DEAE-纤维素DE-52使用说明(详细参考)
[知识]离子交换层析操作
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离子交换层析操作1.DEAE-52的处理取DEAE-52加入10倍量蒸馏水，浸泡12小时，去除悬浮的杂质和破碎颗粒。
其后将DEAE-52用碱—酸—碱（碱为0.5mol·LNaOH、酸为0.5mol·LHCl）的顺序预处理。
加入4倍体积的碱液浸泡半小时，不时搅拌。
抽滤，用蒸馏水洗至中性。
加入4倍体积的酸液浸泡半小时，不时搅拌。
抽滤，用蒸馏水洗至中性。
加入4倍体积的碱液浸泡半小时，不时搅拌。
抽滤，用蒸馏水洗至中性。
直接洗出无色澄清液位置。
2.平衡将DEAE—纤维素放入0.0lMol/L pH 7. 4 PB液中（即起始缓冲液），静止1h，不时搅拌，待纤维素下沉后，倾去上清液或抽滤除去洗液，如此反复几次至倾出液体的pH值与加入的PB液的pH值相近3.装柱层析柱的选择要大小、长度适当。
一般而言，柱长和柱直径之比为10：1～20：1，柱的内径上下要均匀一致。
柱子的清洗：用前将层析柱在清洁液内浸泡处理24h，然后依次用常水、蒸馏水、起始缓冲液充分洗涤。
装柱时，把层析柱垂直固定在三角铁架上，倒入起始缓冲液至一半的柱高，除去死区及塑料管内的气泡。
再将平衡的DEAE－纤维素糊状物沿管壁倒入柱中。
注意不要产生气泡，如有气泡应排除或重装。
拧开螺旋夹，使流速至1ml/5min，待缓冲液快接近纤维素面时，继续倒入纤维素糊，同时用玻璃棒搅拌表面层，以免使两次加入的纤维素形成分界层，通过进出缓冲液调节流量，也可通过塑料管的升降来控制，至柱床体积不变为止。
剪一圆形滤纸（与柱内径大小一致），从柱的上端轻轻放入，使其沉接于纤维素床表面，以免在加样时打乱纤维素层。
装好柱的柱面应该是平整的，无倾斜，整个柱床内无气泡、不分层。
继续平衡，使流出液的pH值与流入液的pH值完全一致为止。
4.上样将多糖溶于10ml缓冲液中平衡过液（4℃）。
将柱的上端打开，用吸管将纤维素柱上面的缓冲液吸出，不要吸净，留一薄层液面，以免空气进入。
whatman DE-52纤维素详细使用方法
whatman DE-52纤维素详细使用方法Whatman DE-52纤维素详细使用方法1.引言本文档旨在提供关于Whatman DE-52纤维素的详细使用方法。
DE-52纤维素是一种常用于分离和纯化过程的离子交换纤维素材料。
以下将详细介绍DE-52纤维素的特性、操作步骤以及实验参数的优化建议。
2.DE-52纤维素的特性DE-52纤维素具有以下特性：________●高度可交换的离子交换群：________DE-52纤维素具有一定数量的阴离子交换基团，可与带正电荷的离子相互作用。
●高度交换能力：________DE-52纤维素对多种离子具有可靠的交换性能，适用于多种离子分离和纯化的应用。
3.实验前准备在使用DE-52纤维素之前，需要进行以下实验前准备工作：________3.1 pH调节：________根据实验需要，调节溶液的pH值至所需范围。
3.2 预处理DE-52纤维素：________将DE-52纤维素浸泡在适当的缓冲液中，使其充分湿润。
4.DE-52纤维素的使用步骤详解以下是使用DE-52纤维素进行分离和纯化的详细步骤：________4.1 样品的初步处理●准备待处理的样品溶液，并根据需要进行预处理，如剔除杂质、浓缩等。
4.2 准备DE-52纤维素柱●将经过预处理的DE-52纤维素装填至柱子中。
●使用适当的流速，将缓冲液预冲柱子，以获得平衡的柱子。
4.3 样品的加载●将经过初步处理的样品加载至DE-52纤维素柱子。
●使用适当的流速，逐步洗脱样品。
4.4 洗脱和回收目标物●使用适当的洗脱缓冲液，洗脱并回收目标物。
5.实验参数优化建议为获得最佳效果，可以根据需要进行以下实验参数的优化：________5.1 pH值：________适当调节操作溶液的pH值可改善分离效果。
5.2 柱子尺寸：________选择合适的柱子尺寸以满足样品处理的要求。
5.3 流速：________通过调整流速可影响分离效率和纯化速度。
DEAE 纤维素使用说明
DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
2 填料特征：3 应用的注意事项：3.1 色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
3.2 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3.3 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
whatman DE-52纤维素详细使用方法
1． 按上项（1）那样轻轻搅拌离子交换剂到一定容积的缓冲液中。
2． 放置 10min，倾出或滤出上清液。 3． 重复处理直到滤液或上清液确实与缓冲液的 pH 和电导率一样为止。变换缓冲液后必须
核对 pH。当采用低浓度缓冲液时本方法会有所变化，且需要增加处理的时间。 4． 除去细颗粒和装柱的准备工作请按上述（4）（5）和（6）项进行。
2． 为了得到尽可能好的结果，对于干的离子交换纤维素（23 和 32）预处理的每一步必须 按下面即将介绍的流程进行操作。
3． DE51、QA52、SE52 和 SE53 含防腐剂。此类物质会在平衡和装柱时自动随之除去。如 果离子交换剂还进行平衡，则防腐剂可以用蒸馏水或者去离子水进行洗涤。
第一部分 干型离子交换纤维素
装柱
在装柱时必须避免离子交换剂和缓冲液的对流翻动。 为此必须使悬浮液倒入柱中瞬间使离子交换剂形成沉降柱床曾，操作进行得尽可能快，否则 悬液中的对流需很长时间才会停下来。 1． 离子交换用柱应该垂直置于无灰、无直射阳光和不发热等环境中。 2． 假如选液体积大于柱体积时，应该另外接一段延长管。 3． 轻轻搅动下将悬液倒入柱中。 4． 让洗脱液从柱中排出。 5． 全部悬液加完后装上或插入柱顶盖。 6． 缓冲液用泵或流动法通过柱子，流速控制至少 45ml/hr/cm2 柱子内截面积，直到柱床高
处理条件
型号 DE CM
一次处理 0.5NHCl 0.5Nห้องสมุดไป่ตู้aOH
中间 pH 4.0 8.0
二次处理 0.5NNaOH 0.5NHCl
注意：对预溶胀的微粒状产品（51，52 和 53 型）不需进行这一步，因此干型产品用在大规 模柱层析分离更好。
一般操作注意事项 z 离子交换剂可以在室温下储存 z 当不用时可以一直密封保存 z 可以用蒸馏水，更好的是使用去离子水 z 为了避免离子交换剂颗粒变细，不可以激烈窑洞或者搅动交换剂悬液 z 为了延长使用期，离子交换剂不可以采用浓酸、浓碱或强氧化剂处理。为了再生。
deae纤维素de-52柱可分离的分子量
deae纤维素de-52柱可分离的分子量
deae纤维素de-52是一种常用的柱层析介质，可用于分离不同分子量的化合物。
它可以提供高效的分离效果，并且具有良好的耐化学性和机械强度。
在生物化学和制药领域，deae纤维素de-52柱常被用于纯化和分离蛋白质、多肽、核酸和其他生物大分子。
deae纤维素de-52柱的分离效果与待分离物的分子量密切相关。
一般而言，较小分子量的化合物在deae纤维素de-52柱上的分离效果更好。
这是因为较小的化合物能够更容易地与柱层析介质发生相互作用，并在柱中停留更长的时间，从而实现更好的分离效果。
然而，需要注意的是，deae纤维素de-52柱并不能对所有分子量的化合物进行有效的分离。
对于分子量过大或过小的化合物，deae纤维素de-52柱的分离效果可能会受到限制。
此外，柱层析的分离效果还受到其他因素的影响，如待分离物的溶液条件、柱层析的pH值和离子强度等。
为了获得最佳的分离效果，使用deae纤维素de-52柱进行层析前，需要对待分离物进行适当的前处理。
比如，可以通过调整溶液的pH 值和离子强度，或者添加特定的缓冲剂，来增加分离效果。
总的来说，deae纤维素de-52柱是一种重要的层析介质，可用于分离不同分子量的化合物。
它的分离效果与待分离物的分子量密切相关，但也受到其他因素的影响。
在实际应用中，需要根据具体的实
验要求和待分离物的特性，来选择合适的柱层析条件，以获得最佳的分离效果。
DEAE52纤维素综述
DEAE52纤维素综述DEAE--52纤维素的处理1.先将干粉的纤维素浸泡在蒸馏水中约3小时左右。
去除杂质最好抽干一下。
2.再用0.5mol/l的HCl溶液浸泡2小时，用去离子水洗净至PH中性，并抽干。
3.将抽干的纤维素再浸泡在0.5mol/l的NaOH溶液中2小时，用去离子水洗至中性，抽干即可用了。
对于用过的纤维素，可以重复利用多次，但需要经过再生处理后才可以使用。
再生处理可先用高浓度NaCl (1－2 mol/L)过柱冲洗柱床，以除去DEAE－52阴离子交换纤维所吸附的成份。
然后，再用0.5 mol/L的HCl和NaOH处理，处理方法与预处理完全相同。
DEAE－纤维素的处理及装柱（1）处理本实验采用的是DEAE－纤维素DE 52 是弱酸型阴离子交换剂，具体处理方法为：先将DE52阴离子交换剂干粉浸泡于蒸馏水中，去除杂质；再在0.5N的HCL溶液中浸泡1－2h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上，并将其在抽滤漏斗中抽干；将抽干的离子交换剂浸泡在0.5N的NaOH溶液中1－2h，再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。
（2）装柱将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱材，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降再层析柱底部，凝胶沉积直到离层析柱上端1.5－2cm处，停止装柱。
层析柱上端进液口连接恒流泵，下出口连接蛋白质监测仪，待层析柱的平衡。
（3）平衡在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液（洗脱液）置换出来，使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。
其方法是：利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内，打开层析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min，当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时，层析柱达到了平衡。
在本实验中，用0.002M Tris-HCL缓冲液PH7.4(内含0.0001M EDTA)，预先将DE-52柱进行平衡。
DEAE-52预处理
2.1 DEAE-52纤维素离子交换柱填料处理[8]2.1.1 预溶胀取DEAE-52纤维素5 g于小烧杯中，加入25 mL蒸馏水，溶胀48小时，待纤维素沉到烧杯底部且纤维素面高度不变时，倾去上层水，将下层的纤维素倒入量筒中测量其溶胀后的体积，5 g的DEAE-52溶胀后的体积约为8 mL，根据该比例确定DEAE-52所需称取的量。
2.1.2 膨胀活化称取50 gDEAE-52纤维素，置于500 mL烧杯中，加入300 mL蒸馏水浸泡至其体积不再改变。
将蒸馏水浸泡后的纤维素用双层滤纸抽滤，把水抽干后加入到0.5 mol/L NaOH溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时。
用双层滤纸抽滤掉NaOH，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。
将近中性纤维素加入到0.5 mol/L HCl溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时。
用双层滤纸抽滤掉HCl，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。
再次将纤维素加入到0.5 mol/L NaOH溶液中，不断搅拌，浸泡30分钟至1小时，用双层滤纸抽滤掉NaOH，用大量蒸馏水冲洗纤维素，使其pH值接近中性。
用蒸馏水浸泡中性的纤维素，不断搅拌，静置，待纤维素下沉后倾去上层清水，反复多次。
2.2 装柱用起始缓冲液反复冲洗已经准备好的层析柱，取一小块脱脂棉润湿后放入层析柱的底部，柱底部连接胶皮管，装上螺旋夹，关闭夹子后将柱子固定在铁架台上，像其中倒入蒸馏水排出棉花与管道中的气泡。
把蒸馏水浸泡的纤维素搅拌均匀呈糊状，像层析柱中倒入一部分纤维素，要缓慢倒入避免产生气泡，拧开下端的螺旋夹，调整流速，待到液面降至距纤维素面2 cm处关闭螺旋夹，继续倒入纤维素，同时用玻璃棒搅拌纤维素防止两次加入产生纤维素分层，重复上述步骤，将所有纤维素都填入层析柱中，最后剪一圆形滤纸片，大小与层析柱内径一致，将其放入层析柱纤维素表面上，防止上样时打乱纤维素。
查看装好的柱子上表面是否平整，柱内不能有气泡、不能分层，待一切正常加入蒸馏水平衡，流速调低，使流出溶液的pH值与加入溶液的pH值一致。
DEAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体
DEAE-纤维素提取法纯化多克隆抗体该法提取IgG简便，既可小量提取，•也可大量制备。
1．批量提取法称取DEAE-纤维素（DE32或DE52）50g，置于1000ml烧杯中，•先以蒸馏水漂浮除去细颗粒，再经酸碱处理后，用0.01～0.05mol/L，pH8.0•左右的磷酸盐缓冲液（PB）平衡。
将水分抽干，或用布氏滤斗（内放两层滤纸）过滤，收集湿纤维素，•以降低其离子强度。
按1ml血清加湿重5g DEAE纤维素，经过充分搅拌，置4℃吸附1h。
•上清液可再如此处理一次，即获得较纯的IgG。
该法提取IgG简便，既可小量提取，•也可大量制备。
2．Tris-Cl离子交换层析法（Ion-exchange chromatography）【材料和试剂】（1）DE32或DE52纤维素。
（2）HCl；NaOH；0.01～0.05mol/L，pH8.0 PB；0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl；0.5mol/L NaCl。
（3）待纯化标本：杂交瘤腹水或培养上清，免疫血清或饱和硫酸铵粗提品。
（4）1.550cm 层析柱；透析袋；紫外分光光度计及其他透析和层析所需的试剂和器材。
【操作步骤】（1）DE52纤维素的处理：DE52经酸、碱处理，0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。
（2）装柱：将层析柱固定于滴定架上，柱底垫一圆形尼龙纱，出口接一细塑料管并关闭出水。
将浸泡于0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中，待DE52自然沉降3～5cm高时，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或松开出水口螺旋夹•，控制流速1～2ml/min，同时连续加入DE52至所需高度。
待DE52完全沉降后，柱面放一圆形滤纸片。
（3）平衡：松开出水口螺旋夹，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速为15•滴/min，待流出液与洗脱液之pH值达到一致时，停止平衡。
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DEAE-纤维素DE-52使用说明
DEAE-纤维素(52)
使用说明书
一简介
DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
二、填料特征：
特点载量大，分辨率好，流速高，使用方便。
基质高度交联纤维素
配基二乙基氨基乙基
配基密度40μmol /ml
吸附载量180mg HSA/ml
填料的颗粒大小50μm
最大流速300cm/h
pH范围3-10，在位清洗时pH范围可到2-11
化学稳定性各种缓冲液及盐，0.5M NaOH及醋酸，8M脲，6M盐酸胍，
乙醇，异丙醇等
物理稳定性0.1M中性缓冲液中，120℃30min 保存温度+4~30℃
保存干粉,1g=3-4ml
三、应用的注意事项：
1) 色谱柱装填
1、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可.
2、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
3、此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
4、在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
2) 蛋白的结合
样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3) 蛋白的洗脱
这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
阶段洗脱容易放大，重复性好，如果洗脱条件好完全可以得到和线性梯度一样或者更好。
采用什么方法完全根据自己需要。
四、再生清洗
1、每次用完最好用0.5MNaOH含2M NaCl洗5个床体积，再用水洗5个柱床体积，然后用20%乙醇保存，使用3-5次后在水洗之后再用70%的乙醇或30%异丙醇都含1%吐温洗5个柱床体积，最后20%的乙醇流洗5个柱床体积。
2、有机溶剂和水混合很容易产生气泡，为了避免这样情况，可以把配好的有机溶剂在室温放置过夜，再使用，这样可以避免气泡进柱子而导致柱子不能正常使用。
五、保存
在20%乙醇中，4℃下长期保存。