被动凝集法检测肺炎支原体

合集下载

被动凝集法检测肺炎支原体

被动凝集法检测肺炎支原体
精品PPT
被动凝集法
精品PPT
被动凝集法
精品PPT
被动凝集法
精品PPT
被动凝集法
精品PPT
被动凝集法
阳性对照:MP抗体滴度为1:320
精品PPT
被动凝集法
精品PPT
精品PPT
精品PPT
MP感染判断标准:
1 MP急性感染判断标准:①急性期MP IgM抗 体≥1:40,且恢复期较急性期血清抗体效价 上升4 倍或4 倍以上。②急性期血清抗体阴性 (IgM抗体<1:40),恢复期血清抗体≥1∶80。
2 MP既往感染判断标准:双份血清抗体效价 均明显增高,但恢复期较急性期血清抗体效 价升高小于4 倍。
2.消除红细胞载体引起的非特异性凝集。 3.特异性、灵敏性较高。 4.血清MP抗体滴度与MP感染者病情的严重 程度呈正相关。
精品PPT
被动凝集法
缺点:
1.检测总抗体。 2.该试验仅用于检测MP抗体,而非 直接检测MP,因而阳性结果并不能确诊 是MP感染。 3.假阴性。
精品PPT
被动凝集法
精品PPT
2.
3.
4.
精品PPT
被动凝集法
判定标准:
阳性:样品与未致敏粒子(最终稀释倍数1:20)
的反应图像判定为(-);而与致敏粒子(最终 稀释倍数1:40)的反应图像判定为(+)或 (++),则结果判定为阳性。将显示出反应图像 为(+)时的最终稀释倍数作为抗体滴度。 阴性:不论样品与未致敏粒子呈现何种反应图像, 只要与致敏粒子(最终稀释倍数1:40)的反应图 像显示为(-),则结果判定为阴性。 保留(-);(±)
被动凝集法
精品PPT
被动凝集法

肺炎支原体抗体三种血清学检测方法的对比分析

肺炎支原体抗体三种血清学检测方法的对比分析

20192019年6月第9卷第11期·检验医学·肺炎支原体抗体三种血清学检测方法的对比分析谢文俊厦门市海沧医院检验科,福建厦门 361026[摘要] 目的 比较电化学发光方法(CLIA)、间接免疫荧光抗体法(IFA)和被动凝集法(PPA)在肺炎支原体感染早期检测中的应用价值。

方法 选取我院2017年6月~2018年3月可疑肺炎支原体感染的患者153例,分别采用电化学发光方法、间接免疫荧光法和被动凝集法检测患者血清中的肺炎支原体抗体,比较这三种检测方法阳性检出率的差异,以协助临床早期诊断肺炎支原体感染。

结果 PA法检测出(IgM+IgG)阳性标本和阴性标本数分别为60(39.22%)和93(60.78%);CLIA检测出(IgM)阳性标本和阴性标本数分别为57(37.25%)和96(62.75%);IFA检测出(IgM)阳性标本和阴性标本数分别为54(35.29%)和99(64.71%);以上三种检测方法的阳性检出率差异均无统计学意义(P>0.05)。

对IFA/PA、IFA/CLIA和CLIA/PA进行一致性分析,CLIA/PA组、CLIA/IFA组和IFA/PA组的Kappa值分别0.903、0.929和0.867,三种检测方法一致性好(Kappa系数均>0.75)。

结论 电化学发光方法(CLIA)、间接免疫荧光抗体法(IFA)和被动凝集法(PPA)均在检测肺炎支原体中有着较高的一致性,均可用于肺炎支原体抗体的检测,且CLIA法由于检测MP分型抗体具备精密度高、用时短、操作自动化等优势,有望替代IFA法和PA法应用于临床。

[关键词] 肺炎支原体;化学发光免疫分析法;间接免疫荧光抗体法;被动凝集法[中图分类号] R446.6 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2019)11-90-03Comparative analysis of three serological detection methods for mycoplasma pneumoniae antibodyXIE WenjunDepartment of Clinical Laboratory,Xiamen Haicang Hospital,Fujian,Xiamen 361026,China[Abstract] Objective To compare the application values of electrochemiluminescence immunoassay(CLIA),indirect immunofluorescence antibody method(IFA)and particle agglutination(PPA)in the early detection of mycoplasma pneumoniae infection. Methods 153 patients with suspected mycoplasma pneumoniae infection who were admitted to our hospital from June 2017 to March 2018 were selected and they were respectively given electrochemiluminescence immunoassay,indirect immunofluorescence antibody method and particle agglutination to detect mycoplasma pneumoniae antibody in the serum.The differences in the positive detection rates of these three methods were compared to assist the early diagnosis of mycoplasma pneumoniae infection. Results The number of positive and negative samples of IgM and IgG detected by PA method were 60(39.22%)and 93(60.78%),respectively.The number of positive and negative IgM samples detected by CLIA was 57(37.25%)and 96(62.75%),respectively.The number of positive and negative IgM samples detected by IFA was 54(35.29%)and 99(64.71%),respectively.There was no significant difference in the positive detection rate of the above three methods(all P>0.05).Consistency analysis was conducted for IFA/PA,IFA/CLIA and CLIA/PA.The Kappa values of CLIA/PA group,CLIA/IFA group and IFA/PA group were 0.903,0.929 and 0.867 respectively.The consistency of the three detection methods was good(Kappa coefficient>0.75). Conclusion Electrochemiluminescence immunoassay(CLIA),indirect immunofluorescence antibody method(IFA)and particle agglutination(PPA)all have high consistency in the detection of mycoplasma pneumoniae,which can be used for the detection of mycoplasma pneumoniae antibodies.In addition,CLIA method is expected to replace IFA method and PA method in clinical application because of its advantages of high precision,short time and automatic operation in the detection of MP typing antibody.[Key words]Mycoplasma pneumoniae;Electrochemiluminescence immunoassay;Indirect immunofluorescence antibody method;Particle agglutination肺炎支原体(mycoplasm apneumonia,MP)是学龄儿童和青少年呼吸道感染的主要原因,是继肺炎链球菌之后的第二大社区获得性肺炎的病原体[1-4]。

肺炎支原体抗体检测(被动凝集法)和肺炎支原体核酸检测(实时荧光定量PCR法)在儿童肺炎支原体感染中的

肺炎支原体抗体检测(被动凝集法)和肺炎支原体核酸检测(实时荧光定量PCR法)在儿童肺炎支原体感染中的

肺炎支原体抗体检测(被动凝集法)和肺炎支原体核酸检测(实时荧光定量PCR法)在儿童肺炎支原体感染中的应用价值摘要目的:评估MP抗体检测与MP-DNA检测在儿童肺炎支原体感染中的应用价值。

方法:将2018年1月至12月在本院进行治疗的100 例MP 感染患儿作为研究对象,同时用被动凝集抗体检测法和实时荧光定量PCR法进行检测,对检测结果进行统计分析。

结果:对100 例MP感染的患儿进行检测,其中应用被动凝集抗体检测法检测出94例呈阳性,阳性率为94.00%,应用实时荧光定量PCR法检测出95例呈阳性,阳性率为95.00%,两种检测方法检出的4-6岁组患儿阳性率均最高,均为100%,两种方法检测阳性率在各年龄组均无显著性差异(P<0.05)。

结论:被动凝集法以及实时荧光定量PCR法在儿童肺炎支原体感染的检测中特异性强,且两种检测方法无显著性差异(P<0.05),均可以应用于临床检测。

关键词:被动凝集法;实时荧光定量PCR;儿童肺炎支原体肺炎支原体肺炎是学龄前和学龄期儿童常见的一种肺炎,婴幼儿亦常见,占住院儿童社区获得性肺炎的10%~40%,其病原体为肺炎支原体 [1-2]。

临床上感染肺炎支原体的儿童在感染初期没有很明显的临床症状,而且有很多症状不会体现在肺部,而且该类疾病的临床进展期比较长,这就致使肺炎支原体感染在临床上有较高的误诊率[3-4]。

虽然有关MP感染而死亡的儿童报道较少,但如果不对这类疾病进行及早的治疗与控制,会给患病儿童带来多种并发症,严重的并发症可能会损伤儿童脆弱的神经,影响儿童的生长发育[5-6]。

就目前临床对MP感染的了解来看,仅仅通过临床症状很难将MP于其他的病原体引起的呼吸道感染进行分辨,由于MP感染后的治疗不同于其他病原微生物,对MP进行及早的诊断,是临床减少抗生素滥用的有效手段,发现准确、快速的MP诊断方法意义重大[3-7]。

目前,在我国对MP进行临床诊断,一般采用血常规分析结合患儿临床症状以及细菌培养或MP抗体检测。

肺炎支原体抗体检测(被动凝集法)

肺炎支原体抗体检测(被动凝集法)

肺炎支原体抗体检测(被动凝集法)1.目的:规范实验室肺炎支原体抗体检测操作。

2.范围: xxxx院xxxx科3.测定原理:将肺炎支原体(Mac株)的细胞膜成分致敏人工载体明胶粒子制造而成。

这种致敏粒子和样本中的肺炎支原体抗体进行反应发生凝集,由此可以检测出血清和血浆中的肺炎支原体抗体,并且用来测定抗体的效价。

4.标本:4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本,血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆,枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。

4.2样本中的沉淀物和悬浮物,红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果,应离心除去,并确定样本未变质方可使用。

4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。

4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时;如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中;若需48小时以上保存或运输,则应冻存于-20℃以下,避免反复冻融。

使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。

5.试剂:珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。

5.1试剂盒在2℃—10℃储存,防止冷冻,避免强光照射,有效期12个月。

5.2 试剂盒开启使用后,冷冻干燥品配好后,2℃—10℃保存可使用7日,使用前必须做对照试验。

5.3试剂组成5.3.1血清稀释液(液体):用于稀释样品和复溶致敏粒子和未致敏粒子。

5.3.2致敏粒子(冷冻干燥):肺炎支原体(Mac株)抗原致敏的明胶粒子。

使用时加入规定量的血清稀释液。

复溶后的试剂含有0.9%的致敏粒子。

5.3.3未致敏粒子(冷冻干燥)鞣化的明胶粒子冻干制品。

使用时加入规定量的血清稀释液。

5.3.4阳性对照血清(液体)肺炎支原体(Mac株)抗体阳性的兔血清用血清稀释液1:10稀释后的制品。

6.临床标本测定6.1试剂的准备6.1.1溶解液(液体):按照测定操作规则使用。

6.1.2血清稀释液(液体):按照测定操作规则使用。

6.1.3致敏粒子(冷冻干燥):加入一定量的溶解液进行调制。

请在使用前30分钟于室温(15~30℃)下进行调制。

支原体肺炎血清学试验被动凝集法作业指导书

支原体肺炎血清学试验被动凝集法作业指导书

支原体肺炎血清学试验被动凝集法作业指导书1.原理本试剂是一种检测肺炎支原体抗体的体外诊断试验,它用肺炎支原体细胞膜成分致敏人工明胶粒子制造而成。

本试剂试验室基于如下原理:致敏粒子与人血清中存在的肺炎支原体抗体发生凝集反应。

2.标本采集2.1标本种类:血清2.2标本要求:新鲜,无溶血,无脂血。

2.3标本存放:室温﹤8小时,4℃—8℃存﹤48小时。

3.试剂组合3.1U型微量反应板:FASTEC。

3.2血清稀释液(液体):30ml*1瓶。

3.3致敏粒子(冻干):1.5ml*5瓶。

3.4未致敏粒子(冻干):1.5ml*5瓶。

3.5阳性对照(液体):0.5ml*1瓶。

4.操作方法4.1用一支校准的滴管,向第1孔加100ul,向第2-第8孔各加25ul血清稀释液。

4.2用微量移液管向第1孔中滴加25ul样品。

4.3用加样器或移液管,从第1孔至第8孔进行对倍稀释。

4.4用试剂盒中提供的一支滴管向第2孔中滴加25ul未致敏粒子,用试剂盒中提供的另一支滴管向第3孔至第8孔各滴加25ul致敏粒子。

4.5用平板混合器混合各孔中内容物约30秒,以便充分混匀。

给反应物加盖。

5.结果判断:在室温下静置3小时,然后在平板观测器上读取凝集图像。

6.操作性能:特异性,灵敏度,重复性,相关性。

7.结果处理7.1若结果失败,则重复测试,并作质控校正。

7.2若失控,则重检试剂盒。

8.方法局限性8.1溶血、脂血结果有影响。

8.2观察结果对弱阳性存在差异。

9.临床意义:肺炎支原体(MP)是引起呼吸道感染的常见病原微生物,它除可引起非典型肺炎外,常可引起呼吸道感染、气管炎、支气管炎、淋巴结炎,也可引起肺大泡、肺脓肿,另外,它还可引起其他系统并发症,如心肌炎、心包炎、脑膜炎、关节炎、胃炎、溶血性贫血等,由于MP对一般治疗肺炎的药物有耐药性,因此,及时进行检查有助于诊断及治疗。

被动凝集法和ELISA法检测肺炎支原体抗体及其IgM、IgG分型研究

被动凝集法和ELISA法检测肺炎支原体抗体及其IgM、IgG分型研究
T 4 P 7条 带 , 确 定 5份 , 为 单 条 T 4 阳 性 。 这 是 由 于 不 均 P7
[ ] 张 良芬 . 毒 螺 旋 体 4 D 脂 蛋 白的 研 究 现 状 [ ] 国外 医 学 皮 肤 7 梅 7k J. 性 病 学 分 册 ,0 1 2 ( ) 2 92 1 2 0 ,7 4 :1-2 .
值 分 析 , 以 看 出 在 s c 值 低 时 容 易 出 现 T P 的 阴 性 结 可 /o PA 果 , 合 1 份 W B法确 认 阴性 , 次 进 行 C I 检 测 也 为 阴 性 结 6 再 LA 的结 果 , 一 方 面 说 明 C I 在 敏 感 性 方 面 比 T P 有 优 势 , 这 LA PA 同 时 也 说 明 C A检 测 中 会 由 于 标 本 处 理 等 原 因 而 存 在 假 阳 u
[ ] S t , r tm Hi t DC, ta. ay i o r p n ma 8 ao NS Hi a H, r a R a a e 1 An ls fT e o e s
p l d m e o a l u r c mb n n n i e s/ rd a n ss o y h l y we t r i i a ta tg n o i g o i fs p i s b s e n i
国际检验 医学杂志 21 年 6月第 3 卷 第 l 期 02 3 1
It a n L bMe, l 21, o 3 , o1 J dJ y 02V 1 3N .1 u .
诊 试 验 , 试 验 采 用 的 是 纯 化 的 致 病 性 梅 毒 螺 旋 体 ( cos 该 Ni l h 株 ) 原 , 敏 感 性 、 异性 均较 高 , 誉 为 “ 实试 验 ” 但 这 种 抗 其 特 被 证 , 试 验并 非 完 美无 缺 , 可 出 现 生 物 学 假 阳 性 ] 仍 。。

被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值

被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值

应用研究被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值王居鹏1,2,朱黎娜2,马明坤2,陈慧3,郭素香3,任丽1△摘要:目的分析被动凝集法(PA)、间接免疫荧光法(IFA)和胶体金法(GICT)联合检测对儿童肺炎支原体(MP)感染的诊断价值。

方法选取进行MP抗体检测的患儿617例,以临床诊断为判断标准,分为MP感染组(345例)和非MP感染组(272例)。

所有患儿均经PA检测MP总抗体,经IFA和GICT检测MP-IgM抗体。

分析PA、IFA和GICT 这3种方法单独检测及两两联合检测与临床诊断的一致性,受试者工作特征(ROC)曲线评价其对MP感染的诊断价值,分析PA联合IFA检测2组患儿抗体情况。

结果MP感染组PA检测MP总抗体、IFA和GICT检测MP-IgM抗体的阳性率较非MP感染组高(P<0.01)。

PA检测MP总抗体的阳性检出率高于IFA和GICT检测MP-IgM抗体的阳性检出率(P<0.01)。

PA联合IFA与临床诊断为中度一致(Kappa值=0.41,P<0.05)。

3种方法单独检测和两两组合检测中PA联合IFA的曲线下面积、敏感度、总符合率、阴性预测值最高,阴性似然比最低。

GICT单独检测特异度最高。

IFA单独检测阳性预测值和阳性似然比最高。

当MP-IgM抗体阳性时,MP感染组23.44%的患儿总抗体滴度<1︰160,非MP感染组47.22%的患儿总抗体滴度≥1︰160。

当MP-IgM抗体阴性时,MP感染组91.91%的患儿MP总抗体滴度≥1︰160,非MP感染组有73.50%的患儿总抗体滴度<1︰160。

结论PA和IFA联合检测可为临床诊断儿童MP 感染提供更客观、准确的检测结果。

关键词:肺炎支原体;儿童;胶体金;免疫球蛋白M;荧光抗体技术,间接;被动凝集法;间接免疫荧光法中图分类号:R446文献标志码:A DOI:10.11958/20212561Diagnostic value of particle agglutination,indirect immunofluorescence assay and immunecolloidal gold technique combined detection for Mycoplasma pneumoniae antibody inchildren with Mycoplasma pneumoniae infectionWANG Jupeng1,2,ZHU Lina2,MA Mingkun2,CHEN Hui3,GUO Suxiang3,REN Li1△1Department of Clinical Laboratory,Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital,National Clinical ResearchCenter for Cancer;Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin;Tianjin's Clinical Research Center for Cancer, Tianjin300060,China;2Department of Clinical Laboratory,3Department of Pediatrics,Second TeachingHospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine△Corresponding Author E-mail:*************.cnAbstract:Objective To analyze the diagnostic value of particle agglutination(PA),indirect immunofluorescence assay(IFA)and immune colloidal gold technique(GICT)combined detection for Mycoplasma pneumoniae(MP)infection in children.Methods A total of617children were selected for MP antibody detection,and children were divided into the MP infection group(345cases)and the non-MP infection group(272cases)based on clinical diagnosis.All the children were detected MP total antibody by PA,and MP-IgM antibody by IFA and GICT.The consistency of PA,IFA and GICT detection alone or in combination with clinical diagnosis was analyzed.The diagnostic value of receiver operating characteristic(ROC) curve in the diagnosis of MP infection was evaluated,and the antibody detection of PA combined with IFA was analyzed.Results The positive rate of total MP antibody detected by PA and MP-IgM antibody detected by IFA and GICT was higher in the MP infected group than those in the non-MP infected group(P<0.01).The positive rate of total MP antibody detected by PA was significantly higher than MP-IgM antibody detected by IFA and GICT(P<0.01).PA combined with IFA was moderately consistent with clinical diagnosis(Kappa=0.41,P<0.05).The area under the curve of the diagnostic value,基金项目:国家自然科学基金资助项目(81904250);天津市教委科研计划项目(2019KJ045)作者单位:1天津医科大学肿瘤医院检验科(邮编300060),国家肿瘤临床医学研究中心;天津市“肿瘤防治”重点实验室;天津市恶性肿瘤临床医学研究中心;2天津中医药大学第二附属医院检验科,3儿科作者简介:王居鹏(1990),男,主管技师,主要从事临床免疫学相关研究。

被动凝集法

被动凝集法

被动凝集法
被动凝集法是一种用于检测抗体或抗原的间接凝集反应,此方法中,可溶性抗原(或抗体)被吸附在载体微粒的表面,然后与相应的抗体(或抗原)发生作用,在适宜的电解质存在的条件下,出现特异性的凝集现象。

以肺炎支原体MP的检测为例,被动凝集法主要用于检测肺炎支原体感染。

灵敏度很高,而且简便、快捷、价格便宜,它用于临床常规的检测和筛查。

目前的正常值是1:40,如果大于1:40就存在弱阳性,如果大于1:80,就是肺炎支原体抗体检测阳性。

但请注意,如果肺炎支原体检测是阳性的,并不能说明就是肺炎支原体的急性感染。

因为肺炎支原体抗体感染一般是7-10天就可以出现,20天左右就能出现长期的抗体,而7-10天出现的是短期的IgM 抗体。

这种IgM抗体最长可以持续一年,甚至有达到两年的记录。

因此,我们判断这个患者是不是有肺炎支原体急性的感染,要根据他的临床症状来加以分析和判断。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
1 MP急性感染判断标准:①急性期MP IgM抗 体≥1:40,且恢复期较急性期血清抗体效价 上升4 倍或4 倍以上。②急性期血清抗体阴性 (IgM抗体<1:40),恢复期血清抗体≥1∶80。 2 MP既往感染判断标准:双份血清抗体效价 均明显增高,但恢复期较急性期血清抗体效 价升高小于4 倍。 3 MP带菌者判断标准:双份血清抗体效价均 阴性,DNA 检测阳性。
被动凝集法检测肺炎支原体
肺炎支原体抗体检测

人体感染肺炎支原体后, 首先出现 IgM 类抗体,IgM 类抗体一般在感染后1 周出现,2~4周达高峰, 后逐渐降低,可持 续数月。IgG类抗体于感染后20天左右 出现,感染一个月左右达高峰,在体内 可维持1.5~2年。
肺炎支原体抗体检测
MP感染判断标准:
被动凝集法
原理: 是用表面吸附了MP抗原的明胶 颗粒代替动物红细胞制成致敏人工 明胶颗粒,再与人血清中存在的MP 抗体产生凝集反应。
被动凝集法
优点:
1.操作简单快速,设备要求低,结果判读容 易,过夜后再判读不发生显著变化。 2.消除红细胞载体引起的非特异性凝集。 3.特异性、灵敏性较高。 4.血清MP抗体滴度与MP感染者病情的严重 程度呈正相关。
被动凝集法
被动凝集法
被动凝集法
被动凝集法
被动凝集法
阳性对照:MP抗体滴度为1:320
被动凝集法
被动凝集法
缺点:
1.检测总抗体。 2.该试验仅用于检测MP抗体,而非 直接检测MP,因而阳性结果并不能确诊 是MP感染。 3.假阴性。
被动凝集法
被动凝集法
Байду номын сангаас
被动凝集法
判定:
滑的圆形。→(-)
1.颗粒呈纽扣状聚集,呈现出外周边缘均匀且平
2.粒子形成小环状,呈现出外周边缘均匀且平滑的 圆形。→(±) 3.粒子环明显变大,其外周边缘不均匀且杂乱地凝 集在周围。→(+) 4.产生均一的凝集,凝集粒子在底部整体上呈膜状 延展。→(++)
1.
2.
3.
4.
被动凝集法
判定标准: 阳性:样品与未致敏粒子(最终稀释倍数1:20)
的反应图像判定为(-);而与致敏粒子(最终 稀释倍数1:40)的反应图像判定为(+)或 (++),则结果判定为阳性。将显示出反应图像 为(+)时的最终稀释倍数作为抗体滴度。 阴性:不论样品与未致敏粒子呈现何种反应图像, 只要与致敏粒子(最终稀释倍数1:40)的反应图 像显示为(-),则结果判定为阴性。 保留(-);(±)
相关文档
最新文档