(完整版)粗多糖的测定方法
保健食品中总黄酮、总皂甙、粗多糖的测定
保健食品中总黄酮、总皂甙、粗多糖的测定附录 A（规范性的附录）保健食品中总黄酮的测定A.1 试剂聚酰胺粉芦丁标准溶液：称取5.0g芦丁，加甲醇溶解并定容至100mL，即得50μg/mL。
乙醇分析纯。
甲醇分析纯。
A.2 分析步骤试样处理：称取一定量的试样，加乙醇定容至25mL，摇匀后，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。
先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25mL。
此液于波长360nm测定吸收值。
同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中的总黄酮含量。
芦丁标准曲线：吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL比色管中，加甲醛至刻度，摇匀，于波长360nm比色。
求回归方程，计算试样中总黄酮含量。
A.3 计算和结果表示：式中：X：试样中总黄酮的含量，mg/100g；A：由标准曲线算得被测液中总黄酮量，μgM：试样质量，gV1：测定用试样体积，mLV2：试样定容总体积，mL计算结果保留二位有效数字。
此方法选自《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）附录 B（规范性的附录）保健食品中总皂甙的测定B.1 试剂Amberlite-XAD-2 大孔树脂，Sigma 化学公司、U.S.A正丁醇分析纯。
乙醇分析纯。
中性氧化铝层析用，100-200目。
高氯酸分析纯。
冰乙酸分析纯。
香草醛溶液称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。
人参皂甙Re 购自中国药品生物制品检定所。
人参皂甙Re标准溶液：精确称取人参皂甙Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每毫升人参皂甙Re2.0mg。
B.2 仪器比色剂层析柱B.3 实验步骤试样处理固体试样：称取1.000g左右的试样（根据试样含人参量定），置于100mL容量瓶中，加少量水，超声30min，再用水定容至100mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL进行柱层析。
粗多糖含量测定方法学验证
粗多糖含量测定方法学研究资料一、仪器与试药 (1)二、方法的研究 (2)1.检测波长的测定 (2)2.样品及对照制备方法 (2)三、方法学验证 (3)1.线性 (3)2.精密度实验 (4)3.稳定性实验 (4)4.重复性试验 (5)5.中间精密度实验 (5)6.准确度试验 (6)芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。
主要研究资料如下：一、仪器与试药1、仪器(1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）；(2) 离心管：50ml；(3) 水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号 DK-S26）；(4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）；(5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计；(6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）；(7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；2、试药(1) 葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；(2) 无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为160802 1；(3) 蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为；(4) 硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；(5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（ml）。
(6) %蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。
现用现配。
3、试样v1.0 可编辑可修改(1) 样品颗粒：XXXXX 有限公司提供。
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
粗多糖的测定
粗多糖的测定：按王光亚主编，《保健食品功效成分检测方法》P19（分光光度法测定粗多糖的含量）1、适用范围本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104的水溶液性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
2、原理食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
3、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器4、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
粗多糖的检验方法(卫生部内统法)
粗多糖的检验方法（卫生部内统法）1.方法原理食品中高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中水溶性粗多糖含量。
2.检测设备和材料本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
2.1.乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80ml，混匀。
2.2.氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L,加入固体硫酸钠至饱和，备用。
2.3.铜储备液：称取3.0gCuSO4 5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解稀释至1L，混匀，备用。
2.4.铜试剂溶液：取铜储备液50ml，加水50ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
2.5.洗涤剂：取水50ml，加入10ml铜试剂溶液：10ml氢氧化钠溶液，混匀。
临用新配。
2.6.硫酸溶液（10%）：取100ml浓硫酸加入到800ml左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
2.7.苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存一月。
2.8.葡聚糖标准储备溶液：精密称取相对分子质量5X10²干燥至恒重的葡聚糖标准0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含10.0mg葡聚糖。
2.9.葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含葡聚糖0.10mg。
2.10.分光光度计2.11.离心机（3000r/min)2.12.旋转混匀器3.样品收集和准备3.1.试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100ml容量瓶中,加水80ml左右,于沸水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀后,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。
多糖测定
附录C（规范性附录）：多糖含量测定方法
C.1 粗多糖的提取
称取生命PACK产品中棕色胶囊内容物和白色胶囊内容物5g精密至0.0001g，置圆底烧瓶内，加入100毫升的水，回流提取4小时，乘热过滤，再重复上述实验1次，合并滤液，加热浓缩，用80%乙醇醇沉过夜，离心干燥，称重，即得粗多糖样品。
C.2 标准曲线的制备
称取105˚C干燥至恒重的无水葡萄糖60mg，精密至0.0001g，至100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度（每1ml中含无水葡萄糖0.6mg）。
精密吸取该溶液0.1,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0ml，分别置50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。
精密吸取上述各浓度的标准溶液2ml，于具塞的试管中，加入4%苯酚 1.0ml，混匀，迅速加入浓硫酸7.0ml，摇匀，于40˚C水浴中保温30分钟后，移至冰水浴中，放置30分钟，取出后于490nm处，测定吸光度A（以第一份为空白）。
以吸光度为纵坐标，标准品浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。
C.3 样品多糖浓度的测定
取D.1中制得的样品5mg于5ml容量瓶中，加水并定容，取1ml样品加1ml水于具塞的试管中，以后操作同标准曲线方法，测得的吸收度，由回归曲线（A=0.0444+0.0121C）计算出相当于葡萄糖的浓度。
C.4 样品多糖浓度的计算
F×f×c
多糖含量（%）= ×100
G
F为稀释倍数f为换算因子（f=1）C为样品多糖相当于葡萄糖的含量（μg/ml）G为样品溶液对应的原料的质量。
主要参考标准及文献：
《中华人民共和国药典》2000版
丰朝霞等，分光光度法测定茯苓中多糖总糖含量。
粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
粗多糖检测方法
粗多糖的测定方法（分光光度法）本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104以上的水溶性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
1. 方法提要食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
2. 主要仪器（1）分光光度计。
（2）离心机（3000r/min）。
（3）旋转混匀器。
3. 试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20mL水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
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粗多糖的测定方法(1)
1. 原理
分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围
参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器
（1）分光光度计
（2）离心机
（3）旋转混匀器
（4）恒温水浴锅
4.试剂
除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)
5. 操作方法
5.1 样品处理
（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
（3）沉淀葡聚糖：上述残渣用水溶解，并定容至50ml （V3），混匀后过滤，弃初始滤液后，取滤液2.0ml （V4），加入2.5mol/L NaOH 2.0ml，Cu应用溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2mim，冷却后以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用洗涤液洗涤3次，残渣供测定葡聚糖之用。
（4）测定葡聚糖：上述残渣用2.0mL 1.8mol/L H2SO4溶解，用水定容至100mL（V5）。
准确吸取2.0ml（V6），置于25ml比色管中，加入1.0ml苯酚溶液，10ml浓硫酸，沸水浴煮沸2分钟，冷却比色。
从标准曲线上查得相应含量，计算粗多糖含量。
5.2 标准曲线制备：
精密吸取葡聚糖标准应用液0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00，1.50，2.00ml（分别相当于葡聚糖0.01，0.02，0.04，0.06，0.08，0.10，0.15，0.20mg），补充水至2.0mL，加入苯酚溶液1.0ml，浓硫酸10ml，混匀，沸水浴2分钟，混匀，沸水浴2分钟，冷却后用分光光度计在485nm波长处以试剂空白溶液为参比，测定吸光度值（A），以葡聚糖浓度为横坐标，A为纵坐标绘制标准曲线。
6.计算
从标准曲线上查得样品相应含量，计算粗多糖含量。
葡聚糖（%）= c×V5×V3×V1×0.1 = c×250 (1)
V6×V4×V2×m m
公式中：c--从标准曲线上查得样品测定管中葡聚糖含量，mg；
V1--样品提取时定容体积，ml；
V2--沉淀高分子物质取液量，ml；
V3 --沉淀葡聚糖时定容量，ml；
V4 --沉淀葡聚糖时取液量，ml；
V5 --测定葡聚糖时定容体积，ml；
V6 --样品比色管中取样液体积，ml；
m--样品称量质量，g；
0.1--将mg/g 换算成g/100g 的系数。
7.注意事项
（1）苯酚-H2SO4溶液可以和多种糖类进行显色反应，常用于总糖的测定。
所以测定过程中应注意容器及试剂中其他糖类的干扰。
（2）苯酚-H2SO4溶液和不同类的糖反应，显色的强度略有不同，反映在标准曲线的斜率不同。
如果已知样品中糖的结构，应尽量以同类糖的纯品做标准品，或以含有已知浓度的同类产品做对照品进行检测分析；如果样品中糖的类型未知或结构多样，则只能以葡萄糖计或其他糖计报告结果。
（3）试验证明葡萄糖、果糖等单糖，蔗糖、乳糖等双糖、低聚糖--棉子糖，淀粉、糊精等多糖及甜味剂糖精不干扰粗多糖测定。
（4）本方法由北京市卫生防疫站建立，经中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所验证。
以上是我找到的方法，希望对大家有所帮助
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