Waters Alliance 2695 HPLC 操作及维护讲课稿
2024版Waters2695仪器使用培训
工作原理及结构组成
工作原理
基于液相色谱技术，通过高压输液泵将流动相泵入装有固定相的色 谱柱，样品在色谱柱内完成分离后，进入检测器进行检测
结构组成
主要由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理系统等 部分组成
输液泵
提供稳定、精确的流动相流速
工作原理及结构组成
进样器
将样品注入色谱柱
色谱柱
装有固定相，用于样品的分离
检测器
检测分离后的样品组分
数据记录及处理系统
记录色谱图，并进行数据处理和 分析
主要性能指标
压力范围
最高可达40MPa（400bar， 5800psi），适用于各种色谱柱 和流动相
流量范围
0.001-10.000mL/min，可满足 不同分析需求
精度
<0.1%RSD，保证分析结果的准 确性和重复性
梯度混合精度
检查仪器状态，确保 各部件正常且无报错 信息。
样品准备及进样方法
根据实验要求准备样品，确保 样品纯净且无杂质。
选择合适的进样器和进样针， 将样品注入进样器中。
设置进样参数，如进样体积、 进样速度等，并启动进样程序。
数据采集与处理参数设置
01
在控制软件中设置数据 采集参数，如采集时间、 数据间隔等。
数据质量控制与评估
01
02
03
质量控制样品
在分析过程中，需加入质 量控制样品，以检验分析 方法的准确性和可靠性。
数据质量评估指标
制定数据质量评估指标， 如精密度、准确度、检出 限等，对数据质量进行全 面评估。
不合格数据处理
对于不合格数据，需进行 原因分析并采取相应措施 进行处理，确保最终结果 的准确性和可靠性。
WATERS 2695,2487,2414,2998高效液相色谱仪操作规程
WATERS 2695/2487/2414/2998高效液相色谱仪操作规程1. 目的：为使对WATERS 2695/2487/2414高效液相色谱仪的使用规范化，特制定本规程。
2. 范围：涉及对WATERS 2695/2487/2414高效液相色谱仪的使用。
3. 职责：QC检验员应严格遵守本规程。
4. 内容：4.1开机4.1.1接通电源，打开电脑主机、显示器的开关，进入Windows画面。
4.1.2 打开Alliance 2695系统的电源，仪器进行自检，“Idle”状态表示开机测试正常。
4.1.3 Wet Prime冲洗：少量气泡，执行Wet Prime。
A利用方向键将光标移至“composition”字段，将欲Wet Prime的溶剂输入100%。
B按“Direct Function”功能键，选择Wet Prime，按“OK”。
C选择流速和冲洗时间，按“OK”。
D重复上述步骤直至所有溶剂做完Wet Prime。
4.1.4 Dry Prime冲洗：大量气泡或者通道走空，执行Dry Prime。
A按“Direct Function”功能键，选择Dry Prime，按Enter。
B利用方向键将光标移至各通道，选择待Dry Prime的通道。
B同时打开阀门，用注射器帮助排液D重复上述步骤直至所有溶剂做完Dry Prime。
4.1.5设定溶剂：在Status(1)画面，利用方向键将光标移至“composition”字段，将所需溶剂输入适当的百分比。
4.1.6设定流速：在Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Flow”字段，输入所需流速。
4.1.7脱气：在Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Degasser”位置，按Enter，利用上下键选择所需要的模式（On:除气装置开启；Off：除气装置关闭）4.1.8置入转盘A打开样品转盘舱门，屏幕会显示A、B、C、D、E五个转盘，按A可取出A盘（每个转盘上可放置24个样品瓶，共计120个）。
watersHPLC2695操作规程
Waters 2695 型高效液相色谱仪操作规程
1.打开电脑，再打开色谱仪和检测器电源开关，等待仪器自检。
当仪器自检完
毕后，色谱仪屏幕上的状态显示区会出现“idle”状态，此乃表示开机测试正常。
2.灌注溶剂通道，打开排液阀，按“Menu/Status” 键，进入Status→按“Direct
Function” 键，选择Dry Prime，然后按OK→按屏幕上你想dry prime的相应流路键→按continue，手动抽至溶剂流出。
3.湿灌注。
按“Direct Function” 键，选择Wet Prime，然后按OK→输入用于prime
的流速（7.5mL/min）和持续时间（6min）→按OK。
4.将样品瓶放入样品转盘内，并记录各瓶号名称。
5.双击电脑桌面上的Empower图标，输入用户名和密码，进入Empower软件控
制。
编辑项目方法和样品方法。
6.运行样品，采集数据，记录各物质的色谱峰。
记下各组分的保留时间和峰面
积。
7.使用完毕，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样
针和柱塞杆密封垫，确保2695 分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源开关，关闭检测器电源开关。
8.处理数据并打印报告后，关闭计算机和打印机电源开关，并做使用登记。
Waters2695操作规程
Waters2695高效液相色谱操作规程[开机程序]1. 状态检查：1）检查仪器外观是否完好2）检查各种线缆连接是否稳固，外表有无损伤痕迹3）确认环境温度在15至35℃之间4）相对湿度在20%至80%之间2．配件安装：无3. 接线要求：1）高效液相色谱主机电源2）连接电脑主机和显示器电源4. 开机步骤：1）打开电脑电源，进入windows系统2）打开高效液相色谱电源，仪器开始自检（约5～6min），待仪器操作面板上出现“Idle”字样表示自检成功，仪器进入待命状态。
[测试步骤]1. 进入软件1）双击电脑桌面上的Empower快捷图标，出现Empower登陆窗口。
输入用户名与密码，默认账号为“system”，密码为“manager”，点击“OK”进入Empower 工作站。
2）选择“运行样品”界面，点击“确定”,然后选择待选定的操作项目以及色谱系统2 编辑仪器方法和方法组1）在“运行样品”界面中，监视区单击方法组编辑向导。
2）选择新建按钮，弹出仪器方法编辑器。
3）通用编辑页面中，可设置单次输送体积，查看脱气选项，确认设置正确，选择等度或者梯度，总流量以及流动相配比等选项。
4）单击2475图标，弹出2475编辑界面，在波长模式中选择相应的波长模式，单波长或者双波长，输入所需的波长，选择相应的采样速率，一般为2点/秒。
5）点击“文件”，选择“另存为”，输入仪器方法名称，点击“保存”，退出。
6）在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击“下一步”。
7）在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择"无处理"、"无报告"），点击“下一步”。
8）输入方法组名称，单击"完成"。
3 运行方法进样1）在“运行样品”界面中，选择相应的仪器方法，点击“监视器”，在监视窗口监视基线至系统平衡，停止系统监视状态，点击停止按钮。
单进样，点击参数编辑快捷方式进入定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数。
waters2695操作规程
进样器进样量范围
0.1-100 μL，进样精度：<±1%。
检测器波长范围
UV-Vis检测器通常为190-600 nm，荧光 检测器则根据具体型号而定。
色谱柱规格
内径2.1-4.6 mm，长度50-300 mm，填 料粒径1.5-5 μm。
02
安装与调试
安装前准备工作
确认waters2695仪 器型号和配置，准备 相应的安装工具和材 料。
样品前处理要求
01
02
03
样品清洁度
确保样品中无颗粒物或杂 质，以避免对仪器造成损 害或影响分析结果。
适当的溶剂
选择与样品相容的溶剂， 确保样品在溶剂中均匀分 散，提高分析的准确性。
样品浓度
根据分析方法的要求，调 整样品的浓度至合适范围 ，避免过高或过低的浓度 导致分析误差。
进样针使用注意事项
选择合适的进样针
实验前准备
1
2
检查waters2695系统状态，确保各部件正常工作 。
3
准备实验所需试剂和标准品，检查其纯度和有效 期。
实验操作规范流程
01
清洁实验台面和仪器表面，避免污染。
02
实验操作过程
03 按照实验需求设置waters2695参数，如流速、压 力、温度等。
实验操作规范流程
01 连接色谱柱和检测器，确保流路畅通。
THANKS
感谢观看
软件功能概述
方法开发与管理
支持多种液相色谱方法的创建 、编辑和管理。
数据采集与处理
实时采集色谱数据，提供多种 数据处理选项，如峰检测、积 分、校正等。
报告生成与导出
生成定制化的分析报告，支持 多种数据格式导出。
Waters HPLC 2695操作规程 一、日常开机步骤 1 制备新鲜流动相和
Waters HPLC 2695操作规程一、日常开机步骤1. 制备新鲜流动相和清洗液流动相●水纯净水。
●缓冲剂首先溶解盐，调节pH值，然后过滤除去不溶解的物质，缓冲盐浓度≤100mMol。
●四氢呋喃使用不稳定的THF时，请确保溶剂是新鲜的。
先前打开过的THF瓶含有过氧化物杂质，将导致基线漂移。
●有机相原装进口的色谱纯。
清洗液●洗针液根据样品和流动相的化学性质选用洗针液，确保所有溶液和缓冲剂都是易混合和可溶解的，最好选择与最终梯度条件相似的洗针液。
推荐使用的洗针液：80%甲醇/20%水●清洗柱塞密封垫（seal wash）的溶液含5% ~ 10%甲醇的超纯水（一般放在弱洗溶液中）注意：所有流动相和清洗液均需盛放于硼硅玻璃制作的高质量实验室玻璃器皿中，混合均匀并在使用前要经过0.45µm的膜式过滤器的过滤，超声脱气1-2min。
2. 开机及系统准备2.1 开机先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器的电源。
接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，表示开机测试正常，之后启动Emperor软件。
A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记，绿色管为冲洗泵头用，白色管为冲洗进样器用，将各泵头放到相应的溶剂瓶中备用。
2.2灌注(Prime)当溶剂的管路是干的或存在较多气泡不易排出时，需进行灌注。
可向管理员求助。
2.3 平衡色谱柱在“Status”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，设置流速，平衡色谱柱30-60min。
（可在工作站中设置）。
2.4 样品的配制所有样品均需经过滤膜过滤，置于液相小瓶内，达到样品瓶的1/3以上。
二、基本操作1. 创建项目双击电脑桌面图标“Empower”，用户名输入“system”密码输入“manager”选中操作项目和色谱系统→确定。
在菜单栏“管理”→创建新项目→选择父项目→下一步→输入表空间值→按“下一步”逐步设置→完成→管理→改变/项目，在该窗口切换项。
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书（入门用前必读）青岛科技大学化工测试中心2015-12-22安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。
注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。
注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。
注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。
小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。
小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。
小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。
目录第一章 WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第一章 WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。
该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。
该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。
建立色谱库后可以实现定性分析。
第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。
2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。
用前均需过0.45μm 滤膜。
2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。
确认流动相管线和相对应的脱气管线。
Alliance2695型高效液相色谱仪标准操作规程
页码：1/4编号：SOP-QA-010201生效日期：年月日标准操作规程STANDARD OPERA TING PROCEDURE题目Alliance2695型高压液相色谱仪标准操作规程Subject颁发部门质量保证部Issue Department起草日期年月日Written by Date审核日期年月日Examined by Date批准日期年月日Approved by Date分发质量保证部、中心化验室、档案室Receiver1 目的：建立Alliance 2695型高效液相色谱仪标准操作规程，以保证Alliance 2695型高效液相色谱仪的正确使用。
2 范围：适用于Alliance 2695型高效液相色谱仪操作的全部行为。
3 责任：中心化验室对本SOP的实施全面负责。
4 内容：4．1 开机4．1．1接通仪器插座电源开关。
4．1．2 先打开2695主机的电源开关，再打开2996检测器的电源开关。
4．1．3待2695主机与2996检测器自检完毕后，打开电脑显示器、电脑主机电源开关，计算机开始自检进入Windows 2000桌面。
4．1．4在电脑屏幕上用鼠标双击Millennium32（M32）图标。
进入Waters高压液相操作系统主窗口。
4．1．5单击M32主窗口上“Login”键，当出现User name提示时，输入使用者代号，在Password提示里输入此代号对应密码。
再按回车键即可激活Millennium32操作窗口。
4．2 硬件操作4．2．1溶剂脱气先打开氦气瓶气体阀门，将分压表调至0．5MPa；按“Menu/Status”键，进入“Status(1)”界面，用“↑”、“↓”、“←”、“→”键在界面上“Sparge”项中，选择A、B、C或D中所选用的溶剂流路号进行脱气处理（如选用A、B两瓶溶剂，则选择A-100%，B-100%，按“Enter”键开始脱气），脱气15～20分钟后，可将脱气量由100%降为30%。
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©20R1e0vW. 0a8te1r1s2C0o0r5poration | COMPANY CONFIDENTIAL
2011年9月
主要内容
基本构造 仪器日常操作 仪器常见故障及维护保养
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仪器日常操作
灌注柱塞密封清洗泵(Prime Seal Wash)
当首次使用或整个管路都已干燥时
1.回到Menu 画面，选择Diag。 2. 将注射器适配器连接到注射器。 3. 移除密封清洗入口管路上的滤头。 4. 将注射器装满清洗液，然后将注射器适配器连到密封清洗管路末端。 5. 按Prime Seal Wash ，再按Start 。 6. 推进注射器使清洗液进入系统。 7. 当有溶剂从密封清洗废液管中流出时，按Halt。 8. 重新安装滤头。 9. 按Close返回。
基本构造
基本构造
溶剂输送系统(串联泵) 进样系统 柱温箱 检测器
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基本构造
溶剂瓶
控制面板
样品盘
串联泵
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Waters e2695示意图
基本构造
样品管理系统可存放和定位样品 瓶并将样品注入溶剂流。样品管 理系统有 5 个样品转盘。
每个样品转盘中最多可容纳 24 个样品瓶，共计可容纳 120 个 样品瓶。
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基本构造
样品管理系统中的流路
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进样器 在线脱气机
Байду номын сангаас
基本构造
溶剂输送系统
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基本构造
2695溶剂输送系统（串联泵）示意图
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基本构造
Prime/Vent Valve
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仪器日常操作 打开真空脱气机（Degasser）
1. 按“Menu/Status” 键，进入Status (1)画面。 2. 利用方向键 将光标移至“Degasser”位置，按Enter。 3. 利用上下键选择模式为ON，如下图所示。
基本构造
柱温箱
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基本构造
检测器
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仪器日常操作
日常操作
开机 操作前准备 灌注柱塞密封泵(Prime Seal Wash) 灌注针头清洗泵 (Prime Needle Wash) 打开真空脱气机 干灌注(Dry Prime) 湿灌注(Wet Prime) 冲洗进样器 (Purge Injector)
注意事项：在开启真空脱气机时，要确认所有溶剂管路都充满溶 剂；若没有溶剂时请执行溶剂的Dry Prime 操作。
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仪器日常操作
干灌注（Dry prime）：系统第一次运行或系统中无溶液时进行。
1 将溶剂管路插入到相应的容器。 2 轻轻摇动滤头，以除去可能存在的气泡。 3 将注射器连到灌注/排放阀。如图所示。 4 逆时针旋转阀1/2圈，将其打开。 5 按Status屏幕中的Direct Function键，选择
Inlet Checkvalve
Inlet Checkvalve
D
A
Front
C
B
溶剂管理系统中的流路
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基本构造
样品管理系统
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注意事项：当更换溶液时，只需执行步骤1，5，7和9。
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仪器日常操作 灌注针头清洗泵 (Prime Needle Wash)
注意事项：1 溶剂的选择：根据样品及流动相的化学特性来作选择。 2 若为浓度较高的样品需要较强的溶剂来清洗。 3 若样品对pH较敏感，应考虑洗针液的pH。
注意事项： 为避免损坏柱塞密封，仅在流路中存在溶剂时执行湿灌注。 若更换流动相与之前流动相不互溶，采用中间溶液过渡。 以最低粘度的溶液开始湿灌注，以帮助清除管路中的空气。
仪器日常操作
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仪器日常操作
操作前准备
用色谱纯有机溶剂配制流动相，所有溶液应经0.45μm滤 膜过滤，脱气应充分。
必须确保6根管子全部插到溶剂瓶的底部。 准备合适的灌注柱塞密封清洗泵（Seal Wash）液体。 准备合适的灌注针头清洗泵（Needle Wash）液体。
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仪器日常操作 开机
依次打开LAC/E采集服务器、2695分离单元、所需检测器以 及计算机的电源。仪器进行5分钟自检后，出现以下画面。
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Dry Prime，然后按Enter。 6 在上述对话框中，选择要灌注的溶剂管路
对应的屏幕键。如图所示。 7 抽回注射器活塞以将溶剂抽出管路。
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仪器日常操作
湿灌注（Wet prime）：更换流动相；排除气泡；仪器闲置了一段时间。