切胶回收的步骤
天根切胶回收说明书
天根切胶回收说明书
天根切胶回收试剂盒说明书
一、产品简介
天根切胶回收试剂盒是一种高效的DNA片段回收试剂盒，能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段。
该试剂盒采用独特的吸附技术，能够有效地去除凝胶中的杂质，纯化DNA片段。
回收的DNA片段可用于后续的克隆、测序、PCR等实验。
二、产品特点
1. 高效回收：能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段，回收率高达90%以上。
2. 纯度高：能够有效去除凝胶中的杂质，纯化DNA片段，提高后续实验的准确性和可靠性。
3. 操作简便：采用独特的吸附技术，无需使用有机溶剂，简化了操作步骤。
4. 稳定性好：试剂盒中的成分稳定，便于长期保存和使用。
三、使用方法
1. 准备凝胶和电泳缓冲液：将凝胶和电泳缓冲液按照要求准备妥当。
2. 切胶：按照实验要求将凝胶切成适当大小的胶块。
3. 洗涤：将切好的胶块放入离心管中，加入适量的洗涤液，充分混匀，洗涤去除凝胶中的杂质。
4. 吸附：将洗涤后的胶块放入吸附柱中，按照说明书要求进行吸附操作。
5. 洗脱：将吸附后的DNA片段进行洗脱，收集洗脱液。
6. 检测：对回收的DNA片段进行检测，如琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测。
四、注意事项
1. 使用前请仔细阅读本说明书，确保按照说明书要求正确操作。
2. 本试剂盒仅供实验室使用，请勿用于食品、药品等领域。
3. 使用过程中请注意安全，避免直接接触眼睛、皮肤和衣物等。
如不慎接触到皮肤或眼睛，请立即用清水冲洗，并及时就医。
4. 本试剂盒中的试剂和耗材均为一次性使用，用后请及时处理废弃物。
PCR扩增结果分析和胶回收切胶的一点注意事项
讨论1.假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量，④PCR循环条件。
寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板：①模板中含有Taq酶抑制剂，②在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。
③模板核酸变性不彻底。
在酶和引物质量好时，不出现扩增带，有可能是模板核酸提取过程出了毛病，可使用阳性对照的DNA模板配合检查模板质量。
酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。
引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。
有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。
②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。
如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。
③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏，导致引物变质降解失效。
④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。
Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul、或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。
物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率，退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
pcr切胶回收的步骤
pcr切胶回收的步骤
PCR切胶回收呀，这可是个很有趣的小实验呢。
先说说准备工作吧。
你得有已经跑过PCR并且经过琼脂糖凝胶电泳的胶块哦。
然后呢，把要用的工具都准备好，像干净的刀片啦，还有专门的切胶回收试剂盒。
开始切胶啦。
在紫外灯下看胶块的时候，就像寻宝一样呢。
找到你要的那条DNA 条带，然后用刀片小心翼翼地把它周围的胶切下来。
可别切太大块啦，不然会有好多杂质的。
切的时候就像在给小宝贝做精细的手术一样，要很小心哦。
切好胶之后，就按照试剂盒的说明来操作啦。
一般是把切下来的胶放到一个离心管里，然后加入一些溶液，让胶融化。
这时候你就看着胶慢慢变成液体，感觉就像魔法一样呢。
接着呢，要把融化后的液体加到吸附柱里。
这个吸附柱就像一个小卫士，专门把DNA吸附住，而那些杂质就被留在外面啦。
把液体加进去之后，离心一下，就像坐小过山车一样，让液体在离心力的作用下快速通过吸附柱。
然后呢，要清洗一下吸附柱。
这一步就像是给小卫士洗个澡，把它身上可能残留的杂质都洗干净。
再离心一下，把清洗的液体甩掉。
最后就是把我们想要的DNA从吸附柱上洗脱下来啦。
加入洗脱液，再离心，这个时候我们的DNA就乖乖地跑到洗脱液里啦。
就像把小宝贝从保护它的小房子里接出来一样。
这样，PCR切胶回收就完成啦。
虽然过程有点小复杂，但是只要按照步骤来，就可以得到我们想要的纯净的DNA啦。
每次做这个实验都感觉像是在和小小的DNA分子玩一场有趣的游戏呢。
切胶回收的步骤
8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min
9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液，
10．重复8，9
11．
4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min，
5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4）
6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清
切胶回收的步骤
1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul）
2．尽量切碎凝胶
凝胶浓度
NAL溶液体积
1%
3倍凝胶体积
1-1.5%
4
1.5-2%
3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液，55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化，
向离心管中加入3倍体积的nal溶液55视具体胶定度加热使凝胶完全融化按每20ul硅胶树脂结合树脂使用前要充分混匀约3ugdna加入适量比例的硅胶树脂充分混合室温放置20min10000rpm离心1分钟去上清上清液暂保存如回收率不过可重复4加入800ul清洗液清洗液加入56ml100的无水乙醇振荡混匀后室温静置10min10000rpm离心1分钟去上清重复步骤6尽量去除上清完全风干至不残留乙醇味道
DNA胶回收实验技术的方法和步骤
DNA胶回收实验技术的方法和步骤一. 提高胶回收量的办法1) 增加电泳时的上样量。
2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
3) 切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4) 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。
5) 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。
6) 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7) 加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。
8) 最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
9) 可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。
10) 将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
二. 几种PCR产物回收的详方法和步骤1) 普通胶回收如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。
另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。
2) 从低熔点凝胶回收DNA纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。
待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。
反复1-2次。
取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。
切胶回收DNA
切胶回收DNA（博迈德琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒DR01）
**WB液使用前加入指定量的无水乙醇；
**尽量使胶中的缓冲液减少。
当PH值《7.5时，吸附回收DNA效率最高，正常情况小，溶胶液依旧保持黄色时，说明PH值正常，如果变成橘红或淡紫色说明PH值偏高，可在胶充分溶解时，加入3M醋酸钠5-10ul
实验步骤：
1.40ulPCR反应液琼脂糖凝胶电泳。
在紫外光下切目的片段。
尽量减少胶的体积；
2.将切下的胶放入1.5ml离心管中，称重；
3.加入3倍体积的溶胶液，如果胶的浓度大于2%，则应加入6倍溶胶液DD;
4.56度水浴10分钟至胶完全溶解，2-3分钟涡旋震荡一次加速溶解；
5.将溶解液EC吸附柱中，吸附柱放入收集管中，室温放置1min，12000rpm离心30-60sec，弃收集管中离心液；
6.加入500ul漂洗液WB，12000rpm离心30sec，弃离心液；
7.重复6
8.将吸附柱EC放入空离心管中，12000rpm离心2min，尽量出去漂洗液，以免残留乙醇抑制下游反应；
9.将EC吸附柱放入一个干净的离心管中，在吸附柱中间部位加入50ul洗脱缓冲液EB，（使用前在65-70度水浴中加热效果更好），室温放置2min，12000rpm离心1min，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1min；
10.取2ul离心液电泳，估计DNA量（250bp marker：5ul，1000bp的相当于150ng，余相当于50ng）。
切胶回收的步骤审批稿
切胶回收的步骤
YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
切胶回收的步骤
1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul）
2．尽量切碎凝胶
3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液， 55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化，
4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min，
5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4）
6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清
7．重复步骤6，尽量去除上清，完全风干至不残留乙醇味道；
8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min 9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液，
10．重复8，9。
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切胶回收的步骤
1．琼脂糖凝胶电泳目的基因，紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖，用纸巾吸尽凝胶表面的液体，尽量减少不含目的基因的凝胶量，称重（1mg=1ul）
2．尽量切碎凝胶
3．向离心管中加入3倍体积的NAL溶液，55（视具体胶定）度加热，使凝胶完全融化，
4．按每20ul硅胶树脂结合（树脂使用前要充分混匀）约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂，充分混合，室温放置20min，
5．10000rpm离心1分钟，去上清（上清液暂保存，如回收率不过可重复4）
6．加入800ul清洗液（清洗液加入56ml100%的无水乙醇），振荡混匀后，室温静置10min，10000rpm离心1分钟，去上清
7．重复步骤6，尽量去除上清，完全风干至不残留乙醇味道；
8．加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀，55度水浴20min 9．10000rpm离心1分钟，吸上清为DNA回收液，
10．重复8，9。