粗多糖含量测定方法学验证
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
丹参粗多糖的制备及含量测定
丹参粗多糖的制备及含量测定（吕培银）一、实验目的1、掌握水提醇沉法提取植物多糖的原理及操作方法;2、了解水提醇沉法制备植物粗多糖的影响因素。
二、实验原理多糖是多羟基的醛或酮类聚合物，可溶于水，但是在多糖水溶液中加入乙醇会破坏多糖水溶液中的氢键，从而降低多糖在水中的溶解度，使多糖以沉淀的形式析出。
水提醇沉法是利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质来提取粗多糖，此法成本低、安全，目前在多糖提取中广泛应用。
不同浓度的醇沉淀的多糖组分会有所差异不一样，一般可采用分级醇沉进行纯化以获得不同级数的多糖组分。
本实验采用水提醇沉法提取丹参粗多糖，干燥后计算多糖得率，并采用苯酚-硫酸法测定多糖中总糖含量。
三、实验用品1、仪器电子天平、恒温水浴锅、250 mL平底烧瓶、1000 mL烧杯、玻璃棒、量筒、抽滤瓶、布氏漏斗、胶头滴管、试管、热风干燥箱、真空泵等。
2、材料脱脂丹参粉末。
3、试剂葡萄糖标准溶液、80%苯酚、浓硫酸、无水乙醇、蒸馏水等。
四、实验内容1、提取准确称取脱脂丹参粉末约5 g于250 mL烧瓶中，按料液比1:10加入蒸馏水，85℃水浴提取1 h，冷却，用四层纱布过滤，滤液减压过滤后转至250 mL烧杯中。
2、醇沉向上述滤液中加入四倍体积无水乙醇烧杯中进行醇沉，边加边搅拌，慢加快搅，室温静置30 min，减压过滤，将烧杯用少量无水乙醇润洗3次，收集沉淀。
过滤之前称滤纸重量，记为M1。
(回收乙醇)3、干燥将过滤后的滤纸置于表面皿上，置于干燥箱中，50℃干燥24 h后取出称重,质量记为M2。
4、含量测定称取干燥至恒重的丹参粗多糖约2.5 mg，少量蒸馏水溶解后定容至50 mL，得到丹参多糖样品溶液，采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。
5、标准曲线的制作分别精密吸取葡萄糖标准溶液4.00 mL、5.00 mL、6.00mL、7.00 mL、8.00mL、9.00mL、10.00mL至10mL容量瓶中，蒸馏水定容后分别得到浓度为40μg/mL、50 μg/mL、60 μgmL、70 μg/mL、80 μg/mL、90 μg/mL和100 ug/mL的葡萄糖系列浓度梯度溶液。
多糖含量测定方法
多糖含量的测定粗多糖中的总糖含量使用苯酚-硫酸法进行测定，还原糖用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定，多糖含量 = 总糖 - 还原糖。
1、总糖含量测定实验原理：多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚生成橙黄色溶液，在490nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
试剂：浓硫酸（分析纯）、5%苯酚溶液（分析纯）、标准葡萄糖。
操作步骤：①制作标准曲线：准确称取105 ℃烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成0.1 mg/ml 的标准溶液，用蒸馏水分别配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/ml。
1 ml标准液分别加入 5% 苯酚溶液1 ml，并迅速加入浓硫酸5 ml，静置10 min。
摇匀，30℃放置30 min后于490nm测定OD值，以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标，制作得到标准曲线。
②样品含量测定：吸取1.0ml样品液，按照上述步骤操作测定OD490，并代入标准曲线计算样品的总糖含量。
2、还原糖含量实验原理碱性条件下，DNS可与还原糖反应生成3-氨基-5-硝基水杨酸。
此物质在煮沸条件下成棕红色，且颜色深浅在一定范围内与还原糖含量成线性关系。
据此可通过测定OD值确定还原糖含量。
试剂及配制：浓度为1mg/ml的葡萄糖标准溶液。
DNS显色液：称取3.25g DNS溶于少量蒸馏水中并转移至500ml容量瓶中，加入2mol/L的NaOH溶液162.5ml，再加入7.5ml的丙三醇，摇匀，加蒸馏水定容至500ml，摇匀。
操作步骤①标准曲线制作：在6支试管中分别加入1mg/ml葡萄糖标准溶液0.00ml，0.10ml，0.20ml，0.30ml，0.40ml，0.50ml，补蒸馏水至0.5ml，然后加入1 / 2DNS试剂1.5ml，充分混匀。
置于沸水浴中煮沸5min，然后迅速流水冷却，并分别向试管中加入4ml蒸馏水，混匀。
在540nm处读OD值。
粗多糖的检验方法(卫生部内统法)
粗多糖的检验方法（卫生部内统法）1.方法原理食品中高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中水溶性粗多糖含量。
2.检测设备和材料本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
2.1.乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80ml，混匀。
2.2.氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L,加入固体硫酸钠至饱和，备用。
2.3.铜储备液：称取3.0gCuSO4 5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解稀释至1L，混匀，备用。
2.4.铜试剂溶液：取铜储备液50ml，加水50ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
2.5.洗涤剂：取水50ml，加入10ml铜试剂溶液：10ml氢氧化钠溶液，混匀。
临用新配。
2.6.硫酸溶液（10%）：取100ml浓硫酸加入到800ml左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
2.7.苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存一月。
2.8.葡聚糖标准储备溶液：精密称取相对分子质量5X10²干燥至恒重的葡聚糖标准0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含10.0mg葡聚糖。
2.9.葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含葡聚糖0.10mg。
2.10.分光光度计2.11.离心机（3000r/min)2.12.旋转混匀器3.样品收集和准备3.1.试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100ml容量瓶中,加水80ml左右,于沸水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀后,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。
(完整版)粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
粗多糖的测定
粗多糖的测定：按王光亚主编，《保健食品功效成分检测方法》P19（分光光度法测定粗多糖的含量）1、适用范围本方法适用于各类食品中以葡聚糖为主要结构，相对分子质量1×104的水溶液性粗多糖的测定。
本方法最低检测浓度为5.0mg/L。
2、原理食品中相对分子质量＞1×104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。
3、主要仪器（1）分光光度计（2）离心机（3000r/min）（3）旋转混匀器4、试剂本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
（1）乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80mL，混匀。
（2）NaOH溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L，加入固体无水硫酸钠至饱和，备用。
（3）铜试剂储备液：称取3.0gCuSO4·5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解并稀释至1L，混匀，备用。
（4）铜试剂溶液：取铜试剂储备液50mL，加水50mL，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
（5）洗涤剂：取水50mL，加入10mL铜试剂溶液、10mL氢氧化钠溶液，混匀。
（6）硫酸溶液（10%）：取100mL浓硫酸加入到800mL左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
（7）苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100mL，混匀。
溶液置冰箱中可保存1个月。
（8）葡聚糖标准储备液：准确称取相对分子质量5x105已干燥至恒重的葡聚糖标准品0.5000g，加水溶解，并定容至50mL，混匀，置冰箱保存。
此溶液1mL 含10.0mg葡聚糖。
（9）葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
粗多糖的检验方法(卫生部内统法)
粗多糖的检验方法（卫生部内统法）1.方法原理食品中高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性的从其它高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚-硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中水溶性粗多糖含量。
2.检测设备和材料本方法所用试剂除特殊注明外，均为分析纯；所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
2.1.乙醇溶液（80%）：20ml水中加入无水乙醇80ml，混匀。
2.2.氢氧化钠溶液（100g/L）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1L,加入固体硫酸钠至饱和，备用。
2.3.铜储备液：称取3.0gCuSO4 5H2O，30.0g柠檬酸钠，加水溶解稀释至1L，混匀，备用。
2.4.铜试剂溶液：取铜储备液50ml，加水50ml，混匀后加入固体无水硫酸钠12.5g并使其溶解。
临用新配。
2.5.洗涤剂：取水50ml，加入10ml铜试剂溶液：10ml氢氧化钠溶液，混匀。
临用新配。
2.6.硫酸溶液（10%）：取100ml浓硫酸加入到800ml左右水中，混匀，冷却后稀释至1L。
2.7.苯酚溶液（50g/L）：称取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀释至100ml，混匀。
溶液置冰箱中可保存一月。
2.8.葡聚糖标准储备溶液：精密称取相对分子质量5X10²干燥至恒重的葡聚糖标准0.5000g，加水溶解，并定容至50ml，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含10.0mg葡聚糖。
2.9.葡聚糖标准使用液：吸取葡聚糖标准储备液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀，置冰箱中保存。
此溶液每1ml含葡聚糖0.10mg。
2.10.分光光度计2.11.离心机（3000r/min)2.12.旋转混匀器3.样品收集和准备3.1.试样提取:称取混合均匀的固体试样2.0g,置于100ml容量瓶中,加水80ml左右,于沸水浴上加热2h,冷却至室温后补加水至刻度,混匀后,过滤,弃去初滤液,收集余下滤液供沉淀多糖。
粗多糖的测定方法
粗多糖的测定方法(1)1. 原理分子量大于10，000道尔顿的多糖经80%乙醇沉淀后，加入碱性铜试剂，选择性地从其他高分子物质中沉淀出葡聚糖，沉淀部分与苯酚-H2SO4反应，生成有色物质，在485nm条件下，有色物质的吸光度值与葡聚糖浓度成正比。
2. 适用范围参照AOAC方法。
适用于检测含有分子量大于10，000道尔顿葡聚糖的样品。
3.仪器（1）分光光度计（2）离心机（3）旋转混匀器（4）恒温水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）80%乙醇：800ml无水乙醇加水200ml。
（2）2.5 mol/L NaOH溶液：100 g NaOH加蒸馏水稀释至1 L，加入固体无水硫酸钠至饱和。
（3）铜贮存液：称取3.0 g CuSO4 ·5H2O，30.0 g柠檬酸钠加水溶解至1 L。
溶液可贮存2周。
（4）铜应用溶液：取铜贮存液50 ml，加水50 ml混匀后加入无水硫酸钠12.5 g，临用新配。
（5）洗涤液：取水50 ml，加入10 ml铜应用溶液，10 ml 2.5 mol/L NaOH溶液，混匀。
（6）1.8 mol/L H2SO4：取100ml浓硫酸用水稀释至1L。
（7）20 g/L苯酚溶液：称取2.0g苯酚，加水溶解并稀释至100ml，混匀备用。
（8）葡聚糖标准液：称取500mg葡聚糖（分子量500,000D）于称量皿中，105℃干燥4h 至恒重，置于装有干燥硅胶的干燥器中冷却。
准确称取100mg干燥后的葡聚糖，用水定容至100ml，葡聚糖标准浓度为1.0 mg/ml。
（9）葡聚糖标准应用液：吸取葡聚糖标准液10ml，用水稀释10倍，葡聚糖终浓度为0.1mg/ml。
粗多糖的测定方法(2)5. 操作方法5.1 样品处理（1）样品提取：称取样品1～5g，加水100ml，沸水浴加热2h，冷却至室温，定容至200ml （V1），混匀后过滤，弃初滤液，收集余下滤液。
（2）沉淀高分子物质：准确吸取上述滤液100ml （V2），置于烧杯中，加热浓缩至10ml，冷却后，加入无水乙醇40ml，将溶液转至离心管中以3000rpm离心5min，弃上清液，残渣用80%乙醇洗涤3次，残渣供沉淀葡聚糖之用。
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粗多糖含量测定方法学研究资料
一、仪器与试药 (1)
二、方法的研究 (2)
1.检测波长的测定 (2)
2.样品及对照制备方法 (2)
三、方法学验证 (3)
1.线性 (3)
2.精密度实验 (4)
3.稳定性实验 (4)
4.重复性试验 (5)
5.中间精密度实验 (5)
6.准确度试验 (6)
芪参颗粒粗多糖含量测定方法起草说明
标志性成分粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，该方法的原理是：多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，糖与硫酸在沸水浴中加热脱水生成羟甲基呋喃甲醛（羟甲基呋喃糠醛），再与蒽酮缩合成蓝绿色化合物，其显色强度与溶液中糖的浓度成正比，在625nm波长下比色测定。
主要研究资料如下：
一、仪器与试药
1、仪器
(1) 离心机（湘南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号TD25-WS）；
(2) 离心管：50ml；
(3) 水浴锅（上海精宏实验设备有限公司，型号 DK-S26）；
(4) 旋涡混合器（DioCote，SA8）；
(5) SHIMADZU UV-1800 紫外可见光分光光度计；
(6) JB760-68 石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）；
(7) TU-1901 双光束紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；
2、试药
(1) 葡萄糖：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；
(2) 无水乙醇：西陇化学股份有限公司，分析纯，批号为160802 1；
(3) 蒽酮：国药集团化学试剂有限公司，分析纯，批号为；
(4) 硫酸：广州化学试剂厂，分析纯，批号为-1；
(5) 葡萄糖标准液：标准称取干燥恒重的分析纯级葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（ml）。
(6) %蒽酮硫酸溶液（W/V）：准确称取蒽酮置于烧杯中，缓缓加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黄色透明溶液。
现用现配。
3、试样
v1.0 可编辑可修改
(1) 样品颗粒：XXXXX 有限公司提供。
二、方法的研究
粗多糖含量测定的方法来源于《保健食品功效成分检测方法》白鸿主编（中国中医药出版社)的第二法，本研究针对葡萄糖对照以及样品的的吸光度进行检测波长测定，如下所示： 1.检测波长的测定
取葡萄糖对照品溶液、样品溶液进行紫外光谱扫描，结果显示对照品和样品均在625nm 波长附近有最大吸收。
序号 波长 吸光度 1 2
2.样品及对照制备方法
（1）样品提取：称取混合均匀的固体样品，置于100ml 容量瓶中，加水80ml 左右，于沸水浴中加热1小时，冷却至室温后补加水至刻度（V1），混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。
葡萄糖对照品紫外波长吸收图
芪参颗粒样品溶液紫外波长吸收图
序号 波长 吸光度 1 2
（2）沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样品）（V2），置于50ml离心管中（或于15ml具塞离心管中），加入无水乙醇20ml（或8ml），混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。
残渣用水溶解并定容至10ml（V3）。
（3）标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0ml、、、、、、（相当于葡萄糖0mg、、、、、、）置于10ml比色管中，补加水，加入%蒽酮硫酸溶液6ml，在旋涡混合器上混匀，置沸水浴中加热10min，取出，在流水中冷却20min后，用分光光度计在625nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。
以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
（4）样品测定：准确吸取样品待测液（含糖量20—100μg），按标准曲线绘制步骤于625nm波长下测定吸光度值并求出样品含量。
三、方法学验证
1.线性
取适量葡萄糖对照品，精密称定，加水制成ml的葡萄糖对照品储备溶液，分别精密吸取葡萄糖对照品储备溶液0ml、、、、、、，置于10ml比色管中，补加水，依法测定。
得标准曲线储备液。
依法测定，分别制成含葡萄糖为0、μg、μg、μg、μg、μg、μg的溶液，以吸光度（Y）为纵坐标，葡糖糖对照品的含量（X）为横坐标，绘制标准曲线，见下图，其回归方程为： y=+（r=），试验表明葡萄糖对照品在0～μg范围内呈良好线性关系。
见表1。
表1 线性考察结果
含量
（μg）
吸光度（Y）
回归方程 y=+ r=
粗多糖标准曲线如下：
v1.0 可编辑可修改
粗多糖对照在0～μg内成良好的线性关系。
2.精密度实验
取一供试品溶液，连续测定6次，记录吸光度，结果见表2。
试验结果RSD＜％（RSD ＝％，n＝6），说明仪器精密度良好。
表2 仪器精密度试验测定结果
序号吸光度平均吸光度RSD％
1
2
3
4
5
6
3.稳定性实验
取同一样品，按以下时间测定，记录吸光度，结果见表3。
表3 粗多糖稳定性试验结果
时间0min30min1h2h3h4h
吸光度03313
1hRSD(%)
2hRSD(%)
4hRSD(%)
结果表明供试品溶液在显色反应完成后4小时内稳定。
4.重复性试验
取同一供试品，按供试品制备方法制备6份供试品溶液，并按样品及对照制备方法测定粗多糖含量，结果见表4。
表4 粗多糖重复性试验测定结果（单位：mg/100g）
样品编号123456
含量(mg/100ml)348343335330335338平均含量338
RSD（%）
结果表明6份供试品溶液按照粗多糖的检测方法测定重复性好。
5.中间精密度实验
取同一供试品(批号：150401)，由另一操作者于不同时间、不同仪器操作，按供试品制备方法制备6份供试品溶液，并按样品及对照制备方法测定粗多糖含量，结果见表5。
表5 粗多糖中间精密度试验测定结果（单位：mg/100g）
标准曲线结果：
含量
（μg）
吸光度（Y） 0
回归方程 y=+ r=
样品测定结果：
样品编号123456
含量(mg/100ml) 294 285 297
273 297 287
平均含量 289 RSD （%）
结果表明6份供试品溶液按照粗多糖的检测方法测定进行的中间精密度实验精密度良好。
6.准确度试验
采用加样回收法，精密称取本品（批号：150401，平均含量：338mg/100g ，平均吸光度：）各6份，按照样品及对照制备方法中制备得样品待测液6份，分别从6份待测液中吸取1ml 置于10ml 比色皿中，再分别精密加入1ml 100%浓度的对照品溶液（浓度：ml ），依法进行测定，记录吸光度，以吸光度计算回收率，结果见表6。
6份样品回收率均在95%~105%之间，平均回收率为103%，RSD=%，该方法准确度符合要求。
表6 粗多糖回收率试验结果
编号
取样量 (g) 样品吸光度 对照品加入量
对照 加入对照后 回收率 平均值 （%）
RSD （mg ）
测得吸光度
总吸光度
（%）
（%）
1 10
2 103
2 10
3 3 102
4 104
5 104 6
103。