实验室常规试剂配制

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常用试剂配制方法

常用试剂配制方法

常用试剂配制方法试剂是科学实验和研究中不可或缺的工具,常用的试剂包括溶液、稀释液、缓冲液、媒体液等。

在实验室中,通常需要根据具体的实验要求来配制各种试剂,合理的试剂配制方法能够确保试剂的质量和稳定性,保证实验结果的准确性和可重复性。

接下来将介绍一些常用试剂的配制方法。

1. 溶液的配制方法溶液是实验室中最常用的试剂之一,常见的溶液包括盐酸溶液、硫酸溶液、碳酸溶液、氢氧化钠溶液等。

溶液的配制主要是根据溶质的重量或体积浓度和所需的溶液体积来计算所需的溶质量或体积,并将溶质溶解在适量的水中。

以盐酸为例,盐酸的浓度通常以摩尔浓度(M)或质量浓度(%)来表示,假设需要制备500ml 1M的盐酸溶液,则按照下面的步骤进行:- 根据盐酸的摩尔质量和摩尔浓度计算出所需的盐酸质量。

- 取适量的去离子水,加入容器中。

- 缓慢地加入计算好的盐酸质量,并充分溶解。

- 加入适量的去离子水至最终体积为500ml。

2. 稀释液的配制方法稀释液通常用于稀释浓度较高的溶液,以得到所需的浓度。

稀释液的浓度计算方法非常简单,只需要使用C1V1=C2V2的公式即可,其中C1为原液的浓度,V1为原液的体积,C2为稀释液的浓度,V2为稀释液的体积。

以盐酸溶液为例,如果需要从浓度为6M的盐酸溶液稀释出100ml 1M的盐酸溶液,则按照下面的步骤进行:- 根据C1V1=C2V2的公式,计算出需要的盐酸的体积。

- 取适量的去离子水,加入容器中。

- 缓慢地加入计算好的盐酸体积,并充分溶解。

- 加入适量的去离子水至最终体积为100ml。

3. 缓冲液的配制方法缓冲液是用来维持溶液的pH稳定性的溶液,常用的缓冲液包括Tris缓冲液、磷酸缓冲液、乙酸缓冲液等。

缓冲液的配制需要根据所需的pH值来选择相应的缓冲剂和其酸性或碱性分量,并按照一定的比例混合制备。

以Tris缓冲液为例,Tris缓冲液的pH值通常在7-9之间,如果需要制备1L pH 7.4的Tris缓冲液,则按照下面的步骤进行:- 根据Tris缓冲液的pKa值和所需的pH值计算出所需要的Tris和酸性成分的摩尔比。

20几种常用试剂配置方法

20几种常用试剂配置方法

20几种常用试剂配置方法一、常用试剂配置方法的介绍试剂配置是实验室中常见的一项工作,准确的试剂配置可以保证实验的准确性和可重复性。

本文将介绍20几种常用的试剂配置方法,帮助实验人员更好地进行实验。

二、体积分配法体积分配法是常见的试剂配置方法之一,通常使用量较小、浓度较高的试剂进行配置。

该方法可通过使用体积移液器、移液枪等实验设备,根据需要配置所需体积的试剂溶液。

三、质量分配法质量分配法适用于需要配置具有特定质量浓度的试剂溶液。

该方法通过称量固体试剂,并按照比例配制溶液浓度。

四、摩尔浓度计算法摩尔浓度计算法是根据化学反应的摩尔比例来计算试剂的浓度。

通过计算反应物的摩尔量和体积,然后以摩尔量除以体积得到摩尔浓度。

五、比例混合法比例混合法适用于需要按照特定比例混合两种试剂的情况。

通常将两种试剂按照比例称量,然后进行混合。

六、稀释法稀释法是指将浓度较高的试剂与溶剂按照一定比例混合来降低试剂的浓度。

通过稀释法可以得到不同浓度的试剂溶液。

七、溶液配制法溶液配制法是根据溶液的浓度公式,按照一定的配比计算所需试剂的质量、体积等,并通过称量和混合来配制出所需的试剂溶液。

八、体积比配制法体积比配制法是指按照特定的体积比例计算所需的试剂体积,并进行混合配制。

该方法常用于需要配制特定体积比例的溶液。

九、对数浓度计算法对数浓度计算法是一种根据试剂的对数浓度来计算所需试剂量的方法。

通过计算对数浓度和体积,然后反推得到所需试剂量。

十、酸碱溶液的配制方法酸碱溶液的配制方法通常是指根据酸碱中和反应的化学方程式,计算所需溶液的质量、体积,并进行配制。

十一、标准溶液配制方法标准溶液配制方法是指通过称量准确的标准溶液,并按照一定比例配制出所需的标准溶液。

十二、离子稀释法离子稀释法是通过稀释一定体积的离子试剂溶液来得到特定浓度的离子溶液。

十三、等效物浓度计算法等效物浓度计算法是根据试剂反应的化学方程和摩尔比例,计算所需试剂的质量或体积,并进行配制。

实验室试剂配制方法

实验室试剂配制方法

实验室试剂配制方法1.水溶液的配制:a.一般的水溶液配制需要使用蒸馏水或者经过高纯水处理的水。

首先,取一定体积的蒸馏水或高纯水加入容器中。

b.如果需要调节溶液的pH值,可以使用酸或碱进行调节。

首先,将所需量的酸或碱溶解在一定体积的蒸馏水中,然后将调节液缓慢滴加到待配制的水溶液中,同时用pH计监测溶液的pH值,直到达到目标值。

2.盐酸溶液的配制:a.取一定体积的蒸馏水或高纯水加入容器中。

b.缓慢滴加盐酸到水中,同时用磁力搅拌子搅拌,直到达到目标浓度。

在配制盐酸溶液时,请务必注意安全,因为盐酸是一种强酸,会对人身体和实验器材造成伤害。

3.NaOH溶液的配制:a.取一定体积的蒸馏水或高纯水加入容器中。

b.缓慢滴加NaOH固体到水中,同时用磁力搅拌子搅拌,直到固体完全溶解,达到目标浓度。

在配制NaOH溶液时,要小心避免固体氢氧化钠与水的剧烈反应,以及注意防护措施,因为氢氧化钠是一种强碱。

4.缓冲溶液的配制:a. 首先,选择合适的缓冲液体系和 pH 值。

常见的缓冲溶液体系有PBS(磷酸盐缓冲溶液)、Tris-HCl(Tris 氢氯酸盐缓冲溶液)等。

b.使用蒸馏水或高纯水加入容器中。

c.根据所需浓度,称取一定质量或体积的缓冲盐或缓冲液,溶解于水中,并用pH计调节溶液的pH值。

5.稀释液的配制:a.确定要配制的目标浓度和配制体积。

b.使用蒸馏水或高纯水加入容器中。

c.根据所需浓度和体积,计算所需的试剂质量或体积。

d.将试剂添加到容器中,并进行充分的混合。

6.细胞培养基的配制:a.根据实验需求和细胞类型选择合适的培养基配方。

b.使用蒸馏水或高纯水加入容器中。

c.按照制定的配方将培养基原料逐一称取,并加入容器中,同时进行充分的混合。

d.最后,将培养基过滤或灭菌处理,以保持无菌状态。

总结:实验室试剂的配制需要准确称量试剂,选择合适的溶剂,并严格按照实验要求进行操作。

在配制过程中,注意安全、准确、固体的溶解效果和溶液的稳定性等因素是非常重要的。

实验室常用试剂和缓冲液配方

实验室常用试剂和缓冲液配方

实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液配方有很多种,下面将介绍一些常用的试剂和缓冲液的配方:一、试剂的配方1. Tris缓冲液:- 3 M Tris-Cl,pH 7.4(准备方法:将121.1 g Tris粉末溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2.NaCl溶液:-5MNaCl(准备方法:将287.7gNaCl溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)3.验血试剂:-4%NaOH溶液(准备方法:将40gNaOH溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-5%CuSO4溶液(准备方法:将50gCuSO4溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-2%K4[Fe(CN)6]溶液(准备方法:将20gK4[Fe(CN)6]溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)4.PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液):-10×PBS缓冲液(准备方法:将80gNaCl,2gKCl,11.5gNa2HPO4,2gKH2PO4溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L。

pH值可以调节至7.4左右)5. Tris-EDTA缓冲液(TE缓冲液):- 10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 8.0(准备方法:将12.1 gTris溶解在800 mL去离子水中,然后加入0.37 g EDTA,使用HCl调节pH值至8.0,并将溶液体积加至1 L)二、缓冲液的配方1. Tris-HCl缓冲液:- 50 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1% Triton X-100,pH 7.4(准备方法:将6.05 g Tris,5.8 g NaCl,0.1 g Triton X-100溶解在800mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2. Tris-Borate缓冲液(TBE缓冲液):- 89 mM Tris,89 mM boric acid,2 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将10.81 g Tris,5.49 g boric acid,3.72 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)3. Tris-Glycine缓冲液:- 25 mM Tris,192 mM glycine,0.1% SDS,pH 8.3(准备方法:将3.03 g Tris,14.35 g glycine溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)4. Tris-Acetate缓冲液(TAE缓冲液):- 40 mM Tris,20 mM acetic acid,1 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将4.84 g Tris,1.86 g acetic acid,0.37 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)5. Phosphate缓冲液:- 100 mM sodium phosphate,pH 7.0(准备方法:根据目标pH值使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节溶液pH至7.0,并将溶液体积加至1 L)以上只是一些常用的试剂和缓冲液的配方,并不是全部。

试剂的配制

试剂的配制

附录1 生物实验室常用试剂的配制一、检验酸碱性的试剂1.酚酞试液取0.1g酚酞,溶解在100mL60~90%的乙醇溶液里,装在试剂瓶内密闭保存。

酚酞试液在碱性溶液中呈红色。

2.甲基橙试液甲基橙是橙黄色粉末或晶状鳞片。

取0.1g甲基橙溶解在100mL蒸馏水里制成。

当pH值由3.1~4.4时,颜色为红至黄色。

3.甲基红试液甲基红是红紫色晶体或红色粉末。

把0.1g甲基红溶在100mL60%乙醇里制得。

当pH值由4.4~6.2时,颜色由红色至黄色。

4.麝香草酚酞(百里酚酞)试液把0.1g白色的麝香草酚酞溶解在100mL 90%乙醇里制得。

当pH值由9.4~10.6时,颜色为无色至蓝色。

5.溴甲酚紫指示剂将0.1g溴甲酚溶于9.25mL的0.02mol/L氢氧化钠溶液中,加蒸馏水稀释至250mL制得。

当pH值由6.2~6.8时,颜色由淡黄色变为淡紫色,变色点在pH 6.7。

6.溴甲酚绿试液溴甲酚绿是黄色晶体或红棕色粉末。

把0.1g溴甲酚绿溶于100mL 20%乙醇中,或把0.1g溴甲酚绿与2.9mL 0.05mol/L 氢氧化钠溶液研匀,用水稀释到100mL制得。

当pH值由3.8~5.4时,颜色由黄至蓝色。

7.甲基紫(结晶紫)试液把0.1g深绿紫色的甲基紫溶解在100mL的水里制得。

当pH值由0.13~0.5时,颜色由黄至绿;pH值由1.0~1.5时,颜色由绿至蓝;pH值由2.0~3.0时,颜色由蓝至紫。

8.甲酚红指示剂把0.1g深红色的甲酚红溶解于100mL 50%的乙醇中,或将0.1g甲酚红与5.3mL 0.05mol/L氢氧化钠研匀,用水稀释到100mL制得。

当pH值由0.2~1.8时颜色由红至黄;pH值由7.0~8.8时,颜色由亮黄至紫红。

甲酚红指示剂遇少量二氧化碳,能快速变色,反应灵敏,效果明显。

9.刚果红试纸(红色)把 0.5g峋果红溶解于1L水中,加入5滴乙酸,滤纸用温热溶解液浸透后,取出晾干。

实验室常规试剂的配制方法

实验室常规试剂的配制方法

4. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。 5. 量取10 ml 250 mM KCl溶液,加入到烧杯中。 6. 滴加5 N NaOH溶液(约0.2 ml),调节pH值至7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至1 L。 8. 高温高压灭菌后,4℃保存。 9. 使用前加入5 ml灭菌的2 M MgCl2溶液。
目录
蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法
30% (W/V) Acrylamide
1
40% (W/V)Acrylamide
1
10% (W/V) 过硫酸铵
1
5×Tris-Glycine Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液)
1
5×SDS-PAGE Loading Buffer
1
考马斯亮蓝R-250染色液
6
组份浓度
配制方法 NZM培养基除不含Yeast Extract(酵母提取物)外,其他成份与NZYM培养基相同。
配制方法
1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基,在高温高压灭菌前,加入下列试剂中的一种。
2. 高温高压灭菌后,戴上手套取出培养基,摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温 度很高,小心烫伤)。 3. 待培养基冷却至50~60℃时,加入热不稳定物质(如抗生素等),摇动容器充分混匀。
3
Ampicillin (100 mg/ml)
IPTG (24 mg/ml)
X-Gal (20 mg/ml)
组份浓度 配制量 配制方法
100 mg/ml Ampicillin
50 ml
1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水,充分混合溶解后,定容至50 ml。 3. 用0.22 μm过滤膜过滤除菌。 4. 小份分装(1 ml/份)后,-20℃保存。

实验室常用试剂配制方法

实验室常用试剂配制方法

实验室常用试剂配制方法实验室中,常用试剂的配制方法非常重要,准确的配制方法可以确保实验的准确性和可重复性。

以下是几种常用实验室试剂的配制方法:1.缓冲溶液的配制:缓冲溶液常用于调节实验的酸碱度,常见的缓冲溶液有Tris缓冲液、PBS缓冲液等。

以Tris缓冲液为例,其配制方法如下:1) 称取所需量的Tris氯化物(Tris-HCl)。

2) 将Tris氯化物溶解于去离子水中,搅拌使其彻底溶解。

可以加热水浴促进其溶解。

3)调整溶液的pH值至所需的酸碱度。

可以使用酸(如盐酸)或碱(如氢氧化钠)来调节pH值,同时使用pH计监测溶液的pH值。

4)将溶液转移到容量瓶中,用去离子水稀释至最终体积。

2.浓度溶液的配制:浓度溶液的配制需要准确计算溶质的质量以及溶液的体积。

以下以NaCl浓度溶液的配制为例:1) 根据所需的NaCl浓度和溶液体积,计算所需的NaCl质量。

可以使用以下公式进行计算:质量(g)=浓度(mol/L)×体积(L)×摩尔质量(g/mol)。

2)称取所需质量的NaCl。

3)加入去离子水溶解NaCl,搅拌使其溶解。

4)如果需要,通过使用pH计校正溶液的pH值。

3.酶溶液的配制:酶溶液常用于生物学实验中。

以下以酶的配制为例:1)根据酶的活力或浓度,计算所需酶的质量或体积。

2)称取所需量的酶,可以在低温环境中操作以保持酶的活性。

3)加入合适的缓冲液溶解酶,并按需添加其他辅助试剂,如辅酶等。

4)将溶液通过滤器过滤以去除可能存在的杂质。

5)根据需要,将溶液分装至小容器中,如冰盒中保存。

4.染色剂的配制:染色剂常用于细胞培养、组织切片,或者蛋白质凝胶电泳等实验中。

以下以伯克氏液的配制为例:1) 称取所需质量的碱性苏丹黑(Fast Green FCF)和亚甲蓝(Methylene Blue)。

2)加入足够的去离子水,用搅拌棒搅拌使其均匀溶解。

3)使用滤纸或滤器将溶液过滤以去除杂质。

4)将溶液分装至小容器中,并用铝箔纸覆盖以避免溶液暴露于光线中。

实验室试剂配制

实验室试剂配制

实验室试剂配制1、0.083M KOH:0.1M KOH稀释12倍(PH必须大于12)2、酸性半饱和硫酸铵:取硫酸铵((NH3)2SO4)400g加蒸馏水500mL.置于37℃水浴24h不时搅拌,使达饱和,再冷至25℃,搅拌一次,使过量的(NH3)2SO4析出,上清液为饱和液,取上清夜400mL加1M HCL20mL。

蒸馏水加至800mL,混匀室温保存(PH必须大于3)3、17%异丙醇溶液:17mL异丙醇加0.1mol/L Tris 缓冲液(7.4)至100mL。

PH〉7.2方可。

4、10g/L(1%)联苯胺:1.0g联苯胺溶于90mL 冰醋酸内,然后加蒸馏水至100mL,贮于棕色瓶,置冰箱内可使用数周。

5、1%H2O2:30%H2O2新鲜配制(稀释30倍)6、100g/L(10%)醋酸溶液:取10mL冰醋酸,加蒸馏水至100mL7、标准Hb溶液:取以生理盐水洗涤过三次的压积红细胞与等体积蒸馏水,0.5倍体积四氯化碳混合,剧烈振荡5min后,离心20min(2,500r/min),吸取上层Hb液,用氰化高铁Hb法准确测定其浓度,稀释成100g/L(10%)Hb浓度,于低温冰箱保存,用时取0.01mL,加生理盐水至10g/L。

即为100mg/L(10mg%)应用标准液。

8、12.5g/L亚硝酸钠—葡萄糖溶液:亚硝酸钠:1.25葡萄糖:5加蒸馏水至100mL,用棕色瓶,4℃保存一个月。

9、0.0004mol/L美蓝溶液:美蓝(次甲基蓝,亚甲基蓝)15mg,加蒸馏水100mL,室温1~2个月。

10、0.02mol/L磷酸盐缓冲液(PH7.4):Na2HPO4·12H2O:229.5mg(1.1475g)KH2PO4:52.2mg(0.261g)加蒸馏水100mL(500mL)11、PH8.5 TEB缓冲液:Tris:10.2g(5.1g)EDTA:0.6g(0.3g)硼酸:3.2g(2.6g)加蒸馏水至1000mL(500mL)12、PH8.5硼酸缓冲液:硼酸5.56g硼砂(四硼酸钠)6.87g加蒸馏水至1000mL13、0.09%丽春红:丽春红S或G:1.8g三氯醋酸:26.8g磺柳酸:26.8g加蒸馏水至100mL用前将上液以蒸馏水稀释20倍使用14、氨基黑:氨基黑10B: 0.5g甲醇50mL冰醋酸:10mL蒸馏水:40mL溶解而成贮棕色瓶内15、漂洗液:甲醇(乙醇)45mL冰醋酸:5mL蒸馏水:50mL溶解而成16、透明液:无水乙醇:70mL冰醋酸:30mL混合而成17、PH6.5磷酸盐缓冲液:KH2PO4:3.11g Na2HPO4: 1.49g(Na2HPO4·2H2O 1.87g)蒸馏水900mL校正PH后稀释至1,000mL18、0.4NaOH:1M →稀释19、0.1Tris缓冲液(PH7.4):Tris: 1.21g 0.1N HCL 40mL加蒸馏水至100mL20、1.0mol/L盐酸标准液:浓盐酸MW=36.465,比重1.18,含HCL 36%~38%。

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实验室常用试剂、缓冲液的配制1 MTris-HCI(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度1 MTris-HCI配制量1 L配制方法1.称量121.1 gTris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 咼温咼压火菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 MTris-HCl(pH8.8)组份浓度1.5 MTris-HCl配制量1 L配制方法1.称量181.7 gTris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压火菌后,室温保存。

注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。

10 X TEBuffer(pH7.4,7.6,8.0)组份浓度100 mMTris-HCl,10 mMEDTA配制量1 L配制方法1.量取下列溶液,置于 1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800ml的去离子水,均匀混合3. 将溶液定容至1 L后,高温高压火菌。

4. 室温保存。

3 M醋酸钠(pH5.2)组份浓度配制量配制方法PBSBuffer 组份浓度137 mMNaCl,2.73 M琴磁柚IQO ml1. N.1OAC - 3H.OH于100-200 m:疑杯中.加人對40讪的去两子水披扌半渚孵2、加入冰酯敌讷帑pH值至43加去离子庆粕増液證容至20ml.mMKCl,10 mMNa2HPO4,2 mMKH2PO4配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于 1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约800ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4,然后加入去离子水将溶液定容至 1 L4. 咼温咼压火菌后,室温保存。

注意:上述PBSBuffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mMCaCI2和0.5 mMMgCI2。

10 M醋酸铵组份浓度10 M醋酸铵配制量100ml配制方法1.称量77.1 g醋酸铵置于100〜200ml烧杯中,加入约30ml的去离子水搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100ml。

3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。

4. 密封瓶口于室温保存。

注意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚配制方法1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160 C对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。

3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:①液化苯酚应贮存于-20 C,此时的苯酚呈结晶状态。

从冰柜中取岀的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68 C水浴中使苯酚充分融解。

②加入羟基喹啉(8-Quinolinol )至终浓度0.1%。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色,有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1 MTris-HCl ( pH8.0 ),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1 MTris-HCl ( pH8.0 ),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4C避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)1. 说明:从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1 )。

氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离,而异戊醇则有助于消除抽提过程中岀现的气泡。

2. 配制方法:将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1 )混合均匀后,移入棕色玻璃瓶中4 C保存。

10%(W/V)SDS2NNaOH组份浓度2NNaOH配制量100ml 配制方法1•量取80ml去离子水置于100〜200ml塑料烧杯中(NaOF溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2. 称取8 gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中,边加边搅拌。

3. 待NaOH完全溶解后,用去离子水将溶液定容至100ml。

4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温保存。

2.5NHCI组份浓度2.5NHCI配制量100ml配制方法1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸(11.6N ),均匀混合。

2. 室温保存。

5 MNaCl组份浓度5 MNaCl配制量1 L配制方法1.称取292.2 gNaCl置于1 L烧杯中,加入约800ml的去离子水后搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至 1 L后,适量分成小份。

3. 咼温咼压火菌后,4°C保存。

20%(W/V)Glucose组份浓度20%(W/V)Glucose配制量100ml配制方法1. 称取20 gGlucose置于100〜200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水后,搅拌溶解2. 加去离子水将溶液定容至100ml。

3. 咼温咼压火菌后,4 C保存。

Solution 1(质粒提取用)组份浓度25 mMTris-HCl (pH8.0 ),10 mMEDTA,50 mMGlucose配制量1 L组份浓度0.5 MEDTA 配制量1 L配制方法1.称取186.1 gNa2EDTA ・ 2H2O ,置于1 L 烧杯中。

2. 加入约800ml 的去离子水,充分搅拌。

3. 用 NaOH 调节 pH 值至 8.0 (约 20 gNaOH)。

注意:pH 值至8.0时,EDTA 才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至 1 L 。

5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。

6. 室温保存。

1 MDTT组份浓度1 MDTT 配制量20ml配制方法1.称取3.09 gDTT ,加入到50ml 塑料离心管内。

2. 加20ml 的0.01 MNaOAc (pH5.2 ),溶解后使用 0.22 mm 滤膜过滤除菌。

3. 适量分成小份后,-20C 保存。

10 mMATP组份浓度10 mMATP 配制量20ml配制方法1.称取121mgNa2ATP3H2O 加入到 50ml 塑料离心管内。

2. 力口 20ml 的 25 mMTris-HCI ( pH8.0),搅拌溶解。

3. 适量分成小份后,-20C 保存。

组份浓度10 mMATP 配制量20ml配制方法1.称取121mgNa2ATP3H2O 加入到 50ml 塑料离心管内。

2. 力口 20ml 的 25 mMTris-HCl ( pH8.0),搅拌溶解。

3. 适量分成小份后,-20C 保存。

配制方法 Soluti on 组份浓度 1.量取下列溶液,置于2. 咼温咼压火菌后,3. 使用前每50ml 的11(质粒提取用)200 mM NaOH. 1% {W/V ) SOS1 L 烧杯中。

4C 保存。

Solution I 中加入 2ml 的 RNaseA (20mg/ml )。

配制量 ml1坦取下列涵亂 置干500 ml 烧杯札10%SDS 50 mF 用)2 N NaOH50 ml氏挪灭蔺水定容至500ml,充分混匀.3•富31保存“此落液保存时聞最好不嬰超过一个月円 注蕙:SDS 易产生警剋,不褻翩烈搅样.500ml 烧杯中。

2. 加入300ml 去离子水后搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至 500ml 。

0.5 MEDTA(pH8.0) Solution III(质粒提取 3 MKOAc,5 MCHCOOH 500ml1.称量下列试剂,置于配制方法组份浓度 配制量 配制方法蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法30%(W/V)Acrylamide组份浓度30% (W/V ) Acrylamide配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约600ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至 1 L,用0.45 mn滤膜滤去杂质。

4. 于棕色瓶中4C保存。

注意:丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。

40%(W/V)Acrylamide组份浓度40% (W/V ) Acrylamide配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中。

2. 向烧杯中加入约600ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至 1 L,用0.45 mm滤膜滤去杂质。

4. 于棕色瓶中4 C保存。

注意:丙烯酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用具有积累性,配制时应戴手套等。

聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为有可能含有少量的未聚合成份。

10%(W/V)过硫酸铵组份浓度W:沪煮棒■配制量i匚i~T配制方法■1-1LI .U . 2.加入to刊的去离孑水石攬拌落囂5XTris-―讦丄一G l yc in e - —* •厂「「「:「亠Buffer(SDS-PAGE电泳缓冲液)组份浓度0.125 MTris,1.25 MGlycine,0.5% (W/V ) SDS配制量1 L配制方法1.称量下列试剂,置于1 L烧杯中。

2. 加入约800ml的去离子水,搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至1 L后,室温保存。

5 XSDS-PAGELoadi ngBuffer组份浓度250 rnM Tris^HCI (pH6 8>配制量10% (W. V)SDS5ml配制方法0,5% (W V)BPB 1.量取下列试剂,置于10ml塑料离心管50% (W)甘油中。

5% (W. V)乙谓(2-ME) 2.加去离子水溶解后定容至5ml。

3. 小份(500 ml/份)分装后,于室温保存。

4. 使用前将25ml的2-ME加到每小份中<5. 加入2-ME的LoadingBuffer 可在室温下保存一个月左右。

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