无菌培养基灌装试验验证方案及报告
培养基灌装试验方案
培养基灌装试验方案一、实验目的与背景培养基灌装试验是为了确保培养基的质量和纯净度，在实验室和生产过程中能够得到准确的结果。
准确无菌的培养基是微生物学和生物工程领域研究的基础，因此培养基灌装试验对于保证实验结果的准确性和可重复性至关重要。
二、试验原理培养基灌装试验主要通过将清洁的培养基倒入无菌的培养皿中，并在一定的温度下进行高温高压灭菌处理，以确保培养基中的菌落全部被杀灭，从而保证培养基的无菌纯度。
试验中需要注意培养基的制备过程，避免任何杂质的进入。
三、试验步骤1.准备工作a.清洁工作台和灌装设备，确保无尘无菌。
b.收集所需的培养基和培养皿，确保其无菌。
c.检查灌装设备和灌装管道的清洁状况，确保其完好无损。
2.培养基制备a.根据实验需求，准备相应的培养基成分和配方。
b.将所需的试剂按照配方在适量的蒸馏水中溶解并充分搅拌，直到完全溶解。
c.将溶解好的培养基通过过滤器过滤，以去除其中的杂质和微生物。
d.检查过滤后的培养基的透明度和颜色，确保其质量良好。
3.培养基灌装a.将已经清洁的培养皿摆放在无菌工作台上。
b.使用无菌的吸管或灌装器将准备好的培养基小心地倒入培养皿中，确保避免任何杂质的进入。
c.倒入的培养基要留有一定的空间，以防止培养基在灭菌处理时翻滚溢出。
d.灌装完成后，封闭培养皿，确保其密封性能良好。
4.培养基灭菌a.将灌装好的培养皿放入适当的灭菌设备中，设置合适的温度和时间参数。
b.灭菌设备应根据厂家的使用说明进行操作，以确保高温高压条件下的灭菌能够达到要求。
c.灭菌完成后，取出培养皿，检查其外观和密封性能，确保其没有任何变化。
d.根据实验需求，可以进行进一步的培养基质量检测，如菌落数目、无菌纯度等。
四、试验注意事项1.严格按照操作规程进行操作，确保各个步骤的无菌操作。
2.培养基的配制和过滤过程应严格控制，避免任何杂质的进入。
3.培养皿应事先清洗并高温高压灭菌处理，以确保其无菌状态。
4.培养基灌装完成后，应尽快进行灭菌处理，避免培养基质量的变化。
培养基无菌灌装工艺验证方案
目录一、目的二、范围与条件三、职责与培训四、验证项目五、偏差六、结论与建议一、目的：1.1验证目的：通过培养基无菌生产工艺验证，证实无菌生产工艺过程的可靠性。
二、验证范围和条件：2.1验证范围：本验证方案适用于冻干粉针生产线（激素）培养基无菌灌装。
2.2验证条件：培养基无菌灌装工艺验证是用与正常的实际生产工艺相同的条件和操作方法，在其他各个系统（诸如公用系统、无菌环境保持系统、设备验证等）验证工作完成的基础上进行的。
本方案必须在动力部门相关验证和冻干车间相关验证完成的条件下进行。
2.3 按照《培养基灌装SOP》，在各个系统验证完成后，开始进行培养基灌装工艺验证。
工艺流程图：2.4执行的标准操作规程：严格按照冻干车间工艺SOP、设备SOP、卫生SOP、物料SOP、基础SOP执行操作。
三、职责和培训:3.1 验证小组成员和职责：3.2 培训内容：3.2.1 培训目的：为建立并保持良好的质量保证系统，应配备足够数量并具有适当资质的人员完成各项操作，所有人员应明确理解自己的职责，熟悉与之相关的GMP原则，并接受良好的培训。
3.2.2人员培训：所有负责该验证操作的操作人员。
四、验证项目：4.1批的选择：冻干生产线的产品规格为，用7ml的西林瓶灌装2ml的培养基。
灌装大豆胰蛋白胨液体培养基（TSB）3批，批号为201406211、201406231、201406251，灌装装量为2ml。
为确保冻干机A、B每台不少于40000支，灌装数量为8万支需16.8万ml大豆胰蛋白胨液体培养基，灌装完毕后，先置23-28℃培养7天，再置30-35℃培养7天，每天观察培养基的微生物生长情况。
培养基灌装与培养基促生长试验同步进行。
4.2 抑菌作用的避免:培养基灌装使用促进微生物生长的培养基来挑战评估污染风险，因此抑菌因素应当在培养基灌装中予以考虑。
将培养基灌装的注射用水冷却至室温20-25℃配制，并在室温下保存培养基液体。
无菌模拟灌装试验报告
无菌模拟灌装试验报告一、试验目的本试验旨在验证无菌模拟灌装工艺的可行性，确保产品在灌装过程中不受到污染。
二、试验装置和材料1.试验装置：包括模拟灌装设备、无菌隔离操作台、培养箱等。
2.材料：试剂瓶，注射器，无菌器具，无菌培养基等。
三、试验步骤1.准备工作a.检查试验设备是否清洁完整，灌装装置是否进行过无菌处理。
b.准备所需的无菌材料和培养基，确保无菌状态。
c.对试验人员进行洗手、穿戴无菌服装等无菌操作准备。
2.模拟灌装操作a.将试剂瓶放入无菌隔离操作台中。
b.打开无菌操作台的无菌室，取出无菌注射器。
c.将无菌注射器插入模拟灌装设备中，调整灌装速度和灌装容量。
d.操作人员向试剂瓶内注射无菌培养基，确保无菌操作。
e.停止模拟灌装设备的运行。
f.将模拟灌装装置的灌装采样口取出，送入无菌培养基中进行培养。
3.培养基培养a.将采样口的培养基培养于37℃下，并定期观察培养基的生长情况。
b.观察培养基是否有细菌生长，如有则说明模拟灌装过程存在污染。
四、试验结果经过培养一定时间后，观察到培养基中出现了细菌生长。
根据菌落的数量和类型，可以判断模拟灌装过程中存在细菌污染。
五、试验分析1.可能的污染原因a.灌装设备未进行充分的无菌处理，造成细菌污染。
b.操作人员的操作技术不熟练，未能保证无菌操作的完整性。
c.无菌材料的质量不符合标准，存在细菌污染。
2.解决方案a.对灌装设备进行充分的无菌处理，确保设备的无菌性。
b.加强对操作人员的培训，提高无菌操作技术。
c.对无菌材料的供应商进行验证，确保无菌材料符合标准。
六、试验结论通过本次试验发现在模拟灌装过程中存在细菌污染的问题，但可以通过加强设备无菌处理、操作人员培训和供应商验证等措施解决。
本试验报告可作为无菌模拟灌装工艺改进的依据，以确保产品在灌装过程中不受到污染，保障产品质量和安全。
七、试验建议在进行下一次无菌模拟灌装试验时，建议加强管理控制，确保试验中的环境无菌，并提前进行试验装置的验证，以减少可能的污染风险。
培养基无菌灌装模拟试验方案
培养基⽆菌灌装模拟试验⽅案XXXXX制药有限公司培养基⽆菌灌装模拟试验再验证⽅案⽂件编号： YZML101P -09所在车间：冻⼲粉针车间起草⼈：⽇期： 2009年6⽉25⽇审核⼈：⽇期：2009年7⽉04⽇批准⼈：⽇期： 2009年7⽉05⽇验证⽅案的起草与审批验证⽅案的起草验证⽅案的审批验证进度计划提出完整的验证计划，经验证⼩组批准后实施，整个验证活动分三个阶段完成。
验证⽅案⽬录第⼀部分：概述 (4)1、验证⽬的 (4)2、验证概述 (4)3、验证领导⼩组分⼯及职责 (4)4、被模拟⼯艺 (5)5、模拟试验中使⽤的设备设施 (6)6、培养基的选择 (6)7、微⽣物培养条件 (7)8、⼯艺模拟的批量，批次 (7)9、灌装体积、灌装速度及灌装⽤容器的确定 (7)10、验证最差条件 (7)11、可接受的合格标准 (8)第⼆部分：试验实施 (9)1、试验实施前的准备⼯作 (9)1.1 培养基⽆菌性试验 (9)1.2 培养基促⽣长试验 (9)1.3 ⽆菌环境控制与监测 (9)2、试验实施过程 (11)2.1⼚房、空间清洁 (11)2.2试验相关⼯序准备 (12)2.3培养基配置、除菌过滤过程 (12)2.4模拟灌装 (12)2.5模拟冻⼲ (13)2.6轧盖 (13)2.7微⽣物培养 (13)3、盖胶塞密闭系统挑战试验 (15)4、偏差的处理 (15)5、试验结果分析与评估 (16)6、验证的维护 (17)第⼀部分：概述1、验证⽬的评价⼀个⽆菌⼯艺操作能⼒的最有⽤的⽅法之⼀是⼯艺模拟，其提供了⼀个可能影响最终产品⽆菌的⽆菌⼯艺操作变更进⾏评价的⽅法，它可以⽤于鉴别⽆菌操作⼯艺中，可以导致产品微⽣物污染的潜在缺陷，通过模拟⽆菌冻⼲粉针的灌装试验，证明冻⼲粉针灌装过程中所采⽤的⽆菌灌装⼯艺参数和相关的SOP对于防⽌微⽣物污染⽔平达到可接受的合格标准，或提供保证所⽣产产品的⽆菌性的可信限度达到可接受的合格标准的证据。
无菌工艺验证-培养基模拟灌装试验.ppt
培养基灌装方案
关键因素: 环境监测措施
在许多法规和制药规范中，都提出了对微生物的要求。 在试验过程中，可以使用主动采样或被动采样的方法进行空气采样；表面采 样最好在无菌操作结束后进行。另外还应该对操作人员进行监测。 在培养灌装过程中，微生物监测（空气、表面、人员）和悬浮粒子监测应该 按照各自的操作规程有效的进行。 有时候，取样点的数量可以较日常监测适当增加。
必须考虑可能采取那些干预措施 ?
模拟试验: 液体无菌灌装生产线
压盖机
压塞机
清洗设备
隧道烘箱
灌装设备
模拟试验: 培养基灌装方案
需要考虑的关键因素 :
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试验的数量和频率
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培养基 (产品的替代品)
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灌装的数量
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容器 (玻璃瓶) 体积
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灌装体积
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生产速度(或 灌装速度)
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灌装过程的持续时间
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工作班次
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监测措施
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干预措施 –常规的和非常规的
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培养方法
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可接受标准
模拟试验: 培养基灌装方案
培养基灌装方案
关键因素: 试验的次数和频率
培养基模拟试验的初始验证，至少需要成功的连续进行 3 次独立的模 拟试验（建议在不同的工作日进行试验）。
首次验证后，培养基模拟试验通常每年进行2次。
当生产线发生变更，并且经过评估可能对无菌生产工艺有潜在危险时， 应当进行额外的培养基灌装试验。
培养基灌装试验方案
培训目的
评估无菌生产模拟试验（培养基灌装或肉汤灌装） 了解在培养基灌装试验方案设计过程中的关键点，以符合
无菌制剂(滴眼剂)培养基模拟灌装工艺验证
培养基模拟灌装验证验证小组人员名单培养基模拟灌装验证方案目录1 概述2 验证目的3 适用范围4 相关部门职责5 验证条件6 验证引用的文件7 培养基8 培养基模拟灌装试验条件9 培养基模拟灌装试验的频率10培养基模拟灌装量和灌装数量的确定11培养基模拟灌装最差条件的设计12培养基配制和无菌灌装操作过程13 取样计划14试验样品的培养15 试验结果评价16环境监控和微生物限度控制17清场与清洁18培养基灌装过程监控记录19偏差调差20纠偏措施21异常情况处理程序22变更23拟定再验证周期24验证结果评定与结论附录附录1：人员培训附录2：系统验证及设备验证确认附录3：纯化水检验报告单附录4：注射用水检验报告单附录5：环境监测报告单附录6：胰酪胨大豆肉汤培养基适应性实验结果附录7：胰酪胨大豆肉汤培养基灵敏度检查结果附录8：培养基及内包材确认附录9：最差条件确认附录10：内包材检验结果附录11：未参加培养灌装瓶原因说明附录12：培养基的培养观察记录附录13：培养基的培养阳性结果和培养基灌装失败情况说明附录14：培养基灌装过程中监控统计表附录15：灌装生产结束清洁记录附录16：质控过程监控产品基本信息：1 概述培养基模拟灌装主要用的是胰酪胨大豆肉汤培养基，适用于黑龙江天龙药业江北新厂滴眼剂车间生产线。
依据批准的滴眼剂车间培养基模拟灌装验证方案，实施培养基模拟灌装试验；评价无菌生产工艺的可信限度达到可接受的合格标准，确认滴眼剂车间生产过程的可靠性，有效性。
本方案规定了滴眼剂车间培养基模拟灌装的验证方法和标准。
2 验证目的通过对滴眼剂灌装过程中采用与正常生产工艺相同的条件和操作方法（包括生产环境等），向8ml滴眼瓶内灌装经过除菌过滤的无菌培养基，在适当条件下培养，并对培养品观察、结果判定的验证，来确定滴眼剂车间生产无菌灌装工艺的无菌保证水平，判定无菌生产要素是否能够达到可接受的合格标准的能力，以确认无菌生产工艺过程的可靠性。
无菌培养基灌装试验验证方案及报告
无菌培养基灌装试验验证方案编号：VMP-XZGY-YZFA-001****药业有限公司目录1 概述 (1)2 验证目的 (1)3 验证范围及要求 (1)4 验证小组成员及职责 (2)4.1 验证小组成员 (2)4.2 相关职责 (2)5 验证前提条件 (2)5.1 厂房和空调系统验证情况检查 (2)5.2 设备和公用系统确认情况检查 (2)5.3人员和物料情况检查 (3)5.4检验仪器确认情况检查 (3)5.5环境监测结果检查 (3)6 验证标准 (3)7 培养基适用性检查 (4)7.1无菌性检查 (4)7.2灵敏度检查 (4)8 验证内容 (4)8.1 取样及检测 (4)8.2 验证程序 (7)9 验证偏差和变更 (8)10 再确认周期 (8)11 确认结果评定及结论 (8)共9页第1页1、概述：无菌培养基灌装试验是指由掌握了无菌操作的人员在一个有控制的环境中将培养基按工艺配制，并经除菌过滤后灌装于灭菌的容器中，并在适当条件下培养，确认没有菌生长，以证明无菌生产工艺的可靠性的过程。
本试验是在与无菌灌装生产过程有关的其他验证合格后，且操作人员熟练掌握了岗位操作规程后进行的。
培养基灌装作为无菌灌装的模拟实验，可以直观、方便、准确地反映出无菌灌装过程的污染情况及问题。
2 、验证目的通过无菌培养基灌装试验证明灌装用的安瓿瓶、过滤器、灌注器等的染菌率是否达到规定的合格标准，确认小容量注射剂车间的洁净环境及进行无菌灌装过程中所采用的各种防止微生物污染的方法和规程的可行性，从而为保证所生产产品的无菌性提供依据。
3、验证范围及要求本验证方案适用于新建或生产工艺进行过重大更改后的非最终灭菌小容量注射液的无菌灌装过程的验证。
必须经连续三批合格的培养基灌装试验后方可证明被验证工艺的可靠性。
不同批次的模拟灌装应在同一条生产线不同的工作日内进行。
如实际生产中有不同的班次，则应对实际生产操作的每个班次进行培养基灌装试验，每班次连续进行3次合格试验。
培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案
培养基模拟灌装无菌生产工艺验证方案目录1 概述2 验证目的3 适用范围4 验证小组成员与职责5 文件资料及培训确认6 编制依据7 验证计划8风险评估分析9 验证内容10验证结果的分析与评价11验证周期验证立项申请表验证方案会签审批表1、概述1.1我公司小容量注射剂车间2号生产线，按GMP2010版及其附录要求进行设计，是专用于≥小容量注射剂非最终灭菌产品生产使用。
维生素C注射液（5ml:0.5g）因无法进行F0 8分钟湿热灭菌，以达到SAL≤10-6，但处方可以通过微生物滞留过滤器过滤，故采用除菌过滤和无菌工艺相结合的灭菌方法。
1.2培养基灌装验证是用和实际生产工艺相同的条件与操作方法（包括生产环境），向安瓿内灌装经除菌过滤的培养基，然后将此模拟制品在适当条件下培养，以确认工艺过程的可靠性。
对设备、环境以及人员操作的一种系统验证，是判断无菌保证水平的关键手段。
在正式生产前必须按维生素C注射液（5ml:0.5g）生产工艺进行培养基模拟灌装验证。
1.3验证次数按2010版GMP附录1要求,因该生产线为新建设施，本次为规格为5ml培养基模拟灌装试验首次验证，故需进行连续三个批次的验证活动。
2、验证目的2.1证明无菌生产区的设计及其设备布局，环境及卫生状态、人员无菌操作等各方面因素均能保证产品的无菌性。
2.2确定生产最差条件下仍能保证产品的无菌性。
2.3通过培养基模拟灌装试验确保生产符合现行GMP法规要求。
3、验证范围本验证方案适用于小容量注射剂车间无菌灌装生产线（二线）正式投入使用前培养基模拟灌装试验的验证。
4、验证小组成员与职责4.1验证小组成员验证小组：准备、检查和实施确认方案；设计、组织和协调验证试验；收集整理验证数据，偏差处理，编写确认报告；再验证周期的确定。
验证小组组长：组织编写验证方案,领导协调验证项目的实施,协调验证小组的工作,对验证过程的技术负责,审核批准验证方案、偏差及验证报告。
验证小组副组长：负责起草验证方案,编写验证报告，负责协调确认方案的实施，相关操作规程的修订，协助收集整理验证数据，对偏差提出纠正措施建议。
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无菌培养基灌装试验验证方案编号：VMP-XZGY-YZFA-001****药业有限公司目录1 概述 (1)2 验证目的 (1)3 验证范围及要求 (1)4 验证小组成员及职责 (2)4.1 验证小组成员 (2)4.2 相关职责 (2)5 验证前提条件 (2)5.1 厂房和空调系统验证情况检查 (2)5.2 设备和公用系统确认情况检查 (2)5.3人员和物料情况检查 (3)5.4检验仪器确认情况检查 (3)5.5环境监测结果检查 (3)6 验证标准 (3)7 培养基适用性检查 (4)7.1无菌性检查 (4)7.2灵敏度检查 (4)8 验证内容 (4)8.1 取样及检测 (4)8.2 验证程序 (7)9 验证偏差和变更 (8)10 再确认周期 (8)11 确认结果评定及结论 (8)共9页第1页名称：无菌培养基灌装试验验证方案编号VMP-XZGY-YZFA-001版本号00 替代版本号——制定人审核人批准人制定日期审核日期批准日期制定部门生产部印数1份执行日期颁发部门质量部存档部门质量部分发部门生产部、质量部变更记载：版本号批准日期执行日期变更历史及原因：1、概述：无菌培养基灌装试验是指由掌握了无菌操作的人员在一个有控制的环境中将培养基按工艺配制，并经除菌过滤后灌装于灭菌的容器中，并在适当条件下培养，确认没有菌生长，以证明无菌生产工艺的可靠性的过程。
本试验是在与无菌灌装生产过程有关的其他验证合格后，且操作人员熟练掌握了岗位操作规程后进行的。
培养基灌装作为无菌灌装的模拟实验，可以直观、方便、准确地反映出无菌灌装过程的污染情况及问题。
2 、验证目的通过无菌培养基灌装试验证明灌装用的安瓿瓶、过滤器、灌注器等的染菌率是否达到规定的合格标准，确认小容量注射剂车间的洁净环境及进行无菌灌装过程中所采用的各种防止微生物污染的方法和规程的可行性，从而为保证所生产产品的无菌性提供依据。
3、验证范围及要求本验证方案适用于新建或生产工艺进行过重大更改后的非最终灭菌小容量注射液的无菌灌装过程的验证。
必须经连续三批合格的培养基灌装试验后方可证明被验证工艺的可靠性。
不同批次的模拟灌装应在同一条生产线不同的工作日内进行。
如实际生产中有不同的班次，则应对实际生产操作的每个班次进行培养基灌装试验，每班次连续进行3次合格试验。
4、验证小组成员及职责4.1 验证小组成员验证小组成员组长姓名部门职务**** 质量部质量负责人组员姓名部门职务姓名部门职务**** 生产部总经理助理**** 质量部QA主管**** 生产部经理助理**** 生产部设备人员**** 质量部QC **** 质量部QC **** 质量部QC4.2 相关职责4.2.1 质量部QC、生产部：共同负责起草验证方案及报告，并实施验证方案。
4.2.2 设备组：负责协助制剂车间、质量部审核仪器、设备确认/检定情况。
4.2.3 QA主管：负责审核验证方案及报告，并监督验证方案的实施。
4.2.4 质量负责人：负责验证方案及报告的最后批准。
5 验证前提条件5.1 厂房和空调系统验证情况检查（1）目的：确认厂房和空调系统已完成验证。
（2）方法：检查培养基灌装所使用的厂房和空调系统的验证情况，检查是否有验证方案、验证报告，并查看验证结果，是否在有效期内。
（3）可接受标准：厂房和空调系统已完成验证，有相应的验证方案、验证报告，且验证结果符合规定。
5.2设备和公用系统确认情况检查（1）目的：确认验证用设备和公用系统已完成确认。
（2）方法：检查验证用的设备和公用系统的确认情况，检查是否有确认方案、确认报告，并查看确认结果，是否在有效期内。
（3）可接受标准：设备和公用系统已完成确认，有相应的确认方案、确认报告，且确认结果符合规定。
5.3人员和物料情况检查5.3.1人员（1）目的：确认人员的健康状况、无菌操作及更衣程序的培训情况是否符合要求。
（2）方法：检查操作无菌操作人员的健康档案和培训资料，检查操作人员的健康体检档案是否在有效期内，是否经过无菌操作和更衣程序的培训。
（3）可接受标准：有健康体检表，且在有效期内，有无菌操作和更衣程序培训资料，且考核合格。
5.3.2物料（1）目的：确认培养基灌装所用物料相关情况是否符合规定。
（2）方法：检查灌装用胰酪胨大豆肉汤培养基（TSB）、低硼硅玻璃安瓿瓶、工艺用水是否有检验报告或适用性检查报告，是否在有效期内。
（3）可接受标准：有相应报告，且在有效期内。
5.4检验用仪器确认情况检查（1）目的：确认检验用仪器已完成确认。
（2）方法：检查检验用仪器是否已完成确认，是否有确认方案、确认报告、并查看确认结果，是否在有效期内。
（3）可接受标准：有确认方案、确认报告、确认结果符合规定、且在有效期内。
5.5环境监测结果检查（1）目的：确认环境监测结果是合格的。
（2）方法：检查灌装前的环境监测情况，查看是否对相关房间进行环境监测，监测项目包括温度、相对湿度、悬浮粒子、沉降菌、风速、换气次数、压差，监测结果是否合格。
（3）可接受标准：已对相关房间进行相应的监测，且监测结果符合规定。
6 验证标准：培养基无菌灌装模拟试验合格标准为：6.1灌装数量小于5000支，不得检出污染品；6.2灌装数量在5000至10000支时：6.2.1有1支污染，需调查，可考虑重复试验；6.2.2有2支污染，需调查后，进行再验证。
6.3灌装数量超过10000支时：6.3.1有1支污染，需调查；6.3.2有2支污染，需调查后，进行再验证。
6.4发生任何微生物污染时，均应当进行调查。
6.5首次验证，应当连续进行3次试验，且均合格。
以后每半年进行1次，每次至少1批。
7 培养基适用性检查验证用培养基（胰酪胨大豆肉汤培养基），通过下述试验对培养基微生物生长性能进行确认。
根据培养基使用说明书要求称取适量培养基，再加对应量的纯化水，用玻棒搅匀后，加热至微温使其充分溶解，再按12ml/支分装于具塞试管中，按说明书要求进行灭菌。
7.1无菌性检查（1）方法：将上述培养基10支于23～28℃下培养7天，然后再于30～35℃下培养7天。
（2）合格标准：上述各管培养基培养过程的14天内均应无菌生长。
7.2灵敏度检查（1）方法：取上述培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另一支不接种作为空白对照，在30～35℃下培养3天；取上述培养基5支，分别接种小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2支，另一支不接种作为空白对照，23～28℃下培养5天。
逐日观察培养情况。
（2）合格标准：空白对照管应无菌生长，加菌的培养基管应均生长良好。
8、验证内容8.1取样及检测：8.1.1取样计划：监测项目取样方法取样频率取样要求安瓿瓶无菌检查随机灌装前、中、后每次取5支，并直接放入装有无菌培养基的三角烧瓶内。
操作人员无菌性检查棉签擦拭法：取经灭菌的棉签用无菌0.9%氯化钠溶液润湿后，用棉签在被取样操作人员的手套、口罩、洁净服前腹部、前臂、眼罩处各取2个点。
取样面积25cm2。
验证开始前，验证进行一半时间，验证结束后，分别对操作人员进行取样监测。
取样时，被取样的操作人员应离开灌装机，在灌装间的一角将双臂平伸，静止不动，取样人员按棉签擦拭取样法在最短时间内取样。
每次对同一操作人员进行取样监测时，其取样点应不相同。
灌装前培养基无菌性检查用无菌的具塞试管进行取样，每次取10管，每管约10ml。
分别从浓配罐、稀配罐、无菌储罐、灌装缓冲罐的取样口取样。
取样过程遵守无菌操作。
灌装过程灌装间洁净度监测按确定的取样点进行取样检测，A级区3个点，B级区4个点。
A、B级区沉降菌及A级区悬浮粒子、浮游菌检测必须贯穿整个灌装过程，B级区悬浮粒子为灌装前、中、后三个时段。
取样位置：A级区为出瓶口、灌装针头处、封口处。
B级区为灌装间的四个角落。
A级区共放置27个平皿，B级区共放置40个平皿。
装量检查随机取样20分钟每次取5支可见异物检查随机取样30分钟每次取20支表面微生物检查接触平皿法：取样面积一般约为25cm2，取样碟为Φ55mm接触碟。
取样时打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约10秒钟，再盖上碟盖。
灌装完成后，清场前。
对A级区的设备表面、B级区的墙面及地面进行取样，每个表面取2个点。
灌装后培养基促生长能力检查从灯检合格产品中随机抽取14支。
灯检结束后灌装后培养基无菌检查灯检合格的所有产品灯检结束后将所有灯检合格的产品，进行无菌检查。
8.1.2检测方法：（1）安瓿瓶无菌检查：方法：将上述取样的安瓿瓶直接放入装有无菌胰酪胨大豆肉汤培养基的三角烧瓶内，并做好标记，先后在23～28℃和30～35℃条件下各培养7天。
合格标准：应无菌生长。
（2）操作人员无菌性检查：方法：将经取样的棉签头剪断分别放入装有10ml生理盐水的试管中，充分振荡，再用薄膜过滤法进行微生物计数。
取经过滤的滤膜贴于胰酪胨大豆琼脂培养基平皿中，菌面朝上，在30～35℃条件下培养3天，对每个培养皿的菌落数进行计算。
合格标准：微生物数应≤1cfu/皿。
（3）灌装前培养基无菌性检查：方法：从每次取样的10支中，取其中2支，每支中加入小于100cfu的金黄色葡萄球菌作为阳性对照，其余8支作为供试品管，将上述所有培养基管先在23～28℃培养7天，再在30～35℃培养7天。
培养期间，第三天和第七天观察培养基的微生物生长情况，并且在检测期间的最后一天再观察一次。
合格标准：阳性对照管应菌生长良好，供试品管应无菌生长。
（4）灌装过程灌装间洁净度监测沉降菌：方法：开始灌装前，在灌装间内将沉降菌检测用胰酪胨大豆琼脂培养基平皿放置于检测点处，A级区共放置27个平皿，B级区共放置40个平皿。
以便进行沉降菌动态检测方法的验证。
待灌装进行3小时、4小时、5小时后，分别从每个检测点上取走3个平皿，做好标识，对放置不同时间的平皿进行菌回收率试验，以便验证沉降菌动态检测时，平皿放置的最长时间。
将相同放置时间的平皿中每个检测点取1个平皿作为供试品组；其余平皿中分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌，每种菌株平行接种2个平皿，作为试验组；取未经检测的2个平皿，作为阴性对照组，将上述所有平皿放置于30～35℃条件下培养3天，观察其菌落生长情况。
合格标准：供试品组：A级区应＜1cfu/4小时；B级区应≤5cfu/4小时；试验组应有菌生长，阴性对照组应无菌生长，且试验组的菌回收率应不小于70%。
悬浮粒子、浮游菌：方法：灌装过程中，应开启灌装机上的尘埃粒子计数器及浮游菌检测仪，时时对灌装区域的洁净度情况进行监测，直至灌装结束。
灌装过程的前、中、后，对灌装间的B级洁净区进行悬浮粒子检测，取样点为4个，每个取样点每个时段采样3次。