下载高效液相色谱法同时测定鳗鱼及其制品中八种磺胺类药物

烷 正已烷 甲醇（色谱纯） 无水硫酸钠 经 ６ ５ ０ 灼 烧 ４ ｈ 置于干燥器内备用 １ ％ （ Ｖ ／ Ｖ ） 乙酸 移取乙酸 ５．００ｍｌ 水稀释至 ５００ｍｌ 过 ０．４５ ｍ 滤膜 用前通氦 气脱气或超声脱气 １５ｍｉｎ 固相萃取柱 ６０ｍｇ／３ｃｃ Ｗａ－ ｔｅｒｓ Ｏａｓｉｓ ＭＣＸ®（阳离子交换柱） 或其它等同效果的固相萃 取柱 １．３ 实验方法
１ 材料与方法
１．１ 仪器 液相色谱仪（ 配有紫外检测器 二极管阵列检测
器） 匀质器 旋涡振荡器 离心机 减压旋转蒸发 仪 玻璃抽滤器 滤膜 无机系 有机系 ０ ． ４ ５ ｍ 氮气吹干浓缩仪 配有 ２ ０ ０ ｍ ｌ 浓缩瓶 １．２ 试剂
磺胺嘧啶 磺胺甲基嘧啶 磺胺二甲嘧啶 磺胺 甲氧嗪 磺胺甲噁唑 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺间二甲 氧嘧啶 磺胺喹噁啉均从 Ｓｉｇｍａ 公司购置的对照品 所 用试剂除注明外均为分析纯 水均为超纯水 二氯甲
［５］ Ｐｈｉｌｉｐ Ｊ． Ｍａｒｒｉｏｔｔ， Ｒｏｂｅｒｔ ｓｈｅｌｌｉｅ， Ｃｈａｒｌｅｓ Ｃｏｒｎｗｅｌｌ， Ｇａｓ ｃｈｒｏ－ ｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ， ２００１， ９３６： １－２２．
ｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ， ２００２， ５１（９）： １６８４－１６８８． ［７］ Ｂｅｃｏｕｒ Ｂｅａｔｒｉｃｅ， Ｃｏｕｒｔｏｉｓ Ｄｉｄｉｅ， Ｅｈｒｅｔ Ｃｈａｒｌｅｓ． Ｂｉｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ
［ｐ］． ＥＰ， ３５３６８３Ａ２， １９８９ －０７－３１． ［８］ Ａｓａｎｕｍａ Ｇｏｒｏ， Ｔａｍａｌ Ｙｏｓｈｉｎ．Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｉｒｏｎｅ［ｐ］．
磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药 物的总称 是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的抗 菌药 磺胺类药物在体内的作用时间和代谢时间较长 通过任何途径摄入的磺胺都有可能在人体中蓄积 当蓄 积浓度超过一定浓度时将对人体机能产生损害 磺胺类 药物的副反应有过敏反应 尿和造血紊乱等 磺胺二 甲嘧啶还表现出可能使小鼠致癌［ １ ］ 因此许多国家对动 物使用磺胺类药物和其在动物源性食品中的残留进行了 严格的监控
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｄｒｕｇｓ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ Ｅｅｌｓ ａｎｄ Ｒｏａｓｔｅｄ Ｅｅｌｓ ｂｙ ＳＰＥ－ＨＰＬＣ
ＬＩＮ Ｈａｉ－ｄａｎ ＸＩＥ Ｓｈｏｕ－ｘｉｎ ＷＵ Ｙｉｎｇ－ｘｕａｎ （Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｑｕａｒａｎｔｉｎｅ ｏｎ Ｆｏｏｄ ｏｆ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ＣＩＱ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６２３， Ｃｈｉｎａ ）
１．３．３ 色谱条件 色谱柱 Ｃｌｏｖｅｒｓｉｌ Ｃ１８ 柱 ２５０ｍｍ ４．６ｍｍ（ｉ．ｄ．） 流动相 甲醇 １％ 乙酸（Ｖ／Ｖ）梯度洗
脱 甲醇 ２ ０ ％ ￣ ５ ０ ％ （ ２ ２ ｍ ｉ ｎ 内线性增加） ５０ ％ ２ ０ ％ （ １ ｍ ｉ ｎ 内线性递减） ２ ０ ％ （ 保持 １ ７ ｍ ｉ ｎ ） 检测波长 ２ ６ ５ ｎ ｍ 柱温 ３ ５ 进样量 ２ ０ ｌ
１．３．１ 校准曲线的绘制 准确称取各磺胺类药物对照品 于容量瓶中 以甲醇定容作为标准贮备液 吸取各标 准贮备液 以甲醇稀释至质量浓度为 ０ ２．０ｍｇ／Ｌ 的标准 系列 各取 ２ ０ ｌ 进样分析 据峰面积与相应的质量浓 度进行线性回归 绘制标准曲线
１．３．２ 样品处理 称取５．０ｇ匀浆样品和１０ｇ经灼烧无水 硫酸钠 于 ５ ０ ｍ ｌ 离心管中 加入 ２ ５ ｍ ｌ 二氯甲烷 均 质提取 １ｍｉｎ ３０００ｒ／ｍｉｎ 离心 ２ｍｉｎ 上清液经快速定性 滤纸过滤到 ２００ｍｌ 浓缩瓶中 用 ２５ｍｌ 二氯甲烷重复提取 一次 合并二氯甲烷 ３ ５ 水浴氮气吹干 上述残渣 用１．０ｍｌ １％（Ｖ／Ｖ）乙酸 甲醇（６５＋３５）溶解 涡旋混匀 转 移至 ５ ｍ ｌ 离心管中 加 ３ ｍ ｌ 正己烷 涡旋混匀 静置 分层 弃上层正己烷层 再加入 ３ ｍ ｌ 正己烷 涡旋混 匀 ３０００ｒ／ｍｉｎ 离心 ２ｍｉｎ 下层过 ０．４５ ｍ 有机系滤膜 供液相色谱测定 烤鳗样品（基质干扰大）的测定 则需 固相萃取柱如下的净化步骤
［６］ Ｍｉｓｈａｒｉｎａ Ｔ Ａ， ｓａｍｕｓｅｎｋｏ Ａ Ｌ， Ｂｅｌｙａｅｖａ Ｎ Ｖ．ｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｒｉ－ ａｎｄ ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎｙｌ ｂｕｔｅｎｙｌ ｋｅｔｏｎｅｓ［Ｊ］． Ｒｕｓｓｉａｎ Ｃｈｅｍｉ－
ＥＰ， ０４９９９８０Ｂ１， １９９５－０４－２６． ［９］ 荣国斌， 译． 波谱数据表－有机化合物的结构解析［Ｍ］． 上
海： 华东理工大学出版社， ２００２． ［１０］ 陈耀祖， 涂亚平． 有机质谱原理及应用［Ｍ］． 北京： 科学出
版社， ２００１． ［１１］ 宁永成． 有机化合物结构鉴定与有机波谱学［Ｍ］． 北京： 科
收稿日期 ２００４－０２－１２ 作者简介 林海丹（ １ ９ ７ ０ － ） 女 硕士研究生 主要从事食品检验研究工作
［３］ 陈学恒． 我国山苍子油产业化技术浅评和利用对策［Ｊ］． 香 精香料化妆品， ２００２， （４）： ３１－３７．
［４］ Ｄｉｄｉｅｒ Ｃｏｕｒｔｏｉｓ， Ｃｈａｒｌｅｓ Ｅｈｒｅｔ， Ｌａｕｒｅｎｃｅ Ｍａｒｔｈｅ Ｍａｒｌｅ Ｆｉｒｍｉｎ． Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｒｏｎｅｓ［Ｐ］． ＷＯ， ９８４９１３９， １９９８－ １１－０５．
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓ ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ｅｅｌｓ ａｎｄ ｒｏａｓｔｅｄ ｅｅｌｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｓｕｌｆａｄｉａｚｉｎｅ， ｓｕｌｆａｍｅｒａｚｉｎｅ，ｓ ｕｌｆａｄｉｍｉｄｉｎｅ，ｓ ｕｌｆａｍｅｔｈｏｘｙｐｙｒｉｄａｚｉｎｅ，ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚ－ｏｌｅ，ｓｕｌｆａｍｏｎｏｍｅｔｈｏｘｉｎｅ，ｓｕｌｆａｄｉｍｅｔｈｏｘｉｎｅ，ｓｕｌｆａｑｕｉｎｏｘａ－ ｌｉｎｅ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｄ ｔｉｓｓｕｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ ａｎｄ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅｄ． Ｔｈｅ ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ ｗａｓ ｆｉｌｔｒａｔｅｄ ａｎｄ ｅｖａｐｏｒａｔｅｄ． Ｔｈｅ ｄｒｙ ｒｅｓｉｄｕｅ ｗａｓ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｉｎ １％ ａｃｅｔａｔｅ ａｃｉｄ－ｍｅｔｈａｎｏｌ（６５：３５， Ｖ／Ｖ）． Ａｆｔｅｒ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｘａｎｅ， ｔｈｅ ａｑｕｅｏｕｓ ｌａｙｅｒ ｗａｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｎｄ ｄｉｌｕｔｅｄ ｗｉｔｈ ５％ ａｃｅｔａｔｅ ａｃｉｄ． Ｔｈｅ ｄｉｌｕｅｎｔ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ａ ｐｒｅ－ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ＭＣＸ ＳＰＥ ｃｏｌｕｍｎ， ｗａｓｈｅｄ ｗｉｔｈ ５％ ａｃｅｔａｔｅ ａｃｉｄ－ｍｅｔｈａｎｏｌ（５０：５０， Ｖ／Ｖ） ａｎｄ ｅｌｕｔｅｄ ｗｉｔｈ ５％ ａｍｍｏｎｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌ． Ｅｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ａｎａｌｙｓｅｄ ｂｙ ＬＣ ｏｎ ａ ｃｏｌｕｍｎ （２５０ｍｍ ４．６ｍｍ ｉ．ｄ．） ｏｆ Ｃｌｏｖｅｒｓｉｌ Ｃ１８ ＯＤＳ， ｗｉｔｈ １％ ａｃｅｔａｔｅ ａｃｉｄ－ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ（１．０ｍｌ／ｍｉｎ） ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｔ ２６５ｎｍ． Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ ｌａｒｇｅｒ ｔｈａｎ ０．９９９． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｗｅｒｅ ０．０２０ｍｇ／ｋｇ． Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ ８０％ ９３％．
下层加 ５％（Ｖ／Ｖ）乙酸溶液稀释至 ３ｍｌ 稀释液注入 预先分别用 ３ｍｌ 甲醇和 ３ｍｌ ５％（Ｖ／Ｖ）乙酸溶液处理的 Ｗａ－ ｔｅｒｓ Ｏａｓｉｓ ＭＣＸ® 固相萃取柱 用 ２ｍｌ ５％ 乙酸溶液甲醇 （５０＋５０）淋洗 最后用 １０ｍｌ５％ 氨甲醇溶液洗脱 洗脱液 ４０ 减压旋转蒸发至干 残渣用 １ｍｌ 甲醇定容 供液相色 谱测定
学出版社， ２００２．
分析检验
食品科学
2005, Vol. 26, No. 1 177
Ｋ ｅ ｙ ｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ＳＰＥ－ＨＰＬＣ ｓｕｌｆｏｎａｍｉｄｅｓ ｅｅｌｓ ａｎｄ ｒｏｓｔｅｄ ｅｅｌｓ 中图分类号 Ｏ６５７．７２ 文献标识码 Ａ 文章编号 １００２－６６３０（２００５）０１－０１７６－０４
结果与分析
２．１ 色谱条件的选择
２．１．１ 流动相与固定相 以甲醇－水二元体系进行不同 比例洗脱试验 甲醇 － 水二元体系即使是在梯度洗脱条 件下八种组分分离差 得不到满意的色谱图 其中磺 胺喹噁啉保留值过长且峰形差 考虑到磺胺类结构式中
178 2005, Vol. 26, No. 1
鳗鱼养殖和加工是 ９０ 年代以来在中国沿海地区 特 别是广东 福建 广西等地发展起来的农业产业 其 规模和技术含量在 ９０ 年代中期得到迅速扩大和提高 日 本为我国鳗鱼及其制品出口的最大市场 而日本规定动 物源性食品中磺胺类药物不得检出 鳗鱼中同时测定磺 胺嘧啶（ Ｓ Ｄ ） 磺胺甲基嘧啶（ Ｓ Ｍ １ ） 磺胺二甲嘧啶 （ Ｓ Ｍ ２ ） 磺胺甲氧嗪（ Ｓ Ｍ Ｐ ） 磺胺甲噁唑（ Ｓ Ｍ Ｚ ） 磺胺 间甲氧嘧啶（ Ｓ Ｍ Ｒ ） 磺胺间二甲氧嘧啶（ Ｓ Ｄ Ｍ ） 磺胺喹 噁啉（ Ｓ Ｑ Ｘ ）方法有关文献国内鲜有报道 动物源性食品 中磺胺类药物检测常用的为液相色谱法 典型的液相色 谱法为欧美官方实验室测定猪肾中的磺胺二甲嘧啶的方 法［２］ 现我国检验磺胺类的标准有ＳＮ０２２１－９３［３］ ＳＮ０２０８－ ９３［４］ 其中有使用重氮甲烷甲酯化后气相色谱分析 重 氮甲烷试剂易爆炸 难操作 有采用液液微萃取净化 液相色谱分析 检测低限为 ０．０５ｍｇ／ｋｇ 不能满足日方 的检测低限要求 分析鳗鱼及其制品中磺胺类药物的基 质干扰大 尤其是烤鳗 样品萃取物不净化或单纯液 液萃取净化都不能满足痕量分析的要求 有鉴于此 本 研究采用固相萃取前处理技术作为样品萃取物的净化富 集 建立固相萃取 － 高效液相分析鳗鱼及其制品中磺胺 类药物残留量 该法简便 准确 本法已应用于广州 口岸出口鳗鱼与烤鳗的实际检验中 效果理想