10实验10-可溶性总糖的测定(蒽酮法)
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)
实验8-可溶性总糖的测定(蒽酮法)实验目的：2. 了解可溶性总糖在不同食品中的含量。
实验原理：蒽酮法测定可溶性总糖的原理是：原理是将待测样品中的可溶性总糖利用酸性条件水解成葡萄糖，再将葡萄糖与蒽酮在酸性条件下反应生成红色产物，在545nm处比色，通过测量产物的吸光度计算出样品中可溶性总糖的含量。
实验步骤：1. 预处理样品称取25g待测样品，加入100mL蒸馏水，加热煮沸5min，冷却至室温，定容到500mL。
2. 酸水解取10mL待测样品，加热至沸腾，加入10mL 0.6mol/L HCl，再加入2mL 66% L-酒精溶液，沸腾10分钟，冷却至室温。
3. 测定葡萄糖含量取上述溶液10mL，加入20mL 蒸馏水，加入0.5g硫代硫酸钠，加1mL4%酚酞酸指示剂，用0.5mol/L NaOH标准溶液滴定至颜色从紫红色变成淡黄色，观察指示剂颜色变化，记下滴定所需的NaOH体积V1。
4. 去色取剩余的水解溶液(约50mL)，加45mL蒸馏水，加入0.5g氯化钠，用3.48×10^-3mol/L 二硫代磺酸钠溶液滴定至橙色转变为淡黄色(V2)。
5. 比色取2mL去色溶液，加0.50mL 1%蒽酮溶液，加0.50mL 4%氢氧化钠溶液，加入烧杯中，隔水加热沸腾5分钟，冷却后用0.5mol/L HCl标准溶液掉定至颜色由深红色变成粉色(V3)。
6. 计算结果计算样品中可溶性总糖的含量(y)：y=(V1-V2)×1000/6.9×V3 (单位：g/100g或mg/L)实验提示：1. 为了减小误差，应使用称量精度较高的电子天平。
2. 滴定时应慢慢加入标准溶液，用玻璃棒搅拌均匀，直到指示剂颜色变化停止。
3. 比色前需要将产物稳定，此步骤是较关键的实验步骤之一，需要加热沸腾不超过5分钟，并且不要在加热沸腾时将实验管口对准自己。
实验结果：利用蒽酮法测定了不同食品中的可溶性总糖的含量，样品1(西瓜)为0.58g/100g，样品2(草莓)为0.67g/100g，样品3(苹果)为0.49g/100g，样品4(香蕉)为0.59g/100g。
蒽酮法测还原糖
总糖的含量的测定（蒽酮法）一、实验目的掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。
二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。
蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620 nm 处有最大吸收。
蒽酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。
当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈红色。
对于以上特定的糖类反应较稳定。
三、实验器材1.吸管2.试管3.分光光度计4.水浴锅5.电炉6.电子分析天平四、实验试剂1．蒽酮试剂：取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中，当时配制使用。
2．标准葡萄糖溶液（0.1 mg/ml）：100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3． 6 mol/l HCl溶液。
4．10 % NaOH溶液：称取10 g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100 ml。
五、实验操作1.制作标准曲线取干净试管7支，按下表进行操作。
表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作2.样品的处理（见实验四）取上述实验四的水解液，冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性，然后用蒸馏水定容至100 ml，过滤，取滤液10 ml，用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液，用于糖含量的测定。
测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量（同标准曲线）。
样品中糖含量的计算：w —糖的质量分数（%）；C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml)； V —样品稀释后的体积（ml ）；m —样品的质量（mg ）。
ｗ＝ CVｍ ×100%。
植物水溶性总糖的提取和含量测定蒽酮比色法
实验六植物水溶性总糖的提取和含量测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
3.学习分光光度计的使用。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较适合。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜高粱，甘草四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。
3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。
4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。
10实验10-可溶性总糖的测定(蒽酮法)
３、测定 吸取１ml提取液于大试管中，加入5.0ml 蒽酮试剂，用上述同样的方法。以0号管调零， 波长625nm下记录吸光度，在标准曲线上查出 葡萄糖的含量（μg）。
五、结果处理
植物样品含糖量（％）＝查表所得糖含量（μg） ×稀释倍数／样品重（g）×106×100
含糖总量一般为：2.1—20%
1、植物样品中可溶性糖的提取
将小麦研磨微碎，准确称取１克，放入10ml 离心管中，管内加入4ml80%乙醇，在80度水浴 中不断搅拌30分钟，离心（3000转、15分钟）， 收集上清液，其残渣加2ml80%乙醇重复提取2 次，合并上清液，80%乙醇定容至10ml ，过滤 后待测。
四、操作步骤
2、葡萄糖标准曲线的制作 取７支大试管，按下表数据配制一 系列不同浓度的葡萄糖溶液：
管号
葡萄糖 标准液 （ml）
80%乙 醇体积 （ml） 葡萄糖 含量 （μg）
0
0
1
0.1
20.230.440.6
5
0.8
6
1.0
1
0.9
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
40
60
80
100
在每支试管中立即加入蒽酮试剂5.0ml， 混匀，盖上塞子，沸水浴中，准确煮沸10分钟 取出，用流水冷却，室温放置10分钟，在 625nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐 标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。
三、仪器、试剂和材料
１、仪器 分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架；漏斗； 容量瓶；试管；水浴锅 ２、试剂 葡萄糖标准液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的D-葡萄 糖50 mg，用80%乙醇配制成500 mL 溶液，即得每毫升 含糖为100μg的标准液；浓硫酸； 蒽酮试剂：100 mg 经过纯化的蒽酮溶于100 mL 硫酸溶 液（76 mL 相对密度1.84的浓硫酸加24 mL水），贮藏在 棕色瓶中。 ３、材料：小麦
总糖的测定蒽酮比色方法
总糖测定——蒽酮比色法一、原理：单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与蒽酮缩合成蓝绿色的化合物，当含糖量在20～200mg/L范围内时，其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色定量。
二、试剂：1、10～100ppm葡萄糖系列标准溶液：称取1.0000g葡萄糖，用水定容至1000ml，从中吸取1、2、4、6、8、10ml分别移入100ml容量瓶中，用水定容，即得浓度为10、20、40、60、80、100ppm（ug/ml）葡萄糖系列标准溶液。
2、0.1%蒽酮溶液：称取0.1g蒽酮，溶于100ml72%硫酸中，贮存于棕色瓶中，于0～4℃下存放。
3、72%硫酸溶液。
三、测定方法：（一）样品处理：称取适量样品，用100ml水转移至250ml容量瓶，慢慢加入5ml乙酸锌和5ml亚铁氰化钾，沸水浴5～10min，定容，静置至上清，过滤。
根据估计含糖量，去滤液进行稀释，使糖含量在20～80mg/L范围内。
（二）测定吸取系列标准溶液、样品溶液（含糖20～80ppm）、蒸馏水（空白）各2ml，分别加入具塞比色管中，沿管壁各加入蒽酮试剂10ml，立即摇匀，放入沸水浴中准确加热10min，取出，迅速冷却至室温，在暗处放置10min，用1cm比色杯，以零管调仪器零点，在620nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
根据样品溶液的吸光度查标准曲线，得糖含量。
四、结果计算：总糖（以葡萄糖计，%）=c×稀释倍数×10-4式中：c：从标准曲线查得的糖浓度，ppm（ug/ml）；10-4：将ppm换算为%的系数五、说明与讨论1、该法是微量法，适合于含微量碳水化合物的样品，具有灵敏度高，试剂用量少等优点。
2、该法按操作的不同可分为几种，主要差别于蒽酮试剂中硫酸的浓度（66～95%），取样量（1～5ml）、蒽酮试剂用量（5～20ml）、沸水浴中反应时间（6～15min）和显色时间（10～30min）。
这几个操作条件之间是有联系的，不能随意改变其中任何一个，否则将影响分析结果。
实验五 可溶性总糖的测定
管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖 标准液 （ml）
蒸馏水 （ml） 葡萄糖 含量 （μ g）
0
1 0
0.1
0.9 10
0.2
0.8 20
0.3
0.7 30
0.4
0.6 40
0.6
0.4 60ຫໍສະໝຸດ 0.80.2 80
在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0ml， 加完后一起浸于沸水浴中，准确煮沸10分钟 取出，用流水冷却，室温放置10分钟，在 620nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横 坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。
一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量 的原理和方法。
二、原理
强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟 甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物， 呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大吸收。在 10－100μ g范围内其颜色的深浅与可溶性糖含 量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３0μ g 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。 一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料
１、仪器 分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架； 漏斗；容量瓶；试管；水浴锅 ２、试剂 葡萄糖标准液；浓硫酸； 蒽酮试剂：0.2g蒽酮溶于100mL浓硫酸中当日配 制使用。 ３、材料 小麦
四、操作步骤
１、葡萄糖标准曲线的制作 取７支大试管，按下表数据配制一 系列不同浓度的葡萄糖溶液：
五、结果处理
植物样品含糖量（％）＝查表所得糖含量（μ g） ×稀释倍数／样品重（g）×106×100
２、植物样品中可溶性糖的提取 将小麦剪碎至２mm以下，准确称取１克， 放入50三角瓶中，加沸水25ml，在水浴中加 盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集在 50ml容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液２ ml置另一50ml容量瓶中，以蒸馏水稀释定容 不，摇匀测定。
实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法
实验十二胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般认为，血糖是指血液中的葡萄糖。
正常人空腹血糖浓度为4.4～6.7mmol/L（80～120mg/100ml）。
血糖是糖在体内的运输形式。
全身各组织都从血液中摄取葡萄糖以氧化供能，特别是脑、肾、红细胞、视网膜等组织合成糖原能力极低，几乎没有糖原贮存，必须不断由血液供应葡萄糖。
当血糖下降到一定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从而影响它们的功能。
所以维持血糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。
血糖浓度的调节血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在一整套高效率的调节机制，精细地控制着血糖的来源与去路，使之达到动态平衡。
神经系统的调节作用神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活性来实现。
神经系统的调节最终通过细胞水平的调节来达到目的。
下丘脑一方面通过内脏神经作用于肾上腺髓质，刺激肾上腺素的分泌；另一方面也作用于胰岛α-细胞，使其分泌胰高血糖素；同时还可以直接作用于肝。
三方面共同作用的结果是使肝细胞的磷酸化酶活化，使糖原分解加速；糖异生关键酶的活性增加，糖异生作用增加，从而使血糖浓度升高。
下丘脑还可通过兴奋迷走神经，使胰腺β-细胞分泌胰岛素，同时还可直接作用于肝，使肝细胞内糖原合成酶活化，促进肝糖原的合成；此外还抑制糖异生途径，促进糖的氧化和转化，总体上使血糖的去路增加，来源减少，最终达到使血糖浓度降低的目的。
激素使血糖浓度降低的激素 :胰岛素使血糖浓度升高的激素:胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。
在激素发挥调节血糖浓度的作用中，最重要的是胰岛素和胰高血糖素。
肾上腺素在应激时发挥作用，而肾上腺皮质激素、生长激素、甲状腺素等都可影响血糖水平，但在生理性调节中仅居次要地位。
实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法
实验四蛋白质含量的测定
——考马斯亮蓝法（Brodford法）
原理
染料考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后引起染料最大吸收波长的改变，从465nm变为595nm，光吸收增加，蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了测定蛋白质的灵敏度（1ug）
实验步骤
1.求标准曲线方程：按下表配置，操作。
管号BSA
（100μg／mL）
H2O
（mL）
考马斯亮蓝
G-250（mL）
Pr.含量操作
1 2 3 4 5 6
0.1
0.2
0.4
0.8
1.0
1.0
0.9
0.8
0.6
0.2
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
0 室
10 温
20 放
40 置
80 五
100 min
2. 样品pr.含量的测定
吸取小白菜提取液0.5mL，加入蒸馏水0.5mL（三次重复）；吸取血清（稀释800倍）1.0mL （三次重复），向以上各管加入考马斯亮蓝G-250 5.0mL，室温放置5分钟，测A595的值
管号小白菜
T 或 A 管号血清
T 或 A
1 2 3 1 2 3
☆小白菜用mg／g，血清用mg／mL。
要求r≥0.99
1。
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一、目的
掌握蒽酮法测定可溶性糖含量 的原理和方法。
二、原理
强酸可使糖类脱水成糖醛，生成的糖醛或羟 甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糖醛的衍生物， 呈蓝绿色，该物质在625nm处有最大吸收。在10 －100μg范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量 成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在３ 0μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖 之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比 较合适。
三、仪器、试剂和材料
１、仪器 分光光度计；电子天平；三角瓶；大管；试管架；漏斗； 容量瓶；试管；水浴锅 ２、试剂 葡萄糖标准液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的D-葡萄 糖50 mg，用80%乙醇配制成500 mL 溶液，即得每毫升 含糖为100μg的标准液；浓硫酸； 蒽酮试剂：100 mg 经过纯化的蒽酮溶于100 mL 硫酸溶 液（76 mL 相对密度1.84的浓硫酸加24 mL水），贮藏在 棕色瓶中。 ３、材料：小麦
３、测定 吸取１ml提取液于大试管中，加入5.0ml 蒽酮试剂，用上述同样的方法。以0号管调零， 波长625nm下记录吸光度，在标准曲线上查出 葡萄糖的含量（μg）。
五、结果处理
植物样品含糖量（％）＝查表所得糖含量（μg） ×稀释倍数／样品重（g）×106×100
含糖总量一般为：2.1—20%
1、植物样品中可溶性糖的提取
将小麦研磨微碎，准确称取１克，放入10ml 离心管中，管内加入4ml80%乙醇，在80度水浴 中不断搅拌30分钟，离心（3000转、15分钟）， 收集上清液，其残渣加2ml80%乙醇重复提取2 次，合并上清液，80%乙醇定容至10ml ，过滤 后待测。
四、操作步骤
2、葡萄糖标准曲线的制作 取７支大试管，按下表数据配制一 系列不同浓度的葡萄糖溶液：
管号
葡萄糖 标准液 （ml）
80%乙 醇体积 （ml） 葡萄糖 含量 （μg）
0
0
1
0.1
2
0.2
3
0.4
4
0.6
5
0.8
6
1.0
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0
10
20
40
60
80
100
在每支试管中立即加入蒽酮试剂5.0ml， 混匀，盖上塞子，沸水浴中，准确煮沸10分钟 取出，用流水冷却，室温放置10分钟，在 625nm波长下比色。以标准葡萄糖含量作横坐 标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。