miR_129_5p调节小鼠乳腺上皮细胞内Igf_1的表达

!""#$%%& &()(*#$$ +,&%-.中国生物化学与分子生物学报/001:--2345464357689762:*/;:8<8=>7?:@A >B C;>2/85;<0?D @:9E>A827A@?C;>A>FD)%$$年(月)&(():SG,I SS+K-!G 78PG L<调节小鼠乳腺上皮细胞内&/%G 7的表达丁巍，李庆章J，王春梅，李晔，崔巍，冯丽(东北农业大学乳品科学教育部重点实验室，哈尔滨$S%%+%)摘要E;2?>O#P<(5;O#P<)是一类大约))个核苷酸的非编码O#P6它能通过调控生长因子表达，引发肿瘤形成"细胞增殖和组织器官发育6本文通过构建5;O $)H S1靶基因序列的双荧光素酶报告载体分析了5;O $)H S1与靶基因之间的关系，应用脂质体转染技术和实时荧光定量技术观察了5;O $)H S1在小鼠乳腺上皮细胞中的表达量及其变化，通过*P"f 细胞活力仪检测转染后的细胞增殖与活力变化，采用T8<08?:印迹方法检!FB $的变化6结果表明:5;O $)H S1在小鼠乳腺青春期表达最高，成功构建了!FB $基因+LcQO 荧光素酶报告载体，5;O $)H S1抑制其荧光素酶活性(F w %a %$)，转染抑制子后5;O $)H S1表达降低(F w %a %$)，胰岛素样生长因子(!FB $)表达增强(F w %a %S )，细胞增殖和活力增强(F w %a %$)，结果提示:5;O $)H S1可能通过抑制靶基因蛋白!FB $的表达，进而抑制小鼠乳腺上皮细胞增殖和活力6关键词5;O $)H S1;荧光素酶报告载体;胰岛素样生长因子(!FB $%;乳腺上皮细胞中图分类号.&S)K-!G 78PG L<J*,/$+(%",&/DG 7>-#$ 2- /- C")($C*KK*,4V<-+F$#-*#@$##(M!#U T8;， !.;:F V/@:F J ，TP#U */7: E8;， !f8，*c!T8;，R\#U ;()*"+,-./,0./".&@,6/"456*25*$，N626$0/".&K7:5,06.2，J./0<*,$0=!/65:A0:/,A >26?*/$60"，(,/-62$S%%+%，;<62,)01(+,*2+E;2?>O#P<(5;O#P<);<@F?>71>B :>: 2>9;:F <5@AA O#P<@4>70)):72A8>0;98<，Z/;2/2@:;:9728075>?F8:8?@0;>:，28AA 1?>A;B8?@0;>:@:9@AA8A>0@XD 0/?>7F/0/8?8F7A@0;>:>B <>58?82810>?8X1?8<<;>:6!:0/;<<079D ，0/8!FB $+L cQO A72;B8?@<8?81>?08?[820>?Z@<2>:<0?720896Q/8M7@A 72;B8?@<8O81>?08?P<<@D "D<085Z@<7<890>d7@:0;0@080/8?81>?08?@20;[;0D6 ;1><>580?@:<B820;>:@:9?8@A 0;58_*O Z8?87<890>>4<8?[80/82/@:F8@:90/88X1?8<<;>:>B 5;O $)H S1>:5>7<85@55@?D 81;0/8A;@A 28AA<6Q/828AA 1?>A;B8?@0;>:@:9[;@4;A;0D Z@<9>:84D 28AA [;@4;A;0D @:@AD<;<@:90/82/@:F8<>B 0/8!FB $980820894D T8<08?:4A>00;:F6">;0Z@<1?>[890/@05;O $)H S18X1?8<<89/;F/8<0;:[;?F;:5@55@?D FA@:9>B 5>7<86Q/8!FB $+LcQO A72;B8?@<8?81>?08?[820>?/@<488:2>:<0?72089<7228<<B7AAD6Q/8A72;B8?@<8@20;[;0D >B 0/8?81>?08?2@:48<711?8<<894D 5;O $)H S1(F w %a %$)6PB08?0?@:<B820;>:，5;O $)H S18X1?8<<;>:Z@<982?8@<89(F w %a %$)，;:<7A;: A;Y8F?>Z0/B@20>?(!FB $)8X1?8<<;>:Z@<;:2?8@<89(F w %a %S )，28AA 1?>A;B8?@0;>:@:9[;0@A;0D Z@<8:/@:289(F w %a %$)6Q/8?8<7A0<<7FF8<00/@05;O $)H S11?>4@4AD ;:/;4;05@55@?D 81;0/8A;@A 28AA<@:9A@20@0;>:4D <711?8<<;:F 8X1?8<<;>:>B !FB $a 3$45",6(5;O $)H S1;A72;B8?@<8?81>?08?[820>?;;:<7A;: A;Y8F?>Z0/B@20>? $;5@55@?D 81;0/8A;@A 28AA 收稿日期:)%$%$$ $$;接受日期:)%$$ %+ $,国家自然科学基金项目(#>6+$%&)$%+)J联系人Q8A :%GS$ SS$H%HHH ;\ 5@;A :d;:FK/@:FA;]/>05@;A62>5O828;[89:#>[8548?$$，)%$%;P2281089:E@?2/$,，)%$$"711>?0894D #@0;>:@A #@07?@A "2;8:28R>7:9@0;>:>B */;:@(#>6+$%&)$%+)J*>??8<1>:9;:F @70/>?Q8A :%GS$ SS$H%HHH ;\ 5@;A :d;:FK/@:FA;]/>05@;A62>5微小O#P (5;2?>O#P ，5;O#P )是长度约为)%I )S :0"SL 端带磷酸基团和+L 端带羟基的非蛋白编码的小O#P 家族［$］，广泛地存在于哺乳动物和人类细胞中6在动物中，多数5;O#P 以不完全互补的方式与其靶5O#P 的+L 端非编码区识别位点结合，从而阻碍该5O#P 翻译调控基因表达，但不影响5O#P 的稳定性［)］65;O#P 通过调控基因表达，参与生命过程的一系列重要进程，包括早期发育［+］"第(期丁巍等:5;O $)H S1调节小鼠乳腺上皮细胞内!FB $的表达细胞增殖［G］"细胞死亡［S］"脂肪代谢和细胞分化［(］6本实验室王春梅等［&］应用5;O#P微阵列检测技术预测显示，5;O $)H S1在小鼠乳腺生长发育的不同时期存在明显差异表达，可能参与乳腺的生长发育6利用Q@?F80"2@:方法预测分析得知，小鼠胰岛素样生长因子(;:<7A;: A;Y8F?>Z0/B@20>? $，!FB $)+L cQO 序列(基因号:#E s%%$$$$)&Sa$)处存在和5;O $)H S1的结合位点6SL666PPPUUPUPPPU*PPPU*PPPPP*666z z z z z z z+L*Ucc*UUUc*cUU*Uccccc*本实验旨在进一步证明5;O $)H S1在小鼠乳腺发育过程中的表达及其作用机制67材料与方法7:7材料CP C-*小鼠购于哈尔滨肿瘤医院，细胞角蛋白$,抗体(P2?;<)"脂质体试剂<;_bOQ#8>RW (P54;>:)"b10; E\E!589;75(U;42>)"!FB $多克隆抗体("@:0@*?7K8)"UP_MN多克隆抗体("@:0@ *?7K8)"R!Q*二抗(";F5@)"辣根过氧化物标记试剂盒(";F5@)"\* 超敏发光液(普利莱)"1E!O O\_bOQQE 72;B8?@<8载体"海肾荧光素酶表达载体(本实验室保存)"双荧光素酶检测试剂盒(_?>58F@)，W 0?858U\#\(O>2/8)"1EM$, Q e820>?"(629%"4#*!"\A820?> *8AA<=E$%H"QG M#P 连接酶"E,L酶"_*O试剂盒(宝生物)，荧光定量_*O试剂盒"5;O $)H S1;:/;4;0>?"5;O $)H S1 5;5;2"#8F@0;[8*>:0?>A(上海吉玛)67:8小鼠乳腺上皮细胞培养与鉴定取妊娠中期雌鼠两侧第G对乳腺组织进行细胞培养，用!型胶原酶与胰蛋白酶+&u消化，所得细胞沉淀接种于培养瓶中，置于+&u，*b)培养箱中培养6用细胞角蛋白$,免疫荧光染色，在激光共聚焦显微镜下观察细胞角蛋白$,的特异性表达［,］67:9荧光素酶报告载体的构建从5;OC@<8Q@?F80<数据库中查找得到可能与5;O $)H S1作用的!FB $的5O#P，并找出其+Lc QO 序列(基因号:#E s%%$$$$)&Sa$)，采用_?;58?Sa %软件设计合成_*O引物，上"下游引物分别引入限制性内切酶(629%和4#*"识别位点6小鼠乳腺组织提取总O#P进行逆转录以其2M#P为模板进行_*O扩增，总体系为)S0 6扩增条件:HG u预变性S5;:后进入扩增循环，循环条件为:HG u$5;:"S+u+%<"&)u$5;:，共+S个循环6_*O产物用$k琼脂糖凝胶电泳验证6将切胶纯化回收后的_*O产物与Q载体连接，连接反应产物转化)S 0 感受态大肠杆菌=E$%H，将用(629%和4#*"双酶切正确的重组子，用$k琼脂糖凝胶电泳验证6将双酶切产物及1E!O O\_bOQ载体双酶切产物纯化并连接得到重组载体6连接反应体系:Q载体双酶切产物与1E!O O\_bOQ双酶切产物比例为+v$，)h连接反应缓冲液S0 ，QG M#P连接酶$0 ，用双蒸水补至$%0 ，G u过夜6取G0 连接反应产物转化)S0 感受态大肠杆菌=E$%H，将正确的重组子送测序鉴定，测序鉴定正确的重组子命名为!FB $ 1E!O O\_bOQ67:?细胞瞬时转染及荧光素酶活性测定用O>2/8公司的W 0?858U\#\转染试剂转染，方法参考说明书6转染前$9将小鼠乳腺上皮细胞接种于)G孔细胞培养板中，每个培养皿接种细胞数为$a%h$%S个，用S%%0 含$%k胎牛血清的培养液培养6转染当天，细胞更换新鲜培养液6用)S0 不含血清的培养液稀释质粒M#P，每个孔转染$%% :F的!FB $ 1E!O O\_bOQ"海肾荧光素酶表达载体，G%%:F的5;O $)H S15;5;2，以5;O $)H S11?8 5;5;2#8F@0;[8*>:0?>A作为对照6向稀释好的M#P 中加入)0 脂质体，混匀后室温下孵育$S5;:，形成转染复合物6将上述转染复合物加入细胞培养板各孔中6转染G,/后裂解细胞，检测荧光素酶活性6上述实验每组设+个平行，以转染#8F@0;[8*>:0?>A 的细胞作为阴性对照，每组实验重复+次6根据_?>58F@公司的双荧光素酶检测试剂盒提供的方法检测荧光素酶活性6将待测细胞用_C"洗涤后再用$%%0 的被冻裂解液将细胞裂解$S5;:，裂解物用_?>58F@公司的UA>5@X)%-)%A75;:> 5808?荧光检测仪检测6向测量管中加入$%%0 的 PO!!和)%0A 的细胞裂解液，测量荧光$，再加入$%%0 的"0>1 o UA>试剂，测量荧光)a以荧光$-荧光)的值作为相对荧光素酶活性67:L实时荧光定量技术鉴定小鼠各时期乳腺组织中K-!G78PG L<的含量提取小鼠G个生长时期乳腺组织中的O#P，取+%%:F总O#P，5;O $)H S1OQ引物逆转录合成5;O $)H S12M#P第$链，以5;O $)H S1实时定量_*O引物和第$链2M#P为模板应用PC!&S%%_*O 仪进行_*O反应，反应条件:HS u+5;:变性，HS u$%<"(%u+%<，G%个循环6以S<为内参，进H G S中国生物化学与分子生物学报第)&卷行数据分析67:M小鼠乳腺上皮细胞的转染及实时荧光定量技术鉴定转染后K-!G78PG L<表达变化收集对数生长期的细胞，用正常培养基调整浓度为$a%h$%S-5 细胞，+&u孵育;采用<;_bOQ #8>RW脂质体转染试剂进行转染，方法参考说明书进行6分别转染5;O $)H S1;:/;4;0>?及其#8F@0;[8 *>:0?>A6用b10; E\E!589;75稀释<;_bOQ#8>RW 脂质体转染试剂(+0 g G&0 )，轻轻混匀，室温孵育$%5;:;用b10; E\E!589;75稀释5;O $)H S1;:/;4;0>?和5;5;2(%a&S0 g GHa)S0 );将上面两个复合物混合，轻轻吹打，室温孵育$%5;:;放入)G孔培养板中6将准备的细胞(GS%0 )加入培养板中，水平振荡培养板，+&u培养，)G/后更换正常培养基6转染G,/后提取O#P进行dOQ _*O，取+%%:F总O#P按照说明书进行，5;O$)H S1OQ 引物逆转录合成5;O $)H S12M#P第$链，以5;O$)H S1实时定量_*O引物和第$链2M#P为模板应用PC!&S%%_*O仪进行_*O反应，反应条件: HS u+5;:变性，HS u$%<"(%u+%<，G%个循环6以S<为内参，进行数据分析67:N]$(+$, 印迹检测转染后相关蛋白质的表达变化!FB $的含量样品分为+组:5;O $)H S1 ;:/;4;0>?转染组"阴性对照组"空白对照组6转染后培养G,/，分别收集以上各组小鼠乳腺上皮细胞6用细胞裂解液提取细胞总蛋白，收集置于p)%u冻存备用［,］6进行T8<08?:印迹检测，结果用C@:9"2@:Ga+软件分析，同一样本不同处理的结果用"_""统计分析软件进行0检验，多组数据之间应用"_""统计分析软件进行方差分析67:Q K-!G78PG L<- F-1-+",转染后对小鼠乳腺上皮细胞生长趋势及活性的影响收集对数生长期的细胞，调整浓度为$a%h $%S-5 ，将细胞接种于)G孔培养板中，分别加入S% 05>A- 浓度的5;O $)H S1;:/;4;0>?以及#8F@0;[8 *>:0?>A，同等条件下培养，G,/收集各组细胞，*P"f 细胞分析仪检测细胞数和活性68结果8:7鼠乳腺上皮细胞的鉴定乳腺上皮细胞爬片染色完成后，置于激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞角蛋白$,的特异性表达(R;F6$)6D-/E7!$()#+("%K")($K*KK*,4$<-+F$#-*#2$##(14-KK) $%#)",$($ 2$(+*- - /(?OO Z)E@55@?D 81;0/8A;@A28AA<B?>5$+ 9@D1?8F:@:05>7<8Z8?827A07?89;: MR$)589;75B>?)G/>7?<，@:9B;X89@:9<0@;:89Z;0/R!Q* _O O6Q/8:72A8;Z8?8<0@;:89Z;0/MP_!6Q/8 BA7>?8<28:05;2?><2>1;2;5@F8<Z8?8@2d7;?897<;:F 8;2@ "_S2>:B>2@A<D<0856U?88::R!Q* _O O;CA78:28AA:72A87<8:8&/%G7G<C&!G!VU\!J表达载体的验证_*O扩增!FB $ 1E!O O\_bOQ，纯化产物经琼脂糖凝胶电泳显示，约$$(41处扩增出$条与预期大小相一致的条带6将连有!FB $的+LcQO序列的Q 载体经(629%和4#*!酶切在$$(41左右和)S%% 41左右得到)个目的片段，结果与预期结果相符，结果省略;!FB $ 1E!O O\_bOQ测序结果与U8:C@:Y中序列完全一致，测序结果省略68:9荧光素酶活性检测K-!G78PG L<对&/%G7G <C&!G!VU\!J表达载体中靶序列的作用!FB $ 1E!O O\_bOQ"海肾荧光素酶表达载体与5;O $)H S15;5;2共同转染小鼠乳腺上皮细胞，对照组转染!FB $ 1E!O O\_bOQ"海肾荧光素酶表达载体与5;O $)H S11?8 5;5;2#8F@0;[8*>:0?>A，根据_?>58F@公司的双荧光素酶检测试剂盒提供的方法检测荧光素酶活性6测定!FB $ 1E!O O\_bOQ(=$)和海肾荧光素酶表达载体(=))的活性，计算=$-=)比值表示相对荧光素酶活性6结果显示:实验组较对照组相对荧光素酶活性明显降低(R;F6)，F w %a%$)68:?实时荧光定量技术鉴定小鼠各时期乳腺组织中K-!G78PG L<的含量摘取小鼠G个成长时期青春期"妊娠期"泌乳期"退化期的乳腺组织，提取总O#P，应用dOQ _*O 方法检测小鼠乳腺组织中5;O $)H S1的表达量，可见内源性5;O $)H S1在小鼠乳腺组织中的各时期均有表达，在青春期的表达量最高(R;F6+，F w%a%$)6%S S第(期丁巍等:5;O$)H S1调节小鼠乳腺上皮细胞内!FB $的表达D-/E 8V%%$2+"%K-!G 78PG L<" ,$#*+-I$#)2-%$,*($*2+-I-+4"%&/%G 7G <C&!G !VU\!J Q/89@0@Z8?8@:@ADK89Z;0/"_""<>B0Z@?86Q/89@0@@?8>40@;:89B?>5+8X18?;58:0<6e@A78<@?858@:<i "M6";F:;B;2@:0AD9;BB8?8:28480Z88:P @:9C ，F w %a %$a $:\X18?;58:0@A F?>71;):#8F@0;[82>:0?>AF?>71D-/E 9!$#*+-I$$S<,$((-" "%K-!G 78PG L<- K")($K*KK*,4+-(()$"%$*2F <$,-"6Q/89@0@Z8?8@:@ADK89Z;0/"_""<>B0Z@?86Q/89@0@@?8>40@;:89B?>5+<81@?@088X18?;58:0<6Q/8D Z8?8980820894D ?8@A 0;58_*O6Q/89@0@Z8?8</>Z890/@05;O $)H S1;:5>7<85@55@?D 0;<<78/@99;BB8?8:0;@A 8X1?8<<;>:，5;O $)H S1/@9/;F/8<08X1?8<<;>:;:[;?F;:6e@A78<@?858@:<i "M6Q/8?8Z8?8<;F:;B;2@:0AD 9;BB8?8:28<@5>:F @，4，2@:996F w %a %$a $:e;?F;:;):_?8F:@:2D ;+: @20@0;>:;G :!:[>A70;>:8:L 实时荧光定量技术鉴定K-!G78PG L<- F-1-+",转染后的K-!G78PG L<的表达变化分别以5;O$)H S1;:/;4;0>?及阴性对照转染小鼠乳腺上皮细胞，G,/后收获细胞，_C"清洗后，Q?;K>A 法提取总O#P ，应用实时荧光定量技术检测转染后5;O $)H S1表达量6结果显示，转染;:/;4;0>?实验组内源性5;O$)H S1在小鼠乳腺上皮细胞中表达量低于对照组，说明5;O $)H S1;:/;4;0>?可有效抑制小鼠乳腺上皮细胞内源5;O $)H S1表达(R;F6G ，F w %a %$)68:M]$(+$, 印迹测转染后&/%G 7的表达变化转染5;O$)H S1;:/;4;0>?和#8F@0;[8*>:0?>A 的小鼠乳腺上皮细胞培养G,/后，提取总蛋白，D-/E ?VS<,$((-" "%K-!G 78PG L<- K")($K*KK*,4$<-+F$#-*#2$##(*%+$,K-!G 78PG L<- F-1-+",$ 6"/$ ")(Q/89@0@Z8?8@:@ADK89Z;0/"_""<>B0Z@?86Q/89@0@@?8>40@;:89B?>5+<81@?@088X18?;58:0<6e@A78<@?858@:<i <6E>7<85@55@?D 81;0/8A;@A 28AA<Z8?80?@:<B82089Z;0/:8F@0;[82>:0?>A@:95;O $)H S1;:/;4;0>?6PB08?0?@:<B820;>:B>?G,/>7?<，;0Z@<980820894D ?8@A 0;58_*O6";F:;B;2@:0AD 9;BB8?8:28480Z88:P @:9C ，F w %a %$a $:#8F@0;[82>:0?>A F?>71;):5;O $)H S1;:/;4;0>?F?>71(S%05>A - )T8<08?:印迹鉴定!FB $的表达，可见;:/;4;0>?作用的小鼠乳腺上皮细胞中!FB$蛋白表达高于阴性对照处理的小鼠乳腺上皮细胞，说明5;O $)H S1可抑制小鼠乳腺上皮细胞中!FB$的表达(R;F6S )68:N K-!G 78PG L<- F-1-+",转染后小鼠乳腺上皮细胞的生长趋势及活性分析分别转染5;O$)H S1;:/;4;0>?及其#8F@0;[8*>:0?>A ，转染G,/后，*P"f 细胞分析仪检测细胞数及其活性6结果可见，5;O $)H S1抑制组小鼠乳腺上皮细胞数高于对照组(_w %a %$)，并且S%05>A - 浓度转染的细胞数最多，说明5;O $)H S1抑制后小鼠乳腺上皮细胞增殖能力高于对照组，即5;O $)H S1有降低小鼠乳腺上皮细胞增殖能力(R;F6(，Q@4A8$)69讨论5;O#P 是一种广泛存在的对基因表达进行微调的分子，主要通过抑制靶基因来起调控作用［H ］，从5;O#P 水平研究其对乳腺发育与泌乳的影响还处于开始阶段，目前对于5;O $)H S1的研究也很少65;O#P 与目标基因转录的5O#P 的+L cQO 区特定序列结合，形成5;O#P O#P 复合体［$%］6目前，对于多数5;O#P 而言，它们调节目标基因的精确作用方式还不清楚6乳腺发育经历胚胎期"青春期"妊娠期"泌乳期"退化期等多个时期，而且是雌性动物出生后唯一可以多次重复发育的器官6大量的激素与细胞因子的共同参与完成乳腺的生长发育［$$］6$S S中国生物化学与分子生物学报第)&卷D-/E L ]$(+$, 1#"+* *#4(-("%$S<,$((-" "%&/%G 7- K*KK*,4$<-+F$#-*#2$##(*%+$,+,* (%$2+-" (P )E>7<85@55@?D 81;0/8A;@A 28AA<Z8?80?@:<B82089Z;0/#8F@0;[8*>:0?>A @:95;O $)H S1;:/;4;0>?6Q>0@A 1?>08;:Z@<1?81@?89G,/>7?<A@08?@:91?>08;:8X1?8<<;>:A8[8A<>B !FB $Z8?8@:@ADK894D Z8<08?:4A>00;:F6(C )M8:<;0>580?;2@:@AD<;<</>Z<0/8?@0;>>B !FB $8X1?8<<;>:98:<;0D6M@0@@?8>40@;:89B?>5+<81@?@088X18?;58:0<6e@A78<@?858@:<i "M ，";F:;B;2@:0AD 9;BB8?8:28480Z88:P @:9C ，*，(F w %a %S )6$:5;O$)H S1;:/;4;0>?F?>71(S%05>A - );):#8F@0;[82>:0?>A F?>71;+:#>:0?@:<B82089F?>71D-/E M@F* /$"%/,"5+F +,$ 6- K")($K*KK*,4$<-+F$#-*#2$##(E>7<85@55@?D 81;0/8A;@A 28AA<Z8?8<88989>:)G Z8AA 1A@08<@0@98:<;0D >B $a %h $%S -5 ，@:90?@:<B82089Z;0/2>:0?>A @:95;O $)H S1;:/;4;0>?6PB08?0?@:<B820;>:B>?)G I (%/>7?<，>:8<80>B 28AA<Z@<0?D1<;:;K89@:92>7:0896Q/88??>?4@??81?8<8:0<<0@:9@?98??>?>B +;:9818:98:08X18?;58:0<6 ’ ’ 5;O $)H S1;:/;4;0>?F?>71(S%05>A - ); ( ( 5;O $)H S1;:/;4;0>?F?>71(+%05>A - ); ) ) 5;O $)H S1;:/;4;0>?F?>71()%05>A - ); h h #8F@0;[8*>:0?>A F?>71J*1#$7W-*1-#-+4"%K")($K*KK*,4$<-+F$#-*#2$##(*%+$,K-!G 78PG L<- F-1-+",U?>71<e;@4;A;0D -k 5;O $)H S1;:/;4;0>?(S%05>A - ),&a &$i %a SS @5;O $)H S1;:/;4;0>?(+%05>A - ),+a G,i %a +H 45;O $)H S1;:/;4;0>?()%05>A - ),$a HH i %a ,H 4#8F@0;[8*>:0?>A&&a S,i %a &S 2Q/89@0@Z8?8@:@ADK89Z;0/"_""<>B0Z@?86Q/89@0@Z8?8>40@;:89B?>5+<81@?@088X18?;58:0<6PB08?0?@:<B820;>:B>?G,/>7?<，0/8[;@4;A;0;8<>B 5>7<85@55@?D 81;0/8A;@A 28AA<Z8?8980820894D 28AA [;@4;A;0D @:@AD<;<6e@A78<@?858@:<i "M6Q/89;BB8?8:0A8008?<(@，4，2)</>Z89<;F:;B;2@:0AD 9;BB8?8:28<，F w %a %S!FB $是一种结构类似胰岛素的多肽类细胞生长因子，是具有细胞分化和增殖作用单链蛋白6!FB $能促进成纤维细胞"成骨细胞"平滑肌细胞"乳腺上皮细胞"胰岛!细胞等多种细胞增殖［$)，$+］65;O#P 与其靶基因的5O#P 的+L cQO 互补结合阻止了5O#P 的翻译，抑制蛋白的表达，最终表现为阻止细胞增殖的作用［$G ］6本研究应用生物信息学方法，结合5;OC@<8Q@?F80数据库分析，以小鼠乳腺组织总O#P 为模板，根据!FB $5O#P 的+L cQO 序列设计引物，构建荧光素酶表达载体，通过脂质体转染技术研究5;O $)H S1在细胞中的表达和!FB $的变化6研究结果证明，5;O $)H S1(SL PPPUUPUPPPU*PPPU *PPPPP* +L )与预测靶基因!FB $5O#P 的+L cQO 序列(SL UQUPU*PPU*PUU*PPPUPU +L )结合，5;O $)H S1沉寂后，使!FB $表达量显著升高，细胞增殖加快，细胞活力增强6实验结果提示，!FB $表达可能受到5;O$)H S1的抑制，5;O $)H S1可能通过调控!FB$5O#P 的翻译影响乳腺细胞的增殖和分泌，与实验预期相符6研究证实，5;O $)H S1对乳腺上皮细胞的增殖和分泌的作用可能通过调控!FB $信号转导分子而实现6在小鼠乳腺发育"泌乳及退化过程中，5;O $)H S1调控的靶基因为!FB $，进而通过表达产物与受体的结合调节乳腺发育与泌乳，其调节机理有待进一步研究6参考文献(!$%$,$ 2$()［$］N>74@[;D N C ，M8::;< ，=@8:;<2/O ，*0,AI */@?@208?;K@0;>:>B@/;F/AD [@?;@4A8870/8?;@:5;2?>O#P F8:8［=］6O#P ，)%%S ，77(,):$)GS $)S&［)］C@??8A M _6E;2?>O#P<:F8:>5;2<，4;>F8:8<;<，582/@:;<5，@:9)S S第(期丁巍等:5;O $)H S1调节小鼠乳腺上皮细胞内!FB $的表达B7:20;>:［=］6*8AA，)%%G，77M()):),$ )H&［+］O8;:/@?0C=，"A@2Y R=，C@<<>:E，*0,A6Q/8)$ :72A8>0;98A80 & O#P?8F7A@08<98[8A>158:0@A0;5;:F;:*@8:>?/@49;0;<8A8F@:<［=］6#@07?8，)%%%，?O9((&&)):H%$ H%(［G］"0@?Y P，C?8::82Y8=，O7<<8AA OC，*0,A6!98:0;B;2@0;>:>B M?><>1/;A@5;2?>O#P0@?F80<［=］6_A>"C;>A，)%%+，7(+):\(%［S］W7_，e8?:>>D"f，U7>E，*0,A6Q/8M?><>1/;A@ 5;2?>O#PE;? $G<711?8<<8<28AA98@0/@:9;<?8d7;?89B>?:>?5@AB@0580@4>A;<5［=］6*7??C;>A，)%%+，79(H):&H% &HS［(］^@Z@<@Y;N，Q@;?@^6R7:20;>:@A@:@AD<;<>B5;2?>O#P<97?;:F 0/8?80;:>;2@2;9 ;:97289:87?>:@A9;BB8?8:0;@0;>:>B/75@:#Q)28AA<［=］6#72A8;2P2;9<O8<"711A，)%%+，(+):)G+ )GG ［&］王春梅，李庆章65;2?>O#P在小鼠乳腺不同发育时期差异表达谱及作用［=］6基因基因组杂志(T@:F*， ;.6!98:0;B;2@0;>:>B9;BB8?8:0;@AAD8X1?8<<895;2?>O#P<97?;:F0/898[8A>158:0>B*/;:8<857?;:85@55@?D FA@:9［=］6=U8:80U8:>5;2<)，)%%&，9?($$):H(( H&+［,］王春梅，李庆章，李晔65;O $+,对小鼠乳腺上皮细胞的作用及其调控的靶序列［=］6生物化学与生物物理进展(T@:F*/7: E8;， ;.;:F V/@:F， ;f865;O $+,B7:20;>:@:9;0<0@?F80<>:5>7<85@55@?D81;0/8A;@A28AA<［=］6_?>F C;>2/85C;>1/D<)，)%%,，9L(&):,+G ,+,［H］e;<[@:@0/@:=， 88"， 88C，*0,A6Q/85;2?>O#P5;O $)G @:0@F>:;K8<0/8@:0; :87?@A O\"Q-"*_$1@0/Z@D97?;:F854?D>:;2*#"98[8A>158:0［=］6U8:8<M8[，)%%&，87(&):&GG &GH［$%］M>8:2/=U，"/@?1_P6"182;B;2;0D>B5;2?>O#P0@?F80<8A820;>:;: 0?@:<A@0;>:@A?81?8<<;>:［=］6U8:8<M8[，)%%G，7Q(S):S%G S$$［$$］陆黎敏，李庆章，王春梅，等65;O ))$对小鼠乳腺上皮细胞增殖和泌乳功能的影响［=］6中国生物化学与分子生物学报( 7 ; E;:， ;.;:F V/@:F，T@:F*/7: E8;，*0,A6!51@20>B5;O ))$>:5>7<85@55@?D81;0/8A;@A28AA<@:9A@20@0;>:［=］6*/;:=C;>2/85E>A C;>A)，)%%H，8L(S):GSG GS,［$)］*@<0;AA>=，*>9;:@E，E@?0;:8K E ，*0,A6E80@4>A;2@:9 5;0>F8:;28BB820<>B!UR "@:9;:<7A;:>:57<2A828AA<>B?@;:4>Z0?>70［=］6P5=_/D<;>A O8F7A!:08F?*>51_/D<;>A，)%%G，8QM(S):OH+S HG$［$+］O/>98<*=6!UR "@:9UN1><0 ?82810>?<;F:@A;:F582/@:;<5<B>?1@:2?8@0;2! 28AA?81A;2@0;>:［=］6=E>A\:9>2?;:>A，)%%%，8?(+):+%+ +$$［$G］C?8::82Y8=，N;1B:8?MO，"0@?Y P，*0,A6C@:0@58:2>98<@ 98[8A>158:0@AAD?8F7A@0895;2?>O#P0/@02>:0?>A<28AA1?>A;B8?@0;>:@:9?8F7A@08<0/81?>@1>10>0;2F8:8/;9;:M?><>1/;A@［=］6*8AA，)%%+，779($):)S +(+S S。