质粒提取试剂盒说明书
高纯度质粒小提试剂盒使用说明书
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。
通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。
产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。
质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒 Mini Plasmid Kit(目录号：HS0101)产品包装（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜吸附。
通过漂洗液PW 的清洗可去除杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到纯度较高的质粒DNA 。
使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml 过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug 的高纯度质粒DNA ，在30 min 之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR 、测序等各种常规分子生物学操作。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液不需要另加乙醇，即开即用。
3. 高质：OD260/280在1.7 ~ 1.9之间。
4. 稳定：正确保存条件下一年内提取效果不发生变化。
操作步骤1. 取1 ~ 5 ml过夜培养的菌液，室温12,000 rpm离心1 min，尽量将上清去除干净。
（注意：根据菌液的浓度决定取液量，浓度高时取1 ml菌液离心即可，浓度低时可多收集一次）2. 加入250 ul Buffer P1，用枪头充分吹打使菌体重悬均匀。
（注意：是否将RNase A溶液加到Buffer P1中并混合均匀；菌体沉淀是否悬浮充分，如有未彻底悬浮的菌块会影响裂解，导致提取的质粒浓度及纯度降低）3. 加入250 ul Buffer P2，温和颠倒混匀6 ~ 8次，直到溶液变得清亮粘稠。
快速型无内毒素质粒超大量 3 提取试剂盒手册说明书
EZgene TM EndoFree plasmid ezFlow ezFilter Megaprep3kit(BG0060) HandbookFor research use only.Not intended for diagnostic testing.ContentsContents (1)Introduction (2)Important Notes (2)Storage and Stability (3)BeforeStarting (4)Safety Information (4)Kit Contents (5)EZgene TM Plasmid ezFilterMegaprep3Protocol (6)Purification of Low-Copy-Number Plasmid and Cosmid (8)快速型无内毒素质粒超大量3提取试剂盒简明步骤 (9)Trouble ShootingGuide (12)IntroductionKey to the kit is our proprietary DNA binding systems that allow the high efficient binding of DNA to our ezBind TM matrix while proteins and other contaminates are removed under certain optimal conditions.Nucleic acids are easily eluted with sterile water or elution buffer.Unlike other procedures,our patented plasmid purification kit has no guanidine salt in the buffer,the purified DNA is guanidine/ion exchange resin residues free which enable the high performance of downstream applications such as transfection, restriction mapping,library screening,sequencing,as well as gene therapy and genetic vaccinations.Important Notesumbers::The yield of plasmid DNA depends on the origin of the Plasmid Copy N umbersreplication and the size of the plasmid.The protocols are optimized for high copy number plasmid purification.For low copy number plasmids,both the culture volume and the buffer volume need to be scaled up2times.Reference Table1for the commonly used plasmids,Host Strains:The strains used for propagating plasmid have significant influence on yield.Host strains such as Top10and DH5a yield high-quality plasmid DNA. endA+strains such as JM101,JM110,HB101,TG1and their derivatives,normally have low plasmid yield due to either endogenous endonucleases or high carbohydrates released during lysis.We recommend transform plasmid to an endA-strain if the yield is not satisfactory.Please reference Table2for the endA information.Table2endA strains of E.Coli .Optimal Cell Mass (OD 600x mL of Culture):This procedure is designed for isolating plasmid grown in standard LB medium (Luria Bertani)for 12-16hours to a density of OD 6002.0to 3.0.If rich medium such as TB or 2xYT are used,make sure the cell density doesn’t exceed 3.0(OD 600).A high ratio of biomass over lysis buffers result in low DNA yield and purity.Culture Volume Volume::Use a flask or tube with a volume at 4times the culture medium to secure optimal condition for bacteria growth.Don’t exceed the maximum culture volume suggested in the protocol.Incomplete lysis due to over amount of bacterial culture results in lower yield and less purity.Table 3The optimal cell mass mass,,culture Volumeand Binding Capacity for the mega DNA units,S torage and StabilityBuffer A1should be stored at 4°C once RNase A is added and Buffer ER should be stored at 4°C.All other materials can be stored at room temperature (22-25o C).The Guaranteed shelf life is 12months from the date of purchase.Before StartingPrepare all components and get all necessary materials ready by examining this instruction booklet and become familiar with each steps.Important:I.RNase A:It is stable for more than half a year when stored at roomtemperature.Spin down RNaseA vial briefly.Add the RNaseA solution to Buffer A1and mix well before use.II.Buffer ER should be stored at4°C.III.Buffer B1precipitates below room temperature.It is critical to warm up the buffer at50°C to dissolve the precipitates before use. IV.Buffer N3may form precipitates below10°C,warm up at37°C to dissolve the precipitates before use.V.Keep the cap tightly closed for Buffer B1after use.VI.Make sure the availability of centrifuge and vacuum manifold, especially,after mixing the lysate with ethanol,the sample needs to be processed immediately by vacuum.Materials supplied by users:VII.100%ethanol.VIII.Pump-driven vacuum system,1,000mL bottle(Corning#430518 or430282)or equivalent pyrex glass bottles.IX.50mL conical tubes.X.High speed centrifuge tube for endotoxin removal if desired. Safety Information�Buffer N3contains acetic acid,use gloves and protective eyewear when handling.�Buffer N3,Buffer RET contains chaotropic salts,which may form reactive compounds when combines with bleach.Do not add bleach or acidic solutions directly to the preparation waste.Kit Contents*Add216mL(BG0059)or320mL(BG0060)96-100%ethanol to each DNA Wash Buffer bottle before use.EZgene TM Plasmid ezFilter ezFilterMegaprep Megaprep 3Protocol I.Inoculate 600600mLmL LB containing appropriate antibiotic with 500µL fresh starter culture.Grow at 37°C for 14-16h with vigorous shaking.Note :The best way to prepare a starter culture:Inoculate a single colony from a freshly grown selective plate into 1mL LB medium containing the appropriate antibiotic and grow at 37°C for 6-8h with vigorous shaking (~250rpm).The buffer volumes need to be scaled up if processing over 500mL of culture.II.Harvest 600mL overnight bacterial cells by centrifugation at 5,000x g for 10minutes at room temperature.Decant or aspirate medium and discard.Note :Remove the residual medium completely for optimal cell lysis and neutralization.III.Resuspend the bacterial pellet in 30mL Buffer A1(Add RNase A to BufferA1before use).Pipet or vortex till thebacterial pellet dispersed thoroughly(Complete resuspension is critical for optimal yields).Then add 1.5mL Bu Bufferffer ER into the suspended bacterial culture.Mix well by inverting 5-10times.Note :if room temperature is below 25°C,warm up the mix solution after adding Buffer ER at 45°C for 5min.IV.Add 27mL Buffer B1.Mix gently but thoroughly by inverting 10times and incubate atroom temperature for 5minutestoobtain a cleared lysate.Do not incubate longer than 5minutes.Then add 3mL Buffer D1,mix gently and incubating for another 5minutes.Over-incubating causes genomic DNA contamination and plasmid damage .Avoid vigorous mixing as this will shear the genomic DNA.V.Add 8mL Buffer N3and mix immediately by inverting 5times till a flocculentwhite precipitate forms.Vortex the lysate for 5seconds.Note:It is critical to mix the lysate well,if the mixture still appears conglobated,brownish or viscous,more mix is required to completely neutralize the solution.VI.Attach the 2-layer filter unit to a sterile 500mL or 1000mL standard bottle(Corning#430518or 430282or equivalent pyrex glass bottle)and screw tight.Connect the unit to a pump-driven vacuum system.VII.Transfer the clear lysate from the bottom of the mixture (use a 50mL serological pipet)to the filter unit.Stand by for 5minutes and turn on the vacuum with low vacuum force and increase to maximum vacuum force after 5minutes.Figure1.Instruction of filter assembling.Note11:If the flow through gets too slow,turn off the vacuum and wait for1minute.NoteCarefully detach the upper filter cup and replace it with the replacement cup.Assemble the unit as Figure1.Pour the lysate from the original cup to the replacement cup.Turn on the vacuum and filter the rest of the lysateN ote2:Low vacuum force prevents clogging of the filter membranes.Note3:Use a50mL serological pipet to transfer the relatively clear lysate from the bottom of the lysate bottle to the filter unit.This will speed up the flow rate of the filter unit.Normally around200mL lysate can be filtered through the filter unit within20-30 minutes.Pour the remaining white precipitates to the filter unit when most of the lysate has been filtered through.VIII.When most of the lysate has been filtered through the unit,turn off the vacuum,wait for1minute,detach the unit and discard the upper filter cup including the rubber rings.Note:The DNA is in the collection bottle.IX.Connect the DNA unit to a500mL or1,000mL standard bottle and screw tight.Connect the DNA unit to the vacuum with the vacuum off.Add1volume of Buffer RET(For example,60m L of Buffer RET to60m L of clear lysate), and add36mL100%ethanol to the lysate bottle.Mix well by sharp hand shaking3-5times and immediately pour half of the lysate/ethanol mixture to the DNA unit and turn on the vacuum.X.Pour the rest of the lysate/ethanol mixture into the DNA unit.When all the lysate pass through the DNA unit,vacuum for1minute.XI.Wash the DNA membrane with50mL DNA Washing Buffer and vacuum for 1minute at maximum force.Wash the DNA membrane with another50 mL DNA Washing Buffer and vacuum for1minute at maximum force. XII.Add50mL100%ethanol evenly to the DNA membrane and vacuum for1minute.Turn off the vacuum,wait for1minute,and discard the liquid waste in the bottle.Reconnect the bottle to the DNA binding unit.Turn on the vacuum for10minutes at maximum force(It is critical to dry the residual ethanol for optimal yield).Turn off the vacuum,incubate at65o C for10min will help to remove the ethonal and increase the elution efficiencyXIII.Wait for1minute,and replace the500mL or1,000mL standard bottle with a sterile50mL conical tube,screw tight.XIV.Add8mL Endofree Elution Buffer evenly to the membrane and incubate for5minutes.Turn on vacuum to elute DNA.Typically3~5mL of solution can be collected.This is the1st elution.XV.Turn off the vacuum and replace the50mL conical tube with another sterile 50mL conical tube,screw tight.Add3mL Endofree Elution Buffer and incubate for3minute.Turn on the vacuum and collect the2nd elution,typically mL of solution can be collected.1~21~2mLNote:The DNA is ready for downstream applications such as transfection of endotoxin-sensitive cell lines,primary cultured cells or microinjection.Note:Two elutions give rise to maximum DNA yield.For maximum yield and higher concentration,pool the elutions together,add0.1volume3M Potassium Acetate or Sodium acetate(pH5.2)and0.7volume isopropanol.Centrifuge at top speed for10 min.Discard supernatant.Wash the DNA with1000µL70%ethanol,centrifuge for5 min,carefully decant.Air-dry the pellet for10-20minutes in a tissue culture hood.Resuspend the DNA in Endofree Elution Buffer.Note:Use lessEndofree Elution Buffer if high concentration is desired.g/mL L)=OD260nm x50x dilution factor.DNA concentration(µg/mPurification of Low-Copy-Number Plasmid and CosmidThe yield of low copy number plasmid is normally around0.1–1µg/mL of overnight culture.For isolating low copy number or medium copy number plasmid DNA,use the following guideline:•Culture volume:Use2x volume of the high copy number cultureBuffer B1,Buffer D1and Buffer N3•Use2x volume of the Buffer A1,Buffer ER,ER,Bufferand100%ethanol.Additional buffers can be purchased from Abgent.•use same volume of DNA Wash Buffer and Endofree Elution BuffeBuffer.r.快速型无内毒素质粒超大量3提取试剂盒简明步骤（详细内容请参考说明书英文部分）�实验前准备RNase A:常温下可稳定贮藏半年，使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1,使用后将Buffer A1/RNase A置于4o C保存。
宁波基内生物技术 小量质粒提取试剂盒说明书
【注意事项】（1）溶液Ⅱ和溶液Ⅲ均应避免长时间与空气接触，使用后立即盖紧瓶盖，否则会因溶液失效而导致菌体裂解效率效果下降。
漂洗液PW含有乙醇成分，用后立即盖紧瓶盖，避免乙醇成分的挥发。
（2）菌体裂解、中和过程中，剧烈混合会造成基因组DNA断裂，导致提取的质粒DNA有基因组DNA污染，请按说明书操作。
（3）溶液Ⅱ作用细菌太久，一方面导致基因组DNA断裂成较短的DNA，不易和其他成分一起沉淀，造成基因组DNA污染。
另一方面会使质粒DNA 出现切口和断裂，间接导致质粒的质量下降。
裂解步骤所用时间不应超过5分钟。
（4）溶液Ⅱ加入后，溶液会变清亮，若无清亮现象，应加大溶液Ⅱ的用量。
（5）含质粒的转化菌的培养时间不应超过16小时。
过度培养一方面导致抗生素失效，选择压力降低，质粒丢失，无质粒细菌增多。
另一方面长时间的培养条件会导致细菌崩解。
（6）尽管本试剂盒可以抽提较大的质粒（>10kb），但不推荐使用。
如果一定要使用，请参考以下方法：加大菌体使用量（使用5～10ml过夜培养物），同时按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的用量；溶解液TE应在60℃预热，洗脱时延长放置时间或用50～100ul TE洗脱2次。
【生产企业】宁波基内生物技术有限公司【医疗器械生产企业许可证编号】浙食药监械生产许20080119号【生产地址】宁波镇海区庄市街道中官路777号【注册地址】宁波镇海区庄市街道中官路777号【联系方式】电话：*************传真：*************小量质粒提取试剂盒说明书宁波基内生物技术有限公司【产品名称】通用名称：小量质粒提取试剂盒商品名称：Geneinn小量质粒提取试剂盒英文名称：Kit for small scale plasmid preparation【产品代码】GN00014【包装规格】50次/盒，100次/盒【预期用途】应用本试剂盒制备的质粒DNA纯度高，可以用于酶切、PCR、测序、细菌转化等实验。
高纯度质粒小量提取试剂盒 说明书
大班数学活动教案：拼图教案1. 教学背景学生年龄：4-5岁学生已具备的知识和技能：会数数、认识一到十的数字、知道形状与颜色的区别2. 教学目标2.1 知识目标1.学生能把简单的拼图拼好，并准确地说出拼图所属的几何形状。
2.学生能通过拼图，巩固对一到十个数字的认识。
2.2 技能目标1.提升学生的动手能力，能够按照图示，拼好拼图。
2.培养学生的观察能力，能够观察拼图的几何形状和数字，准确地做出判断。
2.3 情感目标1.养成学生对数学活动的兴趣，让学生体验到学习数学的快乐。
2.培养学生的合作意识，学生能够在小组内合作完成拼图。
3. 教学过程3.1 导入环节教师问学生：“你们在家里会玩拼图吗？”学生回答时，教师让学生展示一下自己的拼图，然后教师说：“好的，今天我们就来学习大一点的拼图，准备好了吗？”3.2 活动环节一：拼图过程1.分组：教师将学生分成小组，每组三到四名学生。
2.活动准备：教师为每个小组提供一份数字拼图图纸，和相应的拼图，每张图纸上有一到十个数字和图形，学生需要根据图纸上的数字和图形拼出对应的图片。
3.活动过程：教师告诉学生，现在开始拼图，让学生自由组合句子，优美表达以及敢于发言。
学生在拼图过程中，要注意拼图的位置和相互之间的关系，有效进行小组合作，完成自己的任务。
3.3 活动环节二：讲解数字与形状教师在学生完成拼图后，根据每个组完成拼图的情况，问学生完成拼图的过程，并带学生回顾每个数字都对应的几何形状，如数字一对应的图形是直线，数字五对应的图形是五边形等。
3.4 活动环节三：游戏比赛教师让每个小组选一名代表出来，分别进行拼图比赛，以时间最短和完成度最高的小组为胜者，并为获胜小组颁发奖励。
4. 教学反思这次的数学活动，让学生在拼图的过程中，不仅锻炼了学生的动手能力和观察力，还让学生对数字和几何形状有了更深刻的认识。
同时，我们也培养了学生的合作意识，让他们感受到集体的力量。
在今后的数学活动中，我们将进一步发扬数学活动的魅力，让学生在活动中感受到更多的乐趣。
OMEGA无内毒素质粒中提试剂盒中文说明书
E.Z.N.A. Fastfiler Endo-free Plasmid Maxiprep Protocol(OMEGA无内毒素质粒中提)依据该程序可从30-50ml过夜培养物中纯化100-250ug高拷贝数质粒或10-100ug低拷贝数质粒。
若要提高低拷贝质粒的产量，请第8页“Low Copy-Number Plasmids protocol”操作。
■细菌培养：1. 于200-400的培养瓶中加入30-50 LB培养基/AMP或KAN（50ug/ml）,然后接种含所需质粒的菌种于37℃摇床培养12-16小时；使用过夜培养物（0.3-0.5ml）可以获得最佳的结果。
强烈推荐使用E.coli(endA-)菌株用于常规的质粒提取，如DH5a和JM109。
细菌达到最佳生长条件对获得最高质粒DNA产量至关重要。
从新鲜转化平板或新鲜平板挑取单菌落接种于2-5ml含相应抗生素的初始培养基内，于37℃振荡培养（约300rpm）约8小时。
然后接种到合适体积的含相应抗生素预热好的液体培养基中。
于37℃振荡培养（约300rpm）12-16小时。
使用3-4倍于培养物体积的三角瓶或其它容器并以1/500-1/1000的比例稀释初始培养物到生长培养基。
这样可又获得最佳培养条件。
过夜培养后，OD600达1.5-2.0提示为较好的培养物。
建议每批培养物都测下OD600值可以得到最佳的结果。
稀释细菌培养物（10-20倍）使其分光光度测量值在OD6000.1-0.5范围内呈线形变化，该步也具有重要意义。
我们推荐细菌密度在OD6002.0-3.0之间。
若使用非营养丰富培养基，一定要确保细胞浓度不要超过OD600 3.0。
如果使用甘油冻存的菌种作接种物，则应在含有相应抗生素的琼脂糖平板上划线培养以获取间菌落。
然后按照上面步骤挑取单菌落接种于2-5ml初始培养基内。
■碱性SDS溶液裂解细菌：2. 收集20-50ml培养基至适当的离心管，室温3,500-5,000×g离心10分钟；3. 倒去或吸取培养基并弃去。
天根DP117-无内毒素质粒大提试剂盒说明书
For personal use only in study and research; not for commercial use产品简介本试剂盒采用独特的硅胶模吸附技术，高效专一地结合质粒DNA。
同时采用特殊的溶液P4和过滤器CS1，可有效的出去内毒素、蛋白质杂志；整个提取过程仅需1h，方便快捷。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和细胞转染多种细胞等试验。
推荐每次菌液使用量：高拷贝质粒推荐使用量为100ml，得率一般在500-1500μg左右；低拷贝质粒推荐使用量为200ml，得率一般在200-600μg左右。
注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1.溶液P1在使用前先加入RNase A （将试剂盒中提供的RNase A全部加入)，混匀，置于2-8℃保存。
2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW中加入无水乙醇。
3.使用前先检查平衡液BL，溶液P2和P4是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
4.注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子。
5.使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出，避免滤膜因压力而松动。
6.提取的质粒量与细菌培养浓度，质粒拷贝数等因素有关。
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P4的用量；洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热，可以适当延长吸附和洗脱时间，以提高提取效率。
7.实验前使用平衡液BL处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。
8.用平衡液处理过的柱子最好立即使用，放置时间过长会影响使用效果。
质粒DNA 浓度及纯度检测得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。
纯化的质粒DNA OD260/OD280通常在1.8-2.0左右，可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的实验中。
莱枫 质粒DNA小量提取试剂盒 说明书
上海莱枫生物科技有限公司网址：订货电话：传真：技术解答：技术支持：上海)质粒DNA小量提取试剂盒一、产品简介采用SDS碱裂解法，结合硅胶膜选择性吸附DNA的方法，适合从1-4 ml细菌培养物中提取多至20 μg质粒DNA。
纯化的质粒DNA适合用于酶切、PCR、测序、转化和转染肿瘤细胞。
本试剂盒改进了裂解条件(Buffer P2)，避免菌量极少时或者菌液过度老化时可能出现的单链质粒DNA；优化了中和环境(Buffer P3)，彻底去除游离SDS，避免因SDS残留导致的酶切不完全或弥散、转染效率低等情况。
二、试剂盒组成和储存组成内容DK301-01 (50次)DK301-02 (200次)原理与用途RNase A1＊30 μl120 μl降解RNABuffer P115 ml60 ml悬浮细菌Buffer P215 ml60 ml含SDS/NaOH，裂解细菌Buffer P315 ml×280 ml中和，去除SDS-蛋白-基因组DNA复合物Buffer WA15 ml×2120 ml漂洗去除抑制物Buffer WB§16 ml65 ml漂洗去盐DNA吸附柱-B50个 200个 吸附DNA收集管 50个×2200个×2接收废液1.5 ml离心管 50个 200个 接收洗脱的DNATE※15 ml30 ml洗脱DNA说明书 1份 1份＊RNase A1: 50 mg/ml, -20℃长期保存；第一次使用前将RNase A1全部加入Buffer P1中，于4℃保存。
§Buffer WB，第一次使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇，混合均匀。
※TE：10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25°C)。
除RNase A1和Buffer P1(已加入RNase A1)外，其他组成成分于室温储存。
三、注意事项1. Buffer P2、Buffer P3和Buffer WA含刺激性化合物，避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。
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质粒提取试剂盒说明书
而载体构建的方法有多种：
常规克隆（分子克隆你不知道的那些事）
TA克隆（这么简单的TA克隆来领走吧）
同源重组（秒杀分子克隆！同源重组快人一步）
而经转化（DH5α感受态制备及转化）、菌落PCR（菌落PCR）验证得到阳性克隆后，就需要提取质粒了。
构载体是分子生物学中最基本的实验了，而提质粒可以说是最简单的实验了，完全不经过大脑，照着说明书就是“机械”操作，因为这个有现成的试剂盒嘛。
嗯，虽然简单，但是也不能不想啊，要不然提质粒是按什么原理来的你都不知道，这不，当你还在傻傻用试剂盒提质粒的时候，我已经开始自己配buffer了。
加灭菌水补足到1 L。
这个溶液的主要作用是细胞裂解，氢氧化钠会破坏细胞膜的结构，同时会使基因组变性成单链，而对质粒无影响。
在这一步，试剂盒的说明书上会说时间不能过长，因为时间长了对质粒也是有影响的。
而SDS可以和蛋白结合，使变性蛋白质将溶解在溶液中，从而多肽链更好地与基因组DNA缠绕。
这个溶液一看就是酸，用来中和碱的，同时还能清除掉蛋白质等细胞内的杂质，此时基因组也会复性沉淀下来。
另外醋酸钾会与Solution Ⅱ中的SDS发生作用，反应生成的十二烷基硫酸钾，而十二烷基硫酸钾不溶于水，会迅速发生沉淀，也就是我们提质粒时经常看到的沉淀。
好了，到这一步后，试剂盒法一般是要先离心，取上清去过柱，有的剂盒有一个柱的平衡液：。