表5－3－2 急性非T淋巴细胞白血病（non-T-ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征HLA-DRCD19CD10CD22CD20CyIgMSmIgⅠ无标志型急淋Null-ALL+-/+-----Ⅱ普通型急淋common-ALL+++-/+-/+--Ⅲ前B细胞型急淋pre-B-ALL++++++-ⅣB细胞型急淋B－ALL＋＋+/-++-+ （二）急性非淋巴细胞白血病应用免疫学标志进行分型尚正在探索中，髓细胞系的免疫膜标志；粒细胞系为过氧化物酶＋、CD34＋、CD13＋；单核细胞系为α－萘酚醋酸酯酶＋，可被氟化钠抑制，CD34＋、CD13＋、CD14＋；红细胞系为血型糖蛋白（Gl ycophorin）及红细胞膜收缩蛋白（Spectrin）＋；巨核细胞系为血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa+、Ⅰb/Ⅲa＋。
急非淋膜标志与FAB分型的关系见表5－3－3. 表5－3－3 急性非淋巴细胞白血病FAB 分型与膜标志抗体M1M2M3M4M5M6M7 HLA－DR++-+++/-+/-CD34++/--+/-+/--+/-CD33+++ +++/-+/-CD13+/-++ + +- CD14-+/--++- CD15-++/-+++/- 血型糖蛋白-----+-Ⅱb/Ⅲa/Ⅰb------+。
流式细胞术系列之-白血病免疫分型
CD13和/或CD33阳性 HLA-DR阳性 CD34阳性 CD11B，CD15等(+/-) >3%的幼稚细胞表达
MPO。
AML-M2（急性粒细胞白血病部分成熟型）
• 此类型白血病细胞除了占优势的幼稚细胞外还存在已 明显分化的细胞群体，至少已分化至早幼粒细胞或粒 细胞水平。
(immunology， I ) ( cytogenetics，C )
WHO分型(2001)
（MICM）
(morphology，M ) (immunology， I ) ( cytogenetics，C)
(molecular biology, M)
L1型
急淋
急
性
（ALL）
白
L2型 L3型
细 胞
M0: 微分化型髓系白血病；
标本来源
（1）外周血 （2）骨髓穿刺液， （3）骨髓活检标本 （4）淋巴组织穿刺
样本保存
要 求： •室温条件(16℃ -28℃ )存放； • 如非液态标本，则要在标本中加入足量的等渗液 体（如 生理盐水或组织培养液）。
保存时间
1. 肝素抗凝的外周血和骨髓标本，存放时限为48～72小时； 2. EDTA抗凝标本，存放时限只有12 ～ 24小时，因为髓细胞
胞内染色 CD3\CD79a\MPO
可以确定白血病分CD7
B系：CD10、CD19、CD20 表面染色 髓系：CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33
非系列特异的抗体：CD34、HLA-DR 泛白细胞标志：CD45
进一步 细分
其它 CD4、CD8、CD61、CD56、CD38 必要时可以加用
白血病淋巴瘤免疫分型精品课件
Cytokinr
+
Cytokines
+
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DNA
5
设门
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6
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设门
全部 细胞
门内细胞
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7
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8
血液肿瘤分类进程
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9
白血病免疫分型的理论基础
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3
CD45/SS示意图
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4
抗原分布
• 表面,胞浆,核内
• 是共同检测还是分别检测?
表面
胞浆
核内
CD3, CD4, CD8, tetramer
cytokines
DNA
CD3,4,8, tetramer
+
Cytokines
CD3,4,8, tetramer
+
Promyeloid
CD15+/CD117+/-
CD34HLADR-
CD11b-, CD14-
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/HLADR+ CD15+ CD11b+
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61
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CD2-/+ CD5-/+ sCD3-
CD4CD8-
Common Thymocyte
CD2+ CD5+ Dual CD4+/CD8+ sCD3-
急性白血病免疫分型
T-ALL旳免疫表型特点：
T-ALL分类
免疫表记
TdT+ 、CyCD3+ 、CD7+
Pro/Pre-T-ALL
CD2-、sCD3- 、CD1a-
T-ALL
CD2+、 sCD3+ 、 CD5+/- 、CD8+/- 、CD4+/- 、 CD1a+/-
-
+
+
-
T-ALL
+
-
-
+
-
-
+
AML
-
+/-
+
-
-
-/+
-/+
R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞一般会在R4 R6 两门位置处出现
正常骨髓经CD45/SSC射门旳散点图
CD45/SSC 图中可见 CD45 强阳性SSC 低信号旳细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体 中档强度旳CD45 体现SSC 信号最强旳细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体 CD45 体现与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间旳是单核细胞群体绿色细胞群体 CD45 阴性SSC 信号最低旳有核红细胞和细胞碎片
ANLL旳免疫分型特点
FAB-M1/M2旳免疫表型特点：CDl3+、CD15+、CD33+、 HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中旳体现强于M2，而CD15在M2旳体现较强。
ANLL旳免疫分型特点
急性淋巴细胞白血病流式免疫分型探讨
在现实社会中，注意问题比文化素质低更为严重，ADHD大约有50%~80%病例可一直持续到青春期，有30%~50%ADHD病例可持续到成人期，因此，人们认识到ADHD不仅仅是一种儿童障碍，也是一种成人障碍，它可以使人致残。
从临床表现分析，ADHD在儿童期表现为以多动常见，而在青少年期表现为叛逆性常见。
在成人期多动行为可能减少而注意力问题表现更为突出。
注意缺陷会造成学习困难，将直接影响成年后的就业问题。
ADHD如不治疗，可持续到成人期，其后果十分严重，可发展为人格障碍，其表现为冲动、反社会行为、偷窃行为、说谎行为、物质滥用等成瘾行为危害性更大，而治疗十分困难，它将给家族和社会带来极大的危害性，必须引起精神卫生工作者的重视。
因而必须及早对儿童进行矫正治疗，培养儿童健全的人格，使他们成为国家建设的合格人材。
参考文献1王惠梅，张惠清，梁英仪，等.太原市儿童注意多动障碍流行病学调查.中国心理卫生杂志，1997，11（1）：472汪向东，王希林，马弘.心理卫生评定量表手册.北京：中国心理卫生杂志社，1999.553张静萍，于爱萍.合肥市6~11岁儿童多动症患病情况调查.预防医学文献信息，2000，6（4）：3094李元真，景梅菊，赵东霞，等.山西省6~12岁小学生“儿童多动症”患病率调查.中华心身医学杂志，2002，2（2）：905王丽敏，应长青，李德安，等.哈尔滨动力区7~10岁儿童多动症流行病学调查.中国行为医学科学，1997，6（4）：284（收稿日期：2002-09-06）急性淋巴细胞白血病流式免疫分型探讨吴铭孙雄飞陈晓琳暨南大学医学院第二附属医院，广东省深圳市人民医院血液科（518020）【摘要】目的对28例急性淋巴细胞白血病（ALL）进行流式免疫分型研究，探讨CD19，CyCD79a，CD7，CyCD3等白细胞分化抗原在急性淋巴细胞白血病临床免疫分型中的意义。
方法应用双色流式细胞术，对28例经细胞形态学、细胞组织化学和临床表现确诊的急性淋巴细胞白血病患者初诊骨髓或静脉血标本进行免疫分型，采用CD45/SSC设门，MPO以阳性细胞数!3%为该表型表达阳性，其他白细胞分化抗原以阳性细胞数!20%为该表型表达阳性。
儿童急性白血病免疫分型
免疫分型
• 定义：白血病免疫分型是利用单克隆抗体（McAb）检测 白血病细胞的细胞膜和细胞浆抗原，分析其表型，以了解 被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。
• 分型基础：正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为 功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现， 表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相 关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特性。这 些细胞表面和细胞浆内的抗原随着分化成熟过程不断发生 改变，称为造血细胞分化抗原。分化抗原的表达与否可作 为鉴别和分类血细胞的基础。
T-ALL
CD34 TdT CD2 CD5 sCD3 CD4 CD8 TCRαβ TCRγδ CD1a
AML
CD34 CD14 CD15 CD41 Gly A HLA-DR CD61 CD64 CD65s
TdT-FITC HT6 Supertechs
St. Jude Children's Medical Center赠送的破膜剂
各系急性白血病诊断中的重要抗原指标
1. 急性淋巴细胞白血病 (AL)
B-ALL
CD19 cCD79a
敏感性
100% （儿童）
99%
特异性
非特异 特异
T-ALL
CD7 cCD3
100% 100%
非特异 特异
2. 急性髓细胞白血病 (AML)
CD13 CD33 CD117 MPO GlyA CD41
FACS Permeabilizing BD, USA
P Lucio, G Gaipa, EG van Lochem, et al. Leukemia. (2001)15: 1185-1192 EG van Lochem, K Groeneveld, JG Te Marvelde, et al. Leukemia. (1997)11: 2208-2210
免疫分型
2.判断预后 有利于确认与表型有关的特定细胞遗传学异 常来预测肿瘤的生物学行为，有利于发现表型异 常来检测微小残留病。如白血病原始细胞表达多 药耐药基因MDR-1（一种跨膜转运泵，使化学药 物不能进入白血病细胞内），老年AML细胞 MDR-1阳性患者伴预后不良细胞遗传学表现的发 生率比阴性者高，而MDR-1阴性者治疗完全缓解 率高。
白血病免疫分型及应用
昆明市第一人民医院检验科 沈骅
白血病免疫分型理论基础
造血细胞在其分化、发育过程中，细胞膜、 细胞浆或胞核抗原的有无、表达强弱与血细胞的
分化发育阶段密切相关，表现出与细胞系列及其
分化程度相关的特性。
正常血细胞中的抗原表达特点
1. 系列保守性
2. 时序性 3. 抗原表达量的模式化
淋巴瘤临床诊疗现状
在全世界，85%以上的非霍奇金淋巴瘤是成熟B细胞 肿瘤，两种最常见的类型是大B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴 瘤，占所有非霍奇金淋巴瘤的50%。成熟B细胞肿瘤相似 于正常成熟B细胞各个分化阶段的细胞，并有不同的典型 形态和免疫表型。 在过去20年里白血病和淋巴瘤最有意义的治疗进步 主要在前驱B和T-ALL/LBL，前驱B-ALL中有些类型的治 愈率达80%，而另一些类型的肿瘤缓解率仍很低，肿瘤 的细胞遗传谱、基因型和免疫表型有助于预后的分类，这 些不同的预后分类促使人们创建了更有效的治疗方案，并 提高了不良预后组的肿瘤缓解率。
白血病细胞中的抗原表达特点
表达模式基本与相应阶段正常细胞相似，还具 有以下特点： 1. 跨系表达
2. 时相混乱 3. 抗原表达量的改变 白血病髓系细胞抗原标志物表达情况
(TDT CD7)
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初治急白分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD13+ and/orCD117+ and/orCD33+
CD7+ and/orCD2+
CD19+
Myeloid Lineage
T-Lineage
B-Lineage
Myeloid, no or minimal
+
Cytokines
+
DNA
8
设门
9
08-03307
设门
全部 细胞
门内细胞
10
08-03307
11
实验室数目(个)
ASCP(美国临床病理学家协会)流式临床应用调查
140 120 100 80 60 40 20
0
流式临床应用
12
CD4 Leuk Lymph CD34 DNA MDS
Ret B27 Mito NF Plat
CD33
•
CD10
CD65
• 0.5
TdT
TdT
CD14
CD24
CD7
CD15
CD1a
CD64
• *当髓系和一个淋系积分均>2分时，则诊断为急性混合细胞型白 血病。
27
急性白血病的四大免疫类型
• 单表型急性白血病 • 表达某一个系列抗原为主的急性白血病 • 双表型/双克隆急性白血病 • 未分化型急性白血病
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61
29
AML-M1
30
AML-M1
31
AML-M2 32
AML-M2 33
AML-M3 34
AML-M4
35
AML-M4
36
AML-M5
37
AML-M6
38
初治急淋分型
Acute Leukemia – Blasts Present >20%
CD4 CD3
CD8
CD3
7
抗原分布
• 表面,胞浆,核内
• 是共同检测还是分别检测?
表面
胞浆
核内
CD3, CD4, CD8, tetramer
cytokines
DNA
CD3,4,8, tetramer
+
Cytokines
CD3,4,8, tetramer
+
DNA
Cytokines
+
DNA
CD3,4,8, tetramer
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medic2in1e
非肿瘤T淋巴 细胞表型
22
非肿瘤B淋巴 细胞表型
23
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
24
非肿瘤粒细胞、 单核细胞表型
25
白血病免疫分型
• 根据白血病细胞表达的系列相关抗原， 确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、 红系、巨核系等。
3
CD45/SS示意图
4
实验对照的设计
• 空白对照：ALL • 阴性对照：常用同型抗体对照
单色分析：设同型抗体对照 多色分析：同型对照，单阳性对照（用于仪器校正）
• 阳性对照：检测阴性时
5
空白对照和阴性对照的比较：
6
抗原表达
• 需要用多少的标志来确证感兴趣的细 胞群?
• 它们在细胞上的分布是不是很近? • 它们是否在不同的细胞上表达不同? • 他们表达强还是弱?
2
散射光信号和荧光信号
前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积
侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性
荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞 抗原结合越多，产生的荧光信号越强。
CD7+ and/or CD2+
CD19+
maturation
CD34+/CD117+/-
HLADR+
CD56+
CD15-/+ CD11b-, CD14-
Promyeloid
CD15+/CD117+/-
CD34HLADR-
CD11b-, CD14-
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/HLADR+ CD15+ CD11b+
白血病淋巴瘤免疫分 型
流式细胞术的基本概念
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种 可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒 （通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对 特定群体加以分选
研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人 工合成微球等
研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并 加以定量
LGL CLL、ALL、CLD
正常前体细胞 嗜碱性粒细胞
M0、M1、M2、 M4、M5、ALL
成熟红细胞、血小板 细胞碎片
M6、M7、MM Pre-B-ALL 非血液来源细胞
17
B淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medicine
• 根据白血病细胞表达的系列分化其相关 抗原进一步分型。如：早前B，前B，普 通B…
26
EGIL，1998年白血病积分系统
• 分值
B系
T系
髓系
•2
CD79a
CD3
MPO
•
(cyt)CD22 TCRα/β
•
(cyt)IgM TCRγ/δ
•1
CD19
CD2
CD117
•
CD20
CD5
CD13
•
CD10
CD8
血液肿瘤分类进程
13
目前最完善的血液肿瘤免疫分型文献
14
白血病免疫分型的理论基础
白血病/淋巴瘤免疫分型采用的抗原标 志是表达于正常造血细胞不同分化发育阶 段的分化抗原。虽然是恶性肿瘤细胞，但 仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而 仍可依据其抗原的表达谱对白血病/淋巴瘤 进行免疫分型。为了正确分析白血病/淋巴 瘤细胞，必须对正常造血细胞分化抗原的 表达模式有充分的了解。只有熟悉正常细 胞的抗原表达模式，才能辨认白血病/淋巴 瘤细胞的存在。
18
T淋巴细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medic1in9e
粒细胞分化与抗原表达关系图
Wood and Borowitz (2006) Henry’s Laboratory Medic2in0e
单核细胞分化与抗原表达关系图
15
细胞类型鉴定
Borowitz et al (1993) AJCP 100:534-40.
16
Steltzer et al (1993) Ann NY Acad Sci 667:265-280
CD45/SS示意图
正常骨髓细胞
老化粒细胞 、噬酸细胞
血液肿瘤细胞
早幼—成熟粒细胞 单核细胞
淋巴细胞
M3、CML M4、M5