k562饲养层细胞的质量标准
K562细胞培养
K562细胞培养实验实验人员：刘嵘、郝茜、张寅峰、龙琪实验材料：K562细胞，无菌RPMI-1640培养基，无菌离心管，无菌吸管，无菌培养瓶，离心机，倒置显微镜，超净工作台，CO2培养箱。
培养基成分：培养液由90%不完全1640培养液[RPMI-1640液95毫升；0.1M丙酮酸钠1毫升；0.2M谷氨酰胺1毫升；1M HEPES 1毫升；7.5%NaHCO3 1毫升；青霉素、链霉素（各一万单位）1毫升]和10%灭活胎牛或新生牛血清。
细胞培养操作：一、细胞冻存与复苏：细胞冻存实验步骤1、将细胞悬液收集至离心管中。
2、1000rpm离心10分钟，弃上清液。
3、沉淀加含保护液的培养，计数，调整至5×106/ml左右。
4、将悬液分至冻存管中，每管1ml。
5、将冻存管口封严。
如用安郶瓶则火焰封口，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。
6、贴上标签，写明细胞种类，冻存日期。
冻存管外拴一金属重物和一细绳。
7、按下列顺序降温：室温→4o C(20分钟)→冰箱冷冻室（30分钟）→低温冰箱（-30o C 1小时）→气态氮（30分钟）→液氮细胞复苏实验步骤：1、取出贮存细胞，37o C水浴中快速融化。
2、把1-2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基，轻轻混匀。
3、以大约800rpm离心2到3分钟，弃去上清。
4、在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。
5、细胞铺板，细胞接种应该至少为3×105活细胞/ml。
二、细胞培养与传代：1、将细胞培养液转移到离心管中，离心800-1000rpm,5min。
2、去除上清。
3、加入1ml培养基到离心管内，用吹打使细胞悬浮。
4、将细胞悬液吸出，加入到已加入8ml培养基的新的已灭菌培养瓶中。
5、在倒置显微镜中观察瓶中细胞密度是否适中6、旋开半圈培养瓶口，放入CO2培养箱中培养7、观察并适时传代实验结果：b)细胞传代一次时间：其中，第四代（5.20上午-5.22晚上）细胞密度低，生长繁殖时间最长；第五六和第八代细胞生长繁殖一代耗时时间最短，且最终细胞密度也最大，以致培养基变黄。
饲养层细胞、成纤维细胞、滋养层细胞
中文名称：饲养层细胞大鼠胚胎干细胞在饲养层细胞上培养英文名称： feeder layer cell定义：在细胞培养中起分化抑制作用的单层贴壁细胞所属学科：细胞生物学（一级学科）；细胞培养与细胞工程（二级学科）所谓饲养层细胞就是指一些特定细胞（如颗粒细胞、成纤维细胞、输卵管上皮细胞等已在体外培养的细胞），经有丝分裂阻断剂（常用丝裂霉素）处理后所得的细胞单层。
是细胞培养，尤其是胚胎干细胞培养常用的生长增殖促进剂和分化抑制剂。
成纤维细胞成纤维细胞是结缔组织中最常见的细胞，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。
根据细胞不同的功能活动状态，将细胞分为成纤维细胞和纤维细胞二型：成纤维细胞是功能活动旺盛的细胞，细胞和细胞核较大，轮廓清楚，核仁大而明显，细胞质弱嗜碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动；纤维细胞（fibrocyte）功能活动不活跃，细胞轮廓不明显，核小体着色深，核仁不明显，细胞质少。
此二型细胞可互相转化。
在结缔组织中，成纤维细胞还以其成熟状态—纤维细胞的形式存在，二者在一定条件下可以互相转变。
不同类型的结缔组织含成纤维细胞的数量不同。
通常，疏松结缔组织中成纤维细胞的数量比同样体积的致密结缔组织中所含成纤维细胞的数量要少，故分离培养成纤维细胞多以真皮等致密结缔组织为取材部位。
在国王学院研究人员一项针对小鼠的研究中，发现小鼠皮肤中的成纤维细胞至少有两种类型：一种是结缔组织上层的成纤维细胞，它们是皮肤毛囊形成所必须；另一种则是结缔组织下层中的成纤维细胞，这部分细胞负责制造大部分的皮肤胶原纤维，触发受损皮肤的修复。
通过皮肤表皮信号的刺激可增加成纤维细胞的数量，而成纤维细胞数量的增多有助于伤口愈合过程中毛囊的形成，进而降低皮肤愈合后落下疤痕的几率。
研究表明，皮肤的厚度和成分会随着年龄增加而改变，老年人的皮肤很容易受伤，且不易愈合，这很可能是因为上层皮肤成纤维细胞缺失所致，假设找到方法刺激这些细胞生长，就有可能恢复皮肤的弹性，同样还能刺激毛囊形成，减少疤痕。
CD16单抗联合细胞因子体外扩增的NK细胞对K562杀伤功能研究
CD16单抗联合细胞因子体外扩增的NK细胞对K562杀伤功能研究李雪莲;杨本艳姿;范兆心【摘要】目的:建立CD16单抗联合细胞因子IL2、IL15、IL18体外扩增NK细胞的方法,并用扩增后的细胞杀伤K562细胞,研究其杀伤功能,确定一种高效的NK细胞体外培养方案。
方法:抽取5例健康志愿者外周血,Ficoll分离单个核细胞,分组培养,分别为IL2+IL15组、IL2+IL15+IL18组、IL2+IL15+IL18+CD16单抗免疫包被组。
按这三种方案分组培养,分别在第6、9、12、15、18天和21天计算总细胞扩增倍数,流式细胞检测NK细胞的表型,利用各种方案扩增后的NK细胞作为效应细胞,与K562细胞按不同靶效比进行体外杀伤实验,分析各种方案培养的NK细胞对K562细胞的杀伤活性。
结果:IL2+IL15+IL18+CD16单抗免疫包被组的扩增倍数和阳性率均高于IL2+IL15组、IL2+IL15+IL18组,P<0.05;而IL2+IL15组、IL2+IL15+IL18组之间在扩增倍数和阳性率上均无显著差异(P>0.05)。
杀伤实验显示,在不同效靶比情况下IL2+IL15+IL18+CD16单抗免疫包被组均比其他两组有更强的杀伤活性。
而且随着效靶比的增加,NK细胞的杀伤更强。
结论:CD16单抗联合IL2、IL15、IL18、可明显促进NK的扩增能力,并提高体外扩增后对K562细胞的杀伤活性。
【期刊名称】《生物化工》【年(卷),期】2017(000)004【总页数】5页(P30-33)【关键词】CD16单抗;NK细胞;IL2;IL15;IL18;K562;杀伤效率【作者】李雪莲;杨本艳姿;范兆心【作者单位】四川大学生物治疗国家重点实验室;四川新生命干细胞科技股份有限公司研发中心;四川大学生物治疗国家重点实验室;四川新生命干细胞科技股份有限公司研发中心;四川大学生物治疗国家重点实验室;四川新生命干细胞科技股份有限公司研发中心【正文语种】中文【中图分类】R730.51自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）是机体抗病毒感染和抗肿瘤免疫应答的重要淋巴细胞，其来源还不十分清楚，一般认为来源于骨髓，其发育成熟依赖于骨髓微环境，占外周血淋巴细胞总数的5%～20%，具有广谱抗肿瘤作用，其不依赖于抗原刺激作用，即可非特异地直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染的靶细胞，主要参与细胞免疫[1]。
K562及K562A02细胞株遗传学研究的开题报告
K562及K562A02细胞株遗传学研究的开题报告I. 研究背景及意义K562细胞株是人类慢性骨髓性白血病细胞株，常用于白血病的研究。
K562A02细胞株是从K562株经过逐渐加大诱导剂稳定细胞株的筛选、原代细胞的体外扩大等步骤所得的细胞株。
这两个细胞株具有很高的相似性，但K562A02相比K562具有更多的干细胞特征。
本研究旨在探讨K562及K562A02细胞株的遗传学特征，为深入了解白血病细胞的分化和肿瘤发生机制提供理论依据和实验数据。
同时，通过对这两个细胞株的比较，可以揭示细胞株在诱导剂过程中所发生的遗传学变化，为制定更优化的诱导治疗方案提供参考。
II. 研究内容及方法本研究拟采用以下方法和技术进行：1. 细胞培养选取K562及K562A02细胞株进行培养，细胞培养技术可参考相关文献和实验室经验。
2. 细胞生长特征观察通过显微镜观察细胞形态、增殖情况，对比分析K562及K562A02细胞株生长特征。
3. 测序分析采用RNA测序和基因组测序技术对K562及K562A02细胞株进行测序，分析细胞株的转录水平、基因变异和表达差异等遗传学特征，挖掘其与白血病分化和转化相关的分子机制。
4. qPCR定量PCR选取测序分析中差异表达的基因进行定量PCR验证，并进一步分析其生物学功能及与白血病发生发展的关系。
III. 预期结果及意义通过对K562及K562A02细胞株的遗传学分析，我们期望能够揭示其在白血病发生发展中所扮演的角色，为研究白血病的分子机制提供新思路和实验数据。
同时，本研究将揭示不同诱导剂处理下K562及K562A02细胞株的遗传学差异，有助于制定更加个性化的治疗方案，提高白血病患者的治愈率和生存率。
耐STI571的K562细胞株的建立及生物学特性考察
ｗａ ｓ ｓ ｔ ｅ ａ ｄ ｙ ｇ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｕ ｂ ｅ ｒ ａ ｎ ｔ ｒ ｅ ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｃ ｉ ｒ ｃ ｕ ｍｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｃ ｏ ｎ ｔ ａ ｉ ｎ ｅ ｄ １
《 中 国 医 学 创 新》 第１ １ 卷第１ ６ Ｊ ￣ ］ （ 总 第２ ９ ８ 期） ２ ０ １ ４ 年６ 月 论
著 Ｌ ｕ ５ ６ ２ 细胞株 的建立及 生物学 特性 考察
张琼① 王莉莉② 杨利红①
【 摘要 】 目的：建立 １ 株耐 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １ 的Ｋ ５ ６ ２ 细胞，并对其生物学特性进行研究分析 ，探讨耐药机理。方
法 ：通 过 递 增 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １ 药 物 浓 度 的 方 法 ，成 功 建 立 １ 株耐 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １ 人 白 血病 细 胞 株 Ｋ ５ ６ ２ ／ Ｒ，并 采 用 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ 、 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ— ｒ ｂ ｌ ｏ ｔ 、免 疫组 化 、基 因测 序 等生 物 学 手段 对 其进 行 耐 药 机理 进 行 分 析 。结 果 ： Ｋ ５ ６ ２ ／ Ｒ细 胞 株 在 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ １ 浓 度高 达 １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ水平 ， 仍 能稳 定生 长 ， 繁殖 旺盛 。Ｋ ５ ６ ２ ／ Ｒ细胞 株耐 Ｓ Ｔ Ｉ ５ ７ 程 度 较亲代 Ｋ ５ ６ ２细胞 多 达 ２ ３ ５ 倍， 该 耐 药 细胞 株 对 Ｈ Ｈ Ｔ、 Ｖ Ｃ Ｒ、Ｄ Ｎ Ｒ具 有 不 同程 度 的 交叉 耐 药 性 ，与 亲代 Ｋ ５ ６ ２细胞 比较 差 异 有 统计 学意 义 （ Ｐ ＜ ０ ． ０ ５ ｏ与亲 代敏 感株 Ｋ ５ ６ ２细胞 相 比 ， 其Ｂ Ｃ Ｒ — Ａ Ｂ Ｌ基 因表 达上 调 ， Ｂ Ｃ Ｒ — Ａ Ｂ Ｌ 蛋 白及 其 激酶 过度 表达 。 结论 ：
苦参碱对K562细胞培养液中PG2含量的影响
１ 材 料 与 方 法
内保存 备 用 ； １次 反应 ： Ｐ 标 准 品 用 Ｐ Ｓ作 ④ 将 ＧＥ Ｂ
制 白血病 Ｋ５ ２细胞 的增 殖并 诱导其 分化 ［ 。分 析苦 ６ １ ］
参 碱处 理 Ｋ５ ２细 胞后 ， 内与 胞外 信号 分子 量 与活 ６ 胞 性 的改变 ， 有利 于深入研 究其作 用机 理 。 列腺素 Ｅ 前 ２ （ ｒ ｓａ ｌｎ ｉ Ｅ ， ＧＥ ） 机 体 花生 四烯 酸 代谢 的 ｐ ｏ ｔｇａ ｄｎ ２Ｐ ２是 主要活性 产物之一 。 在调 节血 流 、 细胞增殖 、 组织 保护 与修复， 以及 在 消化 、 吸与 泌 尿生 殖 系统 的功 能 调 呼 节 中起着 重要 作 用 。本 研 究 初 步 分 析 了苦 参碱 对 ］ Ｋ５ ２细胞 培养液 中 Ｐ ６ ＧＥ。 含量 的影 响 。
摘 要 目的 ： 究苦参 碱 诱 导 Ｋ５ ２细胞 分 化的 胞 外信 号 。方 法 ： 用酶联 免 疫 法 ， 态检 测 苦 参 研 ６ 运 动 碱 作 用 于 Ｋ５ ２细 胞 后 ， 养 液 中 Ｐ Ｅ ６ 培 Ｇ 含 量 的 变化 。结 果 ： 养 液 中 Ｐ ｚ 量在 苦 参 碱 作 用 于 培 ＧＥ 含 Ｋ５ ２细 胞 ２天后 有 增 高 ， 与 苦参 碱 浓 度 有 关 。结 论 ： 苦 参 碱 诱 导 Ｋ５ ２细胞 分 化 的过 程 中， ６ 并 在 ６
人慢性髓系白血病细胞;K562贴壁培养
人慢性髓系白血病细胞；K562贴壁培养细胞名称：人慢性髓系白血病细胞；K562形态特性：淋巴母细胞样生长特性：悬浮生长培养条件：RPMI1640(w/o Hepes)+10%FBS传代方法：维持细胞浓度在1×105~2×106cells/ml；2~3天换液1次冻存条件：基础培养基+8%DMSO+20%FBS特征特性：该细胞是由Lozzio从一名53岁的慢性髓细胞性白血病急变期的女性患者的胸水中分离建立的。
该细胞曾被认为来源于粒系，处于高度未分化阶段；Anderson等人作了细胞膜特性的研究后，认为该细胞是红白血病细胞系。
该细胞是对自然杀伤细胞高度敏感的体外靶标，故而被广泛应用于这方面的研究。
K562的原始细胞是一种具有多向分化潜能的造血系统的恶性肿瘤细胞，能自发分化为红系、粒系和单核系的可辨识的祖细胞。
该细胞表达CD7（25％）。
细胞处理方法：1.细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满培养基运输，获得细胞后用酒精棉球擦拭瓶口消毒，然后在超净台中操作。
2.将细胞转移至50mL的无菌离心管中，1000rpm离心5-10min，用完全培养基重悬细胞，适宜的密度分瓶培养。
注意：我们使用自产培养基及进口血清培养细胞，在您拿回细胞后，如想更换其它品牌培养基，请依照逐次替换的原则，先保留培养瓶中的培养基，多日多次代逐步更换，以减轻对细胞的刺激。
特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）1.收到细胞后请尽快更换为含10%FBS的新鲜培养基。
2.如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系售后。
3.细胞任何售后问题，均需拍照存档并在2周之内及时联系客服。
饲养层细胞名词解释
饲养层细胞名词解释
饲养层细胞是指用于生物实验或生产中的一种细胞培养方式。
在饲养层细胞中，细胞被放置在培养皿等容器中，通过提供适宜的培养基和条件，使细胞自然生长、繁殖和分化。
饲养层细胞可以分为单层和多层两种形式，单层细胞通常用于细胞学和分子生物学研究，多层细胞则常用于细胞工程、生物制药等领域。
在饲养层细胞的培养中，需要注意控制细胞密度、营养物质供应、培养条件等因素，以维持细胞生长和稳定。
常用的饲养层细胞包括HEK293、CHO、Vero等。
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k562饲养层细胞的质量标准
K562饲养层细胞的质量标准通常包括以下几个方面：
1.细胞形态：饲养层细胞应该呈扁平状，细胞核应该位于细胞中央，细胞质应该清晰可见。
2.细胞密度：饲养层细胞的密度应该适中，过高或过低都会影响细胞的生长和繁殖。
3.细胞活性：饲养层细胞应该具有良好的生长和繁殖能力，能够支持其他细胞的生长和繁殖。
4.细胞纯度：饲养层细胞应该具有较高的纯度，不应该含有其他种类的细胞或微生物。
5.细胞稳定性：饲养层细胞应该具有良好的稳定性，能够长期保存并保持其特性和功能。
6.细胞来源：饲养层细胞应该来自可靠的供应商，并经过严格的质量控制和验证。
以上是K562饲养层细胞的一些常见质量标准，具体要求可能会因供应商和应用领域的不同而有所差异。