医学实验技术用到的试剂配制方法
核酸提取与纯化试剂配方
核酸提取与纯化试剂配方一、细胞裂解液细胞裂解液是核酸提取与纯化的关键试剂之一，其主要成分包括：1.缓冲液：如Tris-HCl、EDTA等，用于维持溶液的pH值和稳定金属离子。
2.蛋白酶抑制剂：如PMSF等，用于抑制蛋白酶活性，保护核酸不被降解。
3.去垢剂：如SDS等，用于破坏细胞膜和细胞器，使核酸从细胞中释放出来。
二、洗涤液洗涤液主要用于去除杂质和蛋白质，提高核酸的纯度。
其成分主要包括：1.缓冲液：如Tris-HCl、EDTA等，用于维持溶液的pH值和稳定金属离子。
2.无水乙醇：用于去除盐离子和其他有机杂质。
3.去垢剂：如SDS等，用于破坏蛋白质结构，使其易于去除。
三、平衡液平衡液主要用于调节溶液的离子浓度和pH值，以便进行后续的纯化操作。
其成分主要包括：1.缓冲液：如Tris-HCl、EDTA等，用于维持溶液的pH值和稳定金属离子。
2.盐离子：如KCl、NaCl等，用于调节溶液的离子浓度。
四、洗脱液洗脱液主要用于从纯化柱上洗脱核酸，其成分主要包括：1.缓冲液：如Tris-HCl、EDTA等，用于维持溶液的pH值和稳定金属离子。
2.洗脱液添加剂：如甲醇、异丙醇等，用于提高洗脱效率。
五、储存液储存液主要用于储存纯化后的核酸，其成分主要包括：1.缓冲液：如Tris-HCl、EDTA等，用于维持溶液的pH值和稳定金属离子。
2.防腐剂：如叠氮化钠等，用于抑制微生物生长。
3.其他添加剂：如抗坏血酸、抗氧化剂等，用于提高核酸的稳定性和抗氧化能力。
在制备和使用核酸提取与纯化试剂时，需注意以下几点：1.应选择高质量的试剂和原料，以保证试剂的质量和稳定性。
2.应按照规定的操作步骤进行试剂配制和使用，以保证实验结果的准确性和可靠性。
3.应注意试剂的储存和使用期限，避免过期或变质试剂的使用。
实验室常用试剂和缓冲液配方
实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液配方有很多种，下面将介绍一些常用的试剂和缓冲液的配方：一、试剂的配方1. Tris缓冲液：- 3 M Tris-Cl，pH 7.4（准备方法：将121.1 g Tris粉末溶解在800 mL去离子水中，使用HCl调节pH值至7.4，并将溶液体积加至1 L）2.NaCl溶液：-5MNaCl（准备方法：将287.7gNaCl溶解在800mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）3.验血试剂：-4%NaOH溶液（准备方法：将40gNaOH溶解在900mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）-5%CuSO4溶液（准备方法：将50gCuSO4溶解在900mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）-2%K4[Fe(CN)6]溶液（准备方法：将20gK4[Fe(CN)6]溶解在900mL去离子水中，并将溶液体积加至1L）4.PBS缓冲液（磷酸盐缓冲液）：-10×PBS缓冲液（准备方法：将80gNaCl，2gKCl，11.5gNa2HPO4，2gKH2PO4溶解在800mL去离子水中，并将溶液体积加至1L。
pH值可以调节至7.4左右）5. Tris-EDTA缓冲液（TE缓冲液）：- 10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 8.0（准备方法：将12.1 gTris溶解在800 mL去离子水中，然后加入0.37 g EDTA，使用HCl调节pH值至8.0，并将溶液体积加至1 L）二、缓冲液的配方1. Tris-HCl缓冲液：- 50 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1% Triton X-100，pH 7.4（准备方法：将6.05 g Tris，5.8 g NaCl，0.1 g Triton X-100溶解在800mL去离子水中，使用HCl调节pH值至7.4，并将溶液体积加至1 L）2. Tris-Borate缓冲液（TBE缓冲液）：- 89 mM Tris，89 mM boric acid，2 mM EDTA，pH 8.3（准备方法：将10.81 g Tris，5.49 g boric acid，3.72 g EDTA溶解在800 mL去离子水中，使用NaOH或HCl调节pH值至8.3，并将溶液体积加至1 L）3. Tris-Glycine缓冲液：- 25 mM Tris，192 mM glycine，0.1% SDS，pH 8.3（准备方法：将3.03 g Tris，14.35 g glycine溶解在800 mL去离子水中，使用HCl调节pH值至8.3，并将溶液体积加至1 L）4. Tris-Acetate缓冲液（TAE缓冲液）：- 40 mM Tris，20 mM acetic acid，1 mM EDTA，pH 8.3（准备方法：将4.84 g Tris，1.86 g acetic acid，0.37 g EDTA溶解在800 mL去离子水中，使用NaOH或HCl调节pH值至8.3，并将溶液体积加至1 L）5. Phosphate缓冲液：- 100 mM sodium phosphate，pH 7.0（准备方法：根据目标pH值使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节溶液pH至7.0，并将溶液体积加至1 L）以上只是一些常用的试剂和缓冲液的配方，并不是全部。
ELISA试剂配制及实验流程
ELISA试剂配制及实验流程ELISA(酶联免疫吸附实验)是一种常用的免疫学实验技术，用于检测抗体或抗原的存在与浓度。
ELISA试剂是ELISA实验中的关键组成部分，正确配制试剂和正确的实验流程对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
一、ELISA试剂的配制1. 背景缓冲液（Coat buffer）：该缓冲液用于包被酶标板上的抗原或抗体，并且用于洗涤步骤中的洗板缓冲液。
配制方法：将10 mL Tris缓冲液（100 mM，pH 9.6）加入0.15 g NaCl，搅拌溶解，最后加入一滴Tween-20或其他润湿剂。
2. 试样稀释液（Sample buffer）：该缓冲液用于稀释试样，使其适应ELISA实验的测量范围。
配制方法：根据试样的含量和要求进行合适的稀释，一般可选择PBS （含0.05% Tween-20) 来稀释。
3. 标准品（Standard）：该物质用于建立标准曲线，以根据样品的读数来确定样品中目标物的浓度。
配制方法：首先通过相关实验确定标准品的初始浓度，使用稀释液进行逐步的2倍稀释，以获得不同浓度的标准溶液。
4. 酶标抗体（Enzyme labeled antibody）：该抗体与目标物结合，可与酶底物发生反应产生荧光或颜色。
配制方法：根据抗体的浓度和信号放大的要求，将抗体稀释在稀释液中。
5. 底物液（Substrate solution）：在酶底物的作用下产生颜色，用于测定目标物的浓度。
配制方法：根据酶底物的要求和实验条件，按照相应的方法配制底物液。
二、ELISA实验流程1.包被抗原或抗体：加入适量的抗原或抗体至酶标板孔中，在4°C 下静置一夜或在37°C下孵育数小时，使其吸附到酶标板表面。
吸附后，将酶标板孔洗涤干净以去除未结合的物质。
2.阻断：将阻断液加入酶标板孔中，避免非特异性结合，阻断剂一般为牛血清蛋白、鱼胶蛋白等。
孵育一段时间后，洗涤酶标板孔以去除阻断液。
第三节、试剂的配制与使用
(二)、酶、辅酶 酶和辅酶作为生物试剂，现已广泛应用于工农业生产、科学研究和 卫生事业的各个领域。在生物化学检验中，酶作为分析试剂具有专 一性高、反应条件温和、催化反应速度快、无毒害等优点。酶作为 分析试剂，能测定标本中用一般化学方法难于检测的物质。酶分析 方法至今已建立了二百多种。可测定一百多种临床生化检验项目， 商品试剂盒亦有五、六十种之多。 在分子生物学技术中，限制性核酸内切酶、聚合酶、DNA连接 酶等工具酶的发现 和应用，使人类重组DNA、探究基因的愿望得以 实现，为基因工程这样一门创造性科学提供了有效的工具。 酶是一种生物催化剂，其活性受许多因素的影响；要长期保存 而不失去活性是比较困难的。通常，结晶干燥的固体酶制剂比液态 酶易于保存，酶试剂最好用深色瓶盛装，置干燥器内，再将干燥器 放人低温冰箱，这样能做到低温、干燥、避光的保存要求。
离心机的种类很多，按其转速的不同，分普通离心机 (<6000rom)、高速离心机 (6000~25000rpm)和超高速离 心机(<30000rpm)。
四、实验试剂的配制和使用
(一)、试剂配制的一般原则
1．生物化学检验实验室配制试剂用水均应用蒸馏水或去离子水。 2．根据实验要求选用不同规格的试剂，一般情况下大多选用AR级， 一般溶液如无特殊要求，可选用CP级试剂。 3．正确合理的选用衡器和量器。配制标准液或缓冲液称重应选用1 ／10 000的分析天平。量器应选用一等容量瓶和吸管。一般试剂如 显色剂、终止剂等无特殊要求的，则选用粗天平和量筒即可。 4．试剂开瓶后，如不能一次用完，应及时予以封闭保存，特别是 易吸潮试剂。对见光易变质的试剂，外面要用黑纸包裹。 5．称量或量取试剂用的器皿，取试剂用的药勺均应洁净干燥。试 剂一经取出(特别是液体试剂)，不得放回原瓶，以免影响试剂纯度。 6．配制好的试剂，应贴标签，写上试剂名称、浓度、配制日期。
人纤维蛋白原配置方法
人纤维蛋白原配置方法1.实验室准备：-纯净水：用于制备溶液的纯净水，最好是经过反渗透处理的水或者高纯度的去离子水。
- PBS缓冲液：磷酸盐缓冲液（phosphate-buffered saline），用于制备纤维蛋白原溶液和洗涤细胞或材料。
2.纤维蛋白原的制备：-根据需要的浓度，按照纤维蛋白原的包装上的说明书，将适量的纤维蛋白原粉末称取放入干燥的试管或容器中。
- 添加适量的PBS缓冲液进行溶解。
通常，根据需要的浓度和工作容量的不同，纤维蛋白原的溶解浓度会有所区别。
例如，用于涂覆细胞培养板或培养皿的浓度一般为10 μg/ml；用于浸泡细胞载体（如凝胶）的浓度一般为100 μg/ml。
在溶解过程中，可以用像麦芽糖或牛血清蛋白（BSA）等载体蛋白质（carrier protein）进行稀释和保护。
-离心纤维蛋白原溶液，以去除不溶解的颗粒。
3.纤维蛋白原的保存：-将制备好的纤维蛋白原溶液通过过滤器（如0.22μm的滤膜）过滤，以去除可能的细菌、真菌或其他污染物。
-将过滤后的溶液分装到干净的冻存管中，尽量避免氧气接触。
-使用低温冷冻器或液氮存储纤维蛋白原的冷冻样品。
4.纤维蛋白原的使用：-取出冷冻的纤维蛋白原样品，并迅速解冻。
-在准备细胞培养的材料上使用纤维蛋白原涂层。
将解冻后的纤维蛋白原溶液均匀涂覆于细胞培养板、培养皿或其他载体上。
可以使用吸管或移液器轻轻摇动溶液，使其充分覆盖整个表面。
-将涂层后的材料在室温下或冰箱中静置一段时间，以使纤维蛋白原牢固粘附在表面上。
具体的时间因工作要求而有所不同，一般需要30分钟到2小时。
-去除多余的纤维蛋白原溶液。
小心地从涂有纤维蛋白原溶液的材料上倒出多余的溶液，并用PBS缓冲液轻轻洗涤1-2次以去除残留的纤维蛋白原。
-使用涂有纤维蛋白原的材料进行细胞培养、细胞黏附迁移实验或其他相关研究。
需要注意的是，在配置纤维蛋白原溶液和进行纤维蛋白原涂层的过程中，应尽量避免纤维蛋白原的过度稀释和暴露在环境中。
医学实验技术操作作业指导书
医学实验技术操作作业指导书一、实验室安全须知1. 实验室入口处需佩戴实验服、口罩和手套，并确保服装整洁。
2. 切勿在实验室内进食、饮水或吸烟。
3. 遵循实验室内规定的紧急疏散路线和安全出口，确保熟悉火灾和紧急救援的相关事项。
4. 操作前，确保室内的化学药品储存顺序和标签是否清晰可见。
5. 操作时，注意保持实验台整洁，避免杂物堆积。
二、实验器材准备1. 确认所需实验器材是否完整并处于良好状态。
2. 准备所需的试剂和溶液，并按照指定浓度配制。
3. 实验前检查实验仪器和设备的工作状态，确保正常运行。
三、实验步骤1. 实验前进行充分的个人卫生，洗净双手并佩戴手套。
2. 取出所需试剂，并按照实验要求称取或滴取所需量。
3. 开始实验前，先阅读相关实验操作指南，确保操作顺序和步骤的正确性。
4. 按照操作步骤，依次进行实验操作，注意实验时间和温度。
5. 操作期间，保持注意力集中，避免走神或转移注意力。
6. 注意观察实验结果，及时记录数据或变化，并按照实验要求进行分析和解释。
7. 实验完成后，及时清理实验台和器材，将废弃物物品按照规定进行分类和处理。
四、实验安全注意事项1. 禁止单独操作需要两人以上合作或需要特殊设备时的实验项目。
2. 实验过程中如遇特殊情况或意外事故，应立即向导师或实验室负责人报告。
3. 实验结束后，注意关闭仪器设备电源，归位实验工具和器材，保持实验室整洁。
4. 实验结束后，注意检查并关闭所有实验用的液体和气体阀门，确保安全。
五、实验结果记录和分析1. 实验结束后，仔细整理和整合实验记录，保证数据清晰准确。
2. 对于实验结果进行合理分析和解释，提出可能的原因和优化方案。
3. 绘制实验数据曲线、图表或统计表格，以便进一步研究和参考。
六、实验评估和总结1. 对实验过程进行自我评估，包括操作规范性、实验结果准确性等方面。
2. 总结实验的意义和价值，回答实验中的疑问或问题。
3. 就实验中存在的问题提出改进意见或优化建议。
实验室常用试剂和缓冲液配方
实验室常用试剂和缓冲液配方PBS（磷酸盐缓冲液）是一种常用的生物化学缓冲液，用于洗涤和稀释生物化学试样。
配方：-NaCl：8g-KCl：0.2g-Na2HPO4：1.42g-KH2PO4：0.24g将上述物质溶解在1升蒸馏水中，调节pH值至7.4、用1M（摩尔浓度）盐酸或1M氢氧化钠进行调节。
2. Luria-Bertani (LB) 培养基配方LB培养基是微生物学研究中常用的培养基，适用于大多数细菌和酵母菌的培养。
配方：- 水解酪蛋白（tryptone）：10 g- 酵母粉（yeast extract）：5 g-NaCl：10g将上述物质溶解在1升蒸馏水中，用1M盐酸或1M氢氧化钠调节pH 至7.0。
可以选择添加洗涤剂Tween-20（0.1%）以提高溶解度。
SSC缓冲液广泛用于核酸杂交实验等生物学研究中。
配方：-NaCl：175.3g- Na3Citrate·2H2O：88.2 g-EDTA：37.2g将上述物质溶解在1升蒸馏水中，调节pH值至7.0-7.2、可以选择添加DEPC（二硫酰二甲酯）处理，增强其功能。
4.甲醛溶液甲醛溶液常用于生物样品固定以及染色实验。
配方：-甲醛：37%-PBS或水将适量的甲醛加入PBS或水中，制备所需浓度的甲醛溶液。
5. β-羟丁酸钠（β-Hydroxybutyrate）溶液β-羟丁酸钠是一种常用的减少剂，用于生物化学实验中。
配方：-β-羟丁酸钠：1M根据需求将适量的β-羟丁酸钠溶解在合适的溶剂中。
这里只是列举了几个常见的试剂和缓冲液配方，实验室试剂和缓冲液种类丰富多样，具体使用取决于研究目的和实验要求。
在进行实验之前，建议仔细阅读相关文献和制造商提供的说明书，并按照正确的比例和步骤配制试剂和缓冲液。
实验常用试剂缓冲液的配制方法
实验常用试剂缓冲液的配制方法实验室中经常使用各种试剂和缓冲液进行实验。
下面我将介绍一些常用试剂和缓冲液的配制方法。
1.磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液一般有三种类型的配方：PBS（磷酸盐缓冲盐溶液）、PBST（含Tween-20的磷酸盐缓冲盐溶液）和TBS（三氯甲烷缓冲盐溶液）。
配制PBS缓冲液：-加入适量的8.0g/L氯化钠和0.2g/L磷酸氢二钠到1L去离子水中。
-调整pH值至7.4，采用10M氢氧化钠（NaOH）或者盐酸（HCl）。
-用去离子水稀释至1xPBS。
配制PBST缓冲液：-配制1xPBS。
- 加入0.1%（v/v）Tween-20。
-混合均匀。
配制TBS缓冲液：-加入2.42g/L三氯甲烷到1L去离子水中。
-加入20g/L三甲基氯化胺到溶液中。
-调整pH值至8.0，采用盐酸（HCl）。
-用去离子水稀释至1xTBS。
2.毛细管电泳缓冲液毛细管电泳缓冲液的配制方法取决于电泳类型，一般包括凝胶和毛细管电泳。
配制凝胶电泳缓冲液：-加入8g/L琼脂糖和0.4g/L硼酸到1L去离子水中。
-用热板搅拌器加热，搅拌至溶解。
-冷却至室温后，调整pH值至8.3，采用盐酸（HCl）或氢氧化钠（NaOH）。
-用去离子水稀释至所需浓度。
配制毛细管电泳缓冲液：-加入10mM氢氧化钠（NaOH）和1mM二硼酸氢钠到500mL去离子水中。
-调整pH值至9.2，采用盐酸（HCl）。
-加入1mM十二烷基硫酸钠。
-用去离子水稀释至所需浓度。
3.蛋白质含量测定蛋白质含量测定一般采用BCA法、Lowry法或Bradford法。
BCA法配制试剂：-在15mL玻璃试管中加入BCA试剂（提取液A）。
-加入0.1M硫酸（提取液B）。
-混合提取液A和提取液B，即得到试剂。
Lowry法配制试剂：-加入白蛋白标准品和Na2CO3/NaOH缓冲液（A液）到250mL锥形瓶中。
-混合硫酸/磷酸/酒精试剂（B液）。
-将A液倒入B液中混合，待用。
Bradford法配制试剂：-加入试剂A到450mL去离子水中。
ELISA试剂及溶液配制及实验步骤
ELISA试剂及溶液配制及实验步骤ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种广泛应用于生物化学和生物医学研究领域的分析技术。
它通过酶标记的抗体与目标物结合，并利用酶的催化作用来测量目标物的含量。
下面将介绍ELISA实验所需的试剂及溶液配制以及实验步骤。
一、试剂及溶液配制1.涂板液：将PBS溶液（1X，pH7.4）加入10%胎牛血清（FBS）中，最终浓度为1%。
用该液体涂覆96孔酶标板，在4℃下静置过夜。
涂板液的制备可以在使用前一天进行。
2.阻断缓冲液：根据实验需求选择合适的阻断缓冲液，常用的有3%BSA（牛血清蛋白）或者5%乳清。
3.洗涤缓冲液：配制PBS-T缓冲液（PBS中加入0.1%的Tween-20）。
4.标准曲线样品：按照实验需要选择合适的标准品，并按照厂家提供的方法配制标准曲线样品浓度序列。
5.样品：收集待测物样品，如血清、尿液、细胞上清等。
将样品离心去除杂质，获得清洁的上清液。
6.酶标记的一抗：选择特异性强、纯度高的一抗，如兔抗体、小鼠抗体等。
根据实验目的和待测物的性质选择合适的抗体。
7.酶标记的二抗：选择与一抗宿主不同的宿主动物制备的酶标记二抗。
根据一抗的种类和宿主动物选择相应的二抗。
8.辣根过氧化物酶标记物质（HRP）：将HRP与一抗或者二抗结合，用于检测目标物的存在。
二、ELISA实验步骤1.将涂板液倒出，用PBS-T洗板3次，每次将洗液孔内保持在饱和状态，吸尽孔内液体。
2.加入阻断缓冲液100μL/孔，孵育1小时，此过程是为了避免非特异性结合。
3.吸尽阻断缓冲液，加入稀释好的标准品和样品，每孔100μL，通常每个样品需要取3个重复孔。
同时，加入相同体积的PBS作为空白对照。
4.孵育2小时，室温孵育条件可在37℃下进行。
5.吸尽样品/标准品，用洗涤缓冲液洗板3次，每次将洗液孔内保持在饱和状态，吸尽孔内液体。
ELISA试剂用洗涤缓冲液洗涤是为了去除非特异性结合物质。
6.向每个孔中加入适量的酶标记的一抗，孵育1小时。
基础医学实验技术指南
细胞传代培养操作要点
01
贴壁细胞的消化
倒掉旧培养基，加入少量胰酶溶液覆盖瓶底，消化一定时间后倒掉胰酶
溶液，加入新培养基终止消化，用吸管吹打贴壁细胞使其悬浮。
02
悬浮细胞的传代
将原培养瓶中的培养基吸出，用吸管轻轻吹打使细胞悬浮，然后根据分
传瓶数补加一定量的新鲜培养基，分装到几个新的培养瓶中。
03
传代比例
离心操作
设置合适的转速和时间，启动 离心机进行离心操作。
样品处理
离心后，取出离心管，根据需 要进行上清液吸取、沉淀物收
集等处理。
移液器使用及液体转移
移液器类型与选择
根据实验需求，选择适当的移液器类 型，如手动移液器、电动移液器等。
移液器使用
吸取液体时，将移液器吸头插入液面 下，缓慢吸取；排放液体时，将吸头 贴紧容器壁，缓慢排放。
将转录组学和蛋白质组学数据进行整合分析，揭示基因表达调控和蛋白质功能之间的关 联。
THANKS
感谢观看
DNA质量检测
通过凝胶电泳、紫外分光光度计等方 法检测DNA的纯度和浓度。
DNA纯化
通过去除蛋白质、RNA等杂质，获得 高纯度的DNA。常用方法有酚/氯仿 抽提、乙醇沉淀等。
RNA提取与反转录过程
RNA提取
利用RNA在细胞中的存在形式，通过物理或化学方法破碎 细胞，使RNA释放到溶液中。常用方法有Trizol法、异硫 氰酸胍法等。
基础医学实验技术 指南
汇报人：XX 2024-01-18
目录
• 实验前准备 • 基本实验操作技术 • 细胞培养与传代技术 • 分子生物学实验技术 • 免疫学实验技术 • 遗传学实验技术 • 生物信息学在基础医学中应用
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实验中用到的试剂配方
一、WB实验
1.电转液（PH=8.3）
甘氨酸 14.5g
Tris 2.9g
甲醇 200ml
蒸馏水至 1000ml
先用蒸馏水溶甘氨酸，最后加甲醇，室温保存，2-3次可用，最好4度保存，可配制成2x转移缓冲液，稀释后可用。
2.TBS缓冲液
1mol/L Tris-HCL （PH=7.5） 10ml
NaCl 8.8g
蒸馏水至 1000ml
可配制成10x转移缓冲液，稀释后可用。
3.TBST缓冲液
20%Tween 1.65ml
TBS 700ml
混匀后即可使用，最好现用现配。
二、免疫染色相关实验
5.多聚甲醛溶液（4%）
多聚甲醛 40g
1×PBS 定容至1L
6.柠檬酸盐抗原修复液（1×）
柠檬酸三钠 3g
柠檬酸 0.4g
dH2O 定容至1L
PH调至6.0
7.盐酸酒精（1%）
浓盐酸 2.5ml
75%乙醇定容至250ml
8.氨水（1%）
氢氧化铵 2.5ml
dH2O 定容至250ml
三、其他
4.红细胞裂解液
NH4CL 2g
KHCO3 0.25g
ddH2O 250ml
0.5M EDTA 250ul
最后用除菌过滤器过滤，待用。