真菌中多糖含量测定方法的研究概况
一种真菌多糖的检测方法

一种真菌多糖的检测方法引言真菌多糖是真菌细胞壁的重要组成部分,具有重要的生物活性和药理价值。
因此,对真菌多糖的检测方法研究具有重要的理论价值和临床应用前景。
本文介绍了一种基于化学反应的真菌多糖的检测方法,并对其在实验室中的应用进行了探讨。
真菌多糖的结构和性质真菌多糖是一类具有多种生理活性的高分子化合物,主要由多糖和蛋白质组成。
其主要结构包括β-葡聚糖、β-葡聚糖苷酸、β-葡聚糖脂等。
真菌多糖具有抗肿瘤、免疫调节、抗菌等多种生物活性,因而在医药领域备受关注。
真菌多糖的检测方法本文使用的检测方法基于真菌多糖的化学特性,利用化学反应对多糖进行定量分析。
具体步骤如下:1. 样品的制备:将真菌样品经过提取、纯化等步骤,获得纯净的真菌多糖样品。
2. 试剂的配制:制备适合的试剂来与真菌多糖发生特定的化学反应。
例如,可以使用硫酸羟乙基甲基纤维素钠(HQS)作为试剂。
3. 化学反应的进行:将真菌多糖与试剂在一定条件下进行反应,使其形成具有特定性质的产物。
4. 反应产物的检测:采用分光光度计、荧光光谱仪等仪器,对反应产物进行定量分析。
5. 数据处理和结果分析:根据检测结果,计算真菌多糖的含量,并进行统计学分析。
实验应用与结果分析本文将该方法应用于检测不同真菌样品中的多糖含量,并与传统的检测方法进行了对比。
实验结果表明,该方法具有以下优点:1. 灵敏度高:与传统的方法相比,该方法具有更高的灵敏度,可以检测到更低浓度的真菌多糖。
2. 精确性好:该方法测定真菌多糖的结果准确可靠,在不同条件下重复性好。
3. 操作简便:该方法操作简单,仪器设备要求低,适用于实验室中快速、高通量的检测需求。
4. 经济可行:试剂成本低廉,且其制备方法简单,适用于批量生产。
综上所述,本文介绍的该方法是一种可行的真菌多糖检测方法,具有较高的灵敏度、精确性和经济可行性。
该方法的应用将为真菌多糖的研究和开发提供重要的技术支持。
结论本文介绍了一种基于化学反应的真菌多糖的检测方法,并对其在实验室中的应用进行了探讨。
猴头菇菌丝体和发酵液中多糖的含量测定

猴头菇菌丝体和发酵液中多糖的含量测定1.河北省食品药品检验院,河北石家庄050011;2.河北医科大学第三医院,河北石家庄050051目的分别测定猴头菇菌丝体、猴头菇发酵液提取的粗多糖中的多糖含量。
方法采用蒽酮-硫酸比色法,利用紫外分光光度计测定多糖含量,样品与对照品分别在450~750 nm波长范围内扫描。
结果最大吸收波长为(625±1)nm,猴头菇多糖检测浓度在20~100?g/mL(r2=0.999)范围内与吸光度线性关系良好;加样回收率为96.0%。
结论猴头菇菌丝体与发酵液提取的粗多糖中多糖含量均能达到30%以上。
标签:猴头菇菌丝体;猴头菇发酵液;多糖;含量测定猴头菌(Hericium erinaceus,Bull.Ex Fr.)又名猬菌、刺猬菌、小刺猴头、猴菇、猴头菇,隶属于担子菌门,齿菌科[1],是著名的药食两用菌。
猴头菇味甘,性平,归脾、胃经。
猴头菇多糖是猴头菌的主要活性成分之一,具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血糖、抗突变、防辐射等作用[2]。
猴头菇多糖制成的药物和保健品深受人们喜爱,开发前景广阔。
目前,通过猴头菇子实体提取猴头菇多糖的方法研究较多,但猴头菇子实体的生长周期相对较长,本文研究的是发酵的方法获得的多糖,具有生长周期短,提取多糖速度快的特点。
因此,液体深层发酵是开发猴头菇活性成分的有效手段。
但是在发酵获得多糖的方法中,采用菌丝体提取多糖的研究较多,而积极利用发酵液提取多糖的方法较少报道,本实验通过对猴头菇菌丝体和发酵液提取的多糖含量进行比较,把发酵液也积极的利用起来,为猴头菇多糖更好的开发利用打下基础。
1 材料与方法1.1 材料与仪器紫外可见分光光度仪GBC Cintra10(澳大利亚GBC公司),高效液相(美国Waters公司),旋涡混合振荡器(江苏海门其林医用仪器厂),恒温水浴锅(北京靖卫科学仪器厂)。
D-无水葡萄糖(中国药品生物制品检定所),蒽酮(北京金龙化学试剂有限公司),浓硫酸、95%乙醇、氯仿均为分析纯,猴头菇菌种为本实验室保存。
蘑菇多糖提取实验报告

一、实验目的1. 学习蘑菇多糖的提取方法;2. 掌握蘑菇多糖的鉴定与检测技术;3. 研究蘑菇多糖的生物活性。
二、实验原理蘑菇多糖是一种生物活性物质,具有多种生物学功能,如抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等。
本实验采用水提醇沉法提取蘑菇多糖,并对其理化性质、结构特征和生物活性进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 蘑菇子实体:香菇、金针菇等;- 无水乙醇、丙酮、正己烷等有机溶剂;- 碘液、硫酸铜溶液等试剂;- pH计、紫外分光光度计等仪器。
2. 实验仪器:- 电子天平;- 磁力搅拌器;- 烘箱;- 冷冻离心机;- 超声波清洗器;- 离心管、烧杯等实验器材。
四、实验方法1. 蘑菇子实体的预处理将蘑菇子实体洗净,去除杂质,切碎,用蒸馏水浸泡过夜。
2. 蘑菇多糖的提取将浸泡好的蘑菇子实体加入蒸馏水中,搅拌提取2小时;将提取液过滤,收集滤液;将滤液用无水乙醇沉淀,离心分离;将沉淀物用蒸馏水溶解,重复上述沉淀、离心步骤,直至沉淀物基本溶解;将溶解后的沉淀物用丙酮沉淀,离心分离;将沉淀物用蒸馏水溶解,得蘑菇多糖粗品。
3. 蘑菇多糖的鉴定与检测(1)外观鉴定:蘑菇多糖粗品为白色粉末;(2)溶解性检测:蘑菇多糖粗品可溶于水、乙醇、丙酮等溶剂;(3)分子量测定:采用凝胶渗透色谱法(GPC)测定蘑菇多糖的分子量;(4)单糖组成分析:采用高效液相色谱法(HPLC)分析蘑菇多糖的单糖组成;(5)生物活性检测:通过体外抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等实验,检测蘑菇多糖的生物活性。
五、实验结果与分析1. 蘑菇多糖粗品的外观为白色粉末,可溶于水、乙醇、丙酮等溶剂。
2. GPC结果显示,蘑菇多糖的分子量在10-100 kDa之间。
3. HPLC分析表明,蘑菇多糖主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖等单糖组成。
4. 生物活性检测结果显示,蘑菇多糖具有抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等生物活性。
六、实验结论本实验成功提取了蘑菇多糖,并通过鉴定与检测,证实了蘑菇多糖具有多种生物活性。
多糖含量测定的方法综述

多糖含量测定的方法综述多糖是一类具有多种生物活性的化合物,广泛存在于植物、真菌和藻类等生物体中。
由于其具有抗氧化、抗炎、调节免疫功能等多种生物活性,因此对多糖含量的测定具有重要意义。
目前,常用的多糖含量测定方法主要包括酚-硫酸法、酚酸法、甲醇-硫酸法、糖酶法、紫外-可见分光光度法等。
本文将对这些方法进行综述,以便更好地了解多糖含量的测定方法及其特点。
酚-硫酸法是一种常用的多糖含量测定方法。
该方法利用硫酸在酚的存在下与多糖产生浓度相关的颜色反应,然后通过测定颜色的吸光度来计算多糖的含量。
这种方法简单、快速,并且对一定范围内的多糖都有较好的灵敏度,因此被广泛应用于多糖含量的测定。
与硫酸反应产生的热量大,操作时需要小心操作,同时硫酸具有腐蚀性,易造成伤害。
因此在使用该方法时需要十分小心,并采取相应的安全措施。
甲醇-硫酸法是一种利用甲醇和硫酸处理多糖样品后,测定多糖含量的方法。
该方法可以有效地将多糖降解成单糖,然后通过测定单糖的含量来间接计算多糖的含量。
甲醇-硫酸法对多糖的种类和结构较不敏感,操作简便,因此也被广泛用于多糖含量的测定。
但是在操作中也需要小心处理甲醇和硫酸,以防造成伤害。
紫外-可见分光光度法是一种利用多糖对紫外或可见光的吸收特性进行测定多糖含量的方法。
该方法对多糖的种类和结构具有一定的选择性,可以根据样品的特性选择合适的波长进行测定,因此较为灵活。
该方法的操作简便,且测定结果稳定,因此也被广泛应用于多糖含量的测定。
除了以上介绍的方法外,还有一些其他的多糖含量测定方法,如高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等。
这些方法在特定情况下具有一定的优势,可以更准确地测定多糖的含量。
但是这些方法通常需要较为复杂的仪器设备,且操作难度较大,因此在实际应用中较少使用。
多糖含量的测定方法有多种,各有特点。
在选择方法时,需要根据具体的样品特性、实验条件和仪器设备等方面进行考量,选择合适的方法进行测定。
在进行多糖含量测定时,也需要严格操作,遵守安全规范,以确保实验的顺利进行。
香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究

香菇多糖提取工艺和含量测定方法研究报告1. 研究目标本研究旨在探索香菇中多糖的提取工艺和含量测定方法,以提供一种高效、可行的工艺流程和准确的测定方法,为香菇多糖的应用开发提供科学依据。
2. 方法2.1 香菇多糖提取工艺研究2.1.1 提取试剂选择根据文献综述和前期实验结果,筛选出适合香菇多糖提取的试剂。
常用的试剂有热水、酶解液、强酸、强碱等,选择合适试剂对香菇进行水解提取。
2.1.2 提取工艺优化基于单因素实验和正交实验设计原理,优化香菇多糖提取的工艺参数,包括提取温度、提取时间、料液比等因素。
通过测定提取液中多糖的含量,确定最佳的提取工艺条件。
2.2 香菇多糖含量测定方法研究2.2.1 选择合适试剂反应根据香菇多糖的特性,选用适合的试剂进行反应。
常用的试剂有硫酸、酚硫酸、费林试剂等,可以选择适合的试剂。
2.2.2 建立标准曲线选取不同浓度的香菇多糖标准品,按照测定方法进行测定,记录各标准样品的吸光度或色素生成情况。
根据实验数据,建立标准曲线。
2.2.3 样品预处理将香菇样品经过适当的处理,如研磨、溶解等,使样品中的多糖保持在可测量范围内。
2.2.4 多糖含量测定根据建立的标准曲线和样品的吸光度值,计算出香菇中多糖的含量,并进行统计分析。
3. 发现3.1 香菇多糖提取工艺发现经过实验研究,发现采用热水提取是一种较为有效的香菇多糖提取工艺。
最佳提取条件为提取温度80℃,提取时间2小时,料液比1:10。
3.2 香菇多糖含量测定方法发现在已有的试剂中,硫酸试剂反应较为敏感,可以用于香菇多糖的含量测定。
建立的标准曲线表明,香菇多糖的浓度与吸光度呈现良好的线性关系。
4. 结论本研究通过对香菇多糖的提取工艺和含量测定方法进行深入研究,得出以下结论:1.香菇多糖的热水提取工艺在提取温度80℃,提取时间2小时,料液比1:10的条件下,可获得较高的提取产率。
2.硫酸试剂是一种适用于香菇多糖含量测定的试剂,建立的标准曲线可用于准确测定香菇多糖的含量。
真菌多糖的研究概况

真菌多糖的研究概况郭凯,原雪(中国药科大学生命科学与技术基地 ,江苏南京, 210038)E-mail:smallrians@摘要:真菌多糖具有重要的药用价值,尤其是其免疫调节功能,在抗肿瘤、保肝、抗氧化等方面发挥重要的药理作用。
本文对近年来真菌多糖免疫调节功能及药理作用的研究做一概述,为进一步研究和开发利用真菌多糖提供参考。
关键字:真菌多糖,免疫调节功能,药理作用多糖(polysacharides,PS)是一种广泛存在于植物、动物和微生物组织中,具有多种生物活性的天然大分子化合物,是生命有机体的重要组成部分。
真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出的,能够控制细胞分裂分化,调节细胞生长衰老的一类活性多糖[1]。
与动、植物多糖不同的是真菌多糖分子单体之间,大多以β (1→3)与β(1→6)糖苷键结合,形成链状分子,具有螺旋状的立体构型[2]。
近年来对真菌多糖化学结构和生物活性的深入研究已经取得了丰硕的成果。
实验证明真菌多糖具有很广泛的免疫调节作用,在抗肿瘤、抑制癌细胞、保肝、降血压、降血脂、抗血栓、抗辐射等方面起着重要的作用。
目前已经广泛应用于临床。
本文就近几年的研究成果做一总结。
1.免疫调节功能目前普遍认为多糖的广泛免疫调节功能是其发挥药理作用的基础,研究已经深入到了分子和受体水平,发现多糖在机体免疫反应中的作用相当于抗原,可以激活多种免疫细胞,还能促进细胞因子生成,激活补体系统,促进抗体产生,对免疫系统发挥多方面的调节作用。
1.1巨噬细胞巨噬细胞在机体的免疫系统中占有极其重要的地位,它担负着吞噬病原微生物,处理抗原并提呈给淋巴细胞,启动特异性免疫应答并参与免疫调节等作用,是多糖作用的最主要靶点。
真菌多糖能明显提高巨噬细胞的吞噬能力。
唐庆九[3]等实验表明灵芝多糖可刺激小鼠巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β,产生NO,并可增强巨噬细胞的吞噬能力。
这可能是其增强机体免疫力的主要机制之一。
马兴铭[4]等实验表明小鼠腹腔注射猪苓多糖、茯苓多糖、灵芝多糖100mg/kg,能显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬指数,加强小鼠腹腔巨噬细胞的非特异性吞噬能力。
药用真菌多糖含量测定方法研究

脱 色 含 量 测 定 中图分类号 :Q 3 59 文献标识码 :A 文章编号 :10 03—8 1 (05 5—03 —0 30 20 )0 07 2
药用真菌 多糖具有抗肿瘤 、免疫 调节 、抗病毒 等作用 ,是近年来 研究 的热点 .。与此 不相 适应 2 J 的是 ,目前 药 用真 菌 多糖 含量 测 定方 法 不 一 ,脱 色 ,未脱色处理之 间的比较 至今未见报道 。多糖测 定过程 中,样 品是否需要脱 色完全凭技术人员 的经 验 。同一个样 品,有 的检 测机 构不进 行 脱色处 理 , 有的采用活性炭或过 氧化氢脱色 ,最后导致 同一样 品不 同检 测 机 构 测 出 的 结 果 不 一 ,这 种 状 况 已严 重 影响到 多糖 的进 一 步 开发 本 实 验从 云 芝 、蛹虫 草 、灵芝子实体 中提取 多糖 ,对多糖含量测定方法
-
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●
进行 比较 ,试 图找 到一 种简便可靠的多糖含量测定
方法 。
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l 材料 和 方法
1 1 材 料 . 111 试 验 材 料 ..
“ 0 02 001 0 06 0 08 0 l 0 2 I 0 I 4 0 6 l
V 1 4 o5 o. .N . 2
液 ,过氧化氢脱色处理 ;第 3 :多糖含 量测定 时 组 以 ( . I水 +08m 04r . n . L苯 酚 +4rI硫酸 )为空 白 . n 溶液 ,活性炭脱 色处理 ;第 4 :多糖 含量测定 时 组 以 ( . I稀 释到合 适倍 数 的待测液 +0 8m 04r . n . L苯 酚 +4t . )为空 白溶液 ,无 脱色处理 : I水 n 124 脱 色 处 理 .. ()过氧化 氢脱 色处理 :从 10m 1 0 L溶液 中吸 取 8m ,滴加 2~6滴 氨 水 ,将 p L H值调 至 8 , ~9 加入 1m 0 的过 氧化氢 ,4 下 脱色 1 ,过 L3 % 0 2h 滤并定容 至 l I 0r . n一 引。 ( )活性炭脱 色处 理 :从 10m 2 0 L溶 液中吸取 8 m. I ,加入 00 粉 末 活性 炭 ,在沸水 浴 中加 热 l .1g 5 mn i,趁热过滤 ,定容至 l I 0r . n。 ()未脱 色处 理的第 1 、第 4组 :从 10m 3 组 0 L 溶 液 中吸 取 8m ,定 容 至 l I L 0r . n。
榛蘑、元蘑混合浸膏中多糖含量测定方法的研究

加 4倍量 9 % 乙醇 静置 4 h 同上条 件离 心取沉 淀 , 水溶 5 8, 加
解, 重复醇沉 , 置 2h 离 心取 沉淀 , 纯化 水溶 解定 容至 静 4, 加 1m , 0 l作为供试 品溶液 。
2 3 测 定 方 法 .
分别取葡萄 糖标 准 品溶 液 2 0 l 供试 品溶 液 2 0 l .m 及 .m 于具塞 比色管中 , 5 加 %苯酚溶液10 l摇匀 , .m , 迅速滴加浓硫
2 2 样 品 溶 液 的 制 备 .
C( / ) mg m1
图 1 葡萄糖标准 曲线
2 4 2 精密度试验 ..
取同一供试 品溶 液 , “ . ” 按 2 3 项下 方法 分别 测定 6次 , 运用水提 醇沉法提 取 、 干燥 , 得蘑 菇干浸 膏 , 确称取 1 精 R D= . 1 ( =6 。 S 02% ) 9号浸 膏各一定量 , 置烧 杯中 , 分别加 1 倍 量纯化水 加热 2 2 4 3 稳定性试验 .. 溶解 , 不溶物3 0 r rn 0・i 0 a 下 离心 2mn 0 i 离心 除 去 , 上清液 取 3号供试 品溶液 0 4 l .m 定容 至 lml按 “ . ” 下方 O , 23 项 法每 间隔 3mn测定 一次 吸光度 ,S 0 3% ( 6 , 0i R D= .0 n= ) 结 收稿 日期 :0 1— 6— 4 2 1 0 2 h内基本稳定 。 基金项 目: 江省教 育厅 21 黑龙 00年度科 学技 术研 究 项 果表明显色在 3 244 重复性试验 .. 目( 目编号 :15 0 3 项 155 7 ) 平行取 3 号样 品溶液 02 l lm 容量瓶 中 , , .m 于 O l 定容 分 作者简介 : 桑咏 梅 ( 9 8一) 女 , 东菏 泽人 , 16 , 山 副教 授 。 别精密量取2O l 5 具塞 比色 管 中, “ .” .m 于 支 按 2 3 项下 方法 研究方 向: 中药炮制 。
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Advances in Analytical Chemistry 分析化学进展, 2017, 7(1), 9-15 Published Online February 2017 in Hans. /journal/aac https:///10.12677/aac.2017.71002文章引用: 果卉, 孙渺, 周婷婷. 真菌中多糖含量测定方法的研究概况[J]. 分析化学进展, 2017, 7(1): 9-15.Methods for the Determination of Fungal Polysaccharides ContentHui Guo, Miao Sun, Tingting Zhou *The Second Military Medical University, Shanghai, ChinaReceived: Feb. 6th , 2017; accepted: Feb. 20th , 2017; published: Feb. 27th , 2017Abstract Recently fungi polysaccharides are valuable application substance, which is used in antiviral, an-tiinflammatory, anticoagulation activity, hypoglycemic and hypolipidemic action. In addition their immunoregulation and anticancer activity have been received much concern. So it’s important fora rapid and accurate analysis and determination of fungal polysaccharides. Through the study of polysaccharide in recent years literature, this paper provides a comprehensive survey on research of methods for different fungus polysaccharides. KeywordsFungus Polysaccharides, Determination, Colorimetric Method, Chromatography Method真菌中多糖含量测定方法的研究概况果 卉,孙 渺,周婷婷*第二军医大学,上海收稿日期:2017年2月6日;录用日期:2017年2月20日;发布日期:2017年2月27日摘 要真菌多糖是近些年来应用价值丰富的一类活性物质。
不仅具有抗病毒,抗炎,抗凝血,降血糖,降血脂等生物活性,还因其具有免疫调节,抗肿瘤等活性而备受关注。
因此对于真菌多糖快速准确的分析检测具有重要意义。
本文综述了近年来国内外不同类的真菌多糖的含量测定方法,以期对进一步的研究提供参考。
*通讯作者。
果卉等关键词真菌多糖,含量测定,比色法,色谱法Copyright © 2017 by authors and Hans Publishers Inc.This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY)./licenses/by/4.0/1. 引言真菌多糖又名多聚糖,在国际上可被称为“生物反应调节物”,简称“biological response modifiers,BRM”,自真菌子实体、菌丝体、发酵液分离而得到。
一般分为纯多糖和杂多糖两类,纯多糖由10个以上单糖通过糖苷键连接而形成的直链或支链结构,而杂多糖除含有纯多糖成分,还可含有肽链和脂类成分。
目前真菌多糖已成为国内国际众多科学领域研究热点之一,主要研究领域包括分子结构和化学特征,提取工艺优化,分离纯化技术,食用药用价值以及质量控制等[1] [2] [3],其中多糖的定量分析技术是其质量控制的关键。
真菌多糖的含量测定方法可大体归纳为三类,其中最常用的为比色法,即间接法,此外还包括直接法即色谱法,以及容量滴定法。
由于含量测定过程中的试剂选择,温度控制,条件优化等均会对真菌多糖的含量测定结果产生影响,本文就真菌多糖的定量分析方法作以综述。
2. 比色法比色法在真菌多糖定量分析方法中应用最为广泛,是一类利用显色剂与单糖缩合反应而建立的测定其吸光值的传统方法。
具体有苯酚硫酸法[4],蒽酮硫酸法[5],地衣酚法[6],3,5二硝基水杨酸法(DNS) [7]。
其中,苯酚硫酸法和蒽酮硫酸法直接测定总糖含量,DNS法不仅可以测定总糖还可测定还原糖含量,而地衣酚法主要测定戊糖和己糖含量。
比色法因其操作简便而被广泛使用,比如常见的真菌多糖如灵芝多糖的药典所列方法为蒽酮硫酸法,而对于茯苓多糖的含量测定药典未举出具体方法,方东军[8]等采用苯酚硫酸比色法测定总糖含量,结果准确,重现性好。
2.1. 苯酚–硫酸法苯酚–硫酸法是真菌多糖含量测定的最常见方法,大多以葡萄糖为标准品,它是利用真菌多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,脱水后与苯酚生成橙黄色化合物,于紫外490 nm处测定吸光度。
吸光值与糖的浓度成正比,因此可用于糖的定量测定。
目前多数国内外文献均采用苯酚–硫酸法对真菌多糖含量进行测定。
文献表明,该方法已应用于食用类多糖如白玉菇多糖,杏鲍菇多糖等的测定,此外,药用类多糖如甘草多糖[9],人参多糖[10],北芪菇多糖[11]等也采用此法进行含量测定。
蓝永锋等[12]用此法快速测定黄芪中多糖的含量,结果证明其重复性强,RSD为2.53;稳定性好,在显色反应可维持4 h以上,RSD = 3.3;回收率高,RSD为1.78,该法操作简单,试剂便宜,是一种常用的测定多糖含量方法。
此外,苯酚硫酸法可降低蛋白质及麦芽糊精等辅料对含量测定的影响,是一种使用性广的的测定方法。
为提高该法的可应用性,齐素芬等[13]对花椒叶多糖的实验条件包括标准单糖和工作波长,加样次序,显色时间,浓硫酸添加量,苯酚添加量,显色温度进行筛选,确定最佳吸光度值。
最终建立一种5%苯酚添加量,3.5 ml浓硫酸量,30℃条件下,显色时间维持在25 min的灵敏,特异,精确度高的含量测定新方法。
另外,针对苯酚易氧化生成有色物质这一副反应,实验中应避光或操作迅速。
Albalasmeh等[14]还通果卉等过将其法改良为硫酸–紫外法而避免苯溶剂对眼,皮肤,呼吸系统,神经系统的威胁,但该法只适于纯多糖类水溶液测定,本身有紫外吸收的糖类也避免该法的应用。
2.2. 蒽酮–硫酸法蒽酮–硫酸法利用糖在浓硫酸的作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛后与蒽酮反应生成蓝绿色衍生物,于紫外620~625 nm处测定吸光度,吸光值与多糖含量成线性,故可用于糖的定量测定。
它是除苯酚–硫酸外较为常用的一种测定总糖量的方法。
该法可囊括所有碳水化合物的测定,此外寡糖和多糖,包括淀粉纤维素等均可用此法进行含量测定。
郭晓蕾等[15]通过比较苯酚–硫酸和蒽酮–硫酸对灵芝多糖的含量测定,证明硫酸蒽酮法吸光值高,线性范围宽,作为优选方法。
不仅如此,为避免苯酚污染等因素,刘洁等[16]采用硫酸蒽酮法测定香菇多糖含量,借鉴药典中灵芝多糖含量测定法,选95%乙醇作为实验试剂,所得数据精密度高,稳定性好。
该法适用范围广,可在强酸强碱性条件测定,但其所用蒽酮试剂稳定性差且不易溶于水,需现用现配,且此法受蛋白质干扰,存在加热后最大吸收峰偏移的缺点,测定前应考察是否进行前处理。
杨瑞瑞等[17]改良了硫酸–蒽酮法中的硫酸浓度,加热条件,反应时间,并选用98%硫酸溶液完全溶解蒽酮,确定了优化条件并使反应系统自行升温,使得灵芝多糖含量简易可行结果准确。
2.3. 地衣酚法地衣酚法是指多糖与浓盐酸反应生成糠醛后与地衣酚试剂反应生成有色物质,该物质在670 nm处有最大的吸光值,利用标准曲线可以根据吸光度计算出戊糖的含量。
该法对戊糖专一性强,但己糖,DNA 和RNA也能发生相似颜色变化而测定含量。
其反应条件易于控制,且灵敏度高,但试剂昂贵。
周纪东等[6]采用地衣酚–盐酸法测定黄花菜多糖含量时,证明以不同单糖作对照品时,所得多糖含量均不同。
针对糠醛缩合显色法测定多糖,王建壮等[18]证实了样品前处理的重要性,即醇沉的次数决定低分子单糖和低聚糖以及苷类的洗脱程度,通过考察酸用量和浓度等,确定合适反应条件,该法重现性好,精密度回收率高。
2.4. 3,5-二硝基水杨酸法多糖可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖,DNS试剂与还原糖共热产生棕褐色化合物,特定波长处有最大吸收值,根据吸光度与多糖含量的线性关联可计算其含量值。
作为紫外分光光度法测定多糖方法中的一类,3,5-二硝基水杨酸法的应用虽没有苯酚–硫酸法和蒽酮–硫酸法范围广,但它消除了硫酸的腐蚀性,具有试剂稳定,操作简便,安全性好,费用低,易普及等特点。
该法通过测定总糖和单糖准确计算多糖含量,完善了苯酚硫酸和蒽酮硫酸法对于总糖测定而不能准确表达多糖含量的缺陷。
就实验中反应温度和DNS显色时间对含量测定的影响,林志銮等[19]和韦练等[20]分别证实沸水浴下显色5min 作为优化条件,准确性高精密度良好。
3. 色谱法色谱法也为直接法,借助相应仪器设备直接测定多糖本身,例如高效液相色谱法、气相色谱法等。
其方法快速、准确,但更多用于测定多糖结构中单糖种类及其含量。
3.1. 高效液相色谱法高效液相色谱法以高压输送流动相,采用高效固定相及高灵敏度检测器进行多糖定量分析。
随着分析检测技术的发展,由最初的示差检测器到柱前衍生化HPLC法为目前检测多糖中单糖组成常用方法。
果卉等除常用检测器外,卞振华[21]应用HPLC-ELSD(高效液相色谱蒸发光散射检测器)分离测定桔梗多糖,结合超滤技术以测得不同分子量范围多糖含量,证明多糖集中在70K和100K范围内。
衍生化HPLC利用衍生化试剂如吡唑啉酮等处理多糖,克服了示差检测器低灵敏度、易受流速、压力和组分改变的缺陷,高效准确的测定中性还原单糖含量及组成。
HPLC法中常用衍生化试剂为PMP。
Li等[22]采用以PMP为衍生化试剂的柱前衍生化HPLC法定量当归多糖成分,由于当归多糖的低电离效率,所以不采用HPLC-MS法。
该法在HPLC基础上采用四氢呋喃进行洗脱,完成了当归多糖中单糖组分糖醛酸、氨基酸、中性糖首次同步测定分析过程,结果准确,回收率高,精密度好。