2沙眼衣原体感染实验室诊断20160613

实验室检测是控制传播的最有 效手段
一级预防：倡导性行为的改变（推迟首次 性交年龄，减少性伴，使用安全套等） 二级预防：检测与治疗（性病患者及性伴 ；孕妇新生儿；普通人群无症状感染传播 三级预防：检测与治疗并发症
沙眼衣原体感染病例定义
《全国性病监测方案》,2007
流行病学史：有不安全性行为，或性伴感染史 临床表现;男性尿道炎、附睾炎等，女性宫颈 炎、盆腔炎 实验室检查：CT抗原或核酸或培养阳性
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我国主要流行的性传播疾病（性病）
50-60年代 经典性病 梅毒 淋病 软下疳 性病性淋巴肉芽肿 80-90年代 监测性病 梅毒 淋病 软下疳 性病性淋巴肉芽肿 非淋菌性尿道炎 生殖器疱疹 尖锐湿疣 HIV/AIDS
目 前 传染法报告病例 监测性病
梅毒 淋病
梅毒 淋病 沙眼衣原体感染
生殖器疱疹 尖锐湿疣
沙眼衣原体: 30%～50% 生殖支原体: 10%～40% 其它: 20%～30%
HIV/AIDS
2007年卫生部《全国性病监测 方案》要求
监测性病5种：TP，NG，CT, HSV, HPV 沙眼衣原体作为独立病种报病
沙眼衣原体感染后：
约70％女性和50％男性为无症状
86％的女性和55％的男性感染者持续感染 时间为1年以上。 不寻求治疗…….
(5).将测试卡平置台面上,逐滴加入5滴提取液于 检体窗,静置15 分钟后观察结果。 (6).结果 质控窗:显示一条兰带,表明卡片质量可靠,如30 分钟内无兰带显示,应另取测试卡进行试验。 结果窗：阳性时显示一条深浅不同的兰带 ,强阳 性者可在 15 分钟内出现 , 一般一小时后作出报 告。 质控窗和结果窗的兰带深浅可能不同，不影响 结果的解释。
细胞培养法检测临床应用
敏感性：较低 特异性: 极高 缺点：实验室条件和实验技术要求高， 费时，敏感性低 临床应用：“金标准”方法 方法学评价 沙眼衣原体感染的确证 沙眼衣原体感染的科研
沙眼衣原体检测方法的选择：
临床典型沙眼衣原体感染，快速法 70％女性/50%男性无症状，ELISA或核酸 检测 可疑病例确证：DFA，核酸检测，培养法 复发性感染：再感染：同上 持续性感染：基因检测分型
(7).质控：取试剂2加5滴於塑料管,再加试 剂1至刻度,以下操作同4-5, 结果应在质 控窗和结果窗均显示一条兰带。
3.注意事项
(1).本试剂盒仅可作为泌尿生殖道衣原 体感染的检测。 (2) 本试剂检测的是衣原体抗原，因而 不能区别是衣原体的感染还是携带者。 不能区别衣原体的死活，不能作为判愈 试验。 (3) 本试验的敏感性为 87% ，特异性为 98.8%。
“立明”衣原体抗原免疫快速法试验 1.原理
该实验是检测寄生於尿道或宫颈柱状上 皮细胞内的沙眼衣原体抗原的快速免疫 方法。
(1). 标本加提取缓冲液经 80℃水浴加热 , 使衣原 体脂多糖(LPS)抗原释放。 (2).加标本提取液到含有带色乳胶标记的鼠抗衣 原体LPS单克隆抗体的测试卡检体窗中,作用15 分钟。
2.检测方法
(1).先将试剂、测试卡、塑料管置室温30分钟复 温。 (2).预备80℃±2℃水浴。 (3).加试剂1至塑料管刻度(约0.6ml)。 (4). 将 拭 子 标 本 浸 入 管 内 混 匀 , 置 水 浴 80℃±2℃,10-12分钟提取 LPS抗原 ,取出后 ,转 动拭子并沿管壁挤压 , 弃去拭子。提取液置室 温冷却后盖回管塞(此液置室温3小时内不影响 结果)。
抗原检测 免疫胶体金快速法检测临床应用
敏感性：较低 特异性: 高 缺点：需要确证，不宜质控操作 临床应用：临床症状典型病例的检测 不适合非典型感染的筛查
抗原检测 沙眼衣原体酶免疫法检测临床应用
敏感性：较高 特异性: 高 缺点：需要确证，批量操作 临床应用：临床和健康体检 沙眼衣原体感染的筛查
三、核酸扩增试验（NAAT）
沙眼衣原体感染的实验室诊断
河北省疾病预防控制中心
性病艾滋病防治所
赵翠英
性传播疾病(STD)/性传播感染(STI)
病 种
病原体
淋球菌 梅毒螺旋体 生殖器疱疹病毒 生殖道沙眼衣原体 乳头瘤病毒 HIV病毒 杜克雷噬血杆菌 衣原体 念珠菌 滴虫 疥虫 阴虱 肝炎病毒 －－－ 淋病 梅毒: 生殖器疱疹: 生殖道沙眼衣原体感染: 尖锐湿疣: HIV感染/艾滋病: 软下疳: 性病性淋巴肉芽肿: 念珠菌性阴道炎: 滴虫性阴道病: 疥疮: 阴虱病: 肝炎（乙、丙）：
确诊病例：符合1+2+3或2+3者， 无症状感染病例：符合3且没有临床症状者。
沙眼衣原体生物学特性
衣原体属微生物 具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA 具有合成蛋白质、核酸和脂类的能力 不能产生三磷酸腺苷（ATP），完全依靠 宿主细胞提供必须的能量
沙眼衣原体病原学
具有原体和始体二个发育型
原体有传染性。原体一旦进入细胞内，就发育
物理和化学因素对沙眼衣原体的影响
温度 衣原体对热敏感，其传染性在60℃ 10分钟完全丧失 化学制剂 衣原体很容易被乙醚、福尔马林、 酚等化学制剂灭活
发病机理
衣原体感染人体后， →柱状上皮→单核巨噬细胞→繁殖→细胞 死亡， 细胞内增值可逃避宿主免疫防御功能， 得到间歇性保护。 衣原体的致病机理是抑制被感染细胞代 谢，溶解破坏细胞并导致溶解酶释放， 代谢产物的细胞毒作用，引起变态反应 和自身免疫。
小结
绝大多数感染无症状，每年10%比例增加 实验室诊断是临床诊断的唯一标准 合理选择实验室方法，合理解释结果
谢谢！
敏感性：高（90%-97%） 特异性: 高（99%-100%） 缺点：实验室条件和技术要求高，成本 高，费时，假阳性，抑制物 临床应用：临床和健康体检沙眼衣原体 感染的筛查。可用于宫颈、尿道标本以 及尿液和阴道标本。
四、细胞培养法：
原理：衣原体在瘤细胞生长，染色检测 方法：制备McCoy细胞 接种标本（2500转，1h） 去上清加新培养液（培养48－72） 检测（碘或姬姆萨染色，荧光法）
检验结果的解释
1 阳性（+）：出现两条红色条带，位于检测 区（T）和质控区（C）。 阳性结果表明：样本中含有衣原体抗原。 2 阴性（-）：仅在质控区（C）出现一条红色 条带，在检测区（T）无红色条带出现。阴性 结果表明：样本中检测不出衣原体抗原，或是 含量低于可检测范围。
检验结果的解释
3 无效：在质控区（C）未出现红色条带，表 明不正确的操作过程或试剂已变质损坏。 4 注意：检测区（T）内的红色条带可显现出 不同深浅的颜色。但是，在规定的观察时间内 ，不论该色带颜色深浅，即使只有非常弱的色 带也该判为阳性结果
沙眼衣原体的检测
常用实验室方法 标本涂片染色直接镜检 抗原检测试验,包括衣原体抗原免疫快速 法、直接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验 核酸检测，多采用实时荧光PCR法 细胞培养法
一、直接涂片法（姬姆萨染色） ：方法：涂片－姬姆萨染色－镜检包涵体
沙眼衣原体包涵体姬姆萨染色 临床应用：
眼部感染：敏感性95％， 男性尿道：敏感性15％， 宫颈感染：敏感性41％。 应用范围：眼部标本。
二、沙眼衣原体抗原检测 试剂盒-艾博
检测方法
使用前将试剂、裂解液和样本恢复到室温（ 15-30℃）。 1 将试剂放置在干净的水平台面上； 2 在裂解管中竖直滴入无色的裂解液A 5滴， 立即放入棉签样本（宫颈拭子），用手指挤压 裂解管中的棉签头，并转动棉签15次，静置2 分钟；
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 检测方法
3 在同一裂解管中竖直滴入裂解液B 6滴，混 合液可能产生沉淀为正常现象。用手指挤压裂 解管中的棉签头，并转动棉签15次，此时溶液 呈淡蓝色。静置1分钟； 4 挤干裂解管中的棉签头，弃去棉签，盖上并 旋紧裂解管滴头； 5 在试剂的加样孔中滴入3滴裂解后溶液； 6 10～20分钟判读结果，20分钟后判读无效。
为始体
始体具有新陈代谢活性，行二分裂增殖，生长 成具有传染性的原体，然后释放出来去感染邻 近的细胞 从感染细胞到释放出原体大约需要35-48小时
沙眼衣原体病原学
严格细胞内寄生 生活特性：原体和始体
正常生活周期
持续性感染
沙眼衣原体血清分型和致病性
沙眼衣原体有15个血清型, A, B, Ba, C,D-K, L1, L2, L3 － A，B，Ba和C型最常引起沙眼 － D-K型主要感染泌尿生殖道 － L1,L2,L3型引起性病性淋巴肉芽肿
核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的 多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和 RNA）检测病原体。 方法包括：聚合酶链反应（PCR）
连接酶链反应（LCR） 等温链置换扩增技术（SDA） 转录介导扩增技术（TMA） 核酸序列扩增技术（NASBA） 实时荧光PCR技术（目前采用较多的方法）
NAAT法临床应用
可逆行感染：
1.女性：盆腔炎、输卵管炎、不孕、流产和死胎等 2. 男性：附睾炎、前列腺炎和不育 3. 新生儿：结膜炎、肺炎及Reiter综合征（反应性 关节炎）
近年来研究：
引起活动性关节炎，与动脉硬化、冠心病 有关；细胞内生长导致与HIV感染的促进 作用
沙眼衣原体感染已成为全世界范围 的公共卫生问题!
(3).如标本中含有衣原体LPS抗原,可与上述标 记的单抗结合, 结合物可通过毛细管作用移动 到结果窗,并可被该处所含有的未标记的鼠抗 衣原体LPS单抗所捕捉 ,阳性时在结果窗中形 成一条可见的兰色带, 过剩的未结合的带色乳 胶标记的鼠抗衣原体LPS单抗可移动到质控窗, 与该处的兔抗鼠抗体相结合,显现一条兰色带。