核酸扩增检测实验室设计及工作流
PCR实验室工作导则
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则一、临床基因扩增检验实验室的设计（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则。
原则上临床基因扩增检验实验室应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。
这 4 个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通。
根据使用仪器的功能，区域可适当合并。
例如使用实时荧光 PCR 仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并。
各区的功能是：1.试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
2.标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。
对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
3.扩增区：cDNA 合成、DNA 扩增及检测。
4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
（二）临床基因扩增检验实验室的空气流向。
临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域。
可按照从试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区方向空气压力递减的方式进行。
可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现。
（三）工作区域仪器设备配置标准。
1.试剂储存和准备区。
（1）2～8℃和-20℃以下冰箱。
（2）混匀器。
（3）微量加样器（覆盖 0.2-1000µl）。
（4）可移动紫外灯（近工作台面）。
（5）消耗品：一次性手套、耐高压处理的离心管和加样器吸头。
（6）专用工作服和工作鞋(套)。
（7）专用办公用品。
2.标本制备区。
（1）2-8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱。
（2）高速离心机。
（3）混匀器。
核酸检测实验室建设方案书
核酸检测实验室建设方案书一、平面布局（一）实验室功能分区普通核酸检测PCR实验室依据所使用的方法可分为试剂准备、标本制备、核酸扩增、产物分析等四个区域。
全自动定量PCR实验室通常设置三个工作区，即试剂准备区、标本制备区、核酸扩增和产物分析区，普通PCR 实验室后两个区合并。
一体化自动化分析PCR 实验室原则上设置两个工作区，即试剂准备区、自动检测区，普通PCR实验室后三个区合并。
各个区可组合布置，也可分散布置。
（二）实验室平面布局实验室应在建筑物中自成隔离区，应有出入控制。
试剂准备区、标本制备区和核酸扩增及产物分析区等四个区域在物理空间上必须是完全相互独立的。
可以分散布置。
为避免交叉污染，进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
不能将工作服带出。
每个工作区域必须有明确的标记，避免不同工作区域内设备、物品混用。
各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
整体划分为∶PCR区域、独立缓冲间，及辅助房间区域，缓冲间可兼做防护服更换间。
当缓冲间的门设置互锁时，应在互锁门的附近设置紧急手动解除互锁开关。
保持合理梯度，保证气流从辅助房间流向核心区。
可降低扩增区内的气压以避免气溶胶从本区漏出。
（三）人流、物流流向人流∶工作人员→一更→二更→缓冲间→洁净走廊→缓冲→核心试验区域洁物∶原料→入口→样品接收→传递窗→洁净走廊→缓冲→核心试验区域污物∶污物→洁净走廊→传递窗→高压灭菌→传递窗→外部进入各个区域必须严格按照单一方向进行，不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。
工作人员离开时，不得将工作服带出。
这种人员的单向流动可以降低因人员的流动带来的交叉污染风险。
所有的物品进入实验区必须经过双扉互锁传递窗，利用传递窗消毒后才可进入，实验室内所有物品也必须经过传递窗才可以传递到实验室以外的清洁公共区。
这种物品有组织的单向流动可以降低物品的差错和混淆的风险。
血站核酸扩增检测实验室工作规范
血站核酸扩增检测实验室工作规范1血站核酸扩增检测实验室工作规范为使核酸扩增检测技术有效地应用于血液筛查，保证血液安全，特制定本规范。
一、血站核酸扩增检测实验室的规范化设置及其管理血站核酸扩增检测实验室的规范化设置详见《临床基因扩增检验实验室管理办法》（卫医发[2010](待定)号文）附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》。
为避免污染，必须严格遵循《临床基因扩增检验实验室设置标准》设置血站核酸扩增检测实验室。
血站核酸扩增检测实验室应根据仪器设备特点设置工作区域，各区域仪器设备应固定不可移至其它区域。
各区域都必须有明确的标记，以避免设备实验器材如加样器、试管或加样器吸头架、试剂等从其各自的区域内移出从而造成不同的工作区域间设备和实验器材发生混淆。
进入各个工作区域必须严格遵循单一方向顺序，即只能从试剂贮存和准备区、标本处理（混样）、核酸纯化、扩增检测区，避免发生交叉污染。
在不同的工作区域应使用不同颜色或有明显区别标志的工作服，以便于鉴别。
此外，当工作者离开工作区时，不得将各区特定的工作服带出。
清洁方法不当也是污染发生的一个主要原因，因此实验室的清洁应按试剂贮存和准备区至扩增检测区的方向进行。
不同的实验区域应有其各自的清洁用具以防止交叉污染。
（一）试剂贮存和准备区下述操作在该区进行：贮存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备。
贮存试剂和用于标本制备的材料应直接运送至试剂贮存和准备区，不能经过产物分析区。
在打开含有反应混合液的离心管或试管前，应将其快速离心数秒。
试剂原材料必须贮存在本区内，并在本区内制备成所需的贮存试剂。
当贮存试剂溶液经检查可用后，应将其分装贮存备用，避免由于经常打开反应管吸液而造成污染。
含反应混合液的离心管或试管在冰冻前都应快速离心数秒。
大多数用于扩增的试剂都应冰冻贮存。
为避免因单次反应取液而频繁的冻融主贮存试剂，应分装冰冻贮存试剂溶液。
贮存试剂的分装体积根据通常在实验室内一次测定所需的扩增反应数来决定。
核酸检测实验室建立与应用
2022/1/24
待查标本复检
合格标本
不合格标本
单人份拆分 反应性标本
淘汰 不合格标本
9
检测流程(2):常规筛查合格单人份标本检测流程
2022/1/24
10
检测流程(3):平行检测流程
常
规
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
检
样测
本
清
点 交
核 酸 单
接份
检
测
不合格标本 合格标本
阴性标本
反应性标本
2022/1/24
阳性或可疑 结果淘汰
2022/1/24
27
深圳血液中心核酸检测概况
对161228人份酶免疫检测结果阴性标本 进行核酸检测，共检出33例不相同HBV DNA阳性献血者，总比率为1：4885。
检出anti-HCV阴性、 HCV RNA阳性1例， 定量结果为1.2×105IU/ml。3个月后追 踪结果发现anti-HCV（+），ALT由正常 升高至700U/L。
培训:①无”核酸”的概念形成, ②防污 染的概念③良好工作习惯的培养. ④报告 的正确发放.
后备人员的培养.
2022/1/24
3
样本离心交接区
试剂准备区
核
酸
实
标本制备区
验
场
地 扩增区及扩增产物分析区
报告发放区
2022/1/24
4
方法选择: TMA与PCR
TMA
扩增原理 模拟自然 DNA 转录成 mRNA 的过程
HBsAg 检测(+).
2022/1/24
37
2022/1/24
38
1.Pooling by STAR processor 2.Virus enrichment by centrfugation
核酸检测实验室装修关键要点和要求
RT-PCR是检测新型冠状病毒核酸最广泛、最准确的筛选和确认方法。
大规模的核酸检测将不可避免地引起相关机构和单位重视建立标准化的临床PCR实验室。
如何避免污染是临床基因扩增实验室装修设计的关键问题，因此实验室的布局、空调通风系统设计、风量控制等都是围绕这一核心问题展开的。
核酸检测实验室装修要求：核酸检测实验室有设计理念、装修要求、净化空调系统、通风、自控、工艺设备等几个关键点。
材质：隔墙及吊顶——净化彩钢板、地面——同质透芯PVC地板、净化实验室专用门、观察窗要求：1.墙面：光洁、不产尘积尘、耐腐蚀，易清洁消毒、无缝隙。
2.地面：防静电、耐腐蚀、无缝隙、无渗漏。
3.阴阳角：均用圆弧角密封处理。
4.门：必须设置自动互锁(机械或电子)。
净化空调、通风系统、自控系统要求：1.避免交叉污染，采用全新风空调系统。
2.样品制备区严格按照BSL-2设计施工。
3.排风系统全部按照要求采用高效过滤器净化。
4.气流组织：采用上送下排形式。
5.压力梯度控制通过微压差计及精密自控系统控制。
6.实验室入口处显示房间内各项指标参数，并设置偏离报警。
工艺设备要求：1.实验台下部均留空，无死角。
2.全部采用不锈钢304制作。
3.样品制备区设置洗眼装置，必要时应有应急喷淋装置。
4.非接触式操作理念(感应式水龙头、感应式自动门、互锁传递窗等)。
核酸检测实验室装修关键点：1.平面布局：不论是组合式还是分散式布置的PCR实验室，各功能房间均宜设置独立缓冲间2.区域空气流向：为避免交叉污染，PCR实验室空气流向必须严格遵循单一方向进行，即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。
3.通风空调：为避免交叉污染，各功能用房内空气不能掺混。
混合式PCR实验室应采用新风直流空调系统，当采用新风系统有困难时，各区域的空气只能在自己的房间内循环。
4.生物安全：按照新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）的规定，2019-nCoV病原体暂按照第二类病原微生物进行管理，则样本植被区宜为负压或加强型P2实验室，核酸操作应在生物安全柜内进行。
PCR实验检测标准操作规范
PCR检测实验室操作规范一、PCR 实验室的设置及管理1．目的：建立实验室的合理设置和科学管理，防止实验污染，保证检测结果的可靠性。
2．适用范围：本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3．负责人：4．细则：4．1流感实验室为急传所的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等。
4．2 本实验室采用实时荧光定量（定性）PCR 技术作为病毒基因诊断的主要手段，实验室分为三个区：试剂准备区（第一区）、标本处理区（第二区）、扩增分析区（第三区）。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4．3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，不可混用。
4．4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP 文件。
4．5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度，不得逆向进入前一工作区。
4．6 非本实验室工作人员，未经许可不得入内；进修、实习或其他科室人员因科研活动需要，进入实验区域（试剂准备区、标本处理区、扩增分析区）需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行，在本实验室人员监督指导下进行。
4．7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
二、PCR 实验室工作制度1．目的：保持良好的工作环境，以确保检测结果的可靠性，防止交叉污染，防止差错、事故及纠纷的发生。
2．适用范围：所有本实验室人员。
3．负责人：4．细则：4．1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作，不得进行其它实验操作。
4．2 各区的用品不得混用。
4．3 在各区的实验操作过程中，操作者必须戴手套和帽子，严格按照操作规程。
4．4 试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作（见相关SOP 文件）。
4．5 标本处理区只能进行临床标本的保存，核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA 时cDNA 的合成（见相关SOP 文件）。
PCR实验室(新冠核酸检测实验室)SOP文件
新型冠状病毒核酸检测标准操作程序……………………………………………………………………18
人乳头瘤病毒分型检测（基因芯片法）标准操作规程…………………………………………………24
核酸扩增及产物分析检测的操作程序……………………………………………………………………30
多恒MINI10K迷你离心机操作流程及维护保养程序………………………………………………….74
多恒MIX-2500微型旋涡混合/匀器操作流程及维护保养程序………………………………………...76
多恒2-96板式离心机操作流程及维护保养程序………………………………………………………..78
威高MSL.NC80高压灭菌器操作流程及维护保养程序………………………………………………...80
多恒DHG-9053BS-III电热恒温鼓风干燥箱操作流程及维护保养程序……………………………….54
多恒HH-100干式恒温器（金属浴）操作流程、校准及维护保养程序……………………………….56
多恒TD4Z低速离心机操作流程及维护保养程序……………………………………………………….60
多恒DH18R台式高速冷冻离心机操作流程及维护保养程序…………………………………………..66
3.2.7使用带有本室专用标志的加样器以及经过消毒处理的离心管和带滤芯的一次性吸头。
3.2.8使用过的离心管、吸头须置于盛有2000mg/L有效氯消毒液的废物盒中。
3.2.9污染的处理：实验中若在操作台面上发生液体外泄，应立即用浸有2000mg/L有效氯溶液的滤纸覆盖发生污染处半小时，然后用酒精擦洗，并开启紫外灯消毒。
3.1.5实验中所使用的离心管、吸头等需经高压灭菌处理，应在消毒有效期内使用。
核酸扩增检测实验室设计及工作流程
核酸扩增检测实验室设计及工作流程一、核酸扩增检测实验室设计1. 实验室空间布局设计核酸扩增检测实验室空间布局应根据实验室操作流程设计，尽量使实验室布局合理、流畅。
一般实验室需要分为准备区、处理区、分析区和储存区四个区域。
（1）准备区：放置进出实验室所需的物品、试剂、耗材等。
（2）处理区：扩增、提取、检测等样品处理操作区域。
该区域需配置相应的消毒设备和抽风设备，并考虑操作人员的人流量，确保操作空间充足。
（3）分析区：PCR扩增、电泳分析等实验操作区域。
该区域需要保持相对干净和静电消除，重要仪器和设备应单独放置。
（4）储存区：将操作过的样品、耗材和试剂分类存放，且应配置低温、恒温、干燥等设备，以确保长期保存。
2. 实验室环境要求核酸扩增检测实验室的环境应符合以下要求：（1）室内温度：18~28℃。
（2）相对湿度：40%~60%。
（3）装修材料：实验室室内装修材料应为易清洁、防腐蚀材料。
（4）光照：实验室应配备恒光可调光源；（5）洁净度：除配置洁净工作台外，实验室墙、地面和物品表面均需定期消毒。
3. 实验室设备及器具要求（1）洁净工作台：核酸扩增实验涉及到高度灵敏的样品处理和PCR扩增，容易引入异物和污染物，必须配置洁净工作台。
（2）PCR仪：PCR仪是核酸扩增检测的核心仪器，具有高温度精度和均匀性，能精确控制温度变化，使PCR反应体系在恒定的温度下进行扩增。
（3）显微镜：核酸扩增检测的结果常常需要用到显微镜，观察PCR扩增产物的大小、形态、颜色等。
（4）离心机：用于离心样品沉淀，制备溶液和样品混合等。
（5）电泳仪：电泳仪用于检测PCR扩增产物，并可用于结合染色方法，对扩增产物进行定性、定量和分析。
二、核酸扩增检测实验室工作流程1. 样品获取和处理根据样品种类，样品获取后需进行不同处理。
如环境样品需要加入缓冲液，以及粉尘、沙尘、胶片、坦克等样品需要分解。
2. DNA/RNA提取将样品经过离心后，取沉淀样品，加入DNA/RNA提取试剂，进行蛋白酶处理和洗脱DNA/RNA等处理步骤，以提取出样本中的DNA/RNA。
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和仅含按样本一样稀释的主反应混合液的扩增阴性质控， 这样做的目的是，最大可能地测出以前扩增产物的交叉污 染。
扩增及产物分析区
l 热循环仪的电源应专用，并配备一个 不间断电源（UPS）或稳压电源。
核酸扩增检测实验室设计 及工作流程
Evaluation only. ted with As李po金se明.Slid卫e生s f部or临.N床ET检3验.5中C心lient Profile 5.2
Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
核酸扩增检测实验室的设计
l 依据：卫生部颁发的《临床基因扩 增检验实验E室val管ua理tion暂o行nly办. 法》（卫
l 各区独立
l 注意风向 Evaluation only.
“十六字口诀” ted with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 l 因C地o制py宜right 2019-2019 Aspose Pty Ltd. l 方便工作
扩增区
A
标本制备区 门
l 实验室的“通风” l 次氯酸钠溶液Ev的alu使ati用on only. ted lw1ithmAosl/pLosHeC.Sl溶lide液s的for使.N用ET 3.5 Client Profile 5.2 l 紫C外op照yr射ight 2019-2019 Aspose Pty Ltd. l 无水乙醇溶液？
Evaluation only. ted with Aspose.Slides空气fo流向r .NE门T 3.5 扩物C分增l析i及e区n产t Profile 5.2
Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd. 空气流向 空气流向 试剂准备区 门 门
门
扩增和产 物分析区
空气流向
Evaluation only.
ted with Aspose.Slid空气e流s向for .NE空T气3流.向5 Client空气P流r向ofile 5.2
空C气流o向pyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
缓冲间
缓冲间
缓冲间
专用走廊
工作流向
核酸扩增检测实验室设计的一般原则
专用走廊
工作流向
关于“区域”合并
l 如使用扩增和产物分析同时完成的实时荧光 PCR仪进行核酸扩增检测，扩增区和产物分析
区可以合并。Evaluation only. ted with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2
l 如C使o用py核rig酸h提t 2取01、9扩-2增01及9 产As物po分se析P等ty均L在td一. 台
l 接收的标本应收集在原始容器中 l 在核酸提取时带入至标本制备区
标本的接收区的仪器设备要求
l 如果在标本接收区分离血清（浆）标本，有1 台分离血清（浆）用离心机、1台生物安全柜、
1台冰箱、加样E器va及lu相ati应on一o次nl性y. 经高压处理的 ted wi消th耗As品p如os带e.滤Sl芯ide吸s头fo、r .标NE本T接3收.5编C号lie记nt录P本ro以file 5.2
Aspose
Pty
Ltd.
其他实验室
区
其他实验室
其他实验室
空气流向++
空气流向
空气流向
走廊
走廊
其他实验室
空气流向+
其他实验室
标本制备 区
其他实验室
其他实验室
产物分析区
扩增区
标本制备区
试剂准备区
传递窗
传递窗
传递窗
空E气v流a向luation空o气n流l向y.
空气流向
ted w空it气h流A向spose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2 Copyrigh缓t 冲2间019-2019缓冲A间spose P缓ty冲间Ltd.
试剂准备区
其他实验室
其他实验室
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其他实验室
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Copyright 2019走-2廊019 Aspose 走P廊ty Ltd.
其他实验室
空气流向
标本制备区
其他实验室
本、C记op号y笔rig、h试t 管20架1及9清-2洁0用19具A等s必p须os专e用P。ty Ltd.
l （3）应在标本制备区、扩增及产物分析区等相对有可能 出现“污染物”的区域安装排风扇或其它排风和有效的装 置，以使空气按试剂准备区标本制备区扩增（及产物 分析）区方向流动。
核酸扩增实验室的工作流程
符合基本要求的核酸扩增检测实验室的条件
l （1）试剂准备区、标本制备区和扩增及产物分析区等三 个或四个区域在物理空间上，必须是完全相互独立的，各 区域无论是在空间还是在使用中，应始终处于完全的分隔
状态，不能有空气E的va直l接ua相ti通on。only. ted lwi（th2）As各p区o的se可.S移l动id的es仪f器o设r .备N及E各T种3.物5品C包li括en实t 验P记ro录file 5.2
谢谢！ Evaluation only.
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仪器上完成的全自动核酸检测分析仪，标本制 备区、扩增区和产物分析区可合并。
无“基因”或“核酸”概念的重要性
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ted lwi每th 次As扩po增se后.SlE，idvea可sluf使aotri用o.Nn可EoTn移l3y..动5 C紫lie外nt灯P对rofile 5.2 扩C增op热yr循igh环t 2仪01进9-行201照9射As。pose Pty Ltd.
l 扩增仪应定期进行校准。
核酸扩增实验室最有效的防“污染”措施
检测时，取出一小瓶使用，未用完的即弃掉，不再使用。 l 仪器设备主要有加样器、天平、离心机和冰箱等，最好配
备超净工作台。
标本制备区
l 仪器设备主要有混样设备、核酸提取仪、生物安 全柜、加样器、高速台式（冷冻）离心机、加热
模块或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不应放在实
验对室分体门式口空等调易。受E人va员lu走a动tio影n响on的ly地. 方，也不应直
一致的温育温度。
扩增及产物分析区
l 扩增反应体系的配制和提取核酸的加入，可在标本制备区 也可在本区内进行，关键是要防止产物的污染。如果空间 允许的话，也可在一个独立的区域内进行。
Evaluation only. ted lwi加th样A时s，po先s加e提.S取lid的e核s酸fo模r板.N样E本T，3每.5加C完l一ie个nt即P盖r好of盖ile 5.2
门
门
产物分析区
试剂准备区
Evaluation only.
ted
with
Aspose.Slides for .NET
门
外走廊
3.5
C门lient
Profile
5.2
Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
B
扩增及产物 分析区标本制备区 门试来自准备区 门门外走廊
门
标本制备区
ted wi医thCA发ospp[y2ori0sge1h.9tS]2l1i0d01e号9s-f2o）0r1.N9 EATsp3o.s5eCPliteynLt tPdr.ofile 5.2
血液标本的接收
l 通常的工作流程：标本采集 血清分离
编号 保存或Ev检a测luation only.
tedl w应ith在A四sp个os测e.S定lid区es域fo之r 外.NE的T地3.方5 C或li区en域t P内ro接file 5.2 收Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
ted llwi所商有th有品机A实试溶s验剂剂po用盒等s：洁可e净能.7S5物 需%lEid品要乙vea自如醇sl配离u、fao心焦tri管碳o.Nn、酸E吸o二Tn头乙l3y等酯..5的（C存DEl放iPeC和n）t准处P备r理处o水f。il、e 5.2 l 自制C试op剂y：rig一h次t 较20大1量9配-2制01，9然A后s分p装os成e小P瓶ty保L存td，.每次
ted
l
w主ith要CA是ospp用yor于isge血h.tS液2li样0d1e本9s-的f2o0混r1.样N9 、EATs核p3酸o.s5样eC本Plit的eyn提Lt tP取dr.。ofile
5.2
l 加样器吸头必须带滤芯。
l 使用加热模块时，如在模块孔中填入二氧化硅细 砂，然后将标本管置于细砂中温育，可得到较为
试剂准备区
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Copyright 2019-2019 Aspose Pty Ltd.
扩增区及扩增产物分析区
试剂准备区
l 核酸扩增实验室中最为“洁净”的区域，不应有任何核酸 的存在，包括试剂中所带的标准品和阳性对照。
ted with Aspose.S空li气d流e向s for .N空E气流T向3.5 Cl空ie气n流t向Profile 5.2