MALDI_TOF_MS测定天然白芨多糖相对分子质量的研究_程安媛
白芨多糖含量标准
白芨多糖含量标准白芨多糖是一种天然的多糖类化合物，具有多种生物活性和药理作用。
其含量标准是衡量白芨多糖质量的重要指标之一。
本文将从以下几个方面详细介绍白芨多糖含量标准。
一、什么是白芨多糖？白芨（学名：Anemarrhena asphodeloides Bunge）是一种常见的中药材，主要分布于我国东北、华北、西北等地区。
其根茎中含有大量的生物活性成分，其中最重要的就是多糖类化合物——白芨多糖。
二、白芨多糖的生物活性和药理作用1. 抗氧化作用：白芨多糖能够清除自由基，保护细胞免受氧化损伤。
2. 免疫调节作用：白芨多糖能够增强机体免疫力，促进淋巴细胞增殖和分泌免疫因子。
3. 抗肿瘤作用：白芨多糖能够抑制肿瘤细胞生长和转移，并促进肿瘤细胞凋亡。
4. 降血糖作用：白芨多糖能够促进胰岛素分泌和细胞对葡萄糖的摄取，从而降低血糖水平。
5. 保护神经系统作用：白芨多糖能够改善神经细胞的代谢状态，促进神经元生长和修复。
三、白芨多糖含量标准的制定1. 国家标准：目前我国已经制定了《中药材白芨的质量标准》（GB/T 18756-2018），其中规定了白芨多糖的含量为不少于10%。
2. 行业标准：除了国家标准外，行业协会也会制定相应的标准。
例如，中国药学会中药分会曾经发布过《中药材白芨质量控制技术规范》（YBZ 0033-2006），其中规定了白芨多糖的含量为不少于8%。
3. 企业标准：一些生产企业也会根据自身需要和实际情况，制定相应的企业标准。
这些标准通常比国家和行业标准更为严格，以确保产品质量。
四、影响白芨多糖含量的因素1. 品种：不同品种的白芨多糖含量有所差异。
一般来说，野生白芨的多糖含量要高于人工栽培的白芨。
2. 产地：生长环境也会影响白芨多糖的含量。
一些地区的土壤和气候条件更为适宜白芨生长，因此其多糖含量也更高。
3. 采收时间：白芨多糖的含量会随着采收时间的不同而发生变化。
一般来说，春季采收的白芨多糖含量最高，夏季次之，秋季最低。
MALDI-TOF-MS测定天然白芨多糖相对分子质量的研究
１ 实 验 部 分
间质 谱 （ ＭＡＬ — ＤＩ ＴＯＦ ＭＳ 简 称 飞行 时 间 质 谱 ， — ） 应
用 脉 冲式 激 光 ， 一种 通 过 离 子 的飞 行 时 间来 测 定 是
其荷 质 比的 软 电 离 生 物 质 谱 技 术 。ＭＡＬ ＩＴＯＦ Ｄ— —
减 少对 多糖 测定 的影 响 。样 品制备 时采 用 自然液滴 干燥 法 ， 基质 与 样 品 的 比例针 对 所 测 的多 糖 的相对 分 子质 量大 的原 因适 当增 加 了基 质 比例 ， 采用 Ｄ 一 ＨＢ 样 品为 １ ５： 测 定 ， 传 递 能量 的过 程 中使 电离 产 ． １ 在 生 的碎 片减 少 ， 能较理 想 的解离 形成 ［ Ｍ＋Ｈ］ 。
有 抗溃 疡 、 消化道 出血 、 防肠 粘连 、 工栓 塞 、 抗 预 人 抗
肿 瘤等 广泛 的药 理作 用 口 。 为植 物 多糖 ， ］作 白芨 多 糖 具有 多 分 散性 ， 相 对 分 子 质 量大 小 及 分 布 是 影 响 其
其 生物 活 性 的 重要 因素 ［ ， ２ 准确 测 定 其 相 对 分 子 质 ］ 量具 有重要 的意义 。基 质辅 助 激光 解 吸 电离飞 行 时
维普资讯
中草药 Ｃ ｉ ｓ Ｔ ａｉｏ ａ ａｄ ｅｂｌ ｒｇ 第３ ｈ ｅｅ ｒｄｔ ｎｌ ｎ ｒａ Ｄ ｕｓ ｎ ｉ Ｈ ９卷第 ６ ０８ 期２０ 年６月
。 １ ８ ７。
Ｍ ＡＬＤＩＴ — — ＯＦ ＭＳ测 定 天 然 白芨 多 糖 相 对 分 子 质 量 的 研 究
中图分类号 ： ３．１ Ｒ９ １ ７ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ２ ３ ２ ７ （ ０ ８ ０ — ８ ７一 ３ ０ ５ — ６ ０ ２ ０ ） ６ ０ １ Ｏ
白芨多糖的提取与除蛋白研究
白芨多糖的提取与除蛋白研究韩欣;王文苹;隋宏;刘艳华【期刊名称】《宁夏医科大学学报》【年(卷),期】2013(035)005【摘要】目的考察中药白芨的多糖含量与提取工艺,为其开发利用奠定基础.方法运用水提醇沉法提取白芨粗多糖,三氯乙酸法除去粗多糖中的蛋白.分别运用苯酚-硫酸法和Bradford法测定多糖和蛋白的含量.结果测得白芨粗多糖提取率34.70%,所得提取物多糖含量为67.61%,三氯乙酸法的脱蛋白率为75.86%,多糖损失率为0.015%.结论白芨中含有大量多糖,值得深入研究开发.%Objective To investigate the extraction methods and content of polysaccharide in Bletilla striata ( Thunb )Reichb. f. and to lay the foundation for polysaccharide exploitation and utilization. Methods Bletilla striata crude polysaccharide was extracted by water extraction and alcohol precipitation method . The protein was removeed from the crude polysaccharide by trichloroacetic acid. The contents of polysaccharide and protein were determined by phenol - sulphuric acid method and Bradford method respectively. Results The extraction ratio of Bletilla striata was 34. 70% . The polysaccharide concentration of Bletilla striata crude polysaccharide was 67. 61% . The ratio of protein removing was 75. 86% and the ratio of polysaccharide loss was 0. 015% . Conclusion There is a lot of polysaccharide in Bletilla striata and it is worthy of research and development deeply.【总页数】3页(P536-538)【作者】韩欣;王文苹;隋宏;刘艳华【作者单位】宁夏医科大学药学院,银川750004;宁夏医科大学药学院,银川750004;宁夏回药现代化工程技术研究中心,银川750004;宁夏医科大学宁夏医药研究所,银川750004;宁夏医科大学药学院,银川750004;宁夏回药现代化工程技术研究中心,银川750004;宁夏医科大学宁夏医药研究所,银川750004;宁夏医科大学药学院,银川750004;宁夏回药现代化工程技术研究中心,银川750004;宁夏医科大学宁夏医药研究所,银川750004【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.白芨多糖提取工艺的研究进展及其在食品中的应用 [J], 商晋2.白芨多糖提取工艺的研究进展及其在食品中的应用 [J], 商晋;3.响应面优化白芨水溶性多糖提取工艺的研究 [J], 唐森; 梁冰娜; 覃逸明; 吴国勇; 张鹏4.白芨多糖的超声辅助提取工艺及抗氧化活性研究 [J], 吴梦晴5.白芨多糖提取纯化新工艺的研究 [J], 雷燕妮;张小斌;李多伟;杨梅;陈冬平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
天然高分子白芨多糖在药物制备中的应用
时间较正常大鼠胃内滞留时间长 ,其黏附性与白芨多 糖的浓度呈正相关 ,为白芨多糖作为一种新型的胃黏 附载体材料提供了实验依据 。彭锐等 [ 6 ]以明胶和白芨 胶为支架材料 ,加入黄连 、丹参等中药提取物 ,通过冷 冻干燥法制备成具有抗菌消炎 、止血镇痛和促进伤口 愈合等多种功效的明胶 /白芨胶载药多孔材料 ,结果显 示明胶 /白芨胶载药多孔材料具有较好的抑菌作用 。 薛春兰等 [ 7 ]用白芨胶和聚乙烯醇按不同质量比分别制 得氢溴酸后马托品眼用膜 ,以 2%氢溴酸后马托品眼液 为对照 ,结果表明 ,白芨胶 - 聚乙烯醇载药膜质地柔 软 ,散瞳效果理想 ,可减少药液流失 ,形成不易流失的 黏稠状液体 ,能较长时间停留在眼结膜囊中 ,并缓慢释 放出药物作用于睫状肌 ,使药物在眼结膜囊中维持较 久的高浓度 ,克服了常用的成膜材料聚乙烯醇 ( PVA ) 单独应用易引起的异物感等缺陷 。
白芨多糖在开发新型制剂方面有广阔的前景 ,如 食品增稠剂 、稳定剂 、可降解包装材料 、创伤辅料 、可降 解支架材料等 。目前应重点研究白芨多糖提取纯化工 艺 、改性修饰路线 ,制定法定标准 ,规范白芨多糖原料 级别标准 ,为白芨多糖应用提供技术保证 。
参考文献
1 刘逢芹 , 夏丽娅. 中药白芨的现代研究概况. 山东医药工 业 , 2000, 19 (5) : 32 - 33.
2 在抗肿瘤治疗中的应用
白芨多糖在体内可生物降解 ,经肝脏代谢水解为 CO2 和 H2O ,同时白芨多糖遇水膨胀可作为血管栓塞剂 栓塞 200～400μm以下的血管 ,最远可达 20～50μm 的
作者简介 :赵文昌 ,制药高级工程师 , Tel: 13688915769, E2mail: zhaowenchang@126. com 2
白芨多糖实验报告
一、实验目的1. 提取白芨多糖，并对其进行鉴定。
2. 研究白芨多糖的生物学活性，包括抗炎、促凝血、抗病毒、抗肿瘤和抗氧化作用。
3. 探讨白芨多糖在医药领域的应用前景。
二、实验材料1. 白芨药材：购自当地药材市场。
2. 乙醇、丙酮、氯仿、苯酚、硫酸、氢氧化钠等化学试剂：市售分析纯。
3. 药用植物提取设备：高速万能粉碎机、回流提取装置、旋转蒸发仪、离心机等。
4. 生化试剂：电导率仪、碱性磷酸酶测定试剂盒、病毒感染性测定试剂盒、肿瘤细胞增殖抑制试剂盒等。
5. 细菌和病毒：大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、HIV病毒、肿瘤细胞等。
三、实验方法1. 白芨多糖提取（1）将白芨药材粉碎成粗粉，过40目筛。
（2）采用水提醇沉法提取白芨多糖：将粗粉加入适量蒸馏水，加热回流提取2小时，过滤，滤液浓缩至一定体积。
（3）向浓缩液中加入一定量的95%乙醇，静置过夜，过滤，滤饼用蒸馏水洗涤，得到白芨多糖粗品。
（4）将粗品用氯仿-甲醇溶液进行重结晶，得到白芨多糖纯品。
2. 白芨多糖鉴定（1）紫外光谱法：测定白芨多糖在可见光区的吸收光谱，与标准图谱进行比对。
（2）红外光谱法：测定白芨多糖在红外光区的吸收光谱，与标准图谱进行比对。
（3）核磁共振波谱法：测定白芨多糖的核磁共振波谱，与标准图谱进行比对。
3. 白芨多糖生物活性研究（1）抗炎活性：采用小鼠耳肿胀法检测白芨多糖的抗炎活性。
（2）促凝血活性：采用小鼠凝血时间法检测白芨多糖的促凝血活性。
（3）抗病毒活性：采用HIV病毒感染细胞法检测白芨多糖的抗病毒活性。
（4）抗肿瘤活性：采用肿瘤细胞增殖抑制法检测白芨多糖的抗肿瘤活性。
（5）抗氧化活性：采用DPPH自由基清除法检测白芨多糖的抗氧化活性。
四、实验结果与分析1. 白芨多糖提取通过水提醇沉法提取，得到白芨多糖粗品，经重结晶得到纯品，纯度为95%。
2. 白芨多糖鉴定紫外光谱、红外光谱和核磁共振波谱结果表明，提取得到的白芨多糖与标准图谱一致，证明其结构为甘葡聚糖。
白芨多糖结构
白芨多糖结构白芨多糖是一种由白芨植物中提取得到的多糖，具有多种生物活性和药理作用。
本文将围绕白芨多糖的结构、生物活性、药理作用等方面展开探讨。
白芨多糖是一种具有多糖结构的天然产物，主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖等单糖组成。
其结构特点是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的长链状结构。
这种结构特点使得白芨多糖具有很强的稳定性和生物活性。
研究表明，白芨多糖具有多种生物活性。
首先，它具有很强的免疫调节作用。
白芨多糖可以增强机体免疫功能，促进巨噬细胞的活化和增殖，提高机体对病原微生物的抵抗能力。
其次，白芨多糖还具有抗氧化作用。
它可以清除体内的自由基，减轻氧化应激反应，保护细胞免受损伤。
此外，白芨多糖还具有抗肿瘤、抗炎、抗衰老等多种生物活性。
白芨多糖的药理作用也引起了广泛的关注。
研究发现，白芨多糖可以通过多种途径发挥药理作用。
首先，它可以激活机体的免疫系统，增强机体的抗病能力。
其次，白芨多糖还可以调节机体的内分泌系统，改善机体的代谢功能。
此外，白芨多糖还可以抑制炎症反应，减轻炎症症状。
最重要的是，白芨多糖还具有抗肿瘤作用，可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散。
白芨多糖在临床上的应用也日益广泛。
目前，已有很多研究证实，白芨多糖可以作为一种抗肿瘤药物使用。
它可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，减轻肿瘤的恶化程度。
此外，白芨多糖还可以作为一种免疫调节剂使用，用于改善机体的免疫功能。
同时，白芨多糖还可以用于治疗炎症性疾病，如关节炎、糖尿病等。
白芨多糖是一种具有多糖结构的天然产物，具有多种生物活性和药理作用。
它可以增强机体免疫功能，抑制肿瘤细胞的生长和扩散，减轻炎症反应等。
因此，白芨多糖在医药领域具有广阔的应用前景。
不过，需要进一步的研究来揭示其准确的作用机制和临床应用价值，为人类健康做出更大的贡献。
白芨多糖提取方法的优选及其理化性质研究
用水提法 、 碱 水提 法 、 纤维素酶解法 、 超声波法进行提取 ； 采用 分 光 光 度 法 测 定 多 糖 含 量 。 得 出 多 糖 得 率 最 高 的 一 种 方 法 为 基 础， 以多 糖 含 量 为指 标 进 行 工 艺 优 化 ； 按照《 中国药典） ２ ０ １ ０年 版 一 部 规 定 的方 法 研 究其 理 化 性 质 。结 果 超 声 提 取 法 最 好 ，
药学实践杂志
２ ０ １ ３年 １月 ２ ５日第 ３ １卷 第 １ 期
３ ５
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｅ ｕ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ Ｐ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｃ ｅ， Ｖｏ １ ． ３１ ，Ｎｏ ． １， Ｊ ａ ｎ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ５， ２ ０１ ３
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［ Ｄ ＯＩ ］ １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６— ０ １ ｌ １ ． ２ Ｏ １ ３ ． ０ １ ． ０ ｌ ０
白芨多糖胶研究进展
文献综述白芨多糖胶研究进展摘要：本文综述了近年来白芨葡甘聚糖多糖胶的研究进展，主要包括白芨多糖胶的理化特性、提取和精制工艺及在食品工业、医药工业和日用化学品工业等方面的应用。
关键词：白芨；多糖胶；应用白芨(Bletillastriata(Thunb.)Rei.hb.f)是兰科白岌属植物，又称小白芨、莲及草、雪如末等，千百年来一直作为传统中药使用，其主要功能是敛疮止血、补肺、消肿生肌等。
白芨鳞茎中大量水溶液性多糖，其化学成分是葡萄甘露聚糖，是白芨胶的主要功能性成分。
白芨多糖胶是一种优良的天然增稠剂，是安全性较高的医药原料、性能卓越的药用辅料和有相当发展前景的生物医学材料。
此外，白芨多糖胶还可应用于日化产品中，替代化学增稠剂，并具有减少刺激性、保护皮肤、延缓衰老等功能。
本文对白芨多糖理化特性、提取精制以及白岌多糖胶在医药工业、食品工业和日化工业中应用研究进行综述。
1白芨多糖胶理化特性1.1 水溶性精制后的白芨胶(多糖纯度＞90%)为无嗅无味白色粉粒，不溶于乙醇，可在水中溶解并形成黏稠的亲水胶液，在酸性溶液中较稳定，但在碱性溶液中易失去黏性。
按中国药典(2000 年)方法测定，2% 的白芨胶溶液相对密度为 1.01～1.05(20℃)，黏度为9.0～12.0mm2/s(25℃)。
白芨多糖胶与魔芋葡甘聚糖、阿拉伯树胶相比，属低黏性胶，可配制10% 以上的高浓度胶体。
纯化后的白芨多糖特性黏度为378，比旋度[α]D=－40.8[1]。
1.2 鉴别和鉴定精制白芨多糖胶溶液直接进行Feling 反应，不产生沉淀，但经盐酸或硫酸处理后能够发生阳性反应，如将白及胶配成1% 的水溶液，加2mol/L 盐酸溶液酸化，加热微沸，放冷后调pH 值至中性，加等量的碱性酒石酸铜试液，可产生棕红色的沉淀。
此外，Dische 法检验表明，白芨多糖不含糖醛酸。
白芨多糖胶不溶于乙醇，在白芨胶水溶液中，加等量95% 乙醇就可产生白色絮状沉淀。
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MALDI-TOF-MS测定天然白芨多糖相对分子质量的研究程安媛,朱照静,徐 丹(重庆医科大学药学院药剂教研室,重庆 400016)摘 要:目的 考察基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(M AL DI-T O F-M S)用于检测天然多糖相对分子质量的可行性及条件。
方法 以2,5-二羟基苯甲酸(D HB)为基质对精制后的天然白芨多糖(未分级)相对分子质量进行测定。
条件采用D HB-白芨多糖为1.5∶1,室温液滴自然干燥法;线性正离子谱模式,激光强度:1500～2500单位。
结果 白芨多糖相对分子质量分布在6×104～3×105,其分散性较大。
结论 采用DHB与白芨多糖样品比例为1.5∶1,直接液滴干燥法效果好,能获得较好的图谱效果。
关键词:白芨多糖;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱;基质;相对分子质量中图分类号:R931.71 文献标识码:A 文章编号:0253-2670(2008)06-0817-03Determination of relative molecular weight of polysaccharidesin Blet illa striata by MALDI-TOF-MSC HEN G An-y uan,ZHU Zhao-jing,XU Dan(Pha rmacy Faculty o f Cho ng qing M edical U niv e rsity,Chong qing400016,China) Abstract:Objective To inv estiga te the relativ e mo lecular w eigh t of po lysaccharides in Bletilla striata by matrix-assisted laser deso rption ioniza tio r/tim e-o f-flig ht mass(M ALDI-TO F-M S).Methods 2,5-Di-hydrox ybenzoic acid(DHB)as a m atrix was used.By drop drying at roo m tem perature the pro po rtio n of the ma trix and poly saccharide sam ple w as1.5∶1.Baseline mo de and laser intensity at1500-2500units w ere carried o ut.Results The relativ e molecula r w eig hts o f polysaccharides in B.striata w ere6×104-3×105,whose distributio n ra ng was wide.Conclusion The relativ e molecula r w eigh ts of po lysaccharides in B.striata a re obtained by M ALDI-TO F-M S tech nique in the propo rtio n of DHB-poly saccha rides in B. striata 1.5∶1,w hich is valuable fo r the preparatio n and go od quality by the direct drop drying m ethod.Key words:po lysaccharides in Bletilla striata(Thunb.)Reichb. f.;m atrix-assisted laser deso rption io nizatior/time-of-fligh t mass(M ALDI-TOF-M S);m atrix;relative molecular w eight 白芨多糖为兰科植物白芨Bletilla striata (Thunb.)Reichb. f.的干燥块茎经提取得到的一种高分子黏性多糖。
白芨作为传统的止血药,收敛止血、消肿生肌功能良好,现代研究表明,白芨多糖具有抗溃疡、抗消化道出血、预防肠粘连、人工栓塞、抗肿瘤等广泛的药理作用[1]。
作为植物多糖,白芨多糖具有多分散性,其相对分子质量大小及分布是影响其生物活性的重要因素[2],准确测定其相对分子质量具有重要的意义。
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(M ALDI-TO F-M S)简称飞行时间质谱,应用脉冲式激光,是一种通过离子的飞行时间来测定其荷质比的软电离生物质谱技术。
M ALDI-TOF-M S适合于混合物及蛋白质等生物大分子的测定,具有灵敏、快速,对杂质的包容性强,分析质量范围大,较少或基本不产生电离碎片,尤其是能对未衍生化糖类进行直接分析等优点[3],其测定准确度高达0.1%～0.01%,目前可测定生物大分子的相对分子质量高达6×105,远远优于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术。
自1987年Ka ras等[4]首次以M ALDI-TO F-M S分析水苏糖以来,已用于游离多糖、环糊精、糖肽、糖脂、糖蛋白、黏多糖、鞘脂等多种糖类化合物的分析。
本实验通过基质的选择及测定条件的确定,对白芨多糖相对分子质量及其分布进行测定分析,为天然高分子聚合相对分子质量的测定提供参考,并为进一步的结构分析奠定基础。
1 实验部分·817·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第39卷第6期2008年6月收稿日期:2007-12-16作者简介:程安媛,女,硕士研究生,研究方向为药物制剂研究。
*通讯作者 朱照静 Fax:(023)86282002 E-mail:zhaojing6271@1.1 仪器与试剂1.1.1 仪器:基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪[ABI Voyag er DE-PRO(US A)]。
1.1.2 试剂:白芨多糖为本实验自制(由白芨块茎水提醇沉并精制所得,未分级);2,5-二羟基苯甲酸(DHB)、乙腈(色谱纯,美国Sig ma 公司);标准混合多肽(美国Sig ma 公司)。
1.2 溶液与样品配制:将乙腈-双蒸水按1∶1的比例混合制成饱和溶液作为溶剂待用;将基质和样品分别溶于上述混合溶剂,配成浓度为100pmol /μL 的溶液,分别取上清液为A 和B 。
将1.5μL A 液与1μL B 液混合均匀,取0.5μL 点样;标准混合多肽以A 稀释,取0.5μL 点样;室温自然干燥后,将点样板放入离子源中进行测定;最低有效浓度为10pm ol /μL 。
1.3 实验参数:线性正离子谱模式,N 2激光源,波长337nm,真空度8×10-8To rr,离子源加速电压25kV ,脉冲速度3nm ,延迟时间1700ns ,叠加100,Grid :93%,Guidewire :0.3%,激光强度:1500～2500单位。
2 结果与讨论在测定中基质的选择及样品的制备方法等对获得理想的质谱图非常关键,因此本实验对基质的选择、样品的制备、检测方式以及参数对测定的影响进行探讨。
2.1 基质的选择及样品的制备对测定的影响:在M ALDI-TOF-M S 测定大分子物质相对分子质量的研究中发现,最初用于蛋白质分析的基质DHB 分析多糖重复性好、灵敏度和信噪比高,较少产生基质相关的低分子离子,适用于分析多糖[5]。
基质的作用是稀释样品、吸收激光能量及解离样品。
基质与样品的晶体形态、样品与基质比率等对谱图质量都有影响[6]。
M ALDI-TOF-M S 测定大分子物质的相对分子质量过程中,按其相对分子质量从小到大依次进行检测,大量较小离子因飞行速度快而先行达到检测器并使其饱和,会削弱检测器对较大离子的检测能力,明显影响大分子物质测定结果的准确性,因此在白芨多糖的精制过程中进行了透析(截留相对分子质量为1.2×104)处理,除去较小分子物质,从而减少对多糖测定的影响。
样品制备时采用自然液滴干燥法,基质与样品的比例针对所测的多糖的相对分子质量大的原因适当增加了基质比例,采用DHB -样品为1.5∶1测定,在传递能量的过程中使电离产生的碎片减少,能较理想的解离形成[M+H]+。
2.2 检测方式及参数对测定结果的影响[7,8]:M ALDI -TO F -M S 在检测方式上有线式和反射式两种,反射式测定模式受低分子的影响较大,其主要用于测定相对分子质量较小的聚糖,针对白芨多糖相对分子质量大,采用线性模式测定。
这样样品所受电离产生的碎片较少,产生的分子离子稳定,并能最大程度地电离产生所需要的分子离子峰。
由于糖类不易离子化,所要测定的多糖相对分子质量大,因此采用的激光强度在1500～2500单位,使多糖更容易形成[M+H ]+。
2.3 测定结果:白芨多糖是由甘露糖和葡萄糖以4∶1比例聚合而成[9]。
在设定条件下,所测得的样品m /z 在6×104～3×105分散分布。
从图1的3个图可以看出,白芨多糖相对分子质量大,分散性大,在1.5×105～3×105区间峰较明显,可测定的最高相对分子质量为298863。
测定结果表明由甘露糖和葡萄糖组成的白芨多糖聚合度n 在70～330,测定结果为绝对值,测定精度为0.1%。
如需进一步确定其结构组成,则需要对多糖进行进一步分级化处理。
m /zA -m /z 在6×104～ 1.5×105的峰B -m /z 在1.5×105～ 2.2×105的峰C -m /z 在2.2×105～3×105的峰A-m /z is 6×104- 1.5×105B-m /z is 1.5×105-2.2×105C-m /z is 2.2×105-3×105图1 白芨多糖相对分子质量测定的部分质谱图Fig .1 Mass spectrogram of relat ive molecular weight f or polysaccharides in B .striata by MALDI -TOF -MS ·818·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第39卷第6期2008年6月2.4 讨论:多糖类物质极性高、难挥发、热不稳定,还具有相对分子质量分布发散的性质,其质谱表征比较困难,而M ALDI-TO F-M S 灵敏、快速,对杂质的包容性强、分析的质量范围大,能够对糖类尤其是非衍生化糖进行直接分析。