胶回收DNA注意事项
天根切胶回收说明书
天根切胶回收说明书
天根切胶回收试剂盒说明书
一、产品简介
天根切胶回收试剂盒是一种高效的DNA片段回收试剂盒，能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段。
该试剂盒采用独特的吸附技术，能够有效地去除凝胶中的杂质，纯化DNA片段。
回收的DNA片段可用于后续的克隆、测序、PCR等实验。
二、产品特点
1. 高效回收：能够从凝胶中快速、准确地回收目的DNA片段，回收率高达90%以上。
2. 纯度高：能够有效去除凝胶中的杂质，纯化DNA片段，提高后续实验的准确性和可靠性。
3. 操作简便：采用独特的吸附技术，无需使用有机溶剂，简化了操作步骤。
4. 稳定性好：试剂盒中的成分稳定，便于长期保存和使用。
三、使用方法
1. 准备凝胶和电泳缓冲液：将凝胶和电泳缓冲液按照要求准备妥当。
2. 切胶：按照实验要求将凝胶切成适当大小的胶块。
3. 洗涤：将切好的胶块放入离心管中，加入适量的洗涤液，充分混匀，洗涤去除凝胶中的杂质。
4. 吸附：将洗涤后的胶块放入吸附柱中，按照说明书要求进行吸附操作。
5. 洗脱：将吸附后的DNA片段进行洗脱，收集洗脱液。
6. 检测：对回收的DNA片段进行检测，如琼脂糖凝胶电泳或紫外分光光度计检测。
四、注意事项
1. 使用前请仔细阅读本说明书，确保按照说明书要求正确操作。
2. 本试剂盒仅供实验室使用，请勿用于食品、药品等领域。
3. 使用过程中请注意安全，避免直接接触眼睛、皮肤和衣物等。
如不慎接触到皮肤或眼睛，请立即用清水冲洗，并及时就医。
4. 本试剂盒中的试剂和耗材均为一次性使用，用后请及时处理废弃物。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问题
原因：洗脱液中含有乙醇
建议：洗脱前，确保柱子中乙醇已无残留乙醇。
琼脂糖凝胶DNA片段回收中的常见问来自 1、未回收到DNA片段或回收效率很低
A、原因：胶块未完全溶解
建议：为加快凝胶的溶解，应将凝胶置于55度水浴中溶解，期间不断上下颠倒，待确定凝胶完全溶解后再进行后续操作。每100 mg凝胶应加入100uL溶胶液，如果胶块过大，应将胶块切成小块，以便于凝胶溶解。
D、原因：洗脱缓冲液不合适
建议：洗脱液的pH值在7.0~8.5时，洗脱效率最高，洗脱液pH超出此范围，将会显著影响收获率，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10mM Tris-HCl），或者使用使用pH值在此范围的ddH2O。
E、原因：洗脱缓冲液未加到离心柱中间
建议：因为在洗脱时使用较少的洗脱缓冲液，洗脱缓冲液应加在中间位置，并室温放置1~2分钟，然后再离心洗脱。另外，采用65度预热的洗脱Buffer将显著提高回收效率。
F、原因：起始回收量太少
建议：如果起始回收量很好的样品，应富集，最好使用不少于1ug的样品。对于PCR产物，应事先电泳检测产量，在进行回收操作。
2、电泳时，产物漂出点样孔
原因：洗脱时，柱子中残留乙醇
建议：在进行洗脱前，如果柱子上残留乙醇，将会影响洗脱效率，在洗脱前应再次离心，或者空气中放置几分钟，再进行洗脱。
B、原因：加入溶胶液过少
建议：对于PCR产物，或者酶切产物，应加入2倍体积的溶胶液。对于凝胶回收，每100 mg凝胶应加入不少于100uL溶胶液。对小于200bp的片段应加入5倍体积的溶胶液。
C、原因：DNA Wash Buffer 中未加入无水乙醇
胶回收
1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。
2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。
此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。
3. 切碎胶块。
胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块融化时间，提高DNA的回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。
计算胶块体积时，以1 mg=1 ul进行计算。
5. 向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer。
DR-I Buffer的加量如下表： 6. 均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热)。
此时应间断振荡混合，使胶块充分融化（约6～10分钟)。
注）胶块一定要充分融化，否则将会严重影响DNA的回收率。
7. 向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer，均匀混合。
当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。
8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。
9. 将上述操作7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。
10. 将500 ul的Rinse A加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
11. 将700 ul的Rinse B加入Spin Column中，12,000 rpm离心30秒，弃滤液。
12. 重复操作步骤11。
13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column 膜的中央处加入25 ul 的灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。
DNA凝胶回收方法及常见问题
DNA凝胶回收方法及常见问题琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。
聚丙烯酰胺凝胶电泳片段的回收将在以后的文章中介绍，在这里我先介绍一下琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法，方便大家学习交流。
从琼脂糖凝胶中回收DNA，是一种简单不过的常规实验操作。
但是由于胶回收的质量和数量直接影响后继的一系列实验――比如酶切连接、转化筛选、测序或者PCR扩增、标记乃至显微注射等等，所以这一步的操作也显得非常重要。
胶回收的质量好否直接影响后继实验的成功与否。
现今除了手工回收方法外，许多公司都开发了方便的回收试剂盒系列，但是无论借助何种方式，最基本的评定标准均包括: 回收产物质量：主要指纯度。
常规电泳过程中，普通级别的琼脂糖自带的一些性状不明的多糖，会连同DNA一起从凝胶中抽提出来，强烈抑制后继的连接、酶切、或者标记、扩增等实验。
对于大片断DNA回收，质量还包括产物的完整性；而对于较小片断回收，质量还包括回收产物的浓度；此外，极微量的纯化介质或者是某些试剂混入回收产物中也会对结果产生致命的影响。
回收率：由于上电泳样品量通常都很少，电泳过程本身也会导致样品的分散和损失，因而尽可能多的回收电泳凝胶条带中的目的片断，提高产物得率，对于后继实验来说是非常重要的。
回收率的多少通常和回收产物的大小以及量的多少有关，比如DNA片断越大，和固相基质的结合力越强，就越难洗脱，回收率就低；又如，DNA的量越少，相对损失越大，回收率越低。
因此，根据情况选择不同的方法是很重要的。
其他：操作方面，操作简单，快速，应用方便的方法或产品自然比较受欢迎。
如溶胶的缓冲液中添加指示剂，可以指示溶胶的溶液pH值就是很方便的设计；离心过柱就比离心沉淀要简单方便。
还有要注意载量问题，因为对于纯化柱或者一定量的纯化介质都有一定的吸附限度，过量的产物吸附不了即被损失掉。
以下是我总结的常见问题，希望对大家有所帮助。
Q1：利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段？A1: 可能有以下几个原因：1. 胶块未完全溶解，溶解凝胶时应置于55℃水浴，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数,确定胶块完全溶解后再进行下一步骤;2. 胶块体积太大,应使用枪头捣碎，还不能充分溶解，则应先将其切为小块，分多次回收或选用大量型回收试剂盒；3.紫外灯下切胶时间过长，导致DNA部分降解，应尽量把切胶时间控制在30s以内；4. 电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH值（pH≤7.5）时可结合DNA，在低盐及高pH 值（pH≥8）条件下洗脱。
DNA胶回收
关于DNA胶回收的一些东西(2012-08-28 21:01:59)分类：资料标签：杂谈这几次做胶回收的回收率都不高，所以很就纠结啊。
逛论坛的时候发现原来中科大IGEM实验的胶回收也跟我们情况差不多，于是去看了一下他们的论坛，就把中科大师兄师姐的经验拿过来先了，希望我们的后续实验能顺利些，前面时间有点拖得久了....1.切胶时放在不吸水的PE手套上，但是PE手套一旦滑动将导致质量的改变，因为说DNA主要在琼脂糖颗粒的缝隙中，也就是TAE缓冲液里，所以吸水过强会导致DNA损失。
2.胶回收的Eluent要预热这个已经不用多说。
我们平时加入Eluent一般静置1-2min，后来在学姐的建议下我延长了静置时间，后来浓度很高的两次都是在5分钟以上，30ng/ul的那次是5分钟，51ng/ul的那次是在65摄氏度水浴中盖盖静置10分钟。
取得了很好的效果，回收浓度比较高（以前经常是10ng/ul）。
主要就这两点，尤其是第二点，个人认为第二点确实很重要。
因为我们平时会遇到片段小了挂不上（用异丙醇），片段大了洗不下来。
我们有的时候是几kb的，一般属于第二种情况，这时就应该延长加入Eluent的静置时间，以获得更高的回收率。
3.照胶一定要快，长时间的紫外照射会引起序列的突变。
4.切胶时注意把胶块切得小些，但是要切掉所有目的片段。
胶块太大不容易溶解，而且会使得浓度低，影响回收效率。
没有切干净所有片段会更加严重影响回收效率。
关于切胶和胶回收效率的关系，文献上是这么讲的：“切胶质量比较小时，对回收效率影响不大；但是切胶质量比较大时，将明显降低胶的回收效率。
”也就是说，切胶不是越小越好，但大了肯定不好，具体到我们现在的条件下，若能控制到0.15g~0.1g左右就应该没有问题了。
当然，前提是一定要把所有的目的条带切干净。
5. 关于溶胶的问题，文献中则说太长和太短都不好，推荐时间是 10min。
他们用的试剂盒和我们的不一样，绝对时间不具有可比性，生工的试剂盒说明书上写的是5~10min。
【精品】从琼脂糖凝胶中回收DNA
【精品】从琼脂糖凝胶中回收DNA琼脂糖凝胶是一种常用的生物分子分离纯化技术，它适用于分离分子大小差异较大的DNA、RNA、蛋白质等生物大分子。
在实验过程中，我们通常需要在琼脂糖凝胶中回收目标分子，接下来将以从琼脂糖凝胶中回收DNA为例，介绍琼脂糖凝胶分离和回收DNA的步骤。
I.琼脂糖凝胶电泳分离DNA1.制备琼脂糖凝胶：准备好琼脂糖粉末、TBE缓冲液或者TAE缓冲液、牛奶桶或者其他可用的模具等材料。
将适量的琼脂粉末与缓冲液混合均匀，然后煮沸并搅拌至完全溶解，待温度降至约60℃时，倒入模具内并加入DNA样品。
注意，样品需与样品量较大的样品间留有一定距离，以便于分离。
2.测量DNA迁移距离：在琼脂糖凝胶分离之后，需要用紫外线紫外检测器对每个DNA带进行测量，以确定其迁移距离。
3.切割琼脂糖凝胶：在确定每个DNA条带的位置之后，需要用刀子或切割器从琼脂糖凝胶上切下每个DNA条带，并收集在小管中备用。
切割时需要注意避免污染、损坏DNA。
1.准备回收DNA的缓冲液：一般来说，在回收琼脂糖凝胶中的DNA时，使用的缓冲液类型包括TE缓冲液、纯水、无菌去离子水等。
2.加入缓冲液并恢复DNA：将切下的琼脂糖凝胶条带投入含有缓冲液的离心管中，并在室温下静置10-15分钟，使得DNA从琼脂糖凝胶带上释放出来。
3.离心：恢复DNA的琼脂糖混合物取出后，需要进行离心处理，以使得DNA沉淀到离心管底部。
离心速度一般为12000ppm，离心时间15min。
4.去除上清：离心完毕之后，将上清取出，只保留离心管底部的沉淀。
上清可以用于其他实验。
5.重悬：加入恰当的缓冲液重悬DNA沉淀，例如TE缓冲液、纯水等。
如果需要，可以用比较温和的方法来提取DNA。
6.测量DNA浓度：用分光光度计或者其他光谱仪器，测量DNA的吸收光谱，从而确定DNA的浓度，以便于后续实验的操作。
以上就是从琼脂糖凝胶中回收DNA的步骤。
整个操作需要尽可能在无菌操作室中进行，以避免污染影响结果。
切胶回收DNA
切胶回收DNA（博迈德琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒DR01）
**WB液使用前加入指定量的无水乙醇；
**尽量使胶中的缓冲液减少。
当PH值《7.5时，吸附回收DNA效率最高，正常情况小，溶胶液依旧保持黄色时，说明PH值正常，如果变成橘红或淡紫色说明PH值偏高，可在胶充分溶解时，加入3M醋酸钠5-10ul
实验步骤：
1.40ulPCR反应液琼脂糖凝胶电泳。
在紫外光下切目的片段。
尽量减少胶的体积；
2.将切下的胶放入1.5ml离心管中，称重；
3.加入3倍体积的溶胶液，如果胶的浓度大于2%，则应加入6倍溶胶液DD;
4.56度水浴10分钟至胶完全溶解，2-3分钟涡旋震荡一次加速溶解；
5.将溶解液EC吸附柱中，吸附柱放入收集管中，室温放置1min，12000rpm离心30-60sec，弃收集管中离心液；
6.加入500ul漂洗液WB，12000rpm离心30sec，弃离心液；
7.重复6
8.将吸附柱EC放入空离心管中，12000rpm离心2min，尽量出去漂洗液，以免残留乙醇抑制下游反应；
9.将EC吸附柱放入一个干净的离心管中，在吸附柱中间部位加入50ul洗脱缓冲液EB，（使用前在65-70度水浴中加热效果更好），室温放置2min，12000rpm离心1min，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，离心1min；
10.取2ul离心液电泳，估计DNA量（250bp marker：5ul，1000bp的相当于150ng，余相当于50ng）。
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程
琼脂糖凝胶回收纯化DNA标准操作规程（编号：013）
1、目的及适用范围
该SOP用于分离纯化目的DNA片段。
2、主要仪器及试剂
台式离心机、微量移液器、binding buffer、wash buffer、elution buffer，各试剂均来自胶回收提取试剂盒。
3、实验步骤
3.1 琼脂糖电泳，将特异电泳带用刀切下放入到离心管中，称琼脂糖带的重量；
3.2 按照每100mg加400µL的量加入binding buffer，放入到离心管振荡器中，45℃～55℃温育振荡，直到所有的琼脂糖都溶解（大概要5min）；
3.3 取出纯化柱，将上述溶解液转移至柱中，室温下放置2min，8000rpm 离心1min，弃离心管中的液体，将纯化柱放回离心管中；
3.4 加500µL的wash buffer至柱中，8000rpm 离心1min，弃管中的溶液；
3.5 重复操作4步的操作1次，最后将纯化柱放入EP管中10000rpm离心30s，除去残余的wash buffer；
3.6 将纯化柱放入一个新的离心管。
加30~40µL H2O或者elution buffer至纯化柱膜的中央，在37℃或50℃下放置2min，10000rpm离心1min洗脱DNA，将离心管中的DNA溶液放在-20℃保存。
4、注意事项
若想要不电泳而直接纯化DNA，只需要在第2步中按100µL液量加400µL的binding buffer,其余的步骤不变。
30。
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胶回收DNA注意事项
①切胶回收DNA片段是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
所以为了减少胶的体积，我们就可以用相对比较薄的胶来跑电泳，通常只要够点样即可，或是采用薄而宽的梳子来跑胶。
这样可减少回收试剂引起的一些后续麻烦。
②主要还是DNA的浓度, 如果DNA浓度不够, 想胶小点也不可能。
③紫外灯下切下含待回收DNA的凝胶时，要衬以干净的塑料薄膜，使用无DNA污染的新刀片，其目的在于防止外源DNA的污染。
④利用凝胶回收试剂盒DNA回收效率较低或者未回收到目的片段可能有以下几个原因：胶块未完全溶解，可适当延长水浴时间，并增加上下颠倒次数辅助溶解；胶块体积太大，应先将其切为小块，分多次回收；电泳缓冲液pH太高，硅基质膜在高盐低pH结合DNA，如pH太高，应作适当调整；漂洗液中未加入无水乙醇。
⑤可以改用去离子水洗脱。
但是实验室所用纯水一般pH偏低，可利用NaOH适当调高其pH 值，以增加洗脱得率。
⑥洗脱产物含有残留的乙醇会影响后续酶切实验，请确保彻底去除漂洗缓冲液，具体方法参见回收效率低的解决方案。
⑦不可以使用更小洗脱体积（小于说明书提供的最小洗脱体积）进行洗脱以提高浓度，因为说明书提供的最少洗脱体积是能完全覆盖吸附膜的最小体积，若减少体积则不能将DNA完全洗脱下来。
⑧电泳检测只有一条目的带，可以选用凝胶回收试剂盒。
如果后续实验对片段纯度要求较高，建议即使只有一条带，也可以切胶纯化，
其回收得到片段的纯度可能要比直接回收高一些。
⑨琼脂糖凝胶胶块不溶可能是下述原因：琼脂糖质量不好；含目的片段的凝胶再空气中放置过久，使胶块失水、干燥，建议切胶后立即进行回收或将胶块保存在4℃或-20℃；制胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。
关于胶回收切胶的一点注意事项
1. 电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。
2. 切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。
3. 关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果戴树脂眼镜就可以了。
要是非常害怕紫外照射，或者对于胶有特殊要求，例如要求不含EB，可以采用点marker和带刻度的尺子一起照相的方法来确定目的条带在胶上的位置进行切胶。
4. 按照正常程序点marker跑胶，然后切下有marker的胶，EB染色，紫外灯下与带刻度的尺子一起照相。
由于要回收的带与marker间的相对位置已知，根据尺子来衡量未染色胶上目的带的位置即可。
如果觉得很难判断，可以直接在marker边点少量的样，这样位置就容易确定了。
胶回收
一. 提高胶回收量的办法：
1) 增加电泳时的上样量。
2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。
3) 切胶时尽量只切有条带的胶，减小切胶体积：含目的片断很少的胶就不要要了，不然影响回收率。
4) 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。
5) 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于DNA与膜的结合，不过一般不要多余750ul。
6) 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使DNA与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的PH偏高，可在溶胶液中加入10ul（PH 5.0，3mol/L的NaAC）；为了使DNA分子更好的拦截在膜上，可以添加30％异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
7) 加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需10分钟），以使乙醇充分挥发。
最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用30-50μl洗脱液洗
脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的DNA。
9) 可以在加入洗脱液之后，可以在55度水浴5分钟或放在50度水浴10分钟以上再洗脱，或用封口膜密封4度过夜，第二天再离心回收，效果不错。
10) 将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。
二. 几种PCR 产物回收的详方法和步骤
1) 普通胶回收
如果要胶回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入3倍体积TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。
另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。
2) 从低熔点凝胶回收DNA
纯化DNA片段加与凝胶体积相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分钟保温，使凝胶完全溶解。
待放至室温，加等量酚（TE饱和，TE封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3分钟离心。
反复1-2次。
取上层液，加0.1体积3mol/L醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积无水乙醇，进行乙醇沉淀。
将纯化的DNA加适量TE溶解，测定含量，备用（可用于目的基因结构分析，探针制备等）。
3) 扩增特异性好的PCR回收
如果PCR扩增特异性好，只是简单的PCR产物纯化回收，可以在PCR 产物中加入50ug／ml 的蛋白酶K，37度1h，酚／氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入0.1体积的醋酸钠，2.5体积的无水乙醇沉淀回收。
三. 不需胶回收就可直接连接的方法
1) 低温冷冻析出法
跑电泳时用低熔点的agarose胶，跑到一定时候，将目的条带所在的
那一段胶切下，尽量切干净，让核酸直接暴露在胶的表面，并且，把底下没有脱氧核酸的那点胶也尽量切掉，然后放入1.5ml EP管中，然后放在负75度冰箱中10－30分钟，接着1，300rpm离心5－10分钟，取10ul上清，加入连接体系中。
将其余的液体也吸出，储存在另一个管子中，做好标记，放在－20度备用。
2) 酶切后的直接连接
在你酶切后可以直接的加入连接酶和另外的片断进行连接是可以筛选出连接好的片断的.
四、一些注意事项
1.电泳的buffer和gel都是新制的，切胶的台子清理干净，刀片最好洗净灭菌，总之一句话就是保证切下的带没有外源DNA污染。
2.切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。
为了减少胶的体积，可以用相对比较薄的胶来做，只要够点样即可，也可采用薄而宽的梳子来跑胶。
3.关于防护，在一般有机玻璃后就足够了，戴上防护面具以保护眼睛，如果你戴树脂眼镜就可以了。
4.琼脂糖对回收率有一定影响，如果琼脂糖较多，可以增加溶胶液，保证体系盐浓度。
影响回收率的因素主要是柱子填料必须在适宜的缓冲环境中（如果用柱子的话）。
对于小于１００ｂｐ的片段回收，可加至30%异丙醇。
5.如果是用PAGE回收，用水或TE溶解，枪头捣碎，过夜浸泡，即可。
当然你要将100bp在胶中位置定好切下。
已标记的探针用X片，未标
记的用EB。
6.选用回收效率较高的柱子，比如进口的Qiaquick spin column。
7.参照分子克隆用低熔点胶回收。
除低熔点凝胶回收法外，如用一般凝胶可用透析带短暂电泳，离心管低部加玻璃棉，高速离心等方法回收DNA片段。
附注：
1．影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素：
1)DNA分子大小迁移速率U与logN成反比（N为碱基对数目）。
分子大小相等，电荷基本相等（DNA结构重复性）。
分子越大，迁移越慢。
等量的空间结构紧密的电泳快（超螺旋>线性DNA）
2) 琼脂糖浓度：logU=logU0 Krt 胶浓度，U为迁移率，U0 为DNA的自由电泳迁移率，t为胶浓度，Kr为介质阻滞系数。
不同的凝胶浓度，分辨不同范围的DNA
Agarose：0.5%：1-30 kb；0.7%：0.8-12 kb
1.2%：0.4-7 kb；1.5%：0.2-3 kb.
3)DNA构象：一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。
当条件变化时，情况会相反，还与琼脂糖的浓度、电流强度、离子强度及EB 含量有关。
4)所加电压：低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。
使分辨效果好，凝胶上所加电压不应超过5V/cm
5)碱基组成与温度：一般影响不大4 -30 ℃
6)嵌入染料的存在：降低线性DNA迁移率，(不提倡加在电泳液中)
7)电泳缓冲液（0.5×TBE）的组成及其离子强度影响DNA的迁移率，无离子存在时，核酸基本不泳动，离子强度过大产热厉害，熔化凝胶并导致DNA变性，一般采用1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA pH8.0）。
2．溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染。
3．电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（bromophenol blue, Bb）呈蓝紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的的迁移率比溴酚蓝慢。