CCK8试剂盒说明书
CCK8试剂盒说明书
Cell Counting Kit（CCK试剂盒）产品简介：Cell Counting Kit简称CCK 试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK法与其它检测方法之间的比较：CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验操作说明：一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。
根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。
）二、细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。
将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。
2、向每孔加入10 μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5% CO2的条件下）。
2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
人胆囊收缩素8(CCK-8)ELISA试剂盒说明书
人胆囊收缩素8(CCK-8)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中胆囊收缩素8(CCK-8)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人胆囊收缩素8(CCK-8)水平。
用纯化的人胆囊收缩素8(CCK-8)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入胆囊收缩素8(CCK-8)，再与HRP标记的胆囊收缩素8(CCK-8)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胆囊收缩素8(CCK-8)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人胆囊收缩素8(CCK-8)含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
CCK-8的步骤
人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽（CCK-8）ELISA试剂盒说明书本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中CCK-8含量。
实验原理用纯化的CCK-8抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的CCK-8抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物（TMB）显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的CCK-8呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1、酶标板：一块（96孔）2、标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。
每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为50 pmol/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成50 pmol/L，25 pmol/L，12.5 pmol/L，6.25 pmol/L，3.12 pmol/L，1.56 pmol/L，0.78 pmol/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 pmol/L。
如配制25 pmol/L 标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）50 pmol/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、样品稀释液：1×20ml。
4、检测稀释液A：1×10ml。
5、检测稀释液B：1×10ml。
6、检测溶液A：1×120 /瓶（1:100）。
临用前以检测稀释液A 1:100稀释（如：10 检测溶液A / 990 检测稀释液A），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100 /孔），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。
7、检测溶液B：1×120 /瓶（1:100）。
PH0534 CCK8试剂盒操作手册
注 4: 细胞的种类不一样，形成的 Formazan 的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成 的 Formazan 很少，需要较长的显色时间（5-6 小时）。 注 5: 如果颜色不均匀的话，可以轻轻敲击培养板以混匀。 注 6: 建议采用双波长进行测定，检测波长 450-490nm，参比波长 600-650nm。
■ Q & A（常见问题与解答）：
Q1.设定参比波长的目的是什么？必须要设定吗？ A1.不一定要设定。 CCK 试剂在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊所带来的吸收。 Q2.如何设定空白对照？ A2.可以在不含细胞，含有药物的培养基中加 CCK，测定 450nm 的吸光度最为空白对照。 Q3.在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？
1
参考图 1
★简单！安全！重现性好！ 无需有机溶剂和放射性同位素，步骤少，无损失，结果准确
CCK 法
还原后的 Formazan 是水溶性的
1
（不需要溶解）
2
重现性好
3
操作简单
4
测定波长：450～490nm
5
为 1 瓶溶液，无需预制，即开即用
MTT 法 还原后的 Formazan 是非水溶性的
（需要加有机溶剂溶解） 重复性差 操作繁琐
Q4.不更换培养基加 CCK 试剂，有没有问题？ A4.一般没有问题。但是如果培养基里有氧化还原性物质的话，有可能会产生误差，必须更换其他培养基。我们发现以下培养基会影响测 定：
培养基
空白吸收
IMDM
1.0
McCoy/s
0.3
Q5.哪些物质会影响 CCK 的测定？ A5.当有还原性物质存在时会影响 CCK 的测定，增加 OD 值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小 OD 值；在有酚红存在 的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可；血清不影响测定。
cck8说明
试剂盒的储存及有效期
所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检 测溶液 A 以及 96 孔板保存于-20 。开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存于-20 ，避 免潮湿。有效期为 6 个月。
实验原理
本试剂盒应用竞争抑制酶标免疫分析法测定标本中待测物质水平。用纯化的抗体包被
微孔板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中同时加入酶标的抗原和待测抗原，被测抗原 与酶标记抗原对特异性抗体进行竞争结合。经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过 氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。待测标本浓度越高， 标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品 中待测物质含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。
TMB底物
1 × 9ml
浓洗涤液(30 x)
1 × 20ml
试剂名称 96孔板覆膜 标准品稀释液 检测稀释液A(2 x) 检测稀释液B(2 x) 终止液 使用说明书
数量 4 1 × 20ml 1 × 6ml 1 × 6ml 1 × 6ml 1
本试剂盒未提供但需自备的设备及试剂
1、450±10nm 滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、单道和多道微量加液器及吸头 3、稀释样品的 EP 管 4、蒸馏水或去离子水 5、吸水纸 6、盛放洗液的容器
(完整word版)CCK8试剂盒说明书
Cell Counting Kit（CCK试剂盒）产品简介：Cell Counting Kit简称CCK 试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2—(2—甲氧基-4-硝苯基)-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯)—2H—四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK法与其它检测方法之间的比较:途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验操作说明:一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞.2、按比例（例如：1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3—5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线.根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。
）二、细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。
将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。
2、向每孔加入10 μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1—4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL0.1M的HCL溶液或者1％ w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化.三、细胞增值—毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5％ CO2的条件下）。
2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
CCK8试剂盒说明书
C C K8试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1Cell Counting Kit（CCK试剂盒）产品简介：Cell Counting Kit简称CCK 试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST（水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK法与其它检测方法之间的比较：CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验操作说明：一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。
根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。
）二、细胞活性检测1、在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔）。
将培养板放在培养箱中预培养（在37℃,5% CO2的条件下）。
2、向每孔加入10 μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5% CO2的条件下）。
cck8中文说明书资料
cck8中文说明书资料CCK8试剂盒是用于检测细胞增殖、细胞毒性、药物敏感性等实验中常用的试剂盒之一。
下面是一份详细的CCK8中文说明书资料，包含了这个试剂盒的简介、使用方法、注意事项、贮藏条件及生产厂家信息等内容。
一、CCK8试剂盒简介CCK8试剂盒是一种方便快捷的细胞增殖、细胞毒性、药物敏感性等实验的检测试剂盒。
它是一种基于WST-8[2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(4-二甲基氨基甲基)-2H-四唑单钠盐]的细胞增殖检测试剂盒。
该试剂盒使用简单，灵敏度高，结果准确可靠，被广泛应用于各种体外细胞学实验中。
二、CCK8试剂盒使用方法1.准备细胞：根据常规细胞培养方法准备好所需细胞。
2.准备试剂：将CCK8试剂从冰箱中取出，室温下平衡至室温。
3.制作标准曲线：根据需要用无血清培养基将CCK8标准品稀释成不同的浓度，然后加入96孔板中，加入100μl/孔。
将不同浓度的标准品分别加入3个复孔中，并设置空白对照。
4.加入细胞：将准备好的细胞悬液加入96孔板中，加入100μl/孔。
5.孵育：将96孔板放入细胞培养箱中孵育适当时间（根据实验需求而定），一般孵育时间为1~4小时。
6.检测：将96孔板取出，加入终止剂，轻轻混匀后，在酶标仪上检测450nm处的吸光度。
7.计算：根据所测吸光度值，使用标准曲线计算出相应的细胞浓度。
三、注意事项K8试剂盒应存放在避光、干燥、阴凉处，避免阳光直射。
2.试剂盒中的各组分应严格按照说明书中的要求进行配制和储存，避免产生误差。
3.实验操作过程中应避免试剂污染，以免影响实验结果。
4.如有异常情况，应及时联系生产厂家或相关技术支持机构进行处理。
四、贮藏条件CCK8试剂盒应在2~8℃的冰箱中保存，有效期为12个月。
如有未使用完的试剂，应及时放回冰箱中保存，以保持试剂的稳定性。
五、生产厂家信息CCk8试剂盒的生产厂家是日本同仁化学研究所（Dojindo），地址为日本东京都中央区日本桥本町1丁目12番1号。
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Cell Counting Kit （CCK 试剂盒）
产品简介：
Cell Counting Kit简称CCK试剂盒，为MTT法的替代方法，是一种基于WST （水溶性四唑盐，化学名：2-（2-甲氧基-4-硝苯基）-3-（4-硝苯基）-5-（2,4-二磺基苯）-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒
性的快速高灵敏度检测试剂盒。
CCK法与其它检测方法之间的比较:
CCK用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验
操作说明：
一、制作标准曲线（测定细胞具体数量时）
1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。
2、按比例（例如：1/2比例）依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度, 每组3-6个复孔。
3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK试剂培养一定时间后测定0D值，制作出一条以细胞数量为横坐标（X轴），OD值为纵坐标（Y轴）的标准曲线。
根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数
量（试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK 后的培养时间。
）
二、细胞活性检测
1、在96孔板中接种细胞悬液（100 ^L孔）。
将培养板放在培养箱中预培养（在37C ,5% C02的条件下）。
2、向每孔加入10 的CCK溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响0D值的读数）。
3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。
4、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。
5、如果暂时不测定0D值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 yLO.IM的HCL溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24 小时内吸光度不会发生变化。
三、细胞增值-毒性检测
1、在96孔板中配置100 的细胞悬液。
将培养板在培养箱预培养24小时（在37C, 5% CO2的条件下）。
2、向培养板加入10 不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48小时）。
12后/24h
4、想每孔加入10^L CCK溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。
（2h 后）
6、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。
7、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 uL0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS 溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。
在24小时内吸光度不会发生变化。
注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK 之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。
当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
备注：
①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK 试剂后的培养时间。
（怎么判断哪个时间好？）
②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。
加入CCK试剂时，建议斜贴着培养
板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD 值读数。
③白细胞可能需要培养较长时间。
④当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔（100 （1L培养基）。
检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔（100 （1L培养基）。
如果要使用24 孔板或 6 孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK 溶液。
⑤如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
活力计算：
]100
细胞活力* （%）=[A（加药）-A （空白）]/[A （0加药）-A （空白）
A （加药）：具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度
A （空白）：具有培养基和CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度
A（0 加药）：具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
* 细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力
保存条件：
4C干燥避光保存，有效期一年。