猴耳环消炎颗粒微生物限度检查法的验证
猴耳环消炎胶囊质量标准研究
猴耳环消炎胶囊质量标准研究彭亮;李诒光;陈杰;饶毅;魏惠珍;眭荣春【摘要】Objective:To establish the quality standards for Houerhuan anti-inflammatory capsules.Methods:The gallic acid was identified by TLC,the contents of gallic acid and quercetin were determined by HPLC.The chromatographic separation was performed on Odyssil C18 column(250 mm ×4.6 mm,5 μm),the mobile phase was acetonitrile-0.2% H3 PO4 in gradient elution.The flow rate was 1.0 mL·min -1 ,and the column temperature maintained at 30℃ .The detection wavelength wa s 254nm,and the injection volume was 5 μL.Results:TLC spots were clear,and good separated.The linearity of gallic acid was good in the range of 0.602-18.1 μg(r =0.999 5),and the average recovery was 98.9%(RSD =1.8%). The linearity of quercetin was good in the range of 0.016 9-0.507 μg(r =0.999 6),and the average recovery of 99.5%(RSD =1.5%).Conclusion:The established method is simple,accurate and can provide reference for quality control of Houerhuan anti-inflammatory capsules.%目的：研究建立猴耳环消炎胶囊的质量标准。
头孢克肟颗粒微生物限度检查的方法学验证
头孢克肟颗粒微生物限度检查的方法学验证摘要】目的建立头孢克肟颗粒的微生物限度检查方法。
方法测定头孢克肟颗粒对5种试验菌株的回收率，并进行控制菌的检查。
结果 5种试验菌株的回收率均高于70%以上，控制菌阳性生长良好。
结论通过试验证明该方法有效可行，可用于该品种的微生物限度检查。
【关键词】头孢克肟颗粒微生物限度检查回收率【中图分类号】R927.11 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）32-0051-02药品在生产、储存、流通等环节都可能受微生物污染，被污染药品对人体的生命安全存在极大的隐患，而采用合适的方法进行药品微生物检查，可准确地反映药品受污染的程度，并保证人民大众用药安全。
头孢克肟为第三代口服头孢菌素，通过抑制细菌细胞壁合成而起杀菌作用，对多数β内酰胺酶稳定，许多产青霉素酶和头孢菌素酶菌株仍对本品敏感。
近年来的研究表明，头孢克肟在治疗儿童上呼吸道感染，儿童急性化脓性中耳乳突炎，小儿细菌性肠炎有较好疗效。
本试验的供试品溶液经低速离心处理后，拟采用薄膜过滤法及常规法进行头孢克肟颗粒的微生物限度检查，并根据《中国药典》2010年版验证试验要求进行方法学验证。
1 试验材料1.1 仪器设备蒸汽灭菌器（DSX-280KB24，上海申安医疗器械厂）；电热鼓风干燥箱[(GF-9030(A)，上海迈捷试验设备]；霉菌培养箱（MJX-150，上海申贤恒温设备厂）；生化培养箱（SPX-80，上海海向仪器设备厂）；离心机（TDZ6B-WS，上海卢湘仪离心机仪器有限公司）；孔径为0.45μm±0.2μm醋酸纤维素滤膜（上海医药工业研究所，亚东分离器材厂）；STV2开放式薄膜过滤器（浙江宁海白石药检器厂）。
1.2 菌种大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]和黑曲霉[CMCC(F)98003]，均由中国药品生物制品检定所提供。
蒲地蓝消炎颗粒微生物限度检查及有效性验证试验研究
天津药学
Ｔａｊ Ｐ ａｍ ｃ ２ １ 年 ｉｎ ｎ ｈｒ ａｙ ０ １ ｉ
第２ ３卷第 ５期
３
１０ｍ 的胆盐乳糖培养基中 ， ０ ｌ 依法检查。
取试 验组 、 阴性 菌 对 照组 、 阳性 对 照 组 、 试 品对 供 照组 上述 培养 物各 ０２ｍ ， ． ｌ分别 接种 于含 ５ｍｌ Ｇ培 ＭＵ 养基 的试 管 内 ， 养 ， 培 分别 于 ５和 ２ ４ｈ在 ３６ｎ 紫外 ６ ｍ
２ ３２ ２ 阴性菌对照组 取 １ ０的供试液 １ ｌ ．．． ：１ ０ｍ 和规定量的金黄色葡萄球菌（ ５ １０ｅ ） 约 ０— ０ ｆ 加入 １０ ｕ ０ ｍ 的胆盐乳糖培养基 中， ｌ 依法检查。 ２ ３２３ 阳性 对 照 组 取 规 定 量 的大 肠 埃 希 菌 （ ．．． 约 ５ — ０ ｆ） ０ １０ｅ 加入 １０ｍ 的胆盐乳糖培养基 中， ｕ ０ ｌ 依法 ２ ３２ １ 试验组 取上述 ｌ ０的供试液 １ ｌ ． ．． ：１ ０ｍ 和规 检查 。 定量 的大肠 埃 希 菌 （ ０～１０ｅｕ 加 入 １０ｍ 约５ ０ ｆ） ０ ｌ的胆 ２ ３２４ 供 试 品对照 组 取 １ ０的供试 液 １ ｌ ． ．． ：１ ０ｍ 置
一
一
（ｆ） （ ｅｕ ％） 大肠埃希菌 ［ ＭＣ （ ４ １２ Ｃ Ｃ Ｂ）４ ０ ］ 枯草芽孢杆菌 ［ ＭＣ （ ６ ５ １ Ｃ Ｃ Ｂ） ３０ ］
∞ 趴 ｅ ） 分别注入平皿 中， 即倾注琼脂培养基 ， ｆ ， ｕ 立 按平皿 （ ｆ） （ ｅｕ ％） 法测定其菌数。 ｍ ８ ８ ５ ｍ ９ ８ ２２ ３ 供试品对照组 同试验组供试 品处理 ， ．． 不加试 验菌 。 ９ ９ ５ ｍ ４ 稀 释 剂对 照 组 ｍ ．８ ２２ ． 取 规定 量 的试 验 菌 （ ５ 约 ０～
消炎退热颗粒微生物限度检查法的验证
北方药学 ２ ０ １ ３ 年第 ｌ Ｏ卷第 ９期
消炎退热颗粒微 生物 限度检查 法的验证
曹 克任 （ 山 东省济 南市食品 药品检 验所 济南 ２ ５ ０ ０ ０ １ ）
摘要 ： 目的 ： 建立 消炎退热颗粒的微 生物 限度检查方法并进 行验证 。方法 ： 按《 中国药典） ２ Ｏ Ｌ Ｏ年版一部的要 求 ， 对 细菌、 霉茵及 酵母 茵计数方 法和控制茵检查方法进行验证 。 结果 ： 消炎退热颗 粒可按常规法进行微 生物限度检查。 结论 ： 为保证 药品 的微生物
１ １ １ ２ ０ ２ ） 。
１ ． ２ 仪器 ： 电热恒温培养箱 ， 电子天平 ， 高压蒸汽灭菌器 。 回收率 ８ ５ ８ １ ８ ２ ７ ５ ７ ６ ７ ５ ８ ３ ８ ２ ７ ３ ８ ２ ８ ９ ８ ９ ８ ７ ９ ５ ９ １ １ ． ３实验用 菌种 ： 大肠 埃希菌 ［ Ｃ ＭＣ Ｃ ［ Ｂ ］ ４ ４ １ ０ ２ ］ 、 金黄色 葡萄 ． ４ 结果 ：表 １ 显示 ， ５株试验菌株 的 ３ 次 回收率均高于 ７ ０ ％， 球 菌［ Ｃ ＭＣ Ｃ ［ Ｂ ］ ２ ６ ０ ０ ３ ］ 、 枯 草芽孢杆菌 ［ Ｃ ＭＣ Ｃ［ Ｂ ］ ６ ３ ５ ０ １ ］ 、 白 ２ 霉菌及酵母 菌计数 。 色念珠菌 ［ Ｃ ＭＣ Ｃ［ Ｆ ］ ９ ８ ０ ０ １ ］ 、 黑曲霉 ［ Ｃ ＭＣ Ｃ ［ Ｆ ］ ９ ８ ０ ０ ３ ］ ， 以上 消炎退热颗粒 可用常规法进行细菌 、 ３控 制菌检查方法验证ｆ ｌ １ 均为购 自山东省食 品药 品检验所的第三代菌种 。 ． １ 菌液制备 ： 取大肠埃希菌 的新鲜培养物 至营养 肉汤培养基 １ ． ４培养基 ：营养琼 脂培 养基 （ １ １ ０ ３ １ ６ ２ ） ，玫瑰 红钠培 养基 ３ ３ ４ ￣ Ｃ 培养 ２ ４ 小 时 ，上述培养物用 ０ ． ９ ％氯化钠溶 液稀 释到 （ １ １ ０ ２ ２ ２ ） ，营 养 肉 汤 培 养 基 （ １ ０ １ ２ １ ５ ） ，改 良马 丁 培 养 基 中， ０ ～ １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ／ ｍ ｌ 的菌悬液备用 。 （ １ １ ０ ２ １ １ ） ， ｐ Ｈ ７ ． ０氯化钠蛋 白胨缓 冲液 （ １ １ ０ ３ ２ ３ ２ ） ， 北京三药科 ５ 技 开 发 公 司 ；胆 盐 乳 糖 培 养 基 （ ２ ０ １ ３ ０ ３ ２ ６ ） ， ＭＵ Ｇ培 养 基 ３ ． ２供试 品组 ：取 １ ： １ ０供试液 １ ０ ｍｌ 接种 至 ｌ Ｏ Ｏ ｍ ！ 胆盐乳糖培 养基 中， ３ ４ 培养 ２ ４小时 ， 取上述培养物 ０ ． ２ ｍ ｌ 至５ ｍｌ ＭＵ Ｇ培 （ ２ ０ １ ２ １ １ ２ ６ ） ， 青岛高科园海博生物技术有 限公司。 于 ５小时 、 ２ ４小时在 ３ ６ ６ ｎ ｍ紫外光下观察 ； 沿培 １ ． ５供 试液制备 ： 取 供试 品 ｌ Ｏ ｇ ， 加ｐ Ｈ７ ． ０无 菌氯化 钠一 蛋 白胨 养基试管 中， 养管 的管壁加入数滴靛基质试液 ， 观察液面颜色。 缓冲液至 ｌ Ｏ Ｏ ｍ ｌ ， 混匀 ， 作为 １ ： １ ０的供试液 。 ３ ． ３ 试验 组 ：取 １ ： １ ０供试液 ｌ Ｏ ｍｌ 、 ３ ． １中制备好 的大肠埃希菌 ２细菌 、 霉菌及酵母菌计数方法验证 ｍ ｌ （ ５ ０ — １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ） 接种至 １ ０ ０ ｍ ｌ 胆 盐乳糖 培养 基 中 ， 方 ２ ． １ 菌液制备 ： 取大肠埃希菌 、 金黄色葡萄球菌 、 枯草芽孢杆菌 菌悬 液 ｌ 的新鲜培养物 至营养 肉汤培养基 中 ， ３ ４ ％培养 ２ ４小时 ，取 白 法 同 ３ ． ２ 。 色念珠菌 的新鲜 培养物至改 良马丁培 养基中 ， ２ ６ ％培养 ２ ４小 ３ ． ３阳性对照实验 ：取 ３ ． １中制备好 的大肠埃希菌 菌悬 液 ｌ ｍｌ ５ ０ ～ ｌ Ｏ Ｏ ｅ ｆ ｕ ） 至 ｌ Ｏ ０ ｍｌ 胆盐乳糖培养基 中， 方法 同 ３ ． ２ 。 时 ，上述 培养 物用 Ｏ ． ９ ％氯化钠溶液稀释到 ５ ０ — １ ０ ０ ｃ ｆ ｕ ／ ｍ ｌ 的菌 （ ． ４阴性对 照实验 ：取 ｐ Ｈ ７ ． ０无 菌氯化 钠蛋 白胨缓 冲液 １ ０ 一 悬液备用 ；取黑 曲霉 的新鲜培养物至改 良马丁琼脂 斜面培养 ３ 基上 ， ２ ６ ℃培养 ７天 ，加入 ５ ｍ１ 含０ ． ０ ５ ％聚 山梨酯 ８ ０的 ０ ． ９ ％ ｌ Ｏ Ｏ ｍ ｌ 胆盐乳糖培养基中 ， 方法 同 ３ ． ２ 。观察结果见表 ２ 。 表 ２ 大肠埃希菌验证结果 无菌氯化 钠溶液 ， 将孢 子洗脱 ， 吸 出孢子 悬液至无 菌试管 ， 用 含０ ． ０ ５ ％聚 山梨 酯 ８ ０的 ０ ． ９ ％无 菌 氯化 钠 溶 液稀 释到 ５ ０ ～ ｌ Ｏ Ｏ ｃ ｆ ｕ ／ ｍｌ 的孢 子悬液备用 。 ２ ． ２细菌计数方法验证＿ １ ｌ ２ ． ２ ． １ 试 验组 ： 取 １ ： １ ０的供试液 ｌ ｍｌ 注入平皿 中， 再分别 注入 ｌ ｍｌ ２ ． １ 中制备好 的大肠埃希菌 、金黄色葡 萄球菌和枯草芽孢 杆菌菌悬液 ， 倾注营养琼脂 培养基 。 ． ５结果 ： 试验组检 出大肠埃希 菌 ， 表明消炎退 热颗粒 可用 常 ２ ． ２ ． ２菌液组 ： 各取 ｌ ｍ ｌ ２ ． １ 中制备好 的大肠埃 希菌 、 金 黄色葡 ３ 萄球菌和枯草芽孢杆菌菌悬液 ， 分别注入平皿中 ， 倾 注营养琼 规法进行控制菌检查 。 ４讨 论 脂培养基。 消炎退热颗粒所含大青叶 、 蒲公 英等成分虽有抑 菌性 ， 但 ２ ． ２ － ３ 供试品对照组取 １ ： １ ０的供试液 ｌ ｍ ｌ 注入 平皿 中， 倾 注营 通过方法验证 ， 可 以采用常规法进行微生 物限度检查 。 由于微 养琼脂培养基 。 生 物 限度 检查 易受试 验条 件的影 响 ， 中国药典 规定 ， 要 进行 ２ ． ３ 霉菌及酵母菌计数方法验证 ， ２ ． ３ ． １ 试 验组 ： 取１ ： １ ０的供试液 ｌ ｍ ｌ 注入平皿 中， 再分别 注人 方 法验证 以确保 在检 验条 件下被 污染 的微生 物能 被检 出圜 所有药品 的微生物限度检查均需进行方法验证 ， 以确保 ｌ ｍｌ ２ ． １中制备好 的 白色念珠菌菌悬液 和黑曲霉孢子悬液 ， 倾 因此 ， 所用方法适用于该 药品的微生物限度检查。 注玫瑰红钠琼脂培养基 。 参考文献 ２ ． ３ ． ２菌液组 ： 各取 ｌ ｍ ｌ ２ ． １中制备好的白色念珠菌菌悬液和黑 １ 】 国家药典委 员会 ． 中华人 民共和 国药典 （ 一部 ） 【 ｓ １ ． 中国 医药 曲霉孢子悬液 ， 分别注入平皿 中 ， 倾注玫瑰红钠琼脂培养基 。 【
清热解毒类中成药微生物限度检查方法验证
经验交流200 2015年16期清热解毒类中成药微生物限度检查方法验证张硕修亚丽卢芳神威药业集团有限公司，河北石家庄051430摘要：目的：研究并总结清热解毒类中成药微生物限度方法。
方法：按照2012年版《中国药典》中关于药物微生物限度检验方法进行验证。
选择常规四种中成药作为待测样本。
总结阳性菌回收率和控制菌检查验证。
结果四种清热解毒中成药具有显著抑菌作用，对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉均有抑制细菌生长效果，平皿法阳性菌回收率均超过70%。
四种中成药对大肠埃希菌以及大肠菌群不存在抑制作用。
结论：根据中成药特点制定相符合的微生物限度检查法，做好药物质量控制。
关键词：清热解毒；中成药；微生物限度；检查方法中图分类号：R286.0 文献标识码：A 文章编号：1671-5837（2015）16-0200-01清热解毒类中成药用于治疗牙龈肿痛、便秘、小便赤黄等临床症状，具有消炎、抑菌功效[1]。
本文研究清热解暑中成药微生物限度检查法的验证，为药物安全性和质量评价提供可靠前提保证。
1 材料和方法1.1 材料中成药样品：甲：黄连上清片（贵州百灵企业集团制药有限公司生产，生产批号：20100971）；乙：黄连上清丸（北京同仁堂股份有限公司生产，生产批号：0015139）；丙：三黄片（安徽华佗国药股份有限公司生产，生产批号：20110305）；丁：一清软胶囊（大连天宇奥森制药有限公司生产，生产批号：20110403）。
菌株：大肠埃希菌[CMCC（B）44102]、金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]（以上菌株由中国医学菌种保存中心提供）、黑曲霉[CMCC（F）98003]（由中国药品生物制品检定中心提供）。
培养基：营养琼脂培养基，批号：091223、胆盐乳糖培养基，批号：110125，由上海生物医药基地附属公司生产。
消炎止灵片微生物限度检查法的研究
消炎止灵片微生物限度检查法的研究建立消炎止灵片的微生物限度方法。
按《中国药典》2010年版微生物限度检查法进行验证和试验。
经方法学验证试验得出的检查方法可用于独一味颗粒的微生物限度检查。
标签：消炎止灵片；微生物限度检查；方法学验证中药口服制剂容易受到微生物的污染，因此微生物限度检查是《中国药典》2010年版一部中药丸剂必检项目，是微生物污染状况控制的重要指标。
当建立的微生物限度检查法时，应进行方法学验证，以确定所采用的方法是否适合该产品，使检验结果更具有有效性。
因此本文通过对辽宁朝阳龙城制药厂提供的消炎止灵片不同批次进行了微生物限度检查法的验证，从而确定了该品种的微生物限度检查法。
1仪器与材料1.1仪器生物安全柜（BHC-1300ⅡA2），生化培养箱（SHP-150），隔水培养箱（JC303-3B ）。
1.2培养基和稀释液营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、改良马丁培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）。
稀释液：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，按要求配制，灭菌。
1.3菌种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉均由中国药品生物制品检定所提供。
2方法2.1菌液制备菌液制备接种大肠埃希菌、金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，30～35℃培养18～24h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，23～28℃培养24～48h。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液。
接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7d，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。
高效液相色谱法测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸的含量
高效液相色谱法测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸的含量杨晓宇【摘要】本文采用高校液相测定了猴耳环消炎胶囊中没食子酸的含量，固定相为：安捷伦Cl8(4.6 mm×250 mm，5um)，乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为3.0）为流动相，检测波长为270nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。
没食子酸在150~900μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
没食子酸的平均回收率为99.6%，RSD为0.66%(n=6)；此方法简便、准确、重现性好，可用于猴耳环消炎胶囊中没食子酸的含量测定。
【期刊名称】《黑龙江科技信息》【年(卷),期】2016(000)003【总页数】1页(P45-45)【关键词】猴耳环消炎胶囊;没食子酸;含量【作者】杨晓宇【作者单位】黑龙江成功药业有限公司，黑龙江哈尔滨 150001【正文语种】中文猴耳环消炎胶囊为猴耳环干浸膏制成的胶囊，主要用于上呼吸道感染，急性咽喉炎，急性扁桃体炎，急性胃肠炎的治疗。
“猴耳环”是一种比较珍稀的中药材，主要分布在广东粤北山区，民间叫婆劈树、围涎树、鸡心树、三不正、尿桶公、洗头树、落地金钱等［1-2］。
猴耳环是双子叶植物纲、含羞草亚科植物，是多年生乔本植物，被医药学家李时珍收录在所著《本草纲目》中收载。
猴耳环性味苦涩寒，具有清热解毒、收湿敛疮的功效，临床应用于咽喉肿痛，包括咽喉炎、急性扁桃体炎；肺热咳嗽、包括上呼吸道感染、肺炎；以及湿热泻，包括急性肠炎、痢疾等［3-5］。
《广西药植名录》记载“猴耳环消肿；治风湿通，跌打，火烫伤。
民间传统以猴耳环枝叶煮水洗疮及化脓性伤口、湿疹等，去腐生新功效独特。
”没食子酸（英语：Gallic acid）亦称五倍子酸或酸，是一种有机酸，可见于五倍子、漆树、茶等植物中。
本文采用高校液相测定了猴耳环消炎胶囊中没食子酸的含量。
便携式pH计CP-401（深圳市朗诚实业有限公司）；ELGA PURELAB Ultra实验室超纯水系统（天津市劳尔科技有限公司）；Cometro高效液相色谱仪（梯度系统）（天津琛航科苑科技发展有限公司）；HU数控系列超声波清洗器（天津市恒奥科技发展有限公司）；UV-5500型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）；ULABO实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；HH-601超级恒温水浴（江苏金坛市亿通电子有限公司）。
HPLC同时测定猴耳环消炎胶囊中没食子酸与槲皮素的含量_陈艳伟
2. College of Pharmacy，Dalian Medical University，Dalian 116044，China）
［Abstract］ Objective： To establish a HPLC method for determination of gallic acid and quercetin in Houerhuan Xiaoyan Jiaonang． Method： The analytical column was Hypersil BDS-C18 （ 4. 6 mm × 150 mm， 5 μm） ，and the mobile phase was methanol-phosphate solution with the gradient elution． The flow rate was 1. 0 mL·min － 1 and the detection wavelength was 254 nm． The column temperature was kept at 30 ℃ ，and the sample volumn was 10 μL． Result： A good linearity was obtained in the range of 15. 0-180. 0 mg·L － 1 （ r = 0. 999 6） and 1. 25-15. 0 mg·L － 1 （ r = 0. 999 7） for gallic acid and quercetin respectively，and the average recovery was 98. 2% （ RSD 0. 7% ） and 99. 2% （ RSD 0. 5% ） respectively． Conclusion： The method is convenient，accurate，precise and can be used in the content determination of gallic acid and quercetin in Pithecellobium clypearia antiphlogistic capsule at the same time，and can be used for the quality control of this capsule．
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猴耳环消炎颗粒微生物限度检查法的验证
作者：曹克任郑鹏
来源：《养生保健指南》2015年第08期
【摘要】目的：建立猴耳环消炎微生物限度检查方法并进行验证。
方法：按照《中国药典》2010年版一部的要求，对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法进行验证。
结果：猴耳环消炎颗粒可按常规法进行微生物限度检查。
结论：为能检出药品中被污染的微生物，应对该药品的微生物限度检查进行验证。
【关键词】猴耳环消炎；微生物限度检查；方法验证
猴耳环消炎颗粒由猴耳环干浸膏制成，用于上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃体炎、急性胃肠炎，亦可试用于细菌性痢疾。
为保证能检出药品中被污染的微生物，应对检查进行方法验证。
1.试药、仪器与培养基
1.1 试药
猴耳环消炎颗粒（江西杏林白马药业有限公司，批号：20140311）
1.2 仪器
电热恒温培养箱，电子天平，高压蒸汽灭菌器。
1.3 实验用菌种
大肠埃希菌[CMCC〔B〕44 102]、金黄色葡萄球菌[CMCC〔B〕26 003]、枯草芽孢杆菌[CMCC〔B〕63 501]、白色念珠菌[CMCC〔F〕98 001]、黑曲霉[CMCC〔F〕98 003]，以上均为购自山东省食品药品检验研究院的第三代菌种。
1.4 培养基
营养琼脂培养基（1305223），玫瑰红钠培养基（130523），营养肉汤培养基（1305223），改良马丁培养基（130211），pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液（1303232），北京三药科技开发公司；胆盐乳糖培养基（20130326），MUG培养基（20121126），青岛高科园海博生物技术有限公司。
1.5 供试液制备
取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
2.细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证
2.1 菌液制备
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，34℃培养24小时，取白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，26℃培养24小时，上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的菌悬液备用；取黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，26℃培养7天，加入5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管，用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的孢子悬液备用。
2.2 细菌计数方法验证[1]
2.2.1 试验组取1：10的供试液1ml注入平皿中，再分别注入1ml 2.1中制备好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌菌悬液，倾注营养琼脂培养基。
2.2.2 菌液组各取1ml 2.1中制备好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌菌悬液，分别注入平皿中，倾注营养琼脂培养基。
2.2.3 供试品对照组取1：10的供试液1ml注入平皿中，倾注营养琼脂培养基。
2.3 霉菌及酵母菌计数方法验证
2.3.1 试验组取1：10的供试液1ml注入平皿中，再分别注入1ml 2.1中制备好的白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。
2.3.2 菌液组各取1ml 2.1中制备好的白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液，分别注入平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。
2.3.3 供试品对照组取1：10的供试液1ml注入平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。
各试验菌分别进行3次独立的平行试验，分别计算各试验菌每次实验的回收率。
各组计数及试验组的菌数回收率见表1。
82 80
2.4 结果表1显示5株试验菌株的3次回收率均高于70%，猴耳环消炎颗粒可用常规法进行细菌、霉菌及酵母菌计数。
3 控制菌检查方法验证[1]
3.1 菌液制备取大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，34℃培养24小时，上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的菌悬液备用。
3.2 供试品组取1：10供试液10ml接种至100ml胆盐乳糖培养基中， 34℃培养24小时，取上述培养物0.2ml至5mlMUG培养基试管中，于5小时、24小时在366nm紫外光下观察；沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，观察液面颜色。
3.3 试验组取1：10供试液10ml、3.1中制备好的大肠埃希菌菌悬液1ml（50-100cfu）接种至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。
3.3 阳性对照实验取3.1中制备好的大肠埃希菌菌悬液1ml（50-100cfu）至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。
3.4 阴性对照实验取pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。
观察结果见表2
3.5 结果试验组检出大肠埃希菌，表明猴耳环消炎颗粒可用常规法进行控制菌检查。
4 讨论
通过方法验证，猴耳环消炎颗粒可以采用常规平皿法进行细菌、霉菌和酵母菌计数，可用常规法进行控制菌检查。
由于微生物限度检查易受试验条件的影响，中国药典规定要进行方法验证，以确保在检验条件下被污染的微生物能被检出，因此所有药品的微生物限度检查均需进行方法验证，确保所用方法适用于该药品的微生物限度检查。
[2]
【参考文献】
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].中国医药科技出版社，2010，附录：附录Ⅷ C 79-88.
[2]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范[M].中国医药科技出版社，2010：351-389.。