药敏纸片中药物含量标准
药敏实验纸片、染色液等产品参数要求
30ug∕片,20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
19
微生物药敏试纸（扩散法）红霉素
15ug∕片，20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
20
微生物药敏试纸（扩散法）氨曲南
30ug∕片,20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
21
微生物药敏试纸（扩散法（K-B
30ug∕片,20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
8
微生物药敏纸片（扩散法）奥扑托新
5ug∕片，20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
9
微生物药敏纸片（扩散法）环丙沙星
5ug∕片，20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
10
微生物药敏纸片（扩散法）庆大霉素
IOUg/片,20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
11
微生物药敏纸片（扩散法）头抱他咤
用于体外抗微生物药物敏感性试验
15
微生物药敏纸片（扩散法）红霉素
15ug∕片,20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
16
微生物药敏纸片（扩散法）左氧氟沙星
5ug∕片20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
17
微生物药敏纸片（扩散法）米诺环素
30ug∕片,20片/瓶
用于体外抗微生物药物敏感性试验
18
4
头的赈酮/舒巴坦药敏实验纸片（扩散法）
50片/筒X5筒
用于头孜哌酮/舒巴坦体外细菌敏感性检测
5
青寄素药敏实验纸片（扩散法）
5X50片/盒
用于脊得素体外细菌敏感性检测
6
氨曲南药敏实验纸片（扩散法）
纸片法抗菌药物敏感实验操作标准
纸片法抗菌药物敏感实验操作标准4.3 标准比浊管用硫酸钡比浊管（0.5麦氏比浊标准），标定接种菌液浓度。
比浊管制备方法如下：（1）0.048mol/L BaCl2，（1.175% w/v BaCl2·2H2O）0.5ml，加到99.5ml的0.18 mol/L（0.36N）H2SO4（1％v/v）溶液中，制成比浊管；（2）用光径为1cm的分光光度计测定光吸收来标定比浊管。
0.5麦氏标准比浊管在625nm波长的吸收光度应为0.08-0.1；（3）选管径与制备菌液试管相同的螺口试管，每管分装4－6ml；（4）将试管帽拧紧，放室温暗处保存；（5）用前，将比浊管在旋转振荡器上混匀。
如出现大颗粒，应更换；（6）每个月更换比浊管或复检比浊管的浊度。
5 操作步骤5.1 制备接种菌液5.1.1 增菌法步骤如下：（1）选琼脂平板上形态相同的菌落至少4－5个，用接种环挑其顶部，移至4－5ml肉汤或大豆酪蛋白消化液中；（2）置35℃培养至菌液浓度达到或超过比浊管浓度（一般需2－6小时），浓度约1－2×108CFU/ml；（3）用生理盐水或肉汤校正菌液浓度，与比浊管相同。
可用光电比浊。
目测比浊须在适当光照下以黑色线条为反衬。
5.1.2 直接菌悬液法步骤如下：（1）做常规药敏试验，可直接用过夜培养的菌落（必须用无选择性培养基平板，如普通琼脂培养基）在盐水或肉汤中制备接种菌液。
菌液浓度调至0.5麦氏管；(2)此法适用于在肉汤培养基中生长不好的细菌如嗜血杆菌、淋病奈瑟氏菌和链球菌及葡萄球菌的甲氧苯青霉素或苯唑青霉素的耐药试验；（3）当用此法做复方磺胺药的试验时，从平板上直接挑菌落时会携带相当量的拮抗剂，造成敏感菌株的抑菌环内出现轻微的生长菌膜。
5.2 接种平板步骤如下：（1）校正的菌液须在15分钟内使用。
用一无菌棉试子蘸取菌液并在上端管壁旋转挤压几次，去掉过多的菌液；（2）用试子涂布整个琼脂平板表面，反复涂布几次，每次将平皿旋转60度，保证涂布均匀。
药敏试验
判定标准
清晰无细菌生长的试管对应的药物浓度为该药
的MIC；
以MIC前2支试管液体涂培养基
培养 菌落少于5个的试管对应的药物浓度为该 药的MBC。
试 材
试管、移液管、营养琼脂和营养肉汤
方 法
（1）制备药液、菌液、培养基; （2）向第1支试管中加入0.9mL营养肉汤、其 余各试管中加入0.5mL； （3）向第1支试管中加0.1mL药液 取0.5mL 加到第2支试管中……至13支试管，取0.5mL涂 平板 向1-14试管中各加0.5mL菌液 培养。
耐药：直径＜10mm液、牛津杯、钢管放置器、陶瓦盖 步 骤 （1）制备菌液：106-7 （2）制备药液：1280μg/mL （3）制备培养基 （4）涂菌液 （5）放置牛津杯 （6）加菌液 （7）盖陶瓦盖 （8）培养 （9）量直径
三、液体试管二倍稀释法
药敏实验
一、药敏纸片法
试 材
培养皿、培养基、菌种（病料）、药敏片、 培养箱
方 法
（1）制备药敏片 （2）制备培养基：营养琼脂、营养肉汤 （3）涂菌：菌液105 CFU （4）贴药敏片 （5）培养:37℃ 24小时 （6）量直径：
判定标准
敏感：直径＞15mm
中度敏感： 10~15mm
常见药物对常见细菌药敏折点的参考值
DB34/T 3399—20199附 录 E（资料性附录）常见药物对常见细菌药敏折点的参考值表E.1 常用药物对气单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片药物 含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--表E.2 常用药物对假单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L） 纸片含量 （μg） 抑菌圈折点 （mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类 甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类 红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 18 15 四环素类 土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--DB34/T 3399—201910表E.3 常用药物对肠杆菌科细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 2 4 23.75/1.25 16 13 甲氧苄啶 2 4 5 18 15氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.25 2 10 23 16 环丙沙星 0.25 2 5 26 20酰胺醇类 甲砜霉素 4 8 30 17 17 氟苯尼考 2 8 30 19 14大环内酯类 红霉素 8 32 15 14 10 氨基糖甙类 新霉素 2 8 10 16 12四环素类土霉素 2 8 30 21 13 强力霉素（多西环素） 2 8 30 21 13β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 21 17 表E.4 常用药物对链球菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂 磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 1 2 23.75/1.25 18 15 甲氧苄啶 2 4 5 20 17氟喹诺酮类 恩诺沙星 0.5 2 10 24 18 环丙沙星 0.5 2 5 22 18酰胺醇类 甲砜霉素 2 8 30 22 18 氟苯尼考 2 8 30 24 18大环内酯类 红霉素 0.5 4 15 21 18 氨基糖甙类 新霉素 4 16 10 15 12四环素类土霉素 1 2 30 23 20 强力霉素（多西环素） 1 2 30 23 20β-内酰胺类 氨苄青霉素 0.25 1 10 22 18_________________________________。
药敏纸片的制备完整版
药敏纸片的制备HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法PBS的配制A.制备L储备液LNa2HPO4： +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水L NaH2PO4: +1000 mL蒸馏水或 +1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用L磷酸缓冲液的配制抗菌药物原液的配制和保存期限－20℃4℃抗菌药物溶剂浓度（?g/mL）青霉素 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类 PBS 1280 3个月4周四环素类 PBS 12803个月1周PBS 12803个月2周多粘菌素B硫酸盐PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用L乳酸溶解再用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸2560长期长期配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏试验判定标准
≤12 13-15 ≥16
75
≤15 16-20 ≥21
30
≤14 15-22 ≥23
-- -- ≥26
-- -- ≥31
≤25 26-27 ≥28
30
≤14 15-17 ≥18
≤23 24-27 ≥28
30
≤14 15-17 ≥18
-- -- ≥26
-- -- ≥31
30
≤14 15-19 ≥20
≤14 15-19 ≥20
头孢肤肟酯（口服） 头孢肤肟（西力欣） 测嗜血杆菌
测葡萄球菌
≤19 -- ≥20 测淋病奈瑟菌
测其他菌
≤13 14-17 ≥18
38
测嗜血杆菌
≤19 -- ≥20 氯碳头孢
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）100/10
拉氧头孢（噻吗灵）
纸片含量
抑菌环直径
ug/片
耐药 R 中介 I 敏感 S
抗生素
纸片含量
抑菌环直径
耐药 R 中介 I 敏感 S 针对病原菌
ug/片 耐药 R 中介 I 敏感 S
氟罗沙星
5
≤15 16-18 ≥19
6 7-9 ≥10 测淋病奈瑟菌
≤27 28-32 ≥33
≤12 13-14 ≥15 左旋氧氟沙星
5
≤13 14-16 ≥17
≤13 14-17 ≥18 测肺炎链球菌
测淋病奈瑟菌
测铜绿假单胞菌 测其他革兰氏阴性杆菌
≤13 14-16 ≤19 20-22
≥17 头孢美唑 ≥23 头孢哌酮（先锋必）
美洛西林
75
头孢噻肟（凯福隆）
测铜绿假单胞菌
≤15 --
≥16 测嗜血杆菌
药敏纸片的制备
药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。
通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。
一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。
药敏试验纸片法的抑菌范围解释标1
抗菌药物名称 含量ug/片 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌
ATCC25922ATCC25923ATCC27853
阿莫西林1019-2528-36——
舒普深（先锋必/舒巴坦）75/7528-3424-3323-29
吉他霉素（柱晶白霉素）15——22-30——
罗红霉素15——22-30——
新生霉素30≤1213-16≥17
多粘菌素B300≤88-11≥12
加替沙星5
测葡萄球菌≤1920-22≥23
测肠杆菌≤1415-17≥18
嗜血杆菌≥18敏感
头孢匹胺75≤1516-20≥21
交沙霉素15≤1314-22≥23
氟苯尼考30≤1213-17≥18
测嗜血杆菌≤2526-28≥29
测肺炎链球菌≤20--≥21
测产单核李斯特≤19--≥20
测嗜血杆菌≤1819-21≥22
测β-溶血性链球菌≤1819-25≥26
阿洛西林（Azlocillin）75
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
羧苄西林100
测铜绿假单胞菌≤1314-16≥17
测其他革兰氏阴性杆菌≤1920-22≥23
美洛西林75
测铜绿假单胞菌≤15--≥16
药敏试验纸片法的抑菌范围解释标准
杭州微生物试剂有限公司
抗生素 纸片含量 抑菌环直径
针对病原菌ug/片 耐药R中介I敏感S
抗生素 纸片含量 抑菌环直径
针对病原菌ug/片 耐药R中介I敏感S
β-内酰胺类
青霉素类
氨苄西林10
测肠杆菌科细菌≤1314-16≥17
测葡萄求菌≤28--≥29
测肠球菌≤16--≥17
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药敏纸片中药物含量标准
含量编号药物名称
(ug/片)
1 青霉素G纸片△10U
2 苯唑青霉素（新青霉素II）(苯唑西林钠) △ 1
3 氨苄青霉素纸片（氨苄西林）△10
4 羧苄青霉素纸片(卡比西林) △100
5 阿洛西林(苯咪唑青霉素) 75
6 美洛西林(硫磺苯咪唑青) 75
7 的卡西林(羧噻吩青) 75
8 氧哌嗪青霉素△(哌拉西林)(哌拉西林钠) 100
9 优立新(氨苄青/舒巴坦) (舒他西林) 10/10
10 特美汀(的卡西林/棒酸) 75/10
11 头孢氨苄(先锋IV) △30
12 头孢唑林(先锋V) △30
13 头孢拉定(先锋VI) △30
14 头孢羟唑（先锋孟多）30
15 头孢呋新（头孢呋辛钠）(西力欣)(头孢肤肟) △30
16 头孢西丁(美福仙) 30
17 头孢美唑(先锋密松) 30
18 头孢克罗(希刻劳) (头孢氯氨苄) 30
19 复达欣(头孢他啶) (头孢噻甲羧肟) △30
20 菌必治(头孢三嗪) (安塞隆)(头孢曲松钠) △30
21 先锋必素(头孢哌酮) (头孢氧哌唑) △75
22 凯福隆(头孢噻肟) (头孢氨噻肟) 30
23 盖保世灵(头孢唑肟) (头孢去甲噻肟) 30
24 噻吗灵(拉他头孢) (拉氧头孢钠) 30
25 舒普深(先锋必/舒巴坦) 75/75
26 头孢克肟(世福素) 5
27 丁胺卡那(阿米卡星) △30
28 庆大霉素△10
29 高浓度庆大霉素120
30 卡那霉素△30
31 链霉素10
32 高浓度链霉素300
33 妥布霉素10
34 新霉素△30
35 乙基西梭霉素(奈替米星) 30
36 四环素△30
37 强力霉素(多西环素) (脱氧土霉素) △30
38 美满霉素(二甲胺四环素)(米诺环素) △30
39 红霉素△15
40 乙酰螺旋霉素30
41 柱晶白霉素(吉他霉素) 15
42 克拉霉素(6-甲红霉素) (克红霉素) 15
43 阿奇霉素(泰力特) 15
44 萘啶酸30
45 麦迪霉素△30
46 吡哌酸30
47 氟哌酸(诺氟沙星) △10
48 氟啶酸(依诺沙星) 10
49 奥复星(氟嗪酸) △(氧氟沙星)(泰利比妥) 5
50 环丙沙星(奔克) △(悉复欢)(丙氟哌酸) 5
51 罗美沙星(洛美灵) (罗氟哌酸) 10
52 氟罗沙星(天方罗星) 5
53 洁霉素(林可霉素) 2
54 万古霉素△30
55 多粘菌素B△300ＩU
56 新生霉素30
57 磺胺甲基异恶唑300
58 复方新诺明( )△23.75/ 1.225
59 呋喃妥因(呋喃旦啶) 300
60 痢特灵△300
61 阿莫西林(羟氨苄青霉素) 10
62 利福平 5
63 氯霉素△30
64 氯洁霉素(克林霉素) △ 2
65 亚胺硫霉素(泰能) 10
66 美罗培南10
67 单环菌素(君刻单) (氨曲南) 30
68 灭滴灵(甲硝唑) 5
69 壮观霉素(淋必治) (奇霉素)(大观霉素) 100
70 二性霉素B 30
71 制霉菌素100
72 头孢噻吩(先锋I) 30
73 左氟沙星 5
74 罗红霉素15
75 替考拉宁30
76 磷霉素200
77 头孢吡肟(马斯平) 30
78 哌拉西林/他唑巴坦(特治星) 100/10
阿莫西林/棒酸(奥格门汀) (复方阿莫西林)(安灭
79
20/10
菌)
80 甲氧苄胺嘧啶(TMP) 5
81 恩诺沙星 5
82 氟康唑25
83 酮康唑15
84 伊康唑8
85 头孢噻肟+棒酸30/10
86 头孢他啶+棒酸30/10
87 头孢匹胺75
88 加替沙星 5
89 交沙霉素15
90 呋喃唑酮100
92 ONPG 80
93 新生霉素 5
94 杆菌肽0.04u
95 奥普托欣(optochin) 5
96 O/129 150
97 O/129 10
98 成套纸片10种
99 成套纸片20种100 成套纸片30种
102 氟苯尼考30
103 氟氧头孢30
104 培氟沙星10
105 帕珠沙星 5
标准：
1、用6mm的药敏制片。
2、每个纸片吸水量为50微升。
3、制备好应放置到4摄氏度冰箱保存3个月。
生物工程系实验中心制
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