应用高效液相色谱法测定预混料及多维中VB1、VB6

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高效液相色谱法在多种维生素药物检测中的应用

高效液相色谱法在多种维生素药物检测中的应用摘要目的：采用高效液相色谱法测定药物中多种维生素的含量。

方法：利用迪马C18色谱柱（250mm*4.6mm），以乙腈-甲醇-水（16:4:80）为流动相测定软胶囊药物中多种维生素的含量。

结论：该方法简便、准确、灵敏、重复性好，可作为该药质量控制方法。

关键词：高效液相色谱法，多种维生素，含量测定高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。

高效液相色谱法是目前在国外使用最普遍的测定维生素的方法，应用范围很广，灵敏度也高，具有样品前处理简单，样品用量少，分离速度快，可一次性分析多种维生素等优点。

1材料与试药1.1仪器分析天平（型号BP211D），由Sartorius生产高效液相色谱仪（型号LC-10ATvp），由日本岛津生产紫外-可见检测器（型号SPD-10A），由日本岛津生产色谱工作站（CS-Light），由日本岛津生产。

1.2试药多种维生素软胶囊样品，自制烟酰胺对照品试剂，由中国食品药品检定研究院生产维生素B1对照品试剂，由中国食品药品检定研究院生产维生素B2对照品试剂，由中国食品药品检定研究院生产维生素B6对照品试剂，由中国食品药品检定研究院生产。

2试验方法2.1色谱条件的优化①高效液相色谱法同时测定配方乳粉中7种脂溶性维生素，建立了高效液相色谱法（HPLC）同时测定配方乳粉中7种脂溶性维生素A、D2、E、K、叶黄素和胡萝卜素的方法，方法采用Poroshelll20SB-C18柱（150×4.6mm，2.7μm），以甲醇、乙腈、氯仿为流动相进行梯度洗脱，流速0.6Ml/min，25min内可对上述7种组分进行基线分离[1]；②利用高效液相色谱法同时测定食品中9种水溶性维生素，采用C18色谱柱进行分离，以pH2.5、25mmol/LKH2PO4-乙腈二元体系为流动相进行梯度洗脱，最后用高效液相色谱二极管阵列检测器对9种维生素进行测定[2]；③利用反相高效液相色谱法同时测定食品和多维片中8种水溶性维生素，建立了以0.05mol/LKH2PO4-甲醇为流动相的梯度洗脱反相高效液相色谱同时测定水溶性维生素C、B1、B2、B6、B12、烟酸、烟酰胺和叶酸的分析方法[3]；④复方卵磷脂多种维生素胶丸中烟酰胺、维生素B1、维生素B2、维生素B6、采用反相高效液相色谱法，色谱柱为汉邦C18色谱柱（250mm*4.6mm），流动相为：乙腈-甲醇-水（16:4:80），水中含2.5mmol/L庚烷磺酸钠和0.12%三乙胺（磷酸调节至pH2.5），流速1.5ml/min，柱温20℃，检测波长为273nm[4]。

超高效液相色谱法测定糜子中4种b族维生素

超高效液相色谱法测定糜子中4种b族维生素超高效液相色谱法测定糜子中4种B族维生素是指以超高效液相色谱（UPLC）为基础，利用其对有机物的快速分离和高灵敏度、高准确度的优势，测定糜子中四种B族维生素，即维生素B1（硫胺素）、维生素B2（核黄素）、维生素B6（吡哆醇）、叶酸。

超高效液相色谱法测定糜子中4种B族维生素的原理是：在特定的条件下将样品中的4种B族维生素经由超高效液相色谱装置快速分离，然后通过分光光度法或荧光检测法测定各种B族维生素的含量。

超高效液相色谱法测定糜子中4种B族维生素的步骤如下：1. 准备样品：将检测样品研磨粉碎，分析时每次加入0.1g的样品，用水稀释，使其质量浓度达到10mg/mL；2. 超高效液相色谱：将稀释后的样品用上述设备进行超高效液相色谱，以保证4种B族维生素的有效分离；3. 测定：根据超高效液相色谱的结果，采用分光光度法或荧光检测法，测定样品中维生素B1、维生素B2、维生素B6和叶酸的含量；4. 结果分析：将测量得到的各种B族维生素的质量浓度进行统计分析，得出糜子中4种B族维生素的含量。

超高效液相色谱法测定糜子中4种B族维生素的优点：1. 测定速度快：超高效液相色谱法可以同时分离出4种B族维生素，大大缩短了检测的时间；2. 测定精度高：超高效液相色谱法具有较高的灵敏度和准确度，能够精确测定4种维生素的含量；3. 操作方便：超高效液相色谱法的操作比较简单，不需要复杂的仪器设备，且操作步骤也比较简单易懂。

超高效液相色谱法测定糜子中4种B族维生素的缺点：1. 仪器成本较高：超高效液相色谱仪器较昂贵，而且维护费用较高；2. 样品准备复杂：样品的准备工作较复杂，需要经过多次洗脱才能达到良好的效果；3. 分析结果受干扰：分析过程中受到温度、pH等因素的影响，可能会对分析结果产生一定干扰。

总之，超高效液相色谱法测定糜子中4种B族维生素是一种快速、准确、高效的检测方法，能够有效提高检测效率，易于操作，但仪器成本较高，样品准备复杂，分析结果受干扰。

反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定多维片中5种主药的含量

冯英明，蒋锋
２１４２００）
（江苏鹏鹞药业有限公司，江苏宜兴
摘要：建立ＲＰ－ＨＰＬＣ法测定多维片中维生素Ｂ１（ＶＢ１）、维生素Ｂ２（ＶＢ２）、维生素Ｂ６（ＶＢ６）、维生素Ｃ（ＶＣ）和烟酰胺５种主药的含量。色谱柱为安捷伦的Ｃ１８柱，以甲醇一乙腈一缓冲盐（体积比为ｌｌ：儿：７８）为流动相，检测波长２１０ｎｍ，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，测定多维片中主药的含量。结果显示各组分和辅料能够达到完全分离，分离度均大于２．０；ＶＢ１，ＶＢ２，ＶＢ６，ＶＣ和烟酰胺在质量浓度范围内具有良好的线性关系，，．均能达到０．９９９，平均回收率分别为９８．８，９９．５，９９．１，９９．２和９９．９％（一９），ＲＳＤ均小于２．０。可见用所建立的分析方法测定多维片中５种主药的含量，结果
Ｖｏ１．２２ＮＯ．２
Ｏｌ３Ｊｕｎ．２
２Ｏ１３年６月
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２ — ６６８５．２０１３．０２．０１６
反相高效液相色谱（ＲＰ — ＨＰＬＣ）法测定多维片中５种主药的含量
ｃｅｉｖｅｄｔｈａｔｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄｉｔｃａｎｂｅｕｓｅｄａｓｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｆｏｒｔｈｅｄｅ — ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｖｉｔａｍｉｎｔａｂｌｅｔｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｕｌｔｉｖｉｔａｍｉｎｔａｂｌｅｔｓ；ＨＰＬＣ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ

高效液相色谱法同时测定复合维生素B注射液中4种维生素的含量

高效液相色谱法同时测定复合维生素B注射液中4种维生素的含量陆春波;穆琳;蔡文金【摘要】建立了复合维生素B注射液中4种维生素的含量测定方法。

采用高效液相色谱法，以甲醇和三乙胺-冰醋酸-甲醇-0．015 mol/L庚烷磺酸钠（0．2∶7．5∶75∶820）为流动相进行梯度洗脱，流速1．0 mL/min，检测波长为280 nm，柱温30℃，进样量20μL。

结果表明，核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素B6、维生素B1分别在10～100、150～1500、10～100、100～1000μg/mL范围内线性良好，相关系数R2均为1．0000；平均回收率为99．5％～100．6％。

本方法操作简便、结果准确可靠，可用于复合维生素B注射液中核黄素磷酸钠、烟酰胺、维生素B6、维生素B1含量的同时测定。

%A method for assaying four vitamins of compound vitamin B injection was established by high performance liquid chromatography method, the mobile phase consisted of methanol and triethylamine-acetic acid-methanol-0.015 mol/L sodium heptanesulfonate (0.2 ∶ 7.5 ∶ 75 ∶ 820). The flow rate was 1.0 mL/min and the detective wavelength was 280 nm. The method proved to be linear in a range of 10~100 μg/mL、150~1500 μg/mL、10~100 μg/mL、100~1000 μg/mL for riboflavin sodium phosphate, nicotinamide, VitB6 and VitB1 , respectively. The correlation coefficients were all 1. 0000. The average recovery rates were 99.5%~100.6%. The method was simple, accurate, and can be used for the determination of content of four vitamins of compound vitamin B injection.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】4页(P43-46)【关键词】复合维生素B注射液;维生素;高效液相色谱法【作者】陆春波;穆琳;蔡文金【作者单位】浙江省兽药饲料监察所，杭州310020;浙江省兽药饲料监察所，杭州310020;浙江省兽药饲料监察所，杭州310020【正文语种】中文【中图分类】S859.2复合维生素B注射液为复方制剂，主要用于防治维生素缺乏所致的多发性神经炎，消化障碍，癞皮病，口腔炎等。

DB37T 2140-2012 预混合饲料中维生素B1、B2、B6和烟酰胺的同步测定高效液相色谱法.pdf

ICS65.120B 46 DB37 山东省地方标准DB 37/ T 2140—2012预混合饲料中维生素B1、B2、B6和烟酰胺的同步测定高效液相色谱法Determination of vitamin B1、B2、B6 and niacinamide in feedHigh performance liquid chromatography2012-05-14发布2012-07-01实施前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。

本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会提出并归口。

本标准起草单位：山东省饲料质量检验所。

本标准主要起草人：强莉、李桂华、刘雪芹、李俊玲、战余铭、张玮、王现杰。

预混合饲料中维生素B1、B2、B6和烟酰胺的同步测定高效液相色谱法 1 范围本标准规定了用高效液相色谱仪同步测定预混合饲料中维生素B1、维生素B2、维生素B6和烟酰胺的方法。

本标准适用于维生素预混合饲料和复合预混合饲料中维生素B1、维生素B2、维生素B6和烟酰胺的测定。

本方法最低定量限维生素B1、维生素B6、烟酰胺为40 mg/kg，维生素 B2为10 mg/kg。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 20195 动物饲料试样的制备3 原理试料中的维生素B1、维生素B2、维生素B6和烟酰胺用盐酸溶液提取、过膜后，在高效液相色谱反相柱上分离，紫外检测器280nm处测定，外标法定量。

4 试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂，水符合GB/T 6682一级水的规定。

试剂包括：a)乙腈：色谱纯；b)三氟乙酸：色谱纯；c)冰乙酸：优级纯；d)盐酸；e)氢氧化钠；f)盐酸溶液：c(HCl)=0.5 mol/L。

高效液相色谱法测定预混料中维生素的研究

高效液相色谱法测定预混料中维生素的研究作者：王晓峰来源：《价值工程》2015年第07期摘要：本文就如何通过高效液相色谱，测定预混合饲料中的维生素，作了一些探讨。

并得出以下结论：检测器选用紫外检测器；色谱柱可使用C18柱；对于流动相，用90﹪甲醇作为测定脂溶性维生素的流动相，用超纯水作为测定水溶性维生素的流动相；对于检测波长，脂溶性维生素用275nm，水溶性维生素用254nm；柱温20℃-30℃；流速1ml/s；pH4.5。

检测脂溶性维生素直接用甲醇溶解提取，水溶性维生素也可直接用超纯水溶解提取。

Abstract： The thesis researches the Vitamin by HPLC. The conclusion： choose UV-detector；use C18 column； flowing phase： 90﹪ methyl alcohol for fat soluble Vitamin； ultrapure water for water soluble Vitamin. UV detection wavelength： 275nm for fat soluble Vitamin， 254nm for water soluble Vitamin； column temperature 20℃-30℃； flow rate： 1ml/s； pH4.5； dissolve and abstract fat soluble Vitamin by methyl， dissolve and abstract water soluble Vitamin by ultrapure water.关键词：高效液相色谱；维生素；水溶性；脂溶性；检测Key words： HPLC；vitamin；water soluble；fat soluble；test中图分类号：Q56 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2015）07-0284-020 引言维生素预混料主要是由载体沸石粉和谷糠等，并添加少量的各单体维生素混合而成的。

高效液相色谱法测定保健品中的6种水溶性维生素及咖啡因

高效液相色谱法测定保健品中的6种水溶性维生素及咖啡因吴淑君;庄志辉;朱孟丽;徐小艳【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2006(24)3【摘要】维生素B1（VB1）、维生素B6（VB6）、烟酸、烟酸胺、核黄素（VB2）等B族维生素和维生素C（VC）、咖啡因已被作为功效成分添加于保健品中。

目前国家标准规定的方法（GB／T 5009．197-2003）只能测定保健品中的VB1、VB6、烟酸、烟酰胺、咖啡因，且需以硫酸月桂酸钠、1-癸烷磺酸钠等贵重离子对试剂为流动相；检测VB1时所用流动相和其他几种维生素不同，需更换流动相重新进样分析，增加了分析时间和检测费用。

本文采用高效液相色谱法，一次进样同时分析VB1、VB2、VB6、烟酸、烟酰胺、Vc、咖啡因等7种成分。

方法的重现性好、灵敏度高、成本低、简单快速，能满足实际检测的需要。

【总页数】1页(P319-319)【作者】吴淑君;庄志辉;朱孟丽;徐小艳【作者单位】广州市农业标准与监测中心,广东,广州,510308;广州市农业标准与监测中心,广东,广州,510308;广州市农业标准与监测中心,广东,广州,510308;广州市农业标准与监测中心,广东,广州,510308【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.高效液相色谱法测定九合维生素丸中水溶性维生素 [J], 顾鑫荣;张晓凡;董广彬;李鹏2.反相高效液相色谱法测定食品中水溶性维生素的含量 [J], 李来生; 张江华3.反相高效液相色谱法测定食品中水溶性维生素的含量 [J], 李来生; 张江华4.超高效液相色谱法测定保健食品中的多种水溶性维生素 [J], 蒲明清;戴舒春;张连龙;周华生;成恒嵩5.同位素稀释—超高效液相色谱—串联质谱法测定婴幼儿奶粉中水溶性维生素 [J], 黄水林;何明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

反相高效液相色谱法同时测定功能饮料中六种B族维生素

反相高效液相色谱法同时测定功能饮料中六种B族维生素徐烨;顾鑫荣;王瑞菲;曹轶男【摘要】提出了反相高效液相色谱法同时测定功能饮料中6种B族维生素,维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、烟酰胺和泛酸的方法.对色谱分离条件做了试验并予以优化.以Kromasil C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm)为分离柱,用甲醇(A)和0.3%(体积分数)三乙胺溶液(B)(磷酸调节pH至3.5)以不同比例混合进行梯度淋洗,选择在200 nm波长处测定泛酸,在270 nm波长处测定其他5种B族维生素.6种B族维生素的质量浓度在0.5～100 mg·L-1范围内与其峰面积呈线性关系.标准加入回收率在97.8%～106.2%之间,相对标准偏差(n=5)在0.5%～2.3%之间.【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2010(046)005【总页数】4页(P497-499,502)【关键词】反相高效液相色谱;功能饮料;B族维生素【作者】徐烨;顾鑫荣;王瑞菲;曹轶男【作者单位】东北大学理学院,沈阳,110004;东北大学理学院,沈阳,110004;东北大学理学院,沈阳,110004;东北大学理学院,沈阳,110004【正文语种】中文【中图分类】O657.62功能饮料是近年来出现的新型饮品,由于许多功能饮料中添加了B族维生素,使其越来越受到人们的青睐。

B族维生素是水溶性维生素中重要的一类,与酶类一起参与肌体的新陈代谢,能使肌体的机能得到有效的调节,当人体中缺乏B族维生素时,可导致多种疾病的产生。

由于人体自身无法合成这些化合物,适当饮用功能饮料可给予一定的补充。

功能饮料中维生素的含量是影响其功能的主要因素,因此建立功能饮料中B族维生素的测定方法是非常必要的。

目前B族维生素的测定方法有电化学法[1]、微生物法[2]、荧光法[3]、光度法[4]和高效液相色谱法[59](HPLC)。

由于药物中B族维生素的含量较高,而食品中B族维生素的含量较低,要求测定方法的检出限低。

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检测
昊淑君：用高效液相色谱法州定预混料及罗雏中ＶＶ应Ｂ、Ｂ
２２试剂．
表２标准数据
维生素Ｂ、，Ｂ标准晶甲醇（色谱纯）乙晴（、色谱纯）乙酸（Ｒ）酸、Ａ磷二氢钾（Ｒ、Ａ）戊烷磺酸钠、去离子水。３测定方法
作同样品测定
１７计算
５ｉ，Ｉｎ冷却后在５０ｍ处测定光密度０Ｉ值ｎ３ｎ）
２５３空白测定．
ＣＭＣ酶活力单位＝Ｂ／． “ ／３ｒｎ－０ＸＪＯ５ｇ・０ｉ５ ℃ ｒａ
式中：一一从标准曲线中查得的净葡萄糖毫克数．ｇＢｍ；ｎ一酶液稀释倍数；０５．——测定时吸取稀释酶液毫升数．。ｍＩ
Ｂ－为白色粉末状固体，羟二极管阵列检测器
性好，回收率高、准确度和精确度均能满足分析要求扫描、确定Ｂ、在波长２０ｍ下有较强的收，采－８ｒｉ因此用反相色谱柱和二极管阵列检测器，可以得到良好的ＨＬＰｃ分离色谱图，利用外标法定量测定．．
２５测定方法．
作为底物的羧甲基纤维索钠，滤纸生产家不同，测定酶活时，果也相『有时相差【较大因结司，乜
此，出酶活力结论时，得应注明底物产地纤维素酶是一种微生物恬性制剂．对温度，它酸度十分敏感，不同菌株生产的纤维素酶最适作用【ＪＨ值，最佳作用温度有所不同，测定疗法有待进一步探讨。Ｉ责任编辑陈广鹏）
２滤纸法
吸取４Ｏｌ．ｍ蒸馏水代替４０．酶液，它操作同样其
品测定。２６计算，
滤纸酶活力（Ｂ＝ｎ４５×ｌｍ／・２ｈ－Ｆ）Ｂ／／ｇ４醋酸钠（Ｒ；Ａ）冰醋酸（Ｒ）甲苯（Ｒ；Ａ；Ａ）
是赦君，州市饲料挂刮站，１４０广东省广州市新广５０４，
２仪器及试剂
２１仪器．
广从公路永泰路段东方商住域Ｄ２五楼。００８０９５。（２）６５４７
收稿日期：０２—０２０１一ｏ４
Ａｌｎ１０系列高效液相色谱仪及ＡｌｎｇｅｔＩ０ｉｇｅｔｉｌ００化学工作站、１超声波振荡器
同ＣＭＣ法同ＣＭＣ法
２５１酶液制备２５２样品测定．
目前预混料及多维中维生素Ｂ、检测的国标方等优点，特别是在同一条件下一针进样，能同时检测．法为荧光法，荧光法存在操作繁琐、重现性差的缺出Ｂ、－含量。Ｂ点。方法采用高效液相色谱法检测Ｂ、具有特异１检测原理本－Ｂ，性强、灵敏度高，简便快速，易掌握，容测试数据重现
４ ℃ ０
２１试剂．
氢氧化钠（Ｒ；Ａ）酒石酸钾钠（Ｒ；Ａ）苯酚（Ｒ）亚硫酸式中：—— 从标准曲线上查得的净葡萄糖毫克数．；Ａ；Ｂ钠（）３５ＡＲ；，一二硝基水杨酸（Ｒ）新华５号滤纸。Ａ；
２２主要仪器．２３试剂配制同ＣＭＣ法ｎ —— 酶液稀释倍数；４５／ —— ５反应液中舍４ｌｍＩｍ酶液；ｌ —— 吸取１ｌｍ酶解液进｛测定、３讨论
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《儡料工业》一０２年舞２２０３麓第４
饲料
度计５０ｍ处比色测定Ｏ３ｎＤ值，
ｌ６４空白测定．
精确吸取４Ｏｌ液和１Ｏ］冲液于试管中，．ｒ酶ａ．ｉ缓ｎ
加人新华５号滤纸条一条，滴人甲苯２～３滴防腐，
吸取滤纸酶解液１Ｏｉｌｎ，Ｄ蒸馏水Ｉ５ｌｌｉ．ｍ，加３，５一二硝基水杨酸溶液２５１于试管中．沸水浴煮沸．１
０ｃ４另取小试管加援甲基纤维素钠２０ｌ加人４ｏ静止反应２ｈ．ｍ，先
２５１，一二硝基水杨酸，．ｍ３５再加酶液０５］其它操．ｍ，
２３１０Ｉｏ／ｐ４６酸一醋酸钠缓冲液．，ｔｌ１Ｈ．醋ｏ准确称取醋酸钠（ＨＣＯａ－ＨＯ）．０Ｃ３ＯＮ３６７ｇ和冰醋酸２６ｒ，．Ｏｌ以蒸馏水溶解，ａ定容至１００ｌ０ｍ
２３２３５，．，～二硝基水杨酸显色液配制同ＣＣ法。Ｍ２３３新华５号滤纸剪成ｌｌｘｅ纸条。．．１３ｒｃ１ａ２４标准曲线绘制．
离子水：乙晴：乙酸＝９０５：０４：０１Ａ：（ｍ５Ｍ＋５ｒｍ戊烷磺酸钠ＫＯ０ａＨＰ
水溶液用１Ｉ酸溶液调至ｐ：磷Ｈ＝３０。．）Ｂ甲醇：３２标准配制．３７回收率试验．采用标准加入法，取束检出含Ｂ、的苜蓿草１Ｂ储备液：４ｍ／ｌ称取标准００４０用０３００ｇｍ，．３ｇ粉，定量添加Ｂ、后再进行检测，－将检测值除以实提取液定容至１０。０计算回收率，具体操作同样品配制，测得回Ｂ储备液：２ｍ／ｌ称取标准００２０用际添加值，０３０Ｏｇｍ，３ｇ提取液定容至１０。０ｍｌ收率结果参见表３表４一