兽药残留检测技术磺胺类
动物性食品中磺胺类兽药残留及检测方法概述
兽药残留检测技术-磺胺类概述
3、气相色谱法
气相色谱法(GC)具有高的灵敏度和选择性,但由于磺胺类 药物难挥发, 测定时需要衍生化。
一般用重氮甲烷甲基化,或甲基化后再用N-甲基-N-三甲基 硅烷基三氟乙酰胺(MSTFA)进行硅烷化或N-甲基双(三氟 乙酰胺)(MBTFA)乙酰化,以增加挥发性,改善色谱特性(热 稳定性、降低极性),氢火焰离子化检测器测定。
除了甲基化外,也可利用水解法将磺胺类药物水解成相应 的挥发性胺类,继之以GC法测定,
也可与适宜的卤化试剂反应,生成相应的衍生物,如三氟乙 酰化或七氟丁酰化衍生物等,以电子捕获检测器测定。
GC分离柱
磺胺类药物的分离柱可用填充柱和石英毛细管 柱,通常毛细管柱(DB-5)分离效果更好。
样品确证分析时,一般用质谱检测器测定,离子源 采用化学电离和电子轰击接口。
(R′=H),两性化合物,可溶于酸或碱溶液。
其化学性质可从四部分结构上表现出来, 即:磺酰胺基(— SO2NHR)、 芳伯氨基(— NH2)、芳环、N1及N4上的取代基。
磺酰胺基
化学性质
本类药物水溶性较低,易溶于极性有机溶剂如乙醇、丙酮、 乙腈、氯仿和二氯甲烷,难溶于非极性有机溶剂。
由于磺胺药具有酸碱两性,通过调节溶液的pH值(pH7~9), 可以使磺胺药呈不同状态,即中性分子还是离子分子,从 而改变水相和有机相的分配系数。
常用的SPE柱,如C18和C8、硅胶柱、离子交换柱、 Florisil柱和碱性氧化铝柱等。
该法操作较为简便、并对生物样品具有较高的“净化” 能力,可提高方法的提取回收率和精密度。亦可将几种小 柱串联应用,可获得更高的净化效果。
磺胺类药物兽药残留检测方法概述.
作者简介:戚凤霞(1965-,高级兽医师,从事动物卫生监督工作。
收稿日期:
2009-07-05
磺胺类药物(Sulfonamides ,SAs属于化学合成抗菌药,均含有氨苯磺酰胺的基本结构(图1,在医学和多种动物的许多感染性疾病防治中具有重要的地位。磺胺类药物具有抗菌谱广、可以口服或注射、吸收迅速,有的能通过血脑屏障渗入脑脊液、较为稳定、不易变质等优点。但是目前磺胺类抗生素的残留在食品抗生素残留检测中经常发现,因其具有广谱、稳定、经济、易用以及联合抗菌增效剂效果可提高数十倍的特点,农业生产中常以亚治疗浓度的药物做为饲料添加剂来预防疾病的发生,提高饲料的转化率和促进动物生长,其中常用的就有十几种。但不合理的使用很容易造成耐药菌增加,而且动物性食品中残留的药物可能对人们的健康造成潜在的危害,如磺胺二甲嘧啶是动物性食品中主要的残留药物,可诱发癌症[1-2]磺胺类药物在体内乙酰化率高,在体内主要经肝脏代谢为乙酰化磺胺,后者无抗菌活力却保持其毒性作用,在泌尿道析出结晶,损害肾脏。出现结晶尿、血尿、管型尿、尿痛以至尿闭等症状。还可破坏人
理化法检测结果准确,分辨率高,可以做单个药物的残留检测,但是理化设备往往价格昂贵,成本高,并且需要专门的技术人员,不适合现场快速检测。
免疫法目前越来越受到重视,因其检测限低,单个样品检测成本低(如ELISA法,并且适合现场快速检测,尤其是免疫层析法,检测速度快,灵敏度高,样品分析时间短,而且成本低,无需大型仪器,人员要求低,适用于现场检测。
gaudin等16建立了测定牛奶中sm2残留的生物传感器方法将sm2与经改良的甲基葡聚糖表面共价连接其多克隆抗体以不同流速经过检测限可达170ngg17建立了单克隆抗体21c7为基础的检测鸡血浆中8种磺胺类药物的生物传感器免疫方法血浆稀释10倍的情况下最低检测限70200ngml免疫法免疫法主要有放射性免疫法酶联免疫吸附法生物传感器法胶体金免疫层41放射性免疫法ria放射性免疫法是最早建立的经典的免疫分析方法此法样处理提取方法简便可以检测磺胺类总残留量已经为欧盟和美国fda认可并且应用于初筛分析18o但ria有缺陷1放射性核素半衰期短
动物性食品中磺胺类兽药残留及检测方法概述(可编辑)
动物性食品中磺胺类兽药残留及检测方法概述科学论坛过程中要注意留设透气排水穴。
但第次浇水应方法对香樟进行保护,即对香樟主干、分枝包裹代幼虫在月底至月中旬为害。
第代幼虫尚透彻,以后视天气、土壤质地而谨慎浇水,做到层外加物第层草绳,第层麻布,第层稻未结成网巢时用 %晶体敌百虫倍“不干不浇,既浇即透”的原则,同时要防止地草。
“层防冻保护”另一个含义指土球部位采液喷杀,如幼虫已结成网巢,可人工摘除烧掉。
面水系过多滴入根部。
另一方面,要防止下雨过用厚的疏松山泥、塑料薄膜、再覆草包的参考文献:后树穴内积水,即要保持每天检查排水、透气设办法保温。
根据以往经验,树干不宜用塑料薄膜秦霞:香樟的功用及主要栽培技术:中国施,发现有堵塞或积水时要及时清除,保证树体保温。
因为冬季雨雪天气较多,一旦有水进入塑林副特产;年期根部不积水,不干旱。
料薄膜,容易积水,常常诱发树干发黑并溃烂,吴会乐:香樟育苗造林技术 :中国林副特而稻草的析水性好,不存在积水的问题。
四、整形修剪产;年期栽植前应对其根部进行整理,剪掉断根、枯六、虫害防治夏义忠::大规格香樟移植及管护技术措施根、烂根。
短截无细根的主根;还应对树冠进行卷叶蛾年发生数代,幼虫蛀食嫩梢,被害:国土绿化;年期修剪,一般要剪掉全部枝叶的 / / ,使树茁枯死。
可用 %乐果一倍液喷杀幼虫,吴松芹:朱旭东::香樟大苗快速生长栽培技冠的蒸腾作用面积大大减少。
带土球的菌木不用当幼虫大量化蛹期间结合抚育进行林地除草培术:苏南科技开发;年期土,杀死虫蛹。
樟天牛主要为害主枝和侧枝,采进行根部修剪,只对树冠修剪即可。
修剪时。
可李振华:温强;戴小英:江香梅::樟树资源利用连枝带叶剪掉树冠的 / ~ / ,以大大减少叶用人工捕杀,或由排泄孔注入敌敌畏药剂。
樟叶现状与展望;江西林业科技;年期面积的办法来降低全树的水分损耗,但应保持基蜂幼虫取食樟叶当年抽的嫩梢,严重影响樟树的李利敏:吴良欢:马国瑞::樟树失绿黄化症的本的树形,以加快成景速度。
动物源食品中磺胺类药物残留检测方法
动物源食品中磺胺类药物残留检测方法摘要众所周知，磺胺类药物不仅价格实惠，而且能够有效对抗很多种微生物、致病因子或疾病，因此深受兽医青睐，与此同时，食品安全问题也越来越受广大群众的关注。
人们想要对食品样品复杂体系的分离分析要求更上一层楼，就需要开发能提高检测效率、准确可靠、灵敏度高的检测分析方法。
本文重点论述了分析方法和几种常见的磺胺类药物残留的检测方法，总结了食品中磺胺类药物残留的前处理方法和检测方法，为食品中磺胺类药物的残留检测提供有力的技术支持和文献参考。
关键词：动物源食品；磺胺类药物；药物残留；检测技术1分析方法1.1处理样品的方法液相萃取法是样品处理方法中最经典的。
由于磺胺类药物在非极性有机溶剂中不易溶解，而在极性有机溶剂中易溶解，通常工作人员采用CH2Cl2、C3H6O、甲基氰以及醋酸乙酯等作为萃取液。
由于某些有机溶剂能够让样品蛋白丧失活性，因此，大力发展固相萃取法势在必行，有利于更快速、顺利地萃取与蛋白结合的磺胺类药物残留。
固相萃取法优势很多，比如可操作性强、装置简单、适用范围较为广泛等。
其中阳离子交换树脂以及C18等是最常见固相萃取装置。
基质固体分散技术和超过滤方法是近年来比较流行的萃取方法。
超过滤法能够有效解决共萃取干扰、乳胶产生等很多液相萃取技术问题，同时简化检测步骤，提升检测结果的准确性，减少分析费用。
MSPD的制备工艺为：将样品与C18柱填料混合，装柱，之后利用正己烷清洗柱子，及时去掉脂质化合物，最后利用二氯甲烷清理掉被吸附的组分，保留高极性杂质。
相对于传统样品处理方法，MSPD具有如下优势：样品处理方法效率较高，而且操作简单；有效抑制和消除了乳化作用；溶剂消耗较少。
此外，超临界流体萃取（SFE）也可用于从样品中提取磺胺类药物。
1.2样品净化方法在进行色谱分析之前，需要净化和浓缩样品，以防止样品基质中的复杂成分严重破坏色谱仪器和干扰目标分析物。
其中薄层色谱、柱色谱以及固相萃取等都是常见方法。
教学案例库——兽药残留检测
教学案例库——兽药残留检测教学案例一磺胺类药物代谢产物残留的检测技术教学案例名称：猪肝中磺胺类药物代谢产物残留的检测教学案例描述：该案例主要讲解水产品中磺胺类药物代谢产物残留的检测方法，适用于进行该项目检测的食品企业，以及进行兽药残留检测项目教学的高职学校。
主要内容：1）猪肝中磺胺类药物代谢产物残留的检测意义2）猪肝中磺胺类药物代谢产物残留的检测方法3）高效液相色谱的使用4）检测报告的出具教学目标：1、知识目标1）熟悉磺胺类药物代谢产物的检测方法2）熟悉高效液相色谱的原理3）磺胺类药物代谢产物检测报告构成4）内标法及外标法定量2、能力目标1）正确进行溶液的配制和稀释2）熟练进行样品的制备3）熟练使用高效液相4）标准曲线的绘制5）独立完成磺胺类药物代谢产物的检测工作6）正确书写检测报告适用对象：高职学生知识准备：（一）磺胺类药物代谢产物的危害磺胺类药物是兽医临床上使用最广的一类化学合成抗菌药,主要用于细菌感染性疾病和某些原虫病的预防和治疗。
但使用不合理很容易造成组织中的残留和蓄积，许多国家和组织规定了其最高残留限量(MRL)为0.1μg/g,甚至不得检出。
在摄食残留有磺胺类药物的肉品是一个长期低剂量吸收磺胺类药物的过程，而细菌对磺胺药较易产生抗药性，当剂量、疗程不足时更易发生。
其中以葡萄球菌最易产生，其次为痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎球菌和链球菌，同时各种磺胺药间有交叉抗药性。
人体内蓄积到一定程度时，有严重的毒副作用，会破坏人的正常免疫机能和造血系统。
损害人体泌尿系统，容易在肾小管内析出结晶，损伤肾小管引起结晶尿、血尿、蛋白尿，重者可发生尿少、尿闭甚至尿毒症。
多数磺胺类药抗菌谱广，易抑制肠道正常寄生细菌的生长，造成某些维生素的缺乏。
此外，磺胺药还可抑制骨髓的造血功能，引起溶血性贫血和再生障碍性贫血等严重反应，还影响中枢神经系统，引起头晕、头痛、全身乏力等，并可引起恶心、呕吐等消化道症状，磺胺药也是较多引起药物过敏的药，严重者引起甚至可引起剥脱性皮炎。
畜禽肉中磺胺类药物残留的检验方法
畜禽肉中磺胺类药物残留的检验方法食品安全检验手册108本方法可以检验畜禽肉、鸡蛋中磺胺嘧啶（SD），磺胺间甲氧嘧啶（SMM），磺胺二甲氧嘧啶（SDM），磺胺二甲嘧啶（SM2），磺胺甲噁唑（SMZ）和磺胺喹噁啉（SQ）的残留。
1. 原理样品中磺胺类药物经乙腈+三氯甲烷（10V+1V）提取后，又经过液—液分配转入水层进行净化后，用具紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量。
2. 试剂和材料以下所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯试剂，水为重蒸水。
(1) 乙腈（优级纯，作流动相用）。
(2) 甲醇（优级纯）。
(3) 正己烷。
(4) 三氯甲烷。
(5) 乙腈+三氯甲烷（10V+1V）。
(6) 乙腈+三氯甲烷（2V+1V）。
(7) 硫酸钠。
(8) 硫酸钠溶液：2%水溶液（m/V）。
(9) 标准溶液①标准储备液：准确称取磺胺嘧啶（SD），磺胺间甲氧嘧啶（SMM），磺胺二甲氧嘧啶（SDM），磺胺二甲嘧啶（SM2），磺胺甲噁唑（SMZ）和磺胺喹噁啉（SQ）各10.0mg，分别用乙腈溶解，并用乙腈定容至10.0mL。
摇匀。
即得各1.0mg/mL的标准溶液。
②混合标准工作液：分别吸取上述溶液各1.0mL于100mL容量瓶中，并用流动相稀释，摇匀。
然后吸取此液0，0.05，0.10，0.25，0.50，1.0mL各放入10mL容量瓶中，各加流动相至刻度，摇匀，即得含6种磺胺的标准系列溶液。
3. 仪器和设备(1) 高效液相色谱仪，具紫外检测器。
(2) 超声波发生器。
(3) 涡流混匀器。
(4) 离心机。
(5) 旋转蒸发仪。
4. 测定步骤(1)试样处理：称取5.0g绞碎后的试样，置于塑料管中，加入约1g硫酸钠，乙腈+三氯甲烷（10V+1V）20mL，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤取滤液于蒸发瓶中，残渣再加乙腈+三氯甲烷（10V+1V）20mL，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤合并滤液于蒸发瓶中，于<40℃水浴旋转蒸发仪上蒸发至干（如果量大，可分两次蒸）。
鸡蛋兽药残留检测项目
鸡蛋兽药残留检测项目
鸡蛋兽药残留检测项目主要包括以下内容：
1. 鸡蛋中磺胺类药物的检测：磺胺类药物是一类广泛应用于牲畜、家禽养殖业中的抗生素，在排泄物和鸡蛋中容易留下残留。
这类药物对人体有一定的危害，因此需要对鸡蛋中的磺胺类药物进行检测。
2. 鸡蛋中喹诺酮类药物的检测：喹诺酮类药物是一种广泛使用于畜禽养殖中的抗生素，其在鸡蛋中容易留下残留。
这类药物对人体有一定的危害，因此需要对鸡蛋中的喹诺酮类药物进行检测。
3. 鸡蛋中氯霉素的检测：氯霉素是一种广泛使用于畜禽养殖中的抗生素，其在鸡蛋中也容易留下残留。
这类药物对人体有很大危害，因此需要对鸡蛋中的氯霉素进行检测。
4. 鸡蛋中瘦肉精的检测：瘦肉精是一种药用增肥剂，其在鸡蛋中容易留下残留。
这类药物对人体有一定的危害，因此需要对鸡蛋中的瘦肉精进行检测。
5. 鸡蛋中红霉素的检测：红霉素是一种广泛使用于家禽养殖中的抗生素，其在鸡蛋中也容易留下残留。
这类药物对人体有一定的危害，因此需要对鸡蛋中的红霉素进行检测。
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溶剂提取
溶剂提取时,应尽可能使组织中结合态的残留物溶解,并 且除去大部分的蛋白质。 一般可采用酸性水溶液、乙腈、氯仿、乙酸乙酯、二氯 甲烷、丙酮或混合溶剂等极性溶剂进行提取。(pH10),对鱼肉和动 物组织的提取,发现磺胺二甲氧嘧啶和奥美普林的提取率 很高。 另外,提取过程中加入无水硫酸钠可脱去组织样品中的水 分,有助于样品的充分提取。
固相萃取
由于甲氧苄啶常和其他磺胺药物同时使用,而它们具有不 同的pKa和溶剂亲和力,难以在给定的pH值和溶剂系统 中同时提取,宜采用固相萃取法(SPE)。 常用的SPE柱,如C18和C8、硅胶柱、离子交换柱、 Florisil柱和碱性氧化铝柱等。 该法操作较为简便、并对生物样品具有较高的“净化” 能力,可提高方法的提取回收率和精密度。亦可将几种小 柱串联应用,可获得更高的净化效果。 基质固相分散法目前只使用C18吸附剂,该方法简便、提 取率和净化能力均高,已应用于鱼肉、牛肉、猪肉和牛奶 样品的预处理。
一、概述
磺胺类(Sµ lfonamides)药物是兽医上较常用的一 类合成抗感染药物,具有抗病原体范围广、化学 性质稳定、使用方便、易于生产等优点。
磺胺药种类繁多,兽医上常用的有10余种(图) 。 磺胺药单独使用,病原体易产生耐药性,与抗菌增 效剂如TMP(甲氧苄啶)等联用,抗菌范围扩大,疗 效明显增强,用来治疗畜禽肠道感染、乳腺炎、 肺炎等疾病。 同时也被广泛的用作饲料添加剂,用来增肥 犊牛 和猪。
排泄
内服难吸收的磺胺药,主要由粪便排出; 内服易吸收的磺胺药主要通过肾脏排泄,通过肾小球滤过 或肾小管分泌到达肾小管腔内的药物,有一部分被肾小管 重吸收。重吸收少、排泄快的药物如磺胺异恶唑在尿中 浓度较高,适用于治疗泌尿道感染。主要由肾小管分泌, 重吸收多的药物在尿中浓度低,但在血中有效浓度维持时 间较长,多属长效如SMZ、SMM等。
吸收后存在形式
磺胺药吸收后,一部分在血浆中保持游离状态(游 离型),一部分与血浆蛋白相结合(结合型),另一部 分在肝脏中高度乙酰化变成乙酰磺胺。
游离型具抗菌作用,且能透过毛细血管进入各种 体液和组织。 结合型无抗菌活性,也不能透入体液或组织中,但 结合较疏松,能不断分解出游离型磺胺。 乙酰化是磺胺的主要代谢产物,无抗菌活性。
磺胺药尚可经肠液、胆汁分泌排出,也可由乳汁排泄,但 量较少。
常见磺胺药
磺胺嘧啶 三甲氧苄啶 磺胺二甲嘧啶 磺胺二甲氧嘧啶 磺胺喹恶啉 磺胺噻唑 巴喹普林
二、样品处理
常用的磺胺类药物,除少数外,一般具有以下的基本结构:
磺酰氨基的酸性表现在 N1上的活泼氢原子,其酸 性的大小取决于N1上的 取代基R。R的吸电性 越大,则其酸性越强。
体内分布、代谢
磺胺药在体内分布相当广泛。各种组织和体液均能到达。 以血液中含量最高,肝、肾次之,胸水、腹水、滑膜液、房 水中浓度也较高,并能透过胎盘进入胎儿体内。 磺胺药在神经、肌肉及脂肪组织中的含量则较低。 磺胺药主要在肝脏代谢,代谢方式有乙酰化、羟基化、结 合等,其中以乙酰化为主。 磺胺药乙酰化后失去抗菌作用,且在尿中的溶解度降低,易 在肾小管析出结晶,造成对泌尿道的损害。应注意同服碳 酸氢钠,并增加饮水,可减少或避免其对泌尿道的损害。 部分磺胺药及代谢产物在肝内成为水溶性的葡萄糖醛酸结 合物而失去活性。
在线透析
采取在线透析、富集的方法,可测定动物源食品 (肌肉、牛奶和蛋)中的13种磺胺类药物：
利用纤维素膜选择性渗过分析物,到达预富集柱 (C18、XAD-2或XAD-4),干扰杂质用淋洗剂洗去, 浓缩后的分析物被洗脱后,进入分析柱分离。
2、净化
初提取液中含大量的内源性干扰杂质,在痕量分析时会干 扰组分的测定,因此还需要净化处理。 净化方法有液-液萃取、固相萃取、基质固相分散、在 线痕量富集、液相色谱、在线透析和超临界流体萃取等。
有时为了获得高的净化效果,几种方法相结合应用。
液-液萃取
液-液萃取尽管操作烦琐、耗费溶剂,但在所有净化方法 中应用最广。 通过调节样液的pH值,使磺胺类药物有选择性地在有机 相与水相之间进行分配。 例如,有机相提取液中的磺胺类药物可以被强酸溶液或碱 性溶液抽提,若将水相提取液调节pH至5.1~5.6,可用二氯 甲烷或乙酸乙酯进行再抽提。 离子对提取法亦有应用,例如,水相提取液调节pH至 10~11,加入四丁基铵离子对试剂,形成磺胺类离子对,可以 被二氯甲烷提取。 用正己烷或乙醚进行液-液萃取,可以脱脂肪。
1、提取
液体样品(如牛奶)可用水稀释过滤后,荧光直接检测,亦可 用水性缓冲液或氯化钠溶液稀释,再进行净化处理。 蜂蜜样品可用水或水性缓冲液稀释。 组织样品(如肌肉、肾脏、肝脏)的预处理相对复杂些,一 般采取均质、液-液萃取或固相萃取净化等步骤。 液-液萃取操作烦琐,而蛋白沉淀后直接进样,虽操作简便、 并具有较高的回收率,但对色谱柱的损害较为严重。
柱切换技术
在线痕量富集技术可分离/净化牛奶样品中9种磺胺 类药物： 磺胺类药物在预富集柱RP-C18(10µ m)中被保留浓缩, 干扰杂质用淋洗剂洗去后,预柱中的磺胺类药物再用 洗脱液洗脱,进入分析柱中分离。 有研究者将TSK凝胶渗透柱和PLRP-S预富集柱串 联使用,用于净化猪组织中的磺胺二甲氧嘧啶、磺胺 甲恶唑和甲氧苄啶。
(R′=H),两性化合物,可溶于酸或碱溶液。
其化学性质可从四部分结构上表现出来, 即:磺酰胺基(— SO2NHR)、 芳伯氨基(— NH2)、芳环、N1及N4上的取代基。
磺酰胺基
化学性质
本类药物水溶性较低,易溶于极性有机溶剂如乙醇、丙酮、 乙腈、氯仿和二氯甲烷,难溶于非极性有机溶剂。 由于磺胺药具有酸碱两性,通过调节溶液的pH值(pH7~9), 可以使磺胺药呈不同状态,即中性分子还是离子分子,从 而改变水相和有机相的分配系数。 例如,磺胺的中性分子,在二氯甲烷等有机溶剂中分配系 数大;离子态分子,则水性溶液中分配系数大。 生物样品通过多次液-液萃取,可达到净化的目的。