柱前衍生高效液相色谱法测定多糖类兽药中单糖组分的方法研究

柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成

柱前衍生化-高效液相色谱法分析木糖结晶母液的单糖组成孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【摘要】The reversed - phase high performance liquid chromatographic ( HPLC) method of pre-column - derivatization with l-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone (PMP) was developed to separate the traditional eight monosaccharides and detect the monosac-charide composition of crystallization solution of xylose. The results showed that crystallization solution of xylose consisted of mannose, rharanose, cellobiose, glucose, galactose, xylose, arabinose, fucose, and the dominant component monosaccharides were glucose, ga-lactose, xylose and arabinose. Peak height was used to quantify. The concentration of eight kinds of monosaccharide was liner with correspond peak area with correlation coefficients (r2) of 0.9897 -0.9994. The detection limit was 0.002 1 -0.003 1 mg/mL. The recovery was 98.4% - 101.0% , and relative standard deviation of detection results was 0.66% -0.21 % (n = 6). The HPLC method is simple, rapid, sensitive, convenient and can be applied to the quality control of crytallization solution of xylose.%采用1-苯基-甲基-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化-反相高效液相色谱(HPLC)法建立了8种常见单糖的分离模式,并用于木糖结晶母液单糖组成的定量分析.结果表明:木糖结晶母液至少由甘露糖、鼠李糖、纤维二糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖及岩藻糖8种单糖组成,其中以葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖为主.以峰高定量,8种单糖的浓度与相应的峰高呈良好的线性关系,相关系数r2在0.9897 -0.9994范围内,方法检出限为0.0021-0.0031 mg/mL,回收率为98.4% -101.0%,测定结果的相对标准偏差为0.66%-1.21%(n=6).该方法简单、快速、灵敏,可用于木糖结晶母液的质量控制.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2011(020)005【总页数】3页(P47-49)【关键词】木糖结晶母液;单糖组成;衍生化;高效液相色谱【作者】孟海波;高绍丰;张海燕;孟汉卿【作者单位】济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204;济南圣泉唐和唐生物科技有限公司,济南,250204【正文语种】中文木糖、阿拉伯糖作为一种良好的食品添加剂已被广泛应用于食品生产中。

柱前衍生化高效液相色谱法分析当归多糖的单糖组成

图 3 当归多糖经 TFA 水解的时间对各组成单糖的测定影响
F ig. 3 The e ffects of com ponent m onosacchar ides o f A ngelica polysaccha rides fo r different trifluoacetic ac id ( T FA ) hydro lysis tim e 1. 葡萄糖醛酸 ( glu cu ron ic acid) ; 2. 甘露糖 ( m annose) ; 3. 鼠李糖 ( rhamn ose); 4. 半乳糖醛酸 ( ga laduron ic acid ) ; 5. 半乳糖 ( galactose); 6. 葡萄糖 ( g lucose) ; 7. 阿拉伯糖 ( arabonose) 。
3 结果与讨论
3. 1 单糖对照品 PM P衍生物的 HPLC 分离为实现当归多糖各组成单糖的高效分离, 本实验对当归多糖可能包含的 G lc、A ra、M an、G al、Rha、
Xyl、G lcUA、GalUA 及内标 Fuc等 9种标准单糖 PMP 衍生物的高效液相色谱分离条件进行了优化。结果表明, 磷酸缓冲液 ( KH2 PO4-N aOH ) 的 pH 6. 9, 时间梯度为 0→ 10→ 30 m in 和相应浓度梯度为 0→ 8% → 20% 溶剂 B的梯度洗脱模式是分离此 9种单糖衍生物的较理想色谱分离条件。
1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮 ( PM P) 柱前衍生化 H PLC 测定单糖含量的方法经过了不断地发展和完善 [ 3~ 7] , 并成功地用于毛细管电泳分析。 PMP 是还原性糖的最好衍生化试剂之一, 如 PM P 衍生物不易裂解, 分析时不产生异构峰, 且在 250 nm 处有强烈的紫外吸收。本研究采用 PMP 衍生化方法, 用常规的紫外检测器和 C18烷基键合柱, 建立适于当归多糖单糖组成测定的 HPLC 新方法, 达到灵敏、快速、准确、方便和可在线大批量分析的目标。

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远　陈　君　李　萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘　要　报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。

采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。

对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。

关键词　单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱　2001207204收稿;2002201209接受1　引言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。

已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。

由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。

12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。

Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。

本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。

2　实验部分2.1　仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。

衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。

色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。

单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。

微波辅助提取_柱前衍生高效液相色谱法分析板蓝根多糖的单糖组成

收稿日期：2011-06-21；修订日期：2011-10-10作者简介：周威（1982-），男（汉族），湖北鄂州人，现为复旦大学药学院博士研究生，主要从事药物质量分析和药物代谢动力学研究工作．*通讯作者简介：段更利（1955-），男（汉族），上海人，现任复旦大学药学院教授，博士研究生导师，硕士学位，主要从事新药质量标准研究和体内方法学研究工作．微波辅助提取-柱前衍生高效液相色谱法分析板蓝根多糖的单糖组成周威1，张晓燕1，2，段更利1*（1．复旦大学药学院，上海201203；2．武汉大学基础医学院，湖北武汉430071）摘要：目的建立了一种微波辅助提取柱前衍生高效液相色谱法测定板蓝根多糖的单糖组成。

方法采用了微波辅助提取，PMP 柱前衍生单糖，Dikma －C 18色谱柱，流动相为乙腈－磷酸盐缓冲液，检测波长为250nm 。

结果L －鼠李糖，D －葡萄糖和D －半乳糖在0．156 62．5μg /ml 浓度范围内线性关系良好（r ＞0．9995），板蓝根多糖主要由D －葡萄糖、L －鼠李糖和D －半乳糖组成。

结论该方法简便、快速、准确，适用于分析测定板蓝根多糖的单糖组成。

关键词：板蓝根多糖；单糖；微波辅助提取；柱前衍生；高效液相色谱DOI 标识：doi ：10．3969/j．issn．1008-0805．2012．01．105中图分类号：R284．2文献标识码：B 文章编号：1008-0805（2012）01-0236-02板蓝根为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort 的干燥根，具有清热解毒、凉血利咽之功效［1］，是传统的抗病毒中药之一，临床上常用于抗病毒、抗菌。

据报道板蓝根多糖具有多种生物活性，是一种免疫增强剂［2 4］。

板蓝根多糖所含组分的相对分子质量差别较大，成分结构复杂等因素给板蓝根多糖的进一步开发利用造成困难。

水煎煮法作为板蓝根多糖的传统提取方法，表现出耗时、费力等不足。

柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析9种多糖中的单糖组成王媛媛;张晖;杨俊松;宗智慧【摘要】Objective To establish a precolumnderivatization procedure with 1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone ( PMP )-high performance liquid chromatography ( HPLC ) method for the determination of the monosaccharide composition of nine polysaccharides.Methods The nine polysaccharides were hydrolyzed, derivatized by PMP and analyzed by HPLC with the Inertsil ODS-SP C18 column(260mm ×4.6mm,5μm).The mobile phase was the 20%triethylamine-buffer solution withKH2PO4(pH=6.9),and the flow rate was 1.0 ml/min.The UV absorbance was detected at a wavelength of 254 nm,and the injection volume was 10μl with the column temperature 30℃.Results The method was successful in the separation of the mixture monosac-charide standards.The calibration line of each monosaccharide had a good relationship.And the precision, stability and reproducibility were also good.The nine polysaccharides were composed of different monosac-charide and the contents had some difference.Conclusion The method was accurate and stable for the deter-mination of the monosaccharide composition and content of nine polysaccharides.%目的：建立1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（ PMP）柱前衍生化-高效液相色谱法（ HPLC）对甘草多糖等9种多糖的单糖组成成分进行分析。

柱前衍生化高效液相色谱等度洗脱分析单糖的方法建立_徐瑾

柱前衍生化高效液相色谱等度洗脱分析单糖的方法建立徐瑾¹常州工程职业技术学院摘要以1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)为柱前衍生化试剂,建立了高效液相色谱等度洗脱分离分析5种单糖的方法。

采用简化的衍生化方法,在流动相:乙腈-醋酸盐缓冲液(0.1mol/L,p H=5.5,V/V=22B78)的色谱分离条件下,5种单糖衍生物可以达到基线分离,检测限分别为0.54~0.90ng,也对方法的线性范围、精密度、稳定性进行了系统的考察。

关键词单糖1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮衍生化高效液相色谱等度洗脱1.前言近年来,糖类物质在生物学领域的作用已越来越被重视,人们将研究的重点放在糖类物质的定量、定性以及结构分析上,并对此做了大量的研究。

因为糖的种类较多,且结构近似,所以无论对哪种糖进行分析,首先必须将分析的对象与其它糖分离开来。

另一方面糖类物质几乎没有光学活性,对分离后的物质进行直接光学检测比较困难,结合灵敏度、选择性等方面的问题,人们多采用通过化学标记将糖类物质转变为具有光学活性的物质,然后再进行分离分析的方法。

衍生方法与高效液相色谱(HPLC)结合使用不但能提高检测的灵敏度,而且可以改善分离特性。

迄今为止,文献报道的用于糖类物质衍生的紫外衍生试剂种类很多[1-3],它们都各有优缺点。

近年来出现的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)是一种具有强紫外吸收的衍生试剂,Honda等[4]发现该试剂可以与还原性的糖在温和条件下反应,无需酸催化,不会引起脱甲硅基的作用,产物无立体异构体,在紫外245nm处有强烈的吸收。

该方法自应用以来,已得到了不断的完善[3-6]。

马定远等[7]在前人的基础上简化了其衍生化方法,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立的方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。

鉴于该物质的这些优点,本文采用它对单糖进行柱前衍生,结合HPLC技术,建立了5种常见单糖的等度洗脱分离模式,通过外标法对这5种单糖进行了定量研究。

柱前衍生高效液相色谱法分析纸张中的单糖

７０ｏＣ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｉｔｖｉｔｙａｎｄａｃｃｕｒａｃｙ，ａｎｄｐｏｖｒｉｄｅｄａｐｒａｃｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｅｓｔｉｎｇｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎ
第４３卷第１７期
２０１５年９月
广
州
化
工
Ｖｏ１．４３Ｎｏ．１７
Ｓｅｐ．２０１５
ＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ
柱前衍生高效液相色谱法分析纸张中的单糖木
ｅｔｈｙｈｃａｒｂａｚｏｌｅ，ｓｅｐａｒａｔｅｄｂｙｒｅｖｅｒｓｅＴｈｅｒｍｏＣ１８ｃｏｌｕｍｎ，ｕｓｉｎｇａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄａｍｍｏｎｉｕｍａｃｅｔａｔｅａｑｕｅｏｕｓｓｏｌｕｔｉｏｎａｓ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｎｅｗｍｅｔｈｏｄｏｆａｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｐａｐｅｒｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙＨＰＬＣｗｉｔｈｐｒｅ—ｃｏｌｕｍｎｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｕｓｉｎｇ３— －ａｍｉｎｏ— －９— －ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｚｏｌｅ．Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｐａｐｅｒｗｅｒｅｄｅｒｉｖａ Байду номын сангаас ｉｚｅｄｕｓｉｎｇ３— — ａｍｉｎｏ— －９— －

单糖的柱前衍生化高效液相色谱及胶束电动毛细管色谱分析的对比研究

在多种毛细管电泳模式中进行糖类物质的分 $ % & ［］ " * ! # + 动毛细管色谱（( 、毛细管凝胶电泳 & ) $） # ! # # ，如采用毛细管区带电泳（析［］ " ’ ）、胶束电
（$ , & . & ) $ 析。/ ( / 衍生与 $ & 结合不仅可以分析简单的单糖和寡糖，而且已经应用于某些糖缀合物中的寡糖成分的检测。在 ( 糖类物质经 / & ) $ 中， ( / 衍生后，其疏水性提高，通过与强疏水的十二烷基硫酸钠（胶束发生疏水作用，可以达到很好的分 0 1 0）
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单糖的柱前衍生化高效液相色谱及胶束电动毛细管色谱分析的对比研究
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柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法

⑥
２０１５Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．Ｅｎｇｒｇ．
医药卫生
柱前衍生化高效液相色谱法测定当归酸性多糖单糖组成的新方法
李卫燕李萍曹蔚
（第四军医大学药学系天然药物学教研室，西安７１００３２）
摘要首次建立柱前衍生化高效液相色谱法分析当归酸性多糖中糖醛酸、氨基糖和中性糖的方法。Ｄ－甘露糖、Ｄ・葡萄糖胺、Ｌ．鼠李糖、Ｄ．半乳糖胺、Ｄ．葡萄糖醛酸、Ｄ．半乳糖醛酸、Ｄ．葡萄糖、Ｄ．半乳糖、Ｌ．阿拉伯糖和Ｄ．岩藻糖等ｌ０种单糖经柱前衍
乳糖醛酸（ＧａｌＵＡ）、Ｄ－葡萄糖（Ｇｌｕ）、Ｄ一半乳糖（Ｇａ１）、Ｌ．阿拉伯糖（Ａｍ）和Ｄ．岩藻糖（Ｆｕｃ）均购自Ｓｉｇｍａ公司；乙腈和甲醇（色谱纯）购自韩国德山药
品公司。
生化法处理后作为标准品。色谱条件：ＨｙｐｅｒｓｉｌＢＤＳＣ８色谱柱（４．６ｍｉｌｌｉ．ｄ．×２５０ｍｍ，５ｍ），流动相由乙酸铵水溶液（１００
ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ＝５．０）、乙腈和四氢呋喃以８１：１７：２的体积比组成，流动相流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长２５０ａｍ，柱温２５℃。实验
１．３当归酸性多糖的提取和纯化
将当归药材粉碎，称ｌｋｇ置于圆底烧瓶中，加入５倍量的９５％乙醇回流提取三次，每次２ｈ。用纱布过滤，药渣晾干。干燥的药渣重新置于圆底烧瓶中，加人８倍量的１．０ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＯＨ溶液，回流提取两次，每次１ｈ。提取完成后再次用纱布过滤，收集滤液，４０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，５５ｏＣ用旋转蒸

PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成

PMP柱前衍生化HPLC法测定地参多糖的单糖组成一、本文概述Overview of this article本文旨在介绍一种采用PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）柱前衍生化结合高效液相色谱法（HPLC）测定地参多糖中单糖组成的方法。

地参作为一种具有丰富营养价值和药用价值的植物，其多糖成分具有显著的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。

因此，对地参多糖中单糖组成的准确分析对于揭示其生物活性机制、优化提取工艺以及质量控制具有重要意义。

This article aims to introduce a method for determining the monosaccharide composition in ginseng polysaccharides using PMP (1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone) pre column derivatization combined with high-performance liquid chromatography (HPLC). As a plant with rich nutritional and medicinal value, the polysaccharide components of ground ginseng have significant biological activities, such as antioxidant, anti-inflammatory, and anti-tumor effects. Therefore, accurate analysis of monosaccharide composition inginseng polysaccharides is of great significance for revealing their biological activity mechanisms, optimizing extraction processes, and quality control.PMP柱前衍生化是一种常用的单糖衍生化方法，通过与单糖上的羟基反应，将单糖转化为具有紫外吸收特性的衍生物，从而便于HPLC 检测。