以冻融法快速纯化高活力基因工程TaqDNA聚合酶
2023北京重点校高二(下)期中生物汇编：基因工程章节综合
2023北京重点校高二（下）期中生物汇编基因工程章节综合一、单选题1．（2023春·北京海淀·高二海淀实验中学校考期中）基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，以便于重组和筛选。
已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—；限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—。
据图判断，下列操作正确的是（）A．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割B．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割C．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割D．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割2．（2023春·北京海淀·高二海淀实验中学校考期中）下面是四种不同质粒的示意图，其中ori为复制必需的序列，amp为氨苄青霉素抗性基因，tet为四环素抗性基因，箭头表示同一种限制性内切核酸酶的酶切位点。
若要得到一个能在四环素培养基上生长而不能在氨苄青霉素培养基上生长的含重组DNA的细胞，应选用的质粒是（）A．B．C．D．3．（2023春·北京海淀·高二海淀实验中学校考期中）科学家将萤火虫的荧光素和荧光酶基因转入烟草细胞，获得高水平的表达。
长成的植物通体光亮，堪称自然界的奇迹。
这一研究成果表明（）Ⅰ萤火虫与烟草的DNA结构基本相同Ⅰ萤火虫与烟草共用一套遗传密码子Ⅰ烟草体内合成了荧光素和荧光酶Ⅰ萤火虫和烟草合成蛋白质的方式基本相同A．Ⅰ和ⅠB．Ⅰ和ⅠC．Ⅰ和ⅠD．ⅠⅠⅠⅠ4．（2023春·北京海淀·高二海淀实验中学校考期中）我国有历史悠久的传统发酵技术，以此为基础发展起来的发酵工程实现了发酵食品、药物等工业化生产，极大地改善了人们的生活。
下列相关叙述错误的是（）A．腐乳的鲜味来源于毛霉等微生物分泌的蛋白酶对豆腐中蛋白质的分解B．利用酵母菌等菌种的发酵工程生产的单细胞蛋白，可作为食品添加剂C．将乙型肝炎病毒的抗原基因转入酵母菌，再通过发酵可生产乙型肝炎疫苗D．发酵是指在无氧的条件下，利用微生物代谢将原料转化为人类所需要的产物的过程5．（2023春·北京海淀·高二海淀实验中学校考期中）在基因工程中常使用噬菌体作为载体。
taq酶冻干工艺
taq酶冻干工艺Taq酶冻干工艺是一项重要的生物技术方法，广泛应用于分子生物学领域。
它以Taq酶为主角，通过冻干技术将其保存和利用，以实现高效、稳定的DNA扩增。
下面将从冻干工艺的原理、应用以及优势等方面进行阐述。
我们来了解一下Taq酶冻干工艺的原理。
Taq酶是一种从热泉中分离出的热稳定酶，具有较高的耐热性和DNA聚合酶活性。
在PCR （聚合酶链式反应）实验中，Taq酶起到了关键的作用，它能够在高温下扩增DNA模板，从而实现对DNA的复制。
然而，Taq酶的活性易受到环境条件的影响，如温度、湿度等。
为了保证Taq酶的活性和稳定性，科学家们开发出了冻干工艺。
冻干工艺的步骤相对简单，首先将Taq酶溶液冷冻至极低温，然后通过真空脱水的方式将水分从冷冻的Taq酶溶液中去除，最后将干燥的Taq酶溶液密封保存。
这样，Taq酶的活性和稳定性就得到了保证。
在需要使用Taq酶时，只需将其重新溶解即可，而且保持了原有的活性和稳定性，方便实验操作。
Taq酶冻干工艺在分子生物学领域有着广泛的应用。
首先，它是PCR技术的关键步骤之一，用于扩增目标DNA序列。
PCR技术在基因工程、医学诊断、疾病预防等方面具有重要的应用前景。
其次，Taq酶冻干工艺还可以应用于DNA测序、基因克隆、基因突变分析等领域。
这些应用都依赖于Taq酶的高效、稳定的活性。
与传统的酶保存方法相比，Taq酶冻干工艺具有明显的优势。
首先，冻干工艺可以将Taq酶保存在较长的时间内而不失活性，延长了其使用寿命。
其次，冻干Taq酶易于储存和运输，方便实验室的使用。
此外，冻干工艺还可以提高Taq酶的稳定性，减少不必要的损失。
因此，Taq酶冻干工艺在分子生物学研究中具有重要的应用价值。
Taq酶冻干工艺是一项重要的生物技术方法，通过冻干技术实现对Taq酶的高效、稳定的保存和利用。
其原理简单，步骤清晰，应用广泛，具有明显的优势。
Taq酶冻干工艺的发展为分子生物学领域的研究提供了有力的支持，为相关领域的进一步发展和应用提供了有力的技术支持。
taqdna聚合酶基因的克隆实验原理
taqdna聚合酶基因的克隆实验原理聚合酶是一种重要的酶，能够催化DNA双链解旋和合成RNA的过程。
在遗传工程和分子生物学研究中，对聚合酶基因的克隆实验具有重要意义。
一、聚合酶基因的克隆实验原理1.提取DNA：首先，需要从细胞中提取DNA。
这可以通过细胞裂解和蛋白酶处理、有机物或者无机盐提取法等多种方法来实现。
经过提取后，可以得到纯净的DNA溶液。
2. PCR扩增：在得到DNA样本后，可以利用聚合酶链式反应（PCR）技术对聚合酶基因进行扩增。
PCR技术利用聚合酶酶、引物和dNTPs等原料，通过多次循环的温度变化，将特定DNA片段迅速扩增成百万甚至亿万倍。
3.消化和连接：经过PCR扩增后，得到的DNA片段需要进行酶切消化和连接。
酶切消化是通过限制性内切酶对DNA分子进行特异性切割，得到所需的DNA片段。
连接则是利用连接酶将所需的DNA片段连接到载体上自由末端的操作过程。
4.转化：连接好的质粒需要通过转化技术导入到宿主菌中，通常使用大肠杆菌等细菌作为宿主。
转化是将外源DNA导入到宿主细胞内，并使其稳定存在并得以复制。
5.筛选：经过转化后，需要对宿主菌进行相应的筛选，找到携带了聚合酶基因的阳性菌落。
通常利用抗生素筛选法或者标记基因法来选出目的菌株。
6.提取和纯化：最终需要对筛选出的阳性菌株进行DNA提取和纯化，得到纯净的含有聚合酶基因的质粒DNA。
通过以上步骤，可以成功得到聚合酶基因的克隆质粒，并可以进一步进行表达、纯化、功能验证等实验。
二、聚合酶基因的克隆实验应用1.遗传工程研究：利用聚合酶基因的克隆实验，可以获得大量的聚合酶基因，从而对其进行结构与功能的深入研究。
这对于揭示聚合酶在DNA复制、转录和修复等生物学过程中的作用具有重要意义。
2.分子生物学研究：在分子生物学研究中，聚合酶基因的克隆实验可以用于构建基因工程载体、进行基因表达调控、开展蛋白结构与功能研究等，为分子生物学研究提供了重要的工具和材料。
《2024年利用重组蛋白技术提高TaqDNA聚合酶活性的研究》范文
《利用重组蛋白技术提高Taq DNA聚合酶活性的研究》篇一一、引言随着生物科技的迅速发展，重组蛋白技术在生物学研究及实际应用中发挥着越来越重要的作用。
Taq DNA聚合酶作为分子生物学领域中常用的酶类，其活性直接影响到PCR（聚合酶链式反应）的效率和准确性。
因此，提高Taq DNA聚合酶的活性成为了一个重要的研究方向。
本文旨在探讨利用重组蛋白技术提高Taq DNA聚合酶活性的研究。
二、材料与方法1. 材料本研究所用材料主要包括Taq DNA聚合酶基因、表达载体、宿主细胞以及相关的实验试剂。
2. 方法（1）基因克隆：首先，从已知的DNA序列中获取Taq DNA 聚合酶的基因序列，然后将其克隆到表达载体中。
（2）重组蛋白表达：将含有Taq DNA聚合酶基因的表达载体转入宿主细胞中，通过诱导表达获得重组Taq DNA聚合酶。
（3）酶活性检测：通过PCR反应检测重组Taq DNA聚合酶的活性，并与其天然酶活性进行比较。
（4）优化表达条件：通过改变表达条件（如温度、pH值、诱导剂浓度等），优化重组Taq DNA聚合酶的活性。
三、实验结果1. 重组Taq DNA聚合酶的表达通过基因克隆和重组蛋白表达，成功获得了重组Taq DNA聚合酶。
SDS-PAGE结果表明，重组Taq DNA聚合酶在宿主细胞中得到了有效表达。
2. 酶活性检测PCR反应结果显示，重组Taq DNA聚合酶具有较高的活性。
与天然Taq DNA聚合酶相比，重组Taq DNA聚合酶的活性得到了显著提高。
3. 优化表达条件通过改变表达条件，发现适当的温度、pH值和诱导剂浓度能够进一步提高重组Taq DNA聚合酶的活性。
其中，在37℃、pH 值为7.5的条件下，使用适量的诱导剂，能够获得最佳的酶活性。
四、讨论本研究利用重组蛋白技术成功提高了Taq DNA聚合酶的活性。
这为PCR反应的效率和准确性提供了有力保障，有助于推动分子生物学领域的发展。
此外，通过优化表达条件，可以进一步提高重组Taq DNA聚合酶的活性，为实际应用提供了更多可能性。
taqdna聚合酶的最佳反应温度
taqdna聚合酶的最佳反应温度
TAQ DNA聚合酶是一种从热泉菌中分离出来的酶，它具有高度的稳
定性和耐热性，在PCR技术中得到了广泛的应用。
TAQ DNA聚合酶
最佳反应温度是多少呢？这是一个非常重要的问题，因为它直接影响
到PCR反应的效率和准确性。
TAQ DNA聚合酶最佳反应温度是72℃。
这个温度是在实验室条件下
通过大量的实验确定出来的。
在这个温度下，TAQ DNA聚合酶能够
充分发挥其催化作用，使得PCR反应能够高效、准确地进行。
但是需要注意的是，TAQ DNA聚合酶不仅仅只能在72℃下发挥作用。
实际上，TAQ DNA聚合酶具有一定的耐热性，在60-80℃范围内都
可以发挥一定的催化作用。
但是在低于60℃或高于80℃时，TAQ DNA聚合酶就会失去活性。
此外，需要注意的是，在PCR反应中还需要加入适量的缓冲液、dNTPs、引物等试剂，并且需要控制好反应体系中的pH值、离子浓
度等因素，才能够保证PCR反应的高效、准确。
总之，TAQ DNA聚合酶最佳反应温度是72℃，在PCR反应中需要控制好反应体系中的各种因素，才能够保证PCR反应的高效、准确。
taqdna聚合酶名词解释
taqdna聚合酶名词解释
TAQ DNA聚合酶是一种热稳定的DNA聚合酶，广泛应用于分子生物学实验
中的PCR（聚合酶链反应）技术。
TAQ DNA聚合酶得名于其首次从热温泉中分离
出的一种细菌——热泉溶菌酶（Thermus aquaticus）。
该酶具有在高温下工作的能力，能够在反应温度高达94-96摄氏度的条件下保持稳定活性。
TAQ DNA聚合酶在PCR技术中起着关键作用。
PCR技术是一种用于扩增
DNA片段的方法，它通过不断重复DNA的变性、退火和延伸的步骤，使得特定的DNA片段得以快速扩增至数以亿计的拷贝数。
在PCR反应中，TAQ DNA聚合酶
被用来催化DNA的延伸步骤。
由于TAQ DNA聚合酶的热稳定性，它能够耐受高温引起的变性，因此在PCR
反应的高温变性步骤中不会失活。
此外，TAQ DNA聚合酶还具有5'→3' DNA依赖DNA聚合酶活性，可以在延伸步骤中合成新的DNA链。
TAQ DNA聚合酶的广泛应用使得PCR技术成为分子生物学研究中的重要工具。
它在基因检测、DNA测序、基因克隆等领域有着广泛的应用。
TAQ DNA聚合酶
的发现和应用为分子生物学研究的发展做出了巨大贡献。
Taq DNA 聚合酶 说明书
Taq DNA Polymerase Taq DNA Polymerase 是耐热的DNA 聚合酶，具有5’-3’ DNA 聚合酶活性和双链DNA 特异的5’-3’外切核酸酶活性，无3’-5’外切酶活性。
使用该产品扩增得到的PCR 产物的3’末端附有一个“A ”碱基，可直接用于TA 克隆。
■产品说明PCR 、TA 克隆。
■应用范围用活性化的大马哈鱼精子DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol 脱氧核苷酸摄入为酸不溶物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U ）。
■活性定义无核酸内切、外切酶活性，也无核酸污染，其酶纯度检测大于99％。
■品质保证产品内容Taq DNA Polymerase （5U/µl ）2+10×Taq Reaction Buffer （Mg plus ）10 mM dNTP 保存条件：-20 ℃. E coli 重组蛋白。
■来源20mM Tris-Cl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 0.5%Nonidet P-40, 0.5%Tween-20和50% 甘油。
■储存缓冲液10×Taq Reaction Buffer ：100mM Tris-Cl(pH8.3@25℃), 500mM KCl, 15mM MgCl 。
2■反应缓冲液GeneCopoeia Inc.19520 Amaranth DriveGermantown, Maryland 20874USATel: 301-515-6982; 1-866-360-9531Fax: 301-515-6983Web: 产品套装编号: C0101A , 本套装包含以下产品:产品编号C01010A C01011A C10010C包装规格200µl1.25ml ×20.5mlTaq DNA 聚合酶生产经销商:能基因广州复能基因有限公司广州高新技术产业开发区广州科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器D 区8楼 (邮编: 510663)技术热线: 020-******** 电子邮箱: support @ 网址:■基本反应条件体系：1、PCR 10× Reaction Buffer Primer1Primer210mM dNTP TemplateTaq DNA Polymerase ddH O22.5µl0.5µl1~100ng(质粒)10~1,000ng(基因组)0.2µl up to 25µl反应物组成体积终浓度l ×0.2~1µM 0.2~1µM0.2mM1U /Reaction条件：2、PCR 94℃94℃Tm -5℃72℃72℃4℃2 min 30 sec 30 sec 1kb/min 7 min hold30 cycles}1. PCR 反应条件应根据模板、目的片段大小、引物结构等具体条件不同，设定最佳反应条件。
taq聚合酶作用
taq聚合酶作用
Taq酶聚合酶最基本的作用是在PCR反应过程中扮演DNA聚合酶的角色,实现DNA链的扩增。
taq酶是一种具有热稳定性的DNA聚合酶，是从水生栖热菌中分离出来的，是让聚合酶链反应能够迅速发展而广泛应用的原因。
在循环的高温条件中仍然能够保持较高的活性，而且taq酶的催化活性对于镁离子浓度非常敏感。
绝大多数酶在经历高温之后会变性失活，但Taq酶可以耐受90摄氏度以上的高温。
通常如果是用taq酶进行聚合酶链反应的话，变性的温度往往在95摄氏度左右，这是taq酶在进行30个左右的聚合酶链反应之后，活力不会损失太多的最高耐受温度，而且taq酶在热变性是不会被钝化，也不需要在每一次扩增后，加新酶能够提高扩增片段特异性以及扩增效率，所以这样的话还能使聚合酶链反应技术简单化，也更加大大的降低了成本。
Taq酶的作用是让聚合酶链反应能够迅速发展和广泛应用的原因，Taq酶是一种具有热稳定性的DNA聚合酶，是从水生栖热菌中分离出来的，Taq酶在循环的高温条件中仍然能够保持较高的活性，而且taq酶的催化活性对于mg2+浓度非常敏感。
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第23卷第4期江西农业大学学报Vol.23,No.4 2001年12月Acta Agriculturae Universitatis Jiang xiensis Dec.,2001文章编号:1000-2286(2001)04-0495-03以冻融法快速纯化高活力基因工程T aq DNA聚合酶孙亮先,骆红梅,董海涛,李德葆(浙江大学生物技术研究所,浙江杭州310029)摘要:用含有T aq DNA聚合酶基因的pT aq表达质粒转化E.coli DH5A菌株,IPT G诱导表达T aq DN A聚合酶。
利用该酶的热稳定性,反复2次-70e、75e交替冻融以裂解细胞释放胞浆;以高速离心除去冻融变性的细胞碎片及核酸蛋白的复合物以达到快速纯化T aq DN A聚合酶的目的。
PCR扩增反应和SDS-PAG E分析表明所制备的T aq DNA聚合酶的纯度、活力、敏感性、特异性均达到试验要求。
该方法具有快速简便的优点。
关键词:T aq DN A聚合酶;冻融;纯化;聚合酶链式反应中图分类号:Q575+.12文献标识码:ARapid Purification of High-activity Recombinant Taq DNA Polymerase Using Freezing-thawing Method SU N Liang-x ian,LU O Hong-mei,DONG H ai-tao,L I De-bao (Biotechnology Institute of Zhejiang University,H ang zhou310029,China)Abstract:The strain of E.coli DH5A w as transformed w ith p Taq expressing plasm id w ithin w hich the T aq DNA polymerase gene w as inserted.T he ex pression of the gene could be induced w ith IPT G.Ex-ploiting the thermal stability property of this enzy me,the authors developed a rapid method to isolated this enzy me by two cycles of-70e freezing and75e thaw ing,w hich ruptured the cell membrane and re-leased the cell content.After a hig h speed centrifug ation,the denatured macromolecules precipitated and the Taq DNA polymerase could be collected in the supernatant.SDS-PAGE and PCR amplification analy-sis demonstrated that the purified enzyme w as very high in purity,activity,specificity and sensitivity.The purification method was more convenient and rapider than those reported previously.Key words:Taq DNA polymerase;freezing-thaw ing;purification;poly merase chain reaction1958年科学家分离出DNA聚合酶后,就曾设想利用DNA聚合酶扩增产生大量DNA。
1983年M ullis发明了聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)[1]。
但一般DNA聚合酶不耐高温,每一轮聚合反应完成后,都需要加入新的聚合酶,这种操作既浪费时间又易出错。
1986年Erlich分离纯化出热稳定适用于PCR技术的Taq DNA聚合酶。
Taq DNA聚合酶是一种耐热的单亚基酶(M r=94 000),具有5.y3.聚合酶的活性,在核苷酸掺入过程中,根据目的序列的不同,最适反应温度为75~收稿日期:2001-06-30作者简介:孙亮先(1970-),男,讲师,在职博士,从事水稻基因蕊片研制及基因功能研究80e ,最初是从耐热细菌Thermus aquaticus 中纯化而得[2],现已有其基因工程酶[3]。
PCR 反应和双脱氧DNA 测序这两项分子生物学中最常用的技术都需要这种酶,它很高的最适反应温度可消除DNA 二级结构,有利于聚合反应顺利进行。
基因工程Taq DNA 聚合酶表达载体的构建便利了该酶的纯化。
尽管如此,从细菌培养物中纯化酶的方法仍很繁琐,需要进行选择性沉淀和离子交换色谱分离[4,5]。
1995年Edith G [5]利用Taq 聚合酶的热稳定性,提出冻融法去除杂蛋白等大分子,所制备的酶可用于PCR 和测序反应[5]。
但纯化中需要使用挥发性神经剧毒物质苯甲基磺酰氟(PMSF),并且在长时间透析过程中酶的活力会丧失。
在综合考虑Taq DNA 聚合酶生物学特性和PCR 反应体系基础上,我们对所用试剂进行优化,不使用溶菌酶和剧毒物质PM SF,简化了纯化工艺,整个纯化过程仅用-70e 、75e 交替冻融和离心即可纯化出产量、纯度、敏感性、特异性和活力均较佳的Taq DNA 聚合酶。
实践中使用所制备的酶进行PCR 扩增反应,均获满意的实验结果。
1 实验材料1.1 宿主菌和T aq 聚合酶表达载体宿主菌为大肠杆菌DH5A 菌株,重组表达载体为pTaq 表达质粒。
插入原核表达质粒的Taq DNA 聚合酶基因的转录由tac 启动子控制。
以pTaq 转化E.coli DH5A 菌株,获得转化子。
1.2 试剂1.2.1 Taq DNA 聚合酶纯化缓冲液A 50mmol/L 葡萄糖,50mmol/L Tris.H Cl(pH 7.9),1mmol/L EDTA 。
1.2.2 Taq DNA 聚合酶纯化缓冲液B 10mmol/L Tris.H Cl (pH 7.9),100mmol/L NaCl ,1mmol/L EDTA ,0.5%Tw een 20,0.5%Nonidet-P40,1mmol/L DTT 。
1.2.3 SDS -PAGE 2@SDS 凝胶加样缓冲液,SDS-PAGE Tris-甘氨酸电泳缓冲液,0.5@TBE 琼脂糖凝胶电泳缓冲液,LB (Lauria Bertaini )液体培养基,均参照5分子克隆6[8]。
SDS-PAGE 分离胶(12%)和浓缩胶(5%)配方见5电泳6[7]。
所用生化试剂和标准分子量蛋白质购于Promeg a 公司。
2 实验方法2.1 Taq DNA 聚合酶的表达与纯化(1)以插入Taq DNA 聚合酶基因的pTaq 表达质粒转化E.coli DH 5A 菌株,具体方法见5基因工程操作技术6[6]。
(2)取一个已转化的BL 21克隆于5m gL LB 液体培养基中(含100L g/mL 氨卞青霉素),37e 200r/min 振荡过夜。
(3)1mL 过夜培养液接种200mL LB 液体培养基(含100L g/mL 氨卞青霉素),37e 200r/min 振荡4h 后加入IPTG(终浓度5mmol/L)诱导T aq DNA 聚合酶基因表达,继续培养10h 。
(4)离心收集菌体。
(5)以Buffer A 清洗菌体2次,悬浮于8mLBuffer A ,反复2次-70e 、75e 交替冻融。
(6)12000g 离心20min,取上清。
(7)上清液中加入等体积的Buffer B ,75e 水浴30m in 。
(8)12000g 离心20min 。
(9)取上清液,加入等体积甘油,-20e 保存备用。
2.2 PCR 反应检测Taq DNA 聚合酶活力PCR 扩增反应检查所纯化TaqDNA 聚合酶活力。
上海Sang no 生物工程公司的商品酶为对照,随机挑取水稻cDNA 文库7个克隆,抽提质粒为摸板;M 13通用引物。
PCR 反应体系(50L L)为:DNA 摸板10L L(1m LLB 培养物所抽提的质粒量的1/400),10@PCR 缓冲液5L L,25mmol/L MgCl 23.5L L ,25ng /mL M13-Reverse 引物1L l,25ng /mL M13-Forward 引物1L L,20mmol/LdNT P 0.5L L ,自制TaqDNA 聚合酶1L L ,对照组使用1个单位TaqDNA 聚合酶。
所用试剂和引物购于上海Sangno 生物工程公司。
PCR 反应参数:94e 预变性5min,94e 变性30s,57e 退火45s,72e 延伸90s,40个循环。
#496# 江西农业大学学报第23卷PCR 反应后取7L L 产物于1%琼脂糖凝胶电泳检测。
2.3 Taq DNA 聚合酶纯度检测以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行蛋白分析,使用5%的浓缩胶和12%的分离胶;30mA 稳流电泳;考马斯亮蓝R-250染色,蒸馏水脱色,具体操作见5电泳6[7]。
3 结果与讨论3.1 Taq DNA 聚合酶的产量及活力以冻融法从200mL E.coli 培养物中制备到15mL TaqDNA 聚合酶溶液。
加入等体积灭菌甘油后,PCR 扩增水稻cDNA 文库7个随机克隆的结果见图1。
图1中上面一排1~7泳道为使用自制Taq DNA 聚合酶的PCR 扩增结果;下面一排是对照组,为使用商品酶对相应克隆进行PCR 扩增的结果。
使用自制酶,可将7个cDNA 片段全部扩增出,其敏感性和特异性等同于商品酶。
根据电泳结果,可以看出所纯化的TaqDNA 聚合酶的活力超过1U/L L 。
按此得率,每升细菌培养物中可纯化出超过15万单位的酶。
影响酶产量的主要因素是宿主菌株和IPT G 诱导时间,使用更优良的宿主菌和相应的最佳诱导时间,可望进一步提高TaqDNA 聚合酶产量。
目前TaqDNA 聚合酶的最低商品价格为0.2~0.3元/单位,所以使用自制酶不仅可以取得很好的试验结果,而且还可以节省大量的科研经费。
本实验室使用自制TaqDNA 聚合酶对水稻的6000个独立基因进行了逾万次PCR 扩增,并将产物点制成cDNA 基因芯片,经中科院微生物所和中国农科院水稻所使用,反映良好。
3.2 SDS -PAGE 检测T aqDNA 聚合酶的纯度由SDS-PAGE 结果(图2)可见,本试验所制备的蛋白的分子量约为94Kda,与T aq DNA 聚合酶的分子量相符,且纯度很高。