α-氨基酸含量的测定(非水滴定法)

• 在HAc中：
NH2 HAc 噲垐 ??
NH
3
Ac
H2 Ac Ac 2HAc
• 醋酸的酸性比水强，易给出质子使弱碱质子化，滴 定终点突跃较大。
测定过程：
（1）HClO4－HAc滴定剂的配制： 冷至25°C的冰醋酸中缓慢加入72％的HClO4溶
液，摇匀，再滴加一定量的醋酸酐，摇匀，冷至室温， 可用冰醋酸稀释。
（2） HClO4－HAc滴定剂的标定： 准确称取定量的基准物KHC8H4O4，溶于冰醋酸中，
以0.2%结晶紫的冰醋酸溶液为指示剂，从紫色滴定 至蓝色。取同样量的同一溶剂作空白滴定。
（3）α-氨基酸的滴定：
将试样溶于冰醋酸、醋酸酐中，以结晶紫为指示 剂，用上述标定好的滴定剂滴定至出现稳定的蓝色。
取同样量的同一溶剂作空白滴定。
氨基酸的含量＝
m
M
KHC8H4O4
（V标定 V空白）滴定剂
(V滴定
V空白/
)滴定剂
M 氨基酸
/
m试样
✓ 方法二：
在苯－甲醇混合液中用甲醇钠滴定α-氨 基酸中的羧基：
• 在水中：
NH2 COOH 噲垐 ??
NH
3
COO
NH
3
OH
噲垐
??
NH 2
H2O
• 在苯－甲醇中：
NH2 COOH 噲垐 ??
α-氨基酸含量的测定
（非水滴定法） 064 黄磊
α-氨基酸的α位碳原子上连有氨基和羧基， 为两性物质，在水溶液中的Ka和Kb很小， 溶液的酸碱性均不明显（羧基Ka＝2.5×10－ 10，氨基Kb＝2.2×10－12），而且会互相干
扰，在水溶液中无法被准确滴定，设计一个
滴定α-氨基酸含量的方法。
• α-氨基酸在水中的形式为：
NH
3
COO
NH3 CH3O NH2 CH3OH
CH3O－碱性比OH－强，和－NH3＋反应比OH－完 全，平衡常数大，滴定较完全，滴定突跃明显。
测定过程：
（1）CH3ONa的苯－甲醇标准液的配制： 称取定量的纯金属钠，切片用无水甲醇洗净，分别多次
加入冷却的无水甲醇中，溶解后，加入苯稀释。
H
H
R
C
COOH 噲垐 ?? R
C
COO-
NH2
NH3+
✓方法一：
在无水冰醋酸中用HClO4滴定α-氨基 酸中的氨基:
• 冰醋酸酸性比水和氨基酸上的羧基都强，给出质 子的能力强，相当于α-氨基酸中的氨基碱性增强：
• 在水中：
NH2 COOH 噲垐 ??
NH
3
COO
H3O COO 噲垐 ?? COOH H2O
（2） CH3ONa的苯－甲醇标准液的标定： 准确称取苯甲酸基准物，溶于二甲基甲酰铵中，用百里
酚蓝为指示剂从黄色滴定至蓝色。
（3）α-氨基酸的滴定：
试样溶于苯－甲醇中，用百里酚蓝为指示剂，用标准液 滴定至黄色变为蓝色。
m
氨基酸含量＝
M
C6 H 5COOH
V滴定剂(标定)
Baidu Nhomakorabea
V滴定剂（滴定） M氨基酸
/ m试样
✓ 参考书目：
杭州大学化学系分析化学教研室，分析化学手册 （第二版）:第二分册：分析化学，化学工业出版 社，北京，1997.
武汉大学主编，分析化学（第二版），北京，高 等教育出版社，1982.