检测磺胺类药物残留
磺胺类及氟喹诺酮类药物兔单克隆抗体的制备与多残留检测技术研究

磺胺类及氟喹诺酮类药物兔单克隆抗体的制备与多残留检测技术研究1. 本文概述在当前食品安全和公共卫生领域,对动物源性食品中的化学药物残留进行有效监控是确保消费者健康的关键环节。
磺胺类药物和氟喹诺酮类药物作为广泛使用的抗菌剂,在畜牧业中的应用尤其普遍。
这些药物的不当使用或过量残留可能对人类健康产生严重威胁。
开发一种高效、灵敏的检测技术以监测和控制这些药物的残留水平显得尤为重要。
本文旨在研究并制备针对磺胺类和氟喹诺酮类药物的兔单克隆抗体,并通过这些抗体建立一种多残留检测技术。
通过使用现代生物技术手段,我们成功地制备了一系列高特异性和高亲和力的单克隆抗体。
这些抗体能够准确识别目标药物,并在后续的检测实验中显示出优异的性能。
本研究首先涉及了抗原的设计和合成,随后通过免疫学方法在兔体内产生相应的抗体。
通过筛选和优化,我们获得了一组性能最佳的单克隆抗体。
本文还将介绍基于这些抗体的多种检测平台,如酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光免疫分析和免疫层析条带(Lateral FlowAssay, LFAS)等,以实现对磺胺类和氟喹诺酮类药物残留的快速、准确检测。
通过本研究,我们期望为食品安全监管机构和相关行业提供一种新的技术手段,以更有效地控制和管理动物源性食品中的药物残留问题,从而保护公众健康并促进行业的可持续发展。
2. 材料与方法化学试剂:弗氏完全和不完全佐剂、辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗、蛋白质AG亲和层析柱等。
偶联载体蛋白:将合成多肽与载体蛋白(如BSA或KLH)偶联,制备免疫抗原。
免疫程序:描述免疫新西兰大白兔的具体步骤,包括免疫原的注射剂量、频率和途径。
杂交瘤细胞的筛选与克隆化:通过HAT选择性培养基筛选,有限稀释法进行克隆化。
单克隆抗体的生产与纯化:采用体外培养或小鼠腹腔注射的方法生产单克隆抗体,并通过亲和层析法纯化。
亲和力常数测定:利用表面等离子共振(SPR)等技术测定抗体与抗原的亲和力。
ELISA方法:建立磺胺类和氟喹诺酮类药物的多残留ELISA检测方法。
磺胺类药物残留的液相色谱-质谱法测定研究进展

并且 可 能致 癌[等 。联合 国 食 品法典 委员 会 ( AC) 4 ] C 和 许多 国家 ( 括 中 国 ) 定 , 品和 饲 料 中磺 胺 类 包 规 食 药物 残 留 总量 以及 磺 胺 二 甲基 嘧 啶 的 量 不 超 过 0 . 1 / g 。 99年 1 开始 , 盟对 不少 磺胺 类 抗 mg k E 19 O月 欧 球 虫药 颁 布 了禁 令 ; 日本 禁 止 在 家禽 使用 磺 胺 喹 琳 等五 种药 物 ;0 3年 起 , 国 F 20 美 DA 公 布 禁止 在 进 口 动物 源性 食 品 中使用 磺胺 类药 物 ; 国禁 止在 鸡 、 英 猪 和火 鸡 中 使用 磺 胺 类 药 物 作为 饲 料 添 加 剂 ; 国 香 我 港地 区也 于 2 0 0 1年 1 2月 3 1日起 将磺胺 类 药物 作 为 实施管 制 的药 物之 一 L 。 1 ] 磺 胺 类药 物检 测 方法 很多 , 学分 析法 , 相 色 光 气 谱法 , 电化 学 法 , 联 免 疫 法 , 细 管 电泳 法[ 等 酶 毛 6 ] 都有应 用 。高 效液 相 色 谱 ( L 是 目前 广 泛应 用 HP C) 的一 种理 化 检 测 方 法 , 的分 离速 度 快 、 率 高 、 它 效 操 作 自动 化 。 几乎 所 有 的化合 物包 括 高极 性 、 离子 型待 测 物和 大 分子 物质 , 可用HP C进行 分 离 。 均 L 质谱 法 ( ) 有较 强 的定 性 功能 , 一次 分析 中可 以 获得 Ms 具 在 很 多 结构 信 息 , 分 离 技 术 和质 谱 法 相 结合 是 分 离 将 科 学 中的 一项 突破 性进 展 。 目前 广泛 应 用于食 品、 生 物、 医药等 行 业 , 可准 确 定 性 、 量 测 定 复杂 混 合 物 定 的组分 [ 。 8 液质 联机 使用 , ] 已成 为大 多数 抗 生素残 留 的常规 分 析 方法 , 也是 测定 磺 胺 类 药 物 残 留 的普 遍 使 用的方 法 。HP C对 磺胺 类 药物 的 分离 主要 采 用 L 反相 柱 , 以 C1 尤 8柱为 主 , 少数 文献 报道 使 用 C81。 , L 。 流 动相 以缓 冲 溶 液 乙腈 、 甲醇为 主 , 离 效 果 良好 。 分 那 广 水[ 等建 立 了用 HP C—MS MS法 同 时测 定 1 妇 L /
(优选)HPLC检测食品中的四种磺胺类兽药

标准曲线的绘制
由四种样品混合标准液400 ppm,进行等度稀释成 质量浓度为8 ppm、6 ppm、4 ppm、2 ppm、1 ppm、 0.4 ppm的标准系列,各取20 ul由高效液相色谱仪 进样分析,据峰面积与相应质量浓度进行线性回 归,绘制标准曲线。
定性实验
将标准样品的四种单品及混合样品溶液分别进行 稀释至8 ppm,并经HPLC进样分析,根据四种单 品各自出峰时间及混合样品中四种单样的出峰时 间比较进行定性
配有UV100紫外检测器
仪器与试剂
➢ 磺胺噻唑 ➢ 磺胺嘧啶 ➢ 磺胺甲基嘧啶 ➢ 磺胺二甲嘧啶 ➢ 色谱纯甲醇
纯度99.9℅ 纯度99.9℅ 纯度99.9℅ 纯度99.9℅
溶液配制
标准样品溶液配制
准确称取四种SAs药物标准品10 mg,置于10 ml容量瓶 中,用甲醇定容至刻度,配置成1 mg/ml的标准储备液。
英美等国家对磺胺类药物在肉类及乳品中的允许残留量限制为100gkg1欧盟第67592号令中规定了在肉类及牛奶中磺胺的最大残留总量不得超过100gkg1日本要求的最高残留限量更严格单个磺胺残留限量为20gkg1最大残留总量不得超过100gkg1我国对磺胺类药物在肉类及乳品中的允许残留量限制为100gkg1磺胺类药物不易溶于非极性溶剂而在极性较大的溶剂中溶解性较好一般常用乙睛氯仿二氯甲烷丙酮或乙酸乙酯提取
N
N
H3CO
OCH3
sulfadoxine (SD)
OCH3 N
N
OCH3
sulfadimethoxine (SDMX)
OCH3 NN
sulfamethoxypyridazine (SPMX)
OCH3 N
N
OCH3 N
国家标准GBT 21316—2007测定动物源性食品中磺胺类药物残留量的不确定度评定

摘要对国家标准GB/T 21316—2007测定动物源性食品中磺胺类药物残留量的测量不确定度进行评定。
根据《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012)和《化学分析中不确定度的评估指南》(CNAS-GL006:2019)中的规定,建立测定鳗鱼肉中磺胺残留量测定的数学模型,根据测量不确定度的来源,以磺胺甲基嘧啶为例,对各个不确定度分量进行评定和分析。
评定结果表明,当样品磺胺甲基嘧啶含量检测结果为10.4μg/kg 时,扩展不确定度为3.4μg/kg 。
不确定度按照从大到小排列,依次为标准曲线最小二乘法拟合、测量重复性、回收率、标准溶液制备、LC/MS/MS 定量重复性、样品定容、样品称量。
关键词国家标准;GB/T 21316—2007;动物源性食品;磺胺;不确定度评定中图分类号S859.84文献标识码A 文章编号1007-5739(2020)01-0224-04开放科学(资源服务)标识码(OSID )Uncertainty Evaluation for Determination of Sulfonamide Residues in Animal-derived Foods by National StandardGB/T 21316-2007CHEN Zhang-jie(Fujian Institute for Food and Drug Quality Control ,Fuzhou Fujian 350001)Abstract The uncertainty of determination of sulfonamide residues in animal-derived foods by GB/T 21316-2007was evaluated.According to "Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement"(JJF 1059.1-2012)and "Guidance on Quantifying Uncertainty in Chemical Analysis"(CNAS -GL006:2019),a mathematical model for determination of sulfonamide residues in eel meat was established.Based on the sources of the measurement uncertainty ,each uncertainty of sulfamethazine as an example was evaluated and analyzed.The evaluation results showed that the extended uncertainty was 3.4μg/kg when the test result of sulfamethazine content in samples was 10.4μg/kg.The uncertainty was arranged in order from large to small ,which were least squares calibration ,measurement repeatability ,recovery rate ,standard solution preparation ,LC/MS/MS quantitative repeatability ,sample volume determination and sample weighing.Key words national standard ;GB/T 21316-2007;animal-derived food ;sulfonamide ;uncertainty evaluation国家标准GB/T 21316—2007测定动物源性食品中磺胺类药物残留量的不确定度评定陈章捷(福建省食品药品质量检验研究院,福建福州350001)磺胺类药物是以对位氨基苯磺酰胺(简称磺胺)为基本结构的一类人工合成抗生素的总称,具有抗菌谱广、吸收迅速、使用方便、价格低廉等优点,广泛应用于人类医学和畜牧行业。
农质发(2014)5号文件 磺胺类药物

农质发〔2014〕5号文件附件8磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法1 范围本标准规定了动物组织中五种磺胺类药物(磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉)残留检测的高效液相色谱测定方法。
本标准适用于猪肉中五种磺胺类药物残留量的测定。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3原理样品经乙腈提取后,在上清液中加入正己烷进行液液分配,取下层溶液浓缩,残留物用95%乙腈溶解,过碱性氧化铝小柱, 以70%乙腈溶液洗脱,加入正丙醇浓缩后,残留物用流动相溶解,高效液相色谱仪进行检测,外标法定量。
4试剂和材料以下所用的试剂,除特别注明者外均为分析纯试剂;水为符合GB/T 6682规定的二级水。
4.1 磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲噁唑(SMZ)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺喹噁啉(SQ)对照品:含量均不得少于98.0%4.2 乙腈色谱纯4.3 甲醇色谱纯4.4 正已烷4.5 冰乙酸4.6 正丙醇4.7 无水硫酸钠4.8 95 %乙腈溶液取乙腈95 mL加水至100 mL,混匀。
4.9 70 %乙腈溶液取乙腈70 mL加水至100 mL,混匀。
4.10 磺胺类药物标准储备液(1mg/mL):分别准确称取适量上述五种磺胺类药物对照品,置同一棕色容量瓶,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成浓度为1mg/mL的标准储备液。
-20℃以下冰箱中保存,有效期6个月。
4.2.10 磺胺类药物标准工作液(10µg/mL):精密移取磺胺类药物标准储备液1.0 mL,置100 mL棕色容量瓶,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
免疫层析法快速测定鸡肉和鸡蛋中磺胺类药物残留

条 。结果 : 该方法可 以在 1 分 钟 内完 成对 磺胺 类 药 物 的半定 量 残 留检 测 , 测磺 胺 间 甲氧 嘧啶 (M 、 5 检 S M)磺胺 对 甲氧 嘧啶
( M )磺胺 二 甲氧嘧啶 (D 的灵敏度 为 1 gn , SD、 s M) 0n/a 肉眼判定检测 限为 2 gn , 品中 回收率 在 8 % ~9 ,%之 间; 测磺 0n/a 样 5 56 检 胺嘧啶 (D ) S Z 的灵敏度为 1 gn , 0n/ ̄ 肉眼判定 检测限为 4 gn 样品 中的回收率 在 4 .% ~6 .%之 间。用本 方法与 高效液 0n/ ̄, 48 09 相色谱法 ( Ⅲ ) 对来 自动物试 验的鸡 肉和鸡蛋样 品进行对 比检测 , 具有较 高的符合率 。结论 : 该方 法灵 敏度高 , 检测快 速、 准 确, 无需特 殊仪器设备 , 可作 为磺胺 类药物残 留的快速筛选方法 。 [ 关键词 ] 免疫 层析 ; 试纸条 ; 磺胺类药物 ; 肉; 鸡 鸡蛋
me o , o ny 1 n t c o l h a smiq a taie d tc o o a e a u to ufn mie , e s n i vt 0 n /  ̄, e r h t d i t k o l 5 m a c mp s e — u n i t ee t n frt c mo n fs l a d s t s i i 1 g n a d t — to i o i t v i r o h e t ys i s e
Ra d ee to pi d t cin o s lo mi e b i m u c r m a o r p i a s y n e g a d f uf na d s y m no h o t g a h c sa i gs n
兽药残留检测技术磺胺类
溶剂提取
溶剂提取时,应尽可能使组织中结合态的残留物溶解,并 且除去大部分的蛋白质。 一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯 甲烷、丙酮或混合溶剂等极性溶剂进行提取。(pH10),对鱼肉和动 物组织的提取,发现磺胺二甲氧嘧啶和奥美普林的提取率 很高。 另外,提取过程中加入无水硫酸钠可脱去组织样品中的水 分,有助于样品的充分提取。
固相萃取
由于甲氧苄啶常和其他磺胺药物同时使用,而它们具有不 同的pKa和溶剂亲和力,难以在给定的pH值和溶剂系统 中同时提取,宜采用固相萃取法(SPE)。 常用的SPE柱,如C18和C8、硅胶柱、离子交换柱、 Florisil柱和碱性氧化铝柱等。 该法操作较为简便、并对生物样品具有较高的“净化” 能力,可提高方法的提取回收率和精密度。亦可将几种小 柱串联应用,可获得更高的净化效果。 基质固相分散法目前只使用C18吸附剂,该方法简便、提 取率和净化能力均高,已应用于鱼肉、牛肉、猪肉和牛奶 样品的预处理。
一、概述
磺胺类(Sµ lfonamides)药物是兽医上较常用的一 类合成抗感染药物,具有抗病原体范围广、化学 性质稳定、使用方便、易于生产等优点。
磺胺药种类繁多,兽医上常用的有10余种(图) 。 磺胺药单独使用,病原体易产生耐药性,与抗菌增 效剂如TMP(甲氧苄啶)等联用,抗菌范围扩大,疗 效明显增强,用来治疗畜禽肠道感染、乳腺炎、 肺炎等疾病。 同时也被广泛的用作饲料添加剂,用来增肥 犊牛 和猪。
排泄
内服难吸收的磺胺药,主要由粪便排出; 内服易吸收的磺胺药主要通过肾脏排泄,通过肾小球滤过 或肾小管分泌到达肾小管腔内的药物,有一部分被肾小管 重吸收。重吸收少、排泄快的药物如磺胺异恶唑在尿中 浓度较高,适用于治疗泌尿道感染。主要由肾小管分泌, 重吸收多的药物在尿中浓度低,但在血中有效浓度维持时 间较长,多属长效如SMZ、SMM等。
食品中磺胺类药物残留检测方法研究进展
高 效 液 相 色 谱 法 是 分 析 磺 胺 类 药 物 残 留 的 国 际 公 认方 法, 具 有 选 择 性 强、 灵 敏 度 高、 检 出 限 低 等
优 点 ” 。
农业 部 2 0 0 2年 1 2 月 发 布 的《 动 物 性 食 品 中 兽 药 最 高残 留限量》 规 定 牛 奶 中磺 胺 类 药 物 的 最 高 残 留 限 量 为 0 . 1
—
品为 基 体 加 入 3 种 药 物 的标 准 溶 液 进 行 回收 试 验 , 测 得
回收 率 在 7 3 . 6 5 ~9 3 . 4 5 之 间。
MS 、 G C — MS / MS ) ; 酶联 免疫 吸附 ( E L I S A) 、 胶 体 金
免疫技术 ( I mmu n e c o l l o i d a l g o l d t e c h n i q u e ) 和毛细管 电
物 残 留检 测 方 法 发 展 的 前 景 进 行 了展 望 。 关键词 : 磺胺类 ; 分析方法 ; 残 留; 液质联 用
中 图分 类 号 : X 9 5 2
文献标识码 : A
文章编号 : 1 6 7 4 — 9 9 4 4 ( 2 0 1 3 ) 0 2 — 0 1 5 3 — 0 3
方 法 的测 定 下 限 ( S / N= 1 0 ) 为 0 . 0 4 mg / k g,以猪 肉样
目前 , 针 对 磺 胺 类 兽 药 残 留 的检 测 方 法 有 薄 层 色 谱 ( TL C ) 、 高效液 相色谱 ( HP L C ) 法、 液 质联 用 ( HP L C— MS 、 HP L C — MS / MS ) 、 气 相 色谱 ( G C ) 、 气质 联用 ( G C
超高压液相色谱-串联四极杆质谱法对牛奶中24种磺胺类药物残留的检测
超 高 压 液 相 色 谱 一串联 四极 杆 质 谱 法 对 牛 奶 中 2 4种 磺 胺 类 药 物 残 留 的检 测
佘永新 ,刘佳佳 ,王 静 永 ,刘 ,王荣艳 ,曹维强
( .中国农业科学 院农 业质 量标 准与检测技术研究所 ,北京 1 研 究所 ,西藏 拉萨 10 8 ;2 0 0 1 .西藏 自治区农牧科学 院兽 医畜牧 哈尔黑龙江 出入 境检 验检疫局 ,黑龙江
第2 7卷 第 l 2期
20 0 8年 l 2月
分 析 测 试 学报 F N IC S IX E A Junl f nt metl nls ) E X E H U B O(ora o s u na A a i I r ys
V0 . 7 No 1 12 . 2
1 1 ~l 7 33 31
Abs r t A o e t o a e n d v lp d f rt e r p d s pa ain a d d t r nain o 4 s l tac : n v lmeh d h sb e e e o e o h a i e r to n ee mi to f2 u -
S E Y n —i ,LU J -a ,WA G J g ,LU Y n 。 H o gx n I i j 。 ai N i I o g ,W A G R n —a A i i g, n N o gy n ,C O We— a q n
(.Ist eo Q at Sadrs n et g eho g r g —rdc ,C ieeA ae yo g clrl c ne 1 ntu f uly t ad adT sn cnl yf rpout hns cdm f r uua Si c, it i n i T o oA i s A i t e
猪肉中磺胺类药物残留检测操作要点
1 分 次 除 脂
所 以本次试 验按 方法 要求每 次加 入 5 l m 正丙醇 ,
将 其 蒸 至近 干 。样 品洗 脱液 是 1 l 0 Om %乙腈 , 7
标准方法 中样 品经 乙腈两次提取 ,然 后合并 含水量 大所需 旋转 蒸发 时间长 ,容易使热不稳定 提 取液 加 入 3 I正 己烷 除 脂 、离 心 、取 下 层 的药物降解 ,而且这步要求将液体全部蒸干,所 以 Or r l 要节约 时间保证 回收率 ,将 正丙醇 的加 入量降为 液 。在实 际操 作过 程 中利用分 液漏 斗作 为容器 ,
维普资讯
猪肉 中磺胺类药 物残留检 测操 作要点
刘
中图分类号 ¥ 5 .4 8 9 8 文献标 识码
凯
( 宁省兽 药饲料监察 所 ,辽 宁 辽
B
沈阳
1 0 1) 1 0 6
1 7 - 6 2 2 0 ) 2源自 2- 2 2 9 9 ( 80 - 0 10 6 0
文章编号
目前我 国磺胺类药物残 留检测对象 主要是猪 2 分 次 蒸 干 肉,使用的检测方法是 Y O 2 0 附录 E磺 52 0l 如果把两 次提 取液收集一起 在进行旋转蒸 发 胺类药物在动物可食 性组织 中残 留的高效液相色 时,由于提 取液过 多,在蒸 发时溶液沸腾极 易溅 谱检 测方法》 以下简称 方法 ) ( 。该检测 方法 用于 到 蒸发仪 的瓶颈 上造 成药 物损 失 ,降低 回收率 。 测 定动物 可食 性组织 中磺胺 间 甲氧 嘧啶 (MM 、 所 以在操 作这个步骤 时,用鸡心瓶收集 分液漏 斗 S ) 磺胺 二 甲基 嘧啶 (M2 、磺 胺 甲恶 唑 (M ) S ) S z 、磺 中的下层溶液后 ,收集 一次蒸发一 次 。尽量降低
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检测磺胺类药物残留,为食品加工提供更安全的保障
磺胺类药物是一种广谱抗菌药,临床上主要用于预防和治疗感染性疾病,加之其性质稳定,制
造不需粮食做原料、产量大、品种多、价格低、使用简便、供应充足等优点,兽医临床和畜牧养殖
业中作为饲料添加剂或动物疾病治疗药物广泛应用。但是磺胺药会引起人过敏性反应,且可能有致
癌性,随着社会的发展,磺胺类药物的不合理使用,使其在动物性食品中残留引起生态环境污染和
人类健康危害的潜在威胁已备受关注,成为人类亟待解决的问题之一,而各类检测方法也随之应运
而生。
磺胺类药物虽然应用广泛,但与此同时,这类药物显著的毒副作用也引起了人们的广泛关注。
例如:影响泌尿系统功能,引起结晶尿,血尿等反应及致癌性。磺胺类药物吸收后分布于全身各组
织中,以血、肝、肾含量最高。且与血浆蛋白结合率高,所以在体内维持时间长。还能透入脑膜积
液和其他积液,以及通过胎盘进入胎循环,对孕妇及婴儿及其不利,还易在尿中析出结晶,导致结
石而损害肾脏.
检测磺胺类药物,为食品加工提供更安全的保障。
禽类加工厂通过测定一些特定的化合物从而准确地检测磺胺类抗生素来提高质量控制。三方圆
检测作为世界领先的检测品制造商,做了大量检测,证明我们投资研发的特异性抗体不同于其他常
规抗体,能确保结果假阳性率低于5%。
磺胺类药物作为抗菌药在全球食品生产中使用来治疗/预防感染,然而随着人们的消费,对磺胺
类药物的抗药性越来越强,其对人体的健康产生巨大的风险。因此,许多国家已经禁止或限制在动
物肉类生产使用磺胺类药物,并且设定最大残留限量(MRLs)。