重组鸡白细胞介素2的诱导表达与生物学活性测定
重组蛋白的原核表达
实验三重组蛋白的原核表达、亲和层析及免疫印迹分析一、实验内容1．重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达。
2．对重组蛋白进行亲和层析，得到纯度较高的融合蛋白。
3．对纯化结果进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测，并做蛋白质的Western blot鉴定。
二、实验目的和要求1．了解重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达的原理和实验方法。
2．掌握亲和层析基本原理和操作过程。
3．掌握蛋白质的免疫印迹分析。
三、实验操作步骤1．重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达。
①将在甘油保存的重组蛋白的表达菌株BL21（pET-IL-2）、BL21（pQE-IL-2）、BL21（pET43.1a）、Origami（pGEX-ES1）、Origami（pGEX-ES2）、Origami（pGEX-4T-1）取少量分别接种于10ml LA（LB+100mg/L的氨苄青霉素）培养基中，37℃下过夜培养。
②以1：100转接至100mL LA液体培养基中培养至OD 0.5-0.6。
加入0.5mM的IPTG诱导表达，诱导表达温度为18℃，诱导时间为9小时。
③将诱导表达的菌液于10000 rpm离心5 min，收集菌体，-20℃保存。
④将菌体细胞重悬于5mL缓冲液buffer I（20 mmoL/L Tris-HCL pH 8.0，150mmoL/L NaCl）（表达菌株BL21（pET-IL-2）、BL21（pQE-IL-2）、BL21（pET43.1a））或PBS（Origami（pGEX-ES1）、Origami（pGEX-ES2）、Origami（pGEX-4T-1））中。
⑤取0.5ml悬浮液，冰浴条件下进行超声波破菌，4℃下12000 rpm离心20 min。
分别取上清和沉淀，作SDS-PAGE检测，估计可溶性表达比例。
⑥将以上④得到的重悬液在冰浴中进行超声波破菌，4℃下12000 rpm离心20 min，其上清即为蛋白粗提液（BL21（pET-IL-2）、BL21（pET43.1a）、Origami（pGEX-ES1）、Origami（pGEX-ES2）、Origami（pGEX-4T-1））或沉淀（BL21（pQE-IL-2））。
重组人白细胞介素—2制备工艺的研究
重组人白细胞介素—2制备工艺的研究白细胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）是一种由T细胞分泌的免疫调节因子，对细胞免疫和体液免疫调控起着重要作用。
由于其广泛的生物活性和临床应用价值，人白细胞介素-2的制备工艺研究一直备受关注。
人白细胞介素-2可以通过多种方法进行制备，其中最常用的方法是采用重组DNA技术。
该方法首先需要在合适的表达载体中克隆人白细胞介素-2的基因，将其转染至适当的宿主细胞中，通过大规模培养和纯化过程得到目标产物。
重组人白细胞介素-2的制备工艺主要包括以下几个步骤：1.基因克隆：将人白细胞介素-2基因放入适合的表达载体中。
载体通常是质粒，具有能够稳定细胞内基因组的特性。
该载体还包含了启动子、终止子等序列，以调控基因的表达。
2.转染：将已构建好的表达载体转染至宿主细胞中。
常用的宿主细胞包括大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞等。
3.培养：经过转染的宿主细胞在适当的培养条件下进行大规模培养。
培养基中会加入适当的抗生素，以筛选出含有重组基因的细胞群。
4.表达：通过培养过程中的细胞生长和代谢活性，使重组基因在细胞内被转录和翻译成蛋白质。
这样，大量的重组人白细胞介素-2就会被产生出来。
5.纯化：将培养基中的细胞分离出来，通过离心、滤过等操作得到细胞上清液。
然后利用离子交换、凝胶过滤、亲和层析等方法进行层析纯化，去除杂质，得到纯净的重组人白细胞介素-2。
重组人白细胞介素-2的制备工艺需要考虑多个因素。
首先，合适的宿主细胞选择对产量和纯度影响很大。
常用的宿主细胞是大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞，每种细胞系统有其优势和限制。
其次，可以通过优化培养条件来提高人白细胞介素-2的表达水平，如调节培养基成分、温度和pH等。
此外，纯化过程的选择和优化也是影响产品质量的重要因素。
目前，人白细胞介素-2的制备工艺已经相对成熟，并且在临床上得到了广泛的应用。
重组人白细胞介素-2的制备工艺研究不断进步，将为更好地利用白细胞介素-2的免疫调节作用，提供更好的疾病治疗手段和提高临床疗效。
白细胞介素(IL-2)检测及临床意义
白细胞介素（IL-2）检测及临床意义
一、概述
白细胞介素-2 (IL-2)又称T细胞生长因子。
主要由T细胞产生。
是在淋巴细胞增殖分化过程中重要的细胞生长因子，生理作用有刺激T细胞生长、诱导细胞毒作用和对B细胞的生长及分化均有一定的促进作用等
二、检测方法
IL-2主要检测方法为生物素亲合素系统的双抗体夹心ELISA 法。
三、临床意义
1、IL-2可提高人体对病毒、细菌、真菌和原虫等感染的免疫应答，促进细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK 细胞)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK 细胞)和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)增殖，并使其杀伤活性增强，进而清除体内肿瘤细胞和病毒感染细胞等。
2、IL-2 还可以增加抗体和干扰素 (IFN)等细胞因子的分泌，在机体免疫应答中具有非常重要的作用，是一种免疫增强剂，具有抗病毒、抗肿瘤和提高机体免疫功能等作用。
3、IL-2的表达异常与临床多种疾病有密切关系，尽管外周血、尿液中IL-2 水平，或激活淋巴细胞上清液中IL-2水平的异常没有疾病特异性，但是可作为相关疾病的辅助诊断、预后及疗效观察提供可靠数据。
4、IL-2升高：肿瘤、心血管病、肝病等疾病时均可使 IL-2 水平升高，在器官移植后早期排斥反应时也出现IL-2表达升高。
5、IL-2降低：在多种原发性免疫缺陷病和继发性免疫缺陷病时均可伴有 IL-2 水平降低，如 SLE、麻风和艾滋病等。
鸡白细胞介素2分子单克隆抗体的研制
ｌ ａ ａｔ ｏ ｉ （ ｂ ａａｎｔ ｈＬ２ｗ ｒ ｏ ｔ ｎｄ Ｔ ｅｍ ｓ ａ ｎａｃｔ ｔｒ ｐ ： ０ ｎ ： ２ ０ｒｓｅｔ ｅｙａｄｂ ｔ ｏ ｌ ｎ ｂ ｄｅ Ｍａ ） ｇｉｓ Ｃ Ｉ・ ｅｅ ｂａ ｅ ． ｈ Ａｂ ｄａ ｓｉ ｓ ｉ ｓ ｆ ６４ ０ａ １３ ０ ｐｃｉ ｌ ｎ ｏｈ ｎ ｉ ｓ ｉ ｈ ｅ ｔｅ １ ｄ ｅ ｖ
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结果 表 明 ，２株 ｍＡ ｂ均 能 与 表 达 产物 反 应 ；Ｗｅｔｒ ｌｔ 析 结 果 显 示 ，２株 ｍＡ ｓｅ ｂｏ 分 ｎ ｂ均 与 原 核 表 达 鸡 Ｉ一 Ｌ２蛋 白发 生
特 异 性 反 应 。本 研 究 所 制备 的 抗 鸡 Ｉ一 分 子 ｍＡ Ｌ２ ｂ可 为 建 立 简单 、快 速 的 鸡 Ｉ一 检 测 方 法提 供 可能 ，并 为 鸡 Ｉ一 Ｌ２ Ｌ２
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重组人IL-2大肠杆菌工程菌质粒稳定性的研究
重组人IL-2大肠杆菌工程菌质粒稳定性的研究摘要基因工程菌中质粒稳定性对于基因工程菌的发酵有着重要影响，但基因工程菌在传代中经常出现质粒不稳定遗传的现象。
本试验通过在工程菌的培养过程中添加抗生素这一选择压力和诱导表达目的蛋白的方式来提高基因工程菌的稳定性，并通过双酶切电泳分析及高效率的诱导表达外源蛋白来进行检测，得出工程菌在LB（-）和LB（+）平板上都能生长且形态相似；电泳图平行、酶切片段的位置大致一致；诱导表达的外源基因的质粒稳定。
提高质粒稳定性有利于外源蛋白表达，以满足大规模生产发酵。
关键词：基因工程菌；质粒；稳定性-I-Study on the stability of plasmid of recombinanthuman IL-2 E.coli bacteriaAbstractEscherichia coli. plasmid stability for the genetic engineering of bacteria fermentation has important implications genetically engineered bacteria in the mid-recurring genetic instability of the plasmid. This experiment in engineering from the training course to add the option of antibiotic pressure and protein expression induced by way of reference high genetically engineered bacteria stability and digested by electrophoresis and high efficiency induced expression of foreign proteins to detect, the virus can grow in the panel of LB(-) and LB(+), and the morphology is similar; The electrophoregram is parallel, and the position of the fragment is consistenct roughly; Inducible expression of foreign genes is stabile. We improve the stabilization of the foreign gene in order to meet the large-scale fermentation.Key words: Genetic engineering ; plasmid ; stability-II-目录摘要 (I)ABSTRACT ............................................................................................................................... I I 前言. (1)1 材料与方法 (3)1.1试验材料 (3)1.1.1 菌种质粒 (3)1.1.2 培养基 (3)1.1.3 常用药品 (3)1.1.4试验仪器 (3)1.2试验方法 (3)1.2.1 基因工程菌的转化 (3)1.2.2 制平板 (3)1.2.3 连续传代 (3)1.2.4 鉴定 (4)2 结果与分析 (6)2.1不同代菌的传代结果 (6)2.2上述不同代质粒的电泳图 (8)2.3不同代质粒的酶切图 (9)2.4诱导表达不同代的基因工程菌的外源基因蛋白电泳图 (10)3 讨论 (11)3.1分析本试验所出现的问题 (11)3.2质粒稳定性影响的若干因素 (12)3.2.1 含调控型启动子的基因工程菌稳定性控制 (12)3.2.2 选择性培养基提高质粒稳定性 (12)3.2.3 培养操作方式对工程菌稳定性的影响 (12)3.2.4 培养条件对工程菌稳定性的影响 (12)4 结论 (14)参考文献 (15)致谢 (17)-III-前言随着分子生物学、免疫学理论和技术的发展，运用重组表达技术来生产预防和治疗疾病的制品已成为近几年研究的热点。
白细胞介素-2(IL-2)在兽医中的应用进展(综述)
Ｒｄｙ ｅｄ 等 报道 ， 将低剂量 （５ｌ ｋ ） ２ ｇ・ ｇ 重组牛 Ｉ－ ｘ Ｌ ２与牛疱疹病毒 ｌ 型活苗 （ Ｈ 一） Ｂ Ｖ １ 一起免疫 ， 血清中和抗体效价 比单独使用疫苗组提高了 ６ 倍。李祥瑞等 【研究表 明， ２ 将重组牛 Ｉ－ 与伊氏锥虫可 Ｌ２ 溶性抗原共同注射小 鼠， 其抗体滴度由对照组的２ 上升到 ２ ， Ｋ细胞杀伤活性由对照组的３ ．％提高 Ｎ １６ 到 ９ ％。 ９ 张光勤等 对经产母猪和育成母 猪的试验结果显示 ， 重组 Ｉ－ 口蹄疫疫苗一 起免疫 ，７ｄ后经 Ｌ２和 ５ 产母猪平均间接血凝抗体滴度由对照组的 ｌ １ ５ ． 上升为 １ ３ １． ； 后育成母猪的平均间接血 ： ５６ ９ ： ８ １５ ｄ ０ ５ 凝抗体滴度由对照组的 ｌ ８５ ４ ： ５ ． 上升为 ｌ ｌ ６ ． 。李祥瑞等 ｌ 的研究表明 ， ： １８ ３ ４ 将重组 Ｉ－ Ｌ２与猪瘟疫苗
白细胞 介 素 一（Ｌ２ 在 兽 医 中的应 用 进 展 （ 述 ） ２ Ｉ一） 综
李蕴玉， 李佩 国，张艳英 ，张香斋
（ 河北科技师范学院 动物科学系， 河北 秦皇岛， ６０ ） ０ ６０ ６
摘要： 白细胞介素 － （Ｌ ） ２ Ｉ－ 是动物机体最重要的细胞因子之一， ２ 在抗感染 、 抗肿瘤、 抗毒索和免疫调节中发 挥重要作用， 而成为当今免疫学、 临床医学等领域的研究热点。主要就 Ｉ－ ［ ， ２在兽医中作为免疫佐剂和免疫治
基因疫苗叉称 Ｄ Ａ疫苗或核酸疫苗 ， Ｎ 是伴随基因治疗而发展起来 的新型疫苗 ， 它是将含有某种抗
一
起使用 ， 可使健康猪 ２ 后间接血凝抗体滴度达到 ｌ ６ ０ｄ ： ４的比例由对照组的 ２ ％上升到８ ．％ ， ５ ７ ５ 并能
白细胞介素—2的研究进展及应用
山东畜牧兽医
白细胞介素 一２的研究进 展及应用
李宏梅 李祥瑞 郭慧君 （ 山东农业大学动物科技学院 泰安 ２ １ １ ） ７ ０ ８
随着分子 生物 学 、 免疫 学 理 论 和 技 术 的 发展 ， ２的氨 基 酸分析 表 明， 与 其 受体 结 合 部 位氨 基酸 这 运用 重组表 达 技 术来 生 产 预 防 和 治疗 疾 病 的制 品 序列较 保守 有 关 ， 外 ， 基酸 排 列 顺 序 和 形 成 的 另 氨 已成 为近几年研 究的热 点。 白细 胞介 素 一２是一 种 空 间构 型也有 很大 关系 。 具有 广泛生物 学活性 的细 胞 因子 ， 能够 有 效地提 它 人 和其它 哺 乳动物 的 Ｉ Ｌ一２不作 用 于 家禽 ， 原
一
同年 ， Ｉ 一２ ｂＬ一２ ｅ ＮＡ 克 隆 成 功 。建 牛 Ｉ （ｌ ）Ｄ
定规律 的 ， 般呈 下行 性 ， 一 即进 化 程 度 高 的动 物 立活化牛淋 巴细 胞 ｅ Ｎ 文 库 后 ， ｈＬ一２ＤＮ Ｄ Ａ 用 ｌ ｅ Ａ
的Ｉ Ｌ一２可 以作 用 于 进 化程 度 较 低 的动 物。 如 人 探 针进行 筛选 。成 熟 Ｉ Ｌ一２含有 １５个 氨基 酸 ， ３ 分 和猿的 Ｉ 一２几 乎可 以作 用于 所 有 哺 乳 动物 的 Ｔ 子量 为 １ ．２ｋ ， 人 和 鼠的 Ｉ Ｉ ５４ Ｄ 与 Ｌ一２各 有 ６ ％及 ５
达 Ｉ 一 Ｒ的细胞表面的 Ｉ ２ Ｌ ２ Ｌ一 Ｒ结合发挥生物学 纤维膜上， ｍ Ｎ 用 Ｒ Ａ与之杂交 ， 回收吸附于膜上的
活性 。
ｍ Ｎ 再进行体外翻译， Ｒ Ａ， 从而克隆了第一个 ｈＩ一 ｌ ，
２ ＤＮ Ａ 。 ｅ
２ Ｉ一 Ｉ ２的种属 特异性 大 量交叉 实验 表明 ，Ｉ一２的种 属特 异 性是 有 Ｉ
重组鸡IL-2对禽流感灭活苗免疫增强作用试验
维普资讯
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摘 要 ： 用 重 组 鸡 白介 素 一 为免 疫 佐 剂 ， １ 材 料 与 方 法 使 ２作 检 测 ｃＩ－ 禽 流 感 病 毒 Ｈ９亚 型 灭 活 疫 苗 １ １ 主 要 试 剂和 材 料 ｈＬ ２对 ．
的免 疫 增 强 作 用 。将 １ 日龄 的 ＡＡ 肉雏 鸡 ， 重组鸡 Ｉ－ Ｌ２由南京农业大学寄生虫教研 室提 随 机 分 为 ７组 ， 组 １ 每 Ｏ只 ， 用 胸 部 肌 肉注 供； 采 禽流感 Ｈ９ 亚型灭活疫苗 由江苏省农 业科 学院 射 方 式 进 行 免 疫 ， 照 组 仅 接 种 Ｈ９亚 型 禽 畜牧兽医研究所禽 病研究室馈赠 ； 对 １日龄雏鸡 购 自
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动 物 医 学 进 展 。 ０ ６ ２ （ ０ ： ９１ １ ２ ０ ，７ １ ） ９ — ０
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重 组 鸡 Ｉ － 禽 流 感 灭 活 苗 免 疫 增 强 作 用 试 验 Ｌ ２对
徐 前 明 ， 祥 瑞 ¨ 李
（． １南京农 业大 学动物 医学 院 。 江苏南 京 ２ ０ ９ ｝． １ ０５ ２ 安徽农业大 学动 物科 技学院 。 安徽合肥 ２ ０ ３） ３ ０ ６
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重组鸡白细胞介素2的诱导表达与生物学活性测定
陈吉刚;陈维虎;周继勇;王金勇;齐静;郑肖娟;俞照正;孙红霞
【期刊名称】《中国农业科学》
【年(卷),期】2005(038)005
【摘要】将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/His B,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达.SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18 kD.用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA,探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学.非变性条件下纯化的rchIL-2 (0.4 ng) 对Con A活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性.抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性,而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白生物学活性的功能.这些研究结果证实,大肠杆菌表达的rchIL-2及其多克隆抗体拥有生物学功能,而获得的单克隆抗体不具有chIL-2的中和特性.
【总页数】6页(P1034-1039)
【作者】陈吉刚;陈维虎;周继勇;王金勇;齐静;郑肖娟;俞照正;孙红霞
【作者单位】浙江大学动物预防医学研究所病毒与免疫研究室,杭州,310029;浙江省象山县农林局,象山,315700;浙江大学动物预防医学研究所病毒与免疫研究室,杭州,310029;浙江大学动物预防医学研究所病毒与免疫研究室,杭州,310029;浙江大学动物预防医学研究所病毒与免疫研究室,杭州,310029;浙江大学动物预防医学研究所病毒与免疫研究室,杭州,310029;浙江省象山县农林局,象山,315700;浙江省象山县农林局,象山,315700
【正文语种】中文
【中图分类】S8
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