多糖检测方法(保健品)
多糖含量的测定方法
多糖含量的测定方法有多种，以下列举其中几种常用的方法： 1. 酚硫酸法：将样品与酚硫酸反应生成稳定的紫色化合物，通过测定紫色化合物的吸光度来确定多糖含量。
2. 蒽酮-硫酸法：样品经热水溶解后，乙醇沉淀，除去其他可溶性糖及杂质的干扰，用热水溶解沉淀物并稀释定容。
此法操作简便，测定速度快，可用于多糖的实时快速测定和定性分析。
3. 刚果红显色法：在一定条件下，刚果红显色剂能与乙酰甘露聚糖生成有色复合物，而不与麦芽糖糊精、蔗糖和葡萄糖等发生明显的显色反应。
由此可以建立定量分析芦荟多糖含量的刚果红显色分光光度法。
此外，还有其他方法如色谱法、光谱法等也可以用于多糖含量的测定。
具体使用哪种方法需要根据实验目的、样品性质和实验条件等因素进行选择。
铁皮石斛多糖含量测定方法
铁皮石斛多糖含量测定方法铁皮石斛（Dendrobium officinale）是我国传统的药食两用植物，被广泛用于中药制剂和保健品的生产。
其中，铁皮石斛多糖作为一种重要的活性成分，具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等多种生理活性。
准确测定铁皮石斛多糖的含量对于保证药品质量、开发新产品以及进行药理研究具有重要意义。
本文将介绍铁皮石斛多糖含量的测定方法，并对其中的一些关键问题进行讨论。
1. 概述铁皮石斛多糖的含量测定方法主要有两种：物理化学方法和生物学方法。
物理化学方法包括紫外分光光度法、高效液相色谱法、凝胶渗透色谱法等，而生物学方法则利用生物活性来测定多糖的含量。
2. 物理化学方法2.1 紫外分光光度法紫外分光光度法是最常用的多糖含量测定方法之一。
其基本原理是利用多糖在240 nm波长处的吸光度进行定量测定。
在实验中，我们可以通过构建标准曲线来计算样品中多糖的含量。
2.2 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种准确快速测定多糖含量的方法。
该方法通过将多糖样品与适当的溶剂混合，并通过色谱柱进行分离和检测。
通过测量峰面积或峰高度与标准曲线进行比较，可以获得多糖的含量。
2.3 凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法（GPC）是一种测定多糖相对分子质量和含量的有效方法。
该方法利用不同分子大小的多糖在凝胶柱中的渗透性不同，从而实现分离和定量。
3. 生物学方法3.1 酚硫酸法酚硫酸法是一种常用的生物学方法。
其原理是利用酚与糖在酸性条件下反应生成深色的复合物，通过测量复合物的吸光度来定量多糖的含量。
3.2 还原糖法还原糖法是一种测定多糖含量的简便方法。
该方法基于多糖的还原性，通过将多糖与苏糖醇进行还原反应，从而产生可见光吸收的还原糖化合物。
通过测量反应产物的吸光度，可以计算多糖的含量。
4. 关键问题的讨论4.1 样品预处理在测定铁皮石斛多糖含量之前，对样品进行适当的处理非常重要。
应选择合适的提取溶剂，以充分提取多糖。
根据样品的特点和需要，可以采用不同的样品预处理方法，如酶解、酸碱水解等。
多糖的研究方法及其现状概要
有人认为β-葡聚糖是一种融合诱 导剂,它能诱导免疫细胞与肿瘤细胞的 融合,从而使肿瘤细胞消失.上述这些 作用机制的理论有的虽被初步实验证 实,有的却是推测,有待人们去进一步 完善.
由此可见,至今活性多糖的研究 尚属初级阶段.
多糖的应用可分为两个方面
一类是利用多糖的独特理化性质， 如易形成凝胶、高渗透压、高粘度和吸 水性，制备医药材料、药物缓释剂、血 浆代用品等
多糖
多糖是由十个以上单糖通过糖苷键以共价键形式 结合起来的聚糖
（Polysaccharide或glycan）
可用(C6H10O5)n表示，其中n>10
自然界很少存在n为10-30的多糖
匀多糖——只有一种类型的单糖组成的多糖 杂多糖——几种类型的单糖组成的多糖
直线型 多糖结构 取代线状型 分枝型 环状型
氢键,范德华力,色散力和疏水性等非共
价作用 --------决定了多糖的三级结构
蘑菇类产生具抗肿瘤作用的多糖: 分子量 10万至100万 分枝度为2:3至1:5 三股螺旋立体结构的β-葡聚糖
香菇多糖,云芝糖肽,裂褶菌多糖 -------正式在临床上应用
证明在提高机体免疫功能上特别是 肿瘤辅助治疗中具有显著作用---受到 临床医生的青睐 但是,人们期待更有效的活性多糖 的问世
但是
多糖的研究必竟起步较晚
----各方面尚须进行深入的研究 ----大量新的活性多糖有待于研究与开发 ----作用机制有待于完善
多糖的构效关系的研究是寻找高活性 多糖及深入研究多糖作用机制的基础
最近
机体
作用机理研究
免疫细胞
-------进展快
多糖 ----分子水平
-------激活 --------释放出细胞间传导的信息Cytokine -------再作用于免疫细胞 ---------体内协同作用 最终 抑制肿瘤生长
高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量
高效凝胶渗透色谱法测定多糖纯度及分子量一、本文概述多糖作为一种重要的生物大分子，广泛存在于自然界中，具有多种生物活性，如免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等。
因此，对多糖的纯度及分子量的准确测定对于其研究和应用具有重要意义。
高效凝胶渗透色谱法（High Performance Gel Permeation Chromatography，HPGPC）是一种常用的多糖纯度及分子量测定方法，具有操作简便、分辨率高、重现性好等优点。
本文旨在介绍HPGPC法测定多糖纯度及分子量的原理、实验步骤、数据处理及注意事项，以期为多糖的研究和应用提供参考。
二、实验材料与方法1 多糖样品：选择待测定的多糖样品，确保其来源清晰，无杂质污染。
2 高效凝胶渗透色谱（HPGPC）柱：选择适当型号的HPGPC柱，以适用于待测多糖样品的分子量范围。
3 流动相：通常选用适当的溶剂或缓冲液作为流动相，以保证多糖样品在色谱柱上的良好分离。
4 检测器：使用示差折光检测器（RI）或紫外检测器（UV）等，以监测多糖样品在色谱柱上的分离情况。
5 其他试剂与仪器：包括样品制备所需的试剂、色谱仪、注射器、进样针等。
1 样品制备：将多糖样品溶解在适当的溶剂中，制备成一定浓度的溶液，以便进行后续分析。
2 色谱条件优化：通过预实验，优化色谱条件，包括流动相的选择、流速、柱温等，以获得最佳的分离效果。
3 进样与分离：将制备好的多糖样品溶液通过注射器注入HPGPC 仪中，通过色谱柱进行分离。
在分离过程中，利用检测器监测多糖样品的分离情况。
4 数据收集与处理：收集分离过程中的数据，利用相应软件对数据进行处理和分析，包括分子量计算、纯度分析等。
5 结果评价：根据分析结果，评价多糖样品的纯度及分子量分布情况，为后续研究提供依据。
通过以上实验材料与方法，可以高效地进行多糖纯度及分子量的测定，为后续多糖的结构研究、质量控制等提供重要支持。
三、实验结果与讨论在本研究中，我们采用了高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）对多糖样品的纯度和分子量进行了测定。
蒽酮-硫酸法测定菌类保健品中的活性多糖
［J］. 食用菌学报，1997，（4 2）：40 - 42 .
3结 论
［5］ 方积年，王顺春 . 香菇多糖的研究进展［J］. 中国药学 杂志，1997，3（2 6）：32 - 34 .
用蒽酮-硫酸法测定菌类保健食品中葡聚糖 的含量，方法简单，操作简便，具有较高的精密度， 较好的准确度，可用于菌类保健食品中的葡聚糖 的测定 .
洗涤液：取水 50 mL，加入 10 mL 铜试剂溶液， 10 mL 氢氧化钠溶液，混匀 .
0 . 06% 蒽酮-硫酸溶液（W / V）：称取 0 . 06 g 蒽 酮，加入浓硫酸 100 mL 混匀，临用新配 .
葡聚糖标准储备液：精确称取分子量 5 X 105， 干燥至恒重的葡聚糖 0 . 500 0 g，加水溶解，并定容 至 100 mL，混匀，置于冰箱中保存 . 此溶液每 mL 含 5 . 00 mg 葡聚糖 . 用时取适量稀释至每毫升含 葡聚糖 0 . 100 mg 为标准使用液 . 1.3 分析步骤 1.3.1 工作曲线绘制
样品 号
1 2 3 4 5
表 2 精密度的实验结果
样品的质量 /g
0 . 385 0 . 382 0 . 395 0 . 395 0 . 385
多糖含量 （/ mg / g）
6 . 271 6 . 199 6 . 079 6 . 232 6 . 190
相对标准偏差 /%
1 . 04
可见，该法的精密度较好 . 2.7 回收率的测定
图 1 乙醇浓度的影响
2.5 硫酸体积的影响 按照实验步骤，在葡聚糖沉淀、离心、洗涤后，
沉淀分别用不同体积的 100 ml / L 的硫酸溶液溶 解，制成样品测定液，进而测定多糖 . 结果见表 1 .
多糖分离纯化及含量测定
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、提取温度、浸 提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 该种方法提取多糖不需特殊设备，生产工艺成本低， 安全，适合工业化大生产，是一种可取的提取方法。
• 但由于水的极性大，容易把蛋白质、苷类等水溶性的 成分浸提出来，从而使提取液存放时腐败变质，为后 续的分离带来困难，且该法提取比较耗时，提取率也 不高。
溶剂法：酸提法
• 为了提高多糖的提取率，在水提醇沉法的基础上发展 了酸提取法。
• 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团的多糖在较低pH 值下 难以溶解；
• 含有胺基的多糖可使用乙酸或盐酸调节提取液成酸性 进行提取，然后再加乙醇使多糖沉淀析出，也可加入 铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。
• 影响多糖提取率的因素有：水的用量、pH值、提取温 度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等。
• 微 波 是 指 波 长 在 1mm 到 1m 范 围 （ 相 对 频 率 为 300~ 300000MHz）的电磁波，介于红外与无线电波之间。
• 微波协助萃取植物药材时，一方面是利用微波透过萃 取剂到达物料内部，由于物料腺细胞系统含水量高， 水分子吸收微波能，产生大量的热量，所以能快速被 加热，使胞内温度迅速升高，液态水汽化产生的压力 将细胞膜和细胞壁冲破，形成微小的孔洞。
2. 酶解法：单一酶解法
• 单一酶解法是指使用一种酶来提取多糖，从而提高提 取率的生物技术。其中经常使用的酶有蛋白酶、纤维 素酶等。
• 蛋白酶对植物细胞中游离的蛋白质具有分解作用，使 其结构变得松散；蛋白酶还会使糖蛋白和蛋白聚糖中 游离的蛋白质水解，降低它们对原料的结合力，有利 于多糖的浸出。
• 纤维素酶则能特异性地降解纤维素，使植物细胞的细 胞壁破裂，有利于多糖易从胞内释放。
多糖检测方法_乌药精颗粒中粗多糖的检测方法探讨
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容量瓶中,加水 80ml 左右,在沸水浴中加热 2 小时,冷却至室温,过滤。加 取样品测定液的体积(ml)。
1.0ml 10%的糖化酶溶液(含 1 万 U/ml,现配现用,在离心机中以 3000rpm
②取 5ml 溶液至 50ml 的离心管中,加 20ml 无水乙醇,在离心机中以
3000rpm 离心 20min,并当心弃去上清液,再用 10ml 80%乙醇洗沉淀物,在
3 试验结果
离心机中以 3000rpm 离心 20min,反复操作 3 次。残渣(沉淀物)用蒸馏水
溶解并定容至 50ml。此溶液为样品测定液。③取 2.0ml 样品测定液于 25ml
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多糖检测方法_乌药精颗粒中粗多糖的检测方法探讨
关键词 乌药精颗粒 粗多糖 检测方法
多糖在调整血
脂、免疫功能及抗疲惫、抗肿瘤、抗放射等方面具有显著的作用[1-3]。
目前国内尚无标准方法测定多糖的含量[4],本法接受糖化酶消化,80%乙
醇沉淀,用苯酚-硫酸反应法测定含量。测定结果稳定、精确,适用于模糊
④同时做糊精对比(样品由糊精、葡萄糖各 1g 组成),假如糊精对比测定结
果,粗多糖含量不在 0.2%以下,说明酶活性不够,应增加用量重新检测。
3.2 不同方法对不同样品的粗多糖含量检测结果:详见表 2。
2.3 结果计算:X(%)=m1×v1×v3×100/(m2×v2×v4×1000)。X 为指
样品中粗多糖的含量(以葡萄糖计)(g/100g);m1 为(标准曲线查)样品测定
大枣提取多糖的实验报告
一、实验目的本实验旨在通过热水浸提法提取大枣中的多糖，并对提取的多糖进行定量分析，探究提取工艺条件对多糖提取率的影响。
二、实验材料与仪器1. 实验材料- 大枣：市售新鲜红枣，要求无病虫害、无腐烂。
- 乙醇、硫酸、苯酚、Folin-Ciocalteu试剂等化学试剂。
2. 实验仪器- 磁力搅拌器- 电子天平- 超声波清洗器- 分光光度计- 恒温水浴锅- 离心机- 旋蒸仪三、实验方法1. 样品处理将新鲜大枣去核，用去离子水清洗，晾干后用剪刀剪碎，置于烘箱中60℃烘干至恒重。
2. 多糖提取称取5.0g干燥的大枣粉末，加入50mL去离子水，在磁力搅拌器上搅拌30min，然后加入2.5mL 95%乙醇，继续搅拌10min，静置30min。
将混合液离心（3000r/min，10min），取上清液。
3. 多糖含量测定采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。
准确吸取1mL提取液，加入5mL 6%苯酚溶液，混匀后加入5mL硫酸溶液，在沸水浴中反应10min，冷却后于490nm波长处测定吸光度。
以葡萄糖为标准品，绘制标准曲线，计算多糖含量。
4. 工艺条件优化通过单因素实验和正交实验，探究提取温度、提取时间、料液比对多糖提取率的影响。
四、实验结果与分析1. 多糖提取率根据苯酚-硫酸法测定，本实验中多糖提取率为2.5%。
2. 工艺条件优化（1）提取温度：在50℃、60℃、70℃、80℃条件下，多糖提取率分别为 2.2%、2.5%、2.4%、2.3%。
结果表明，提取温度为60℃时，多糖提取率最高。
（2）提取时间：在30min、40min、50min、60min条件下，多糖提取率分别为2.0%、2.3%、2.5%、2.4%。
结果表明，提取时间为50min时，多糖提取率最高。
（3）料液比：在1:10、1:15、1:20、1:25条件下，多糖提取率分别为2.2%、2.4%、2.6%、2.3%。
结果表明，料液比为1:20时，多糖提取率最高。
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A.2 粗多糖的测量
A.2.1 方法
本方法参照《保健食品功效成分检测方法》（王光亚主编，中国轻工业出版社2002年出版）中“粗多糖的测定方法”中“（一）碱性酒石酸铜滴定法”制订。
A.2.2原理
样品中多糖经乙醇沉淀分离后，加酸、加热、回流水解成单糖，以次甲基蓝作指示剂，在加热条件下，滴定经标定过的碱性酒石酸钾钠铜溶液，根据样品液消耗体积，计算其含量。
A.2.3仪器与试剂
A.2.3.1全玻璃标准磨口回流装置(500ml)，水解用；
A.2.3.2碱性酒石酸铜甲液
称取15g硫酸铜(CuSO4·5H2O)，及0.05g次甲基蓝，溶于水并稀释至1000ml。
A.2.3.3碱性酒石酸铜乙液
称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000ml，储存于橡胶塞玻璃瓶内。
A.2.3.4葡萄糖标准溶液
准确称取1.0000g 经过98~100℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后，并以水稀释至1000ml此溶液1ml含1mg葡萄糖，现配现用。
A.2.4 操作方法
A.2.4.1 样品处理
准确称取均匀研碎的样品粉末2.0g，置于250ml的磨口烧瓶中，精密加入50ml水，称定重量，至沸水浴中加热回流2h，冷却至室温，用水补足减失重量，混匀，滤过，精密吸取续滤液15ml加75ml无水乙醇搅拌均匀，在离心机中以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液，再加15ml热水（温度>90℃），冲洗离心瓶中沉淀物，重复一次后再以4000r/min离心30min，小心用吸管将上层液体吸去。
用离心瓶中醇析物用50ml热水（温度>90℃）少量多次转移至250ml磨口三角瓶中，加入15ml浓盐酸，开启冷凝管，在沸水浴中加热2h，冷却，然后先用40%的氢氧化钠溶液（约15ml）粗调pH值，后用稀的氢氧化钠溶液细调，再置于pH计上调整pH在6.8~7.2之间，（不要用pH试纸调）。
将已中和的酸解
液转移至100ml容量瓶中，加水定容（V1）。
用滤纸过滤，滤液为待测液，供滴定用。
A.2.4.2 标定碱性酒石酸铜液
A.2.4.2.1 用定量移液管吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，加10ml蒸馏水及数粒玻璃珠。
A.2.4.2.2 用滴定管加入9.0ml葡萄糖标准溶液于锥形瓶中，并将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再用标准葡萄糖溶液滴定，待溶液颜色变浅时，以每2秒1滴的速度滴至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。
同法平行操作三份，取其平均值（V G）。
A.2.4.3 样品溶液预测和测定。
A.2.4.4.1 样品溶液的预测
精密吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5ml于150ml的锥形瓶中，加10ml蒸馏水及数粒玻璃珠，控制在2分钟内加热至沸，保持溶液在微沸状态下，从滴定管中滴加样品溶液，待溶液颜色变浅时，以每2s1滴的速度滴至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗样品液体积。
同法平行操作三份，取其平均值即为预测体积。
A.2.4.4.2 样品溶液的测定
精密吸取碱性酒石酸铜甲液与乙液各5.0ml，置于150ml锥形瓶中，加10ml 蒸馏水及数粒玻璃珠，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品溶液，将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2分钟内至沸，并保持溶液在微沸状态下再从滴定管中滴加样品溶液，待溶液颜色变浅时，以每2秒1滴的速度滴定至蓝色刚好褪去为终点，记录消耗样品溶液消耗的总体积。
同法平行操作三份，得出平均消耗体积（V2）。
A.2.5 计算
V G × C × V1 ×50
X ＝× 0.9 × 100%
m × V2 ×1000×15
式中：X——样品中粗多糖，g/100g；
V G——标定10ml碱性酒石酸铜液（甲、乙各5ml）消耗标准葡萄糖溶液ml数；
C——标准葡萄糖溶液的浓度（mg/ml）；
m——称取样品质量，g；
V1——酸解液中和后定容的体积，ml；
V2——测定时平均消耗样品溶液体积，ml；1000——mg换算成g；
0.9——还原糖换算成多糖的系数。