培养基的灵敏度测试
培养基灵敏度检查记录
培养基灵敏度检查记录
一、仪器、菌种、培养基
1、仪器高压蒸汽灭菌器恒温水浴箱培养箱
2、菌种金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉
3、培养基营养琼脂培养基批号：配制日期:
硫乙醇酸盐流体培养基批号：配制日期：
改良马丁琼脂培养基批号：配制日期：
改良马丁培养基批号: 配制日期：
4、其它0.9%无菌氯化钠溶液无菌试管
二、菌液制备
1、接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基中，
接种生孢梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中,放入培养箱30－35℃培养24小时。
用0。
9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含量小于100cfu的菌悬液。
2、接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，放入培养箱23－28℃培养48
小时。
用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含量小于100cfu的菌悬液。
3、接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中，放入培养箱23－28℃培养5天，加
入5ml0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含量小于100cfu的孢子悬液。
三、培养基接种
1、取装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9管，分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌的菌悬液各管，另一管不接种作空白对照,放入培养箱30－35℃培养天。
2、取装量为9ml的改良马丁培养基5管，分别接种白色念珠菌、黑曲霉各管，另一管不接种作空白对照,培养天。
3、仪器状态：
4、逐日观察结果，并记录于下表。
检验员: 复核: 报告日期：。
支原体培养基灵敏度检査(变色单位试验法)
支原体培养基灵敏度检査（变色单位试验法）及供试品检查方案目的：建立支原体培养基灵敏度检査（变色单位试验法）及供试品检查方案。
范围：适用于支原体培养基灵敏度检査及供试品检查。
依据：《中国药典》2015年版内容:1、概要：除药典推荐培养基外，亦可使用可支持支原体生长的其他培养基，但灵敏度必须符合要求。
2、设备生化培养箱、生物安全柜。
3、培养基灵敏度检査（变色单位试验法）3.1干粉培养基及对应菌种产品号产品名称菌种名称菌种编号11109 支原体肉汤培养基肺炎支原体ATCC 15531株11C21 精氨酸支原体肉汤培养基口腔支原体ATCC 23714株11A09 支原体半流体培养基肺炎支原体ATCC 15531株11321 精氨酸支原体半流体培养基口腔支原体ATCC 23714株3.2 培养基配制按照标签处方量配制成液体培养基，并按标签规定的温度和时间进行湿热灭菌，待用。
3.3灵敏度检查3.3.1菌液制备将菌种接种于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传两代。
3.3.2培养基接种及培养将培养物接种至待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7〜10-9，接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3〜10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内。
每个稀释度接种 3 支试管，置36℃±1℃培养7〜14天，观察培养基变色结果。
3.3.3结果判定：以接种后培养基管数的2 / 3 以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。
灵敏度应达到：支原体肉汤培养基：肺炎支原体（ATCC 15531株）应达到10-8；精氨酸支原体肉汤培养基：口腔支原体( ATCC 23714株)应达到10- 4。
3.3供试品检查法3.1干粉培养基及对应菌种产品类型产品名称产品号液体培养基支原体肉汤培养基11109精氨酸支原体肉汤培养基11C21 半流体培养基支原体半流体培养基11A09精氨酸支原体半流体培养基11321 或：琼脂培养基支原体琼脂培养基11C233.2配制半流体培养基（或琼脂培养基) 按照标签处方量配制，并按标签规定的温度和时间进行湿热灭菌；在使用前应煮沸10〜15分钟，冷却至56°C左右，然后加人灭能小牛血清（培养基: 血清为8 ：2) ，并可酌情加入适量青霉素，充分摇匀。
SOP-QC-03000培养基灵敏度检查标准操作规程471
SOP-QC-03000培养基灵敏度检查标准操作规程471 GMP标准文件分发号: 流水号:471 编码: SOP-QC-03000 共2页第1页题目: 培养基灵敏度检查标准操作规程制定人 QA审核批准人制定日期审核日期批准日期颁发部门质量技术部颁发日期生效日期质量技术部分发部门目的:建立培养基灵敏度检查标准操作规程，保证无菌检查结果的准确性、可靠性。
范围:适用于培养基灵敏度检查。
职责:QC无菌检验员。
规程:1 实验设备及用具:高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪瓷托盘、时钟、75,酒精棉球、无菌服。
2 培养基:需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐液体培养基)、真菌培养基，培养基的配制详见《培养基配制标准操作规程》。
3 测试用菌种3.1 藤黄微球菌[CMCC (B) 28 001]3.2 生孢梭菌[CMCC (B) 64 941]3.3 白色念珠菌[CMCC (F) 98 001]4 操作4.1 取藤黄微球菌的营养琼脂斜面和白色念珠菌的真菌培养基琼脂斜面的新鲜培养物，分别用0.9,无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液;将生孢梭菌不含琼脂的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，吸至无菌离心管，离心，弃去上清液,菌体用0.9,无菌氯化钠溶液制成均匀的菌悬液。
分别取上述菌悬液,用0.9,无菌氯化钠溶液稀释至与细菌浊度标准管相同的浓度，然后作10倍系列稀释，制成1ml中含10-100个菌并计数。
4.2 取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液作10倍系列稀释，制成1ml中含10—100个菌并计数。
4.3 将藤黄微球菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的需气菌、厌气菌培养基3管，生孢梭菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别GMP标准文件接种至每管装量为12ml需气菌、厌气菌培养基3管，白色念珠菌的上述4.1或4.2的稀释菌液各1ml，分别接种至每管装量为9ml的真菌培养基3管，以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。
培养基的灵敏度测试
培育基的灵敏度测试培育基的灵敏度测试是其质量掌握的一个重要检测部分。
方法如下：1.用于菌数计数的半固体琼脂培育基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。
取预先制备好的琼脂培育基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培育基平皿3~5个（如较闻名的如MERCK,DIFICoL产品）做对比试验，待培育基表面的菌液被琼脂培育基吸干或风干后，将培育皿倒置于培育箱的使用温度下培育48~72小时，（也可采纳浇碟法进行）取出培育后的平皿点计菌落数。
样品培育基上的微生物数量应不得低于对比培育基上微生物生长数量的70%。
否则，需重新检查，或该培育基被视为不符合促生长要求。
2.用于掌握菌检查的富集培育基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培育基均应进行灵敏度检查。
每100ml培育基内分别接入试验菌小于100cfu,每个菌种接种两瓶培育基，将接过种的培育基置于指定条件下培育。
应在16~18小时后可明显观看到培育基内有微生物生长，则证明此培育基合格。
原则上无论是采纳脱水培育基还是按相关处方配制的培育基，一旦制成成品培育基，则应对每个配制批号培育基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培育基的质量。
按脱水培育基的生产批号做灵敏度检查是基于培育基的灭菌程序已经经过验证。
假如试验室使用的是商购的成品培育基,供应商应随培育基供应相应批次的培育基质量检测报告，报告包括培育基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。
建议在使用某一新的成品培育基（新供应商或新培育基品种）时，应至少考察三个不同批次的培育基质量，只有三批质量均合格方可使用该培育基。
微生物限度检查用成品培育基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以亚核其质量。
用于无菌检查试验的每批培育基，均必需按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于试验室自行配制的培育基。
培养基的灵敏度检查操作SOP
培养基的灵敏度检查操作SOP1 目的建立培养基灵敏度试验的操作规程，是为了规范、统一培养基灵敏度检测，确保微生物检测准确、安全进行。
2 适用范围本标准适用于2015版中国药典培养基灵的敏度检查。
3 责任者 QC检验人员。
4 内容试验设备及用具：无菌培养皿、移液枪或无菌注射器、无菌玻璃涂布器、培养箱等。
使用的菌株：金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003,铜绿假单胞菌CMCC(B)10104，枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501，·生孢梭菌CMCC(B)64941，白色念珠菌CMCC(F)98001，黑曲霉CMCC(F)98003，培养基灵敏度检测所用的菌株传代次数不得超过5代，并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验用菌株的生物学特性。
检测频率每批新买的培养基配制、灭菌后均应做灵敏度测试。
操作方法对照标准培养基用已经过试验证明合格的培养基或购买的有质量证书的成品平皿培养基作为对照标准培养基。
试验培养基将琼脂类的试验培养基加热融化后，冷却至45℃左右，以无菌的方式在无菌培养皿中注入15～20mL，备用。
液体类的培养基直接使用。
'菌悬液的制备购买对应的商业化定量菌株。
使用时直接稀释成规定菌含量的菌悬液。
目前有进口的bioball和国产的microball等。
使用方便，定量精确。
培养基的生长促进实验琼脂类培养基的生长促进试验每株菌用2个试验培养基平皿，用表面涂布法在每个平皿表面接种的菌悬液（约10-100CFU试验菌），同时用2个对照标准的培养基平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，取出平皿点计菌落数。
试验培养基上的微生物数量应为对照培养基上微生物生长数量的70%-150%范围内。
（注：每种培养基生长促进实验的具体菌株见附录1）液体类培养基的生长促进实验每株菌用2管（或瓶）试验培养基，接种的菌悬液（约10-100CFU试验菌），同时用2个对照标准的培养基或用已知合格的酪蛋白大豆消化琼脂平皿做对照，接种相同量的菌悬液试验，在规定温度下培养，对比或计数，在规定时间内能生长菌落为合格。
培养基的灵敏度检查
培养基的灵敏度检查
一、目的：建立培养基灵敏度检查的操作规程，保证无菌检查结果的准确性、可靠性。
二、适用范围：适用于培养基灵敏度检查。
三、职责：质量检验员对本标准的实施负责。
四、正文：
1 实验设备及用具：
高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、注射器、针头、注射器盒、试管、试管架、搪瓷托盘、时钟、75%酒精棉球、无菌服。
2培养基：需气菌、厌气菌培养基（如：流体硫乙醇酸盐培养基）、真菌培养基。
3测试用菌种
藤黄微球菌[CMCC（B）28 001]
生孢梭菌[CMCC（B）64 941]
白色念珠菌[CMCC（F）98 001]
4操作：
取藤黄微球菌、生孢梭菌的需气菌、厌气菌培养基新鲜培养物，白色念珠菌的真菌培养基的新鲜培养物 1ml，用 0.9%无菌氯化钠溶液作 10 倍梯度稀释，制成 1ml 中含 10-100 个菌并计数。
4.2 将藤黄微球菌、生孢梭菌的上述稀释菌液各 1ml 分别接种至每管装量为 9ml 的需气菌、厌气菌培养基 3 管，白色念珠菌的上述稀释菌液 1ml，接种至每管装量为 9ml 的真菌培养基 3 管。
以未接种的培养基作对照，按规定的温度培养5天并逐日记录结果。
5 结果判定：以每株菌接种后培养基不得少于 2 管呈现生长，即该培养基
的灵敏度检查符合要求。
培养基灵敏度验证
注意： 注意：
1. 培养基配置应使用洁净的玻璃容 不能使用金属容器。 器，不能使用金属容器。配置好的 培养基应尽快进行灭菌处理， 培养基应尽快进行灭菌处理，以免 长菌。 长菌。 2. 灵敏度检查是基于培养基的灭菌 程序已经经过验证。 程序已经经过验证。
3. 如果实验室使用的是购买的成品 培养基， 培养基，供应商应随培养基提供相 应批次的培养基质量检测报告， 应批次的培养基质量检测报告，报 告包括培养基的PH值 告包括培养基的PH值、无菌检查 结果和促菌生长（灵敏度） 结果和促菌生长（灵敏度）试验结 果等项目。 果等项目。同时应注意培养基有效 期。
6. 配制好的培养基应保存在2～25 配制好的培养基应保存在2 避光的环境， ℃、避光的环境，一般在三周内使 生化鉴别用培养基， 用。生化鉴别用培养基，应在一周 内使用； 内使用；选择性分离鉴别培养基最 好当日使用， 好当日使用，必要时于冷暗避光处 保存，最多不得超过三天。 保存，最多不得超过三天。
3. 如对实验结果有怀疑，可将新、老 如对实验结果有怀疑， 将新、 批号培养基在相同的条件下同时进行 试验。 设立对照培养基（ 试验。或设立对照培养基（如进口培 养基）。 养基）。 4. 标准菌株（如 ATCC 或NCTC标准 标准菌株（ NCTC标准 菌株或CMCC） 菌株或CMCC）及经过准确鉴定的临 床分离菌。试验前对菌种进行传代培 床分离菌。 对照菌株必须使用新鲜培养物。 养，对照菌株必须使用新鲜培养物。 一旦发现对照菌株污染或存在问题， 一旦发现对照菌株污染或存在问题， 则应立即更换。 则应立即更换。
培养基灵敏度检查所用的菌株传代次 数不得超过5 数不得超过5代（从菌种保存中心获得 的冷冻干燥菌种为第0 ），并采用适 的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适 宜的菌种保藏技术， 宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株 的生物学特征。 的生物学特征。实验用菌应是生命活 力旺盛的新鲜培养物， 力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三 代的培养物。 代的培养物。
质量SOP规程：SOP-ZL-JY016-1 培养基灵敏度查标准操作规程
目的：建立培养基灵敏度检验标准操作规程，保证检查结果的准确性和可靠性。
应用范围：适用于培养基灵敏度的检查。
责任人：QC无菌检验员。
编订依据：《中国药典》2010年版二部、《中国药品检验标准操作规范》2010年版。
内容：
1 细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的灵敏度检查及适用性检查，成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
2 菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特性。
大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44 102]
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B) 26 003]
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B) 63 501]
白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F) 98 001]。
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培养基的灵敏度测试
培养基的灵敏度测试是其质量控制的一个重要检测部分。
方法如下：
1.用于菌数计数的半固体琼脂培养基促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查（促菌生长检查）。
取预先制备好的琼脂培养基平皿3~5个，用表面涂布法每块平板表面接种30~100个试验菌，同时用已知质量保证的同型号培养基平皿3~5个（如较著名的如MERCK，DIFICOL产品）做对照试验，待培养基表面的菌液被琼脂培养基吸干或风干后，将培养皿倒置于培养箱的使用温度下培养48~72小时，（也可采用浇碟法进行）取出培养后的平皿点计菌落数。
样品培养基上的微生物数量应不得低于对照培养基上微生物生长数量的70%。
否则，需重新检查，或该培养基被视为不符合促生长要求。
2.用于控制菌检查的富集培养基的促菌生长（灵敏度）检查的方法：对每个不同批号的脱水培养基均应进行灵敏度检查。
每100ml培养基内分别接入试验菌小于100cfu，每个菌种接种两瓶培养基，将接过种的培养基置于指定条件下培养。
应在16~18小时后可明显观察到培养基内有微生物生长，则证明此培养基合格。
原则上无论是采用脱水培养基还是按相关处方配制的培养基，一旦制成成品培养基，则应对每个配制批号培养基进行促菌生长（灵敏度检查）试验，以考察培养基的质量。
按脱水培养基的生产批号做灵敏度检查是基于培养基的灭菌程序已经经过验证。
如果实验室使用的是商购的成品培养基，供应商应随培养基提供相应批次的培养基质量检测报告，报告包括培养基的PH值、无菌检查结果和促菌生长（灵敏度）试验结果等项目。
建议在使用某一新的成品培养基（新供应商或新培养基品种）时，应至少考察三个不同批次的培养基质量，只有三批质量均合格方可使用该培养基。
微生物限度检查用成品培养基一旦初试确认合格后，可审查供应商的质检报告，而不必每批再作无菌检查和灵敏度检查，但半年应至少检查一次，以复核其质量。
用于无菌检查试验的每批培养基，均必须按规定进行灵敏度检查试验，此规定同样适用于实验室自行配制的培养基。
建议在正式使用前即应完成对培养基的质量检查。
如果在进行灵敏度试验的同时，也使用该培养基进行样品检查，那么，一旦培养基的无菌性或灵明度不符合规定，则检验结果应无效。
无论这些质量控制检查试验何时完成，实验室都必须在相关产品放行之前或检验报告发出之前，对所用培养基的无菌性及灵敏度试验资料的完整性和合格予以确认。
灵敏度（促生长）检查试验用菌悬液，可用标准菌种制得，也可向具备适当资质的供应商购买。
目前市场上的商用产品，如microball公司的培养基质量检查用的定量质控菌株，小瓶内一个小球上含有10~100CFU。
此类产品使用简单，但操作者需严格遵守供应商的使用要求。
另外，尽管所购试菌种均附有质量证书，正式使用前，仍必须用倾注平皿法或铺表面法等标准检测方法对菌悬液的微生物数量进行复核确认。