四川三大烟区烤烟蔗糖分解酶类及其基因表达的差异分析
四川主产烟区烤烟主流烟气特征成分分析
四川主产烟区烤烟主流烟气特征成分分析曾淑华; 任亚; 刘少军; 郭仕平; 刘雷; 信俊峰; 刘雅洁【期刊名称】《《烟草科技》》【年(卷),期】2019(052)011【总页数】9页(P69-77)【关键词】四川省; 烤烟; 单料烟; 主流烟气; 气相色谱-质谱法; 正交偏最小二乘判别分析【作者】曾淑华; 任亚; 刘少军; 郭仕平; 刘雷; 信俊峰; 刘雅洁【作者单位】四川农业大学农学院成都市温江区惠民路211号 611130; 四川省烟草专卖局成都市高新区世纪城路936号 610041【正文语种】中文【中图分类】TS411.2烟叶的香气品质是决定烟叶可用性以及烟叶产区发展的基础，相关研究备受重视。
各种植区域的生态环境、烟叶感官质量、化学成分及代谢物均存在差异，研究表明生态因素对烤烟品质和风格特色起决定性作用[1-5]。
不同生态条件下烤烟主要化学成分和致香物质质量分数差异明显[6-8]。
烟叶内在化学成分是烟叶品质和风格特征的物质基础，烟叶的香型分布有明显的地域性特点[9]。
四川省是我国烤烟主产区之一，省内烟区间生态条件差异明显，烟叶香型风格也有不同。
烟气是烟叶燃烧并发生复杂热化学反应后的产物，而主流烟气是直接进入卷烟消费者口腔的物质，烟气化学成分组成及其释放量对卷烟感官质量及香型风格有直接影响。
因此，分析主流烟气成分对于认识烟叶香型特点具有重要意义。
已有较多的研究者从烟叶化学成分方面分析四川烤烟的特色[10-11]，而与特色相关的烤烟烟气成分的分析工作尚显不足。
因此，本研究中对四川省不同烟区单料烤烟的主流烟气成分进行GC/MS、PCA 和OPLS-DA 分析，旨在明确各种植区烟叶产品的烟气特征，为四川省烟叶特色彰显与分类提供参考依据。
1 材料与方法1.1 材料、试剂和仪器35 个烤烟样品取自四川省凉山州、攀枝花市、泸州市、宜宾市、广元市，等级为C3F，每个样品5 kg。
烟叶的详细信息见表1。
二氯甲烷、无水硫酸钠（AR，成都市科隆化学品公司）；乙酸苯乙酯（内标，AR，上海甄准生物科技有限公司）。
不同产区烤烟主流烟气中11种成分含量的差异及相关性
不同产区烤烟主流烟气中11种成分含量的差异及相关性姬厚伟;张丽;王芳;刘剑;何军;段凯【摘要】为烤烟新品种选育、适宜种植区域规划和卷烟降焦减害新产品的研发提供参考,以全国6个不同产烟区的57个单料烟样品为材料,在ISO抽吸模式下,研究同一等级模块卷烟烟气中11种烟气成分(4种常规化学成分,7种有害成分)的含量差异及其相关性.结果表明:1)在同一等级配方模块卷烟中,同省份烤烟主流烟气中11种成分含量的差异较小,而不同省份则差异较大.2)在卷烟主流烟气的11种成分中,水分含量除与巴豆醛含量达极显著正相关(相关系数0.540,P＜0.01)、与苯酚含量达极显著负相关(相关系数-0.370,P＜0.01)外,与其他指标的相关性较小;而总粒相物、烟碱和焦油含量与其他指标的相关性较大.3)卷烟危害性指数与烟气中氨含量的相关性最大,相关系数为0.890;与烟气中总粒相物、焦油、CO、HCN、NNK、苯并[a]芘、苯酚含量呈中度相关,相关系数为0.508～0.752;与烟气中烟碱含量的相关性最弱,相关系数为0.441.%The content of eleven smoke components (four conventional chemical components and seven harmful components)in 57 unblended cigarette samples from six tobacco-producing areas in China was determined and their correlations were analyzed to provide a reference for breeding and suitable planting regional planning of new flue-cured tobacco varieties and development of new cigarette products with low tar and low harm.Results:1) There is little difference in eleven smoke components of cigarettes with the same blending module in the same province but obvious difference among different provinces.2) The moisture content is positively related to crotonaldehyde content very significantly and negatively related to phenol content very significantly.But thecorrelations between moisture and other chemical components are not obvious.Total particle matter,nicotine and tar content is greatly related to other chemical components.3) The cigarette hazard index is related to ammonia content in cigarette smoke and its correlation coefficient is0.890.The cigarette hazard index is moderately related to total particle matter,tar,CO,HCN,NNK,benzopyrene and phenol content in cigarette smoke and their correlation coefficient is 0.508～0.752.The cigarette hazard index is weakly related to nicotine content in cigarette smoke and its correlation coefficient is 0.441.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2017(045)001【总页数】5页(P26-30)【关键词】配方模块;烟气;有害成分;常规化学指标;相关性【作者】姬厚伟;张丽;王芳;刘剑;何军;段凯【作者单位】贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳 550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳 550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳 550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳 550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳 550009;贵州中烟工业有限责任公司技术中心,贵州贵阳 550009【正文语种】中文【中图分类】S39烟叶是卷烟生产的主要原料，其质量直接影响卷烟成品品质。
我国不同生态烟区烤烟的部分化学成分和多酚类物质含量的比较
我国不同生态烟区烤烟的部分化学成分和多酚类物质含量的比
较
武丽;徐晓燕;朱小茜;李章海;黄义德
【期刊名称】《华北农学报》
【年(卷),期】2008(023)0z1
【摘要】对我国5个主要烟区的3个等级烟叶标样的多酚类物质和主要化学成分进行了系统的比较和评价.结果表明:云南和贵州两地多酚含量较高,烟碱含量中等,总糖、还原糖的含量相对较高.安徽烟区烟碱含量略高.辽宁和安徽烟叶的多酚、总糖和还原糖含量普遍较低.辽宁、安徽烟区烟叶糖碱比较低,烟叶协调性不够;云南和贵州烟区的各部位烟叶协调性普遍较好.
【总页数】4页(P153-156)
【作者】武丽;徐晓燕;朱小茜;李章海;黄义德
【作者单位】安徽农业大学,农学院,安徽,合肥,230036;中国科技大学,地球与空间学院,安徽,合肥,230026;安徽农业大学,农学院,安徽,合肥,230036;中国科技大学,地球与空间学院,安徽,合肥,230026;安徽农业大学,农学院,安徽,合肥,230036
【正文语种】中文
【中图分类】S572.01
【相关文献】
1.产烟国部分烟区烤烟质体色素及主要挥发性香气物质含量的比较 [J], 周冀衡;王勇;邵岩;杨虹琦;李永平;朱列书
2.凉山烟区不同品种烤烟化学成分及香气物质含量分析 [J], 郭群召;钱宇;高峻;罗文斌;张骏
3.云南不同生态烟区烤烟主要挥发性香气物质含量的比较 [J], 师君丽;杨虹琦;宋春满;邓建华;逢涛
4.我国不同生态烟区烤烟的部分化学成分和多酚类物质含量的比较 [J], 武丽;徐晓燕;朱小茜;李章海;黄义德
5.云南不同生态烟区烤烟多酚类物质含量比较 [J], 李薇; 雷丽萍; 师君丽; 杨虹琦因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
四川三种香型风格产区烟叶化学成分特征分析
四川三种香型风格产区烟叶化学成分特征分析作者：肖勇杨兴有靳冬梅余佳敏赵宇张建会余祥文陈志华来源：《南方农业·上旬》2020年第11期摘要为明确四川不同香型烤烟产区的烟叶品质特征，采用连续流动法测定分析比较了2010—2018年四川三个香型烤烟不同产烟区烟叶主要化学成分的含量。
结果表明：1）烤烟清甜香型、蜜甜香型和醇甜香型产区烟叶总糖、还原糖、烟碱、总氮含量差异显著，淀粉、钾、氯含量差异相对较小。
2）清甜香型产区烟叶具有“糖类物质较多、含氮物质较少、氯较少”的特征，蜜甜香型产区烟叶具有“糖类物质较清甜香型产区烟叶少、含氮物质较清甜香型产区烟叶多、钾较多”的特征，醇甜香型产区烟叶具有“糖类物质和含氮物质中等、钾较少”的特征。
3）同一香型产区内，不同产烟县区的烟叶化学成分含量差异明显。
清甜香型烤烟产区内烟叶差异较大，总体均为清甜香特征;蜜甜香型烤烟产区内烟叶化学成分差异大，屏山县烟叶具备一定的清甜香型烟叶特征;醇甜香型烤烟产区烟叶的化学成分含量差异较小，三个产烟区间烟叶品质较一致。
建议四川不同香型烤烟产区可根据各自特点，有针对性地开展生态特色定位、生产资源布局和栽培技术研究等。
关键词烟草;烟叶;香型;化学成分;产区差异;四川中图分类号：S572 文献标志码：A DOI：10.19415/ki.1673-890x.2020.31.002烟叶品质特色的形成是生态、品种和栽培因素共同作用的结果，生态条件决定烟叶香气风格的类型和潜力，品种彰显烟叶风格特征，栽培因素支撑风格特色的显示度和彰显度[1-2]。
“全国烤烟烟叶香型风格区划”以生态为基础、以香韵为依据、以化学成分和物质代谢为支撑，通过生态、感官、化学、代谢四个维度的划分和交叉验证，将全国烟叶划分为八大香型[3]。
四川是我国主要烤烟产区，年种植面积和收购量多年居国内第三位，植烟区生态类型多样，生产清甜香型（凉山与攀枝花）、蜜甜香型（泸州和宜宾）和醇甜香型（广元）三类香型烟叶[3-5]。
不同地区烤烟多酚类物质的分布特点及与其它化学成分的关系的开题报告
不同地区烤烟多酚类物质的分布特点及与其它化学成分的关系的开题报告引言：烟草中含有很多毒害物质，其中包括多酚类物质。
多酚类物质是烟草中的重要化学成分，其含量和分布特点对烟草的品质和毒害程度有着重要的影响。
由于不同的烟草品种和生长环境的差异，烟草中的多酚类物质含量和分布特点也存在差异。
因此，深入研究不同地区烤烟多酚类物质的分布特点及其与其它化学成分的关系，对于了解烟草品质和毒害程度的影响具有重要意义。
材料与方法：本研究选取了四种地区的烟草，分别为江苏、河南、云南和贵州，采用冷水提取法提取烟草中的多酚类物质。
使用高效液相色谱法和气相色谱法对提取出的样品进行分析，分析结果用SPSS统计分析软件进行统计处理。
结果与讨论：四种地区烤烟中多酚类物质的含量和分布特点差异很大。
其中，云南烟草中多酚类物质含量最高，贵州烟草中最低。
同时，不同的多酚类物质在烟草中的含量和分布特点也存在差异。
例如，在河南烟草中，黄酮类化合物占多酚类物质的主要成分，并且含量较高；而在江苏烟草中，花青素类化合物含量较高。
此外，在四种地区的烟草中，还发现了一些其他的化学成分，如尼古丁和烟碱等。
这些化学成分与多酚类物质之间的关系需要进一步研究。
结论：不同地区烤烟中多酚类物质的含量和分布特点存在差异，这与烟草品种和生长环境有关。
在四种地区烟草中，多酚类物质是主要的烟草化学成分之一，但并不是仅有的成分。
因此，深入探究不同地区烤烟中多酚类物质的含量和分布特点，对于了解烟草品质和毒害程度的影响具有重要意义。
不同基因型烤烟化学成分及致香物质差异研究
品质 的内在 因素 ， 而烟 叶品质决定 了烟叶的经济价值 和使用 价值 …。烟叶致香物质含量 与其 香气质量密 切相关 ， 通过分 析烟 叶致香物质含量 ， 以对 烟叶质量进 行 比较客观 准确 的 可
评价 。由于基 因型受生态 因子 和生产条件 的影响较大 ， 因
１３ 试 验 方 法 ．
适宜的栽培品种提供理论依据。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 试 验 材 料 ．
１３ １ 烟叶主要化学成分测定 ．．
采用 Ａ ＡⅢ型连续流动化学 香气物质 的
分析仪（ 国 Ｂ Ａ Ｌ Ｅ Ｂ 德 Ｒ Ｎ＋ Ｕ Ｂ Ｅ公 司生 产 ） 定 。 测
１３ ２ 中性致香物质 的提取及 定性定量测定 ．．
张双双 ’ ，闰铁 军 刘 国顺 ， ，常 栋 贺 凡 解 燕 ， ，
（． １河南农业大学烟草学院／ 国家烟草栽培生理生化研究基地 ， 河南郑州 ４ ００ ； ５ ０ ２ ２ 湖北 中烟武汉烟草（ 团） ． 集 有限公 司 ， 湖北武汉 ４ ０ ５ ；． ３ ０ １ ３ 云南 省烟草公 司曲靖市公司 ， 云南 曲靖 ６ ５ ０ ） ５ ００
中图分类号 ：５ ２ ０ ￥７．１ 文献标志码 ： Ａ 文章 编号 ： ０ １０ （０２ ０ ０ ８ ０ １ ２— ３ ２ ２ １ ）４— ２ ６— ０ ４
不 同品种的烤烟由于基 因型 和遗 传基础不 同 ， 叶化学 烟
成 分 和香 气 物 质 的 含 量也 不 相 同 。烟 叶 化 学 成分 是 决 定 烟 叶
提取采用“ 水蒸气蒸 馏 一二 氯 甲烷溶 剂萃取 ” 法。在 同步蒸
馏萃取装置的一端接盛有 １ ０ｇ烟样 、 ｇ １ 柠檬 酸、５ Ｌ蒸馏 ３０ｍ 水 的 ０ ５ｍ ． Ｌ内标 的 ５０ｍ ０ Ｌ圆底烧瓶 ， 使用恒温 电热套 进行 加热 ； 装置 的另一端接盛有 ４ ０ｍＬ二氯 甲烷 的 ２０ｍ ５ Ｌ圆底烧 瓶， 该烧瓶置于恒温水浴锅 中加热 ， 水浴温度为 ６ ０℃ ； 两端同
四川会理烟区烤烟质量综合评价的开题报告
四川会理烟区烤烟质量综合评价的开题报告
1.研究背景
会理烟区地理位置优越，气候适宜，土壤肥沃，是一个适合烤烟生长的地方。
近年来，随着稳定增长政策的实施和经济的快速发展，烟草行业取得了显著进展。
其中，烤烟生产的产值和规模也得到了进一步的提升。
因此，从总体上看，会理烟区的烤烟
质量综合评价已经成为一个非常重要的问题。
2.研究目的
本研究的主要目的是通过对会理烟区烤烟质量的综合评价，探讨其主要优劣势，分析烤烟品质提高的关键因素，并提出相应的改进措施，以推动会理烟区烤烟的发展
和提升。
3.研究方法
本研究的方法主要包括两个方面：数据收集和数据分析。
在数据收集方面，我们将采用问卷调查和审查等方式，详细了解电子烟市场、烤烟生产和消费的现状。
在数
据分析方面，我们将采用定性和定量分析的方法，比较各个因素对会理烟区烤烟质量
的影响，提出合理的改进措施。
4.预期成果
本研究预计能够形成一套科学、系统的综合评价方法，并探讨其应用前景。
同时，本研究还将进一步发现会理烟区烤烟生产的主要优劣势和改进方案，为会理烟区的烤
烟质量提升和提高进一步的发展提供参考。
最后，本研究成果的应用和推广也将促进
我国烤烟行业的进步和发展。
不同产区烤烟醇化过程中α—淀粉酶活性的变化
不同产区烤烟醇化过程中α—淀粉酶活性的变化作者：赵云飞陈振国兰明蓉等来源：《湖北农业科学》2015年第05期摘要：以六大烤烟产区（云南、湖北、东北、四川、贵州和福建）的烟叶为试验材料，研究醇化过程中烤烟α-淀粉酶活性的变化。
结果表明，醇化过程中烤烟α-淀粉酶活性随时间的延长先上升后下降，且在醇化15个月时其活性达到最大；相关分析显示，α-淀粉酶活性与烤烟感官质量呈极显著正相关；α-淀粉酶活性与醇化时间的回归模型为=-0.017 x2+0.52 x+1.77，方程检验极显著。
通过检测α-淀粉酶活性，利用回归模型预测烤烟的感官质量，从而为烟叶工业利用提供指导。
关键词：烤烟；醇化时间；α-淀粉酶活性；不同产区中图分类号：S572 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）05-1111-03DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.05.021Abstract： Tobacco leaves from six flue-cured tobacco producing areas including Yunnan，Hubei， Dongbei， Sichuan，Guizhou and Fujian were clooected to study the activities of α-amylase in the aging process. Results showed that the activity of α-amylase increased first and then decreased， reaching the highest leve l in the fifteen month. The correlation between the activity of α-amylase and sensory quality was significantly positive. The regression models was =-0.017 x2+0.52 x+1.77. The equation inspection was very significant. The a-amylase activity and aging time was used to establish the sensory quality of flue-cured tobacco. The application of enzymological model was effective to predict the quality of flue-cured tobacco.Key words： flue-cured tobacco；alcoholization duration；α-amylase activity；different area烤烟是中国重要的烟草品种，复烤而未经醇化的烟叶具有生青气和地方性杂气，吸味粗糙，刺激性大，不能用于卷烟的生产[1]。
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生物技术2017年第7期收稿日期：2017－05－19基金项目：烟草资助项目。
作者简介：唐煌（1989－），男，硕士。
*为通讯作者。
四川三大烟区烤烟蔗糖分解酶类及其基因表达的差异分析唐煌1，张军杰2，鲁黎明3，黄玉碧3*（1．四川省种子站，四川成都610041；2．四川农业大学生命理学院，四川雅安625014；3．四川农业大学农学院，成都温江611130）摘要：为探究四川烟叶风格特色重要物质蔗糖对四川三大烟区烤烟品质、香气特征的影响，本研究以四川主要栽培种红花大金元和云烟87为材料，在攀西烟区（攀枝花、凉山）、川南烟区（泸州）、川北烟区（广元）驻点采样，研究烟株旺长期、现蕾期和成熟期碳代谢重要产物蔗糖相关分解酶活性及基因表达情况，初步解析影响四川烟叶风格特色重要物质蔗糖分解规律，经研究发现：1．攀西地区酸性转化酶活性呈现出先增后降的趋势，川北剑阁及川农古蔺烤烟酶活性则在旺长期最高。
中性转化酶除冕宁外，各地酶活性随着烤烟生育期不断上升。
各地蔗糖合成酶变化趋势一致，均出现逐渐升高的趋势。
2．各烟区相比较，川南烟区及川北烟区酸性转化酶活性旺长期时达到峰值，攀西地区则在现蕾期时酶活性最高。
各烟区中性转化酶活性均较低，各地差异较小。
三烟区蔗糖合成酶活性均出现逐渐升高的趋势。
其中酸性转化酶、蔗糖合成酶攀西烟区与川南、川北烟区差异较大，可能是各烟区烟叶香型不同的因素。
3．推测蔗糖及淀粉分解酶相关基因时空表达特性分析：（1）现蕾期表达活跃型：V －inv ；（2）成熟期表达活跃型：C －inv ，Sus ，N －inv 。
其中，V －inv 、Sus 可看作影响各烟区香型不同的因素之一。
关键词：烤烟；蔗糖；酶活性；特色风格；实时荧光定量烟草（Nicotianatabacum L．）属双子叶植物管花目茄科烟草属，是一种以收获叶片为目标的重要经济作物，因此烟叶品质的好坏直接决定着烤烟的经济价值。
国内外研究表明，生态环境通过调节烟株内部的生理生化反应成为影响烟叶质量的关键因素，是优良烟叶品质形成的基础与前提［1－3］。
作为我国最为重要的烟叶主产区之一，四川各烟区区域气候特征差异明显，土壤类型分布多样，海拔跨度较大，生态环境不一，因而烤烟品质不同，抽吸风格各有特色，综合来看可将四川分为攀西烟区、川南烟区和川北烟区三大烟区。
其中，攀西地区烟叶香气量较足，香气质佳，加工性好，香气特性兼有清香型和中间型。
川南地区烟叶外观质量和物理特性均不如攀西地区，化学成分协调性好，但该地区的部分烟叶产区烟碱含量偏高，劲头偏大，香气特性为中间型。
川北地区烟叶外观质量和物理特性较好，化学成分较为协调，但该地区烟叶还原糖含量较高，烟叶香气特性为中间型［4－5］。
烟叶品质、香气特征与烟叶碳代谢的强弱息息相关，蔗糖是烟草碳代谢的主要产物之一，对烤烟品质影响较大。
一方面，在烟叶生长过程中，蔗糖作为烟草碳代谢的产物，在烤烟生命活动中有着不可替代的作用，作为糖类它是烟草生命活动的基础物质，为烟草体细胞、组织不断分裂生长提供能量，在烤烟生命活动中起主导作用。
此外，蔗糖是诸多高等植物储藏、积累和运输糖分的形式，在高等植物体中具有信号的功能，还是“库”代谢的主要基质［6－7］。
另一方面，在卷烟制品中，作为水溶性糖类的蔗糖在烟支燃吸时会发生酸性反应，从而抑制烟气中碱性物质的碱性，使烟气的刺激性降低，酸碱平衡适度，产生令人满意的吃味。
烟叶在调制和烟支燃吸的过程中，糖类会发生美拉德反应，从而掩盖其他物质产生的杂气，产生令人愉悦的香气。
此外，适宜的水溶性糖含量还能使烟叶保持色泽鲜亮，弹性好，耐压而不易破碎，油份足，为许多香气物质的形成提供碳骨架，是多种代谢次生物质的前体。
因此，蔗糖是影响烤烟品质重要物质。
蔗糖含量的多少与其相关酶活性的作用息息相关。
近年来人们通过对苹果、荔枝、桃［8－11］等的研究表明：与蔗糖代谢和积累密切相关的酶主要有蔗糖转化酶（Inv ）、蔗糖磷酸合成酶（SPS ）和蔗糖合成酶（SS ）。
蔗糖合成酶与蔗糖转化酶均能催化蔗糖分解，后者能够不可逆的将蔗糖分解为果糖和葡萄糖为烤烟形态建成提供碳骨架［12］。
在高等植物中，蔗糖转化酶的活性对碳代谢影响很大，蔗糖通过韧皮部能从合成部位运输到需要大量能量和碳源的组2017年第7期生物技术织细胞中，然后在蔗糖转化酶的作用下分解为葡萄糖和果糖，经糖酵解后进入三羧酸循环，因此蔗糖转化酶的强弱常作为烤烟碳代谢强弱的衡量标准。
本研究以四川主要栽培种红花大金元和云烟87为材料，在攀枝花、凉山、泸州、广元驻点采样，研究烤烟旺长期、现蕾期和成熟期蔗糖分解相关酶活性及其基因表达情况，初步解析四川省烟叶风格特色重要物质蔗糖分解相关酶类及其基因表达规律，以探索烤烟蔗糖分解酶代谢及其基因表达对于四川省不同烟区烟叶风格的影响，找出影响四川各地区烤烟香型不同、品质不同可能存在的内在原因，为优质烟叶的生产提供理论基础，为进一步改良四川省烤烟风格提供依据。
1材料方法1．1试验点及试验品种的选取四川烤烟全年出产约为380万担，其中攀西地区生产烟叶250万担。
因此在试验点的选取上，偏重与攀枝花和西昌地区。
攀枝花地区选取米易与仁和2个地区，凉山选取的3个点分别为冕宁、会理、西昌。
而川南和川北采集点则选取泸州古蔺县、广元剑阁县。
本试验所选品种为当前四川烤烟的主推品种红花大金元和云烟87。
1．2试验材料的采集2013年、2014年分别在烤烟旺长期、现蕾期、成熟期的晴朗天气上午采集各地区试验田中长势基本一致且无病虫害的烟株，按“S ”型取样方法，选取30株采集中部烟叶（从下往上数第10片烟叶），每个地区每个品种采集3管烟叶，液氮速冻。
两年共计在攀西烟区的西昌（XC ）、会理（HL ）、冕宁（MN ）、仁和（ＲH ）、米易（MY ），川南烟区的古蔺（GL ），川北烟区的剑阁（JG ）7个不同取样点采集样品252份，带回实验室分装后冻存于－80ħ冰箱用于酶活性及基因表达水平测定。
1．3蔗糖转化酶的提取和测定参照Nielsen 等的方法稍作改进。
中性转化酶：取0．2mL 酶提液（透析过的）加入0．8mL 的反应液［0．1mol /L 蔗糖，0．1mol /L 磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液（pH7．5）］在37ħ热浴0．5h 后，加1mL 蒸馏水，1．5mL3，5－二硝基水杨酸，沸水浴5min 以终止反应。
用3，5－二硝基水杨酸法测定还原糖含量。
还原糖产生速率，表示转化酶的活性。
可溶性酸性转化酶：取0．2mL 酶提液（透析过的）加入0．8mL 的反应液［0．1mol /L 蔗糖，0．1mol /L 磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液（pH4．5）］在37ħ热浴0．5h 后，加1mL 蒸馏水，加1．5mL3，5－二硝基水杨酸，沸水浴5min 以终止反应。
其余操作同上。
1．4蔗糖合成酶的提取和测定参照Nielsen 等的方法稍作改进。
取0．2mL 酶提液（透析过的）加入0．8mL 的反应液［5%蔗糖，0．1mol /L 磷酸氢二钠－柠檬酸缓冲液（pH6），0．1mol /LUDP ］在37ħ孵浴0．5h 后，加1mL 蒸馏水，加1．5mL3，5－二硝基水杨酸，沸水浴5min 以终止反应。
其余操作同蔗糖转化酶。
1．5Ｒeal －Time PCＲ检测烟草蔗糖代谢相关酶关键基因序列通过NCBI 、EMBL 、DDBJ 查阅，利用软件Primer 5．0通过相关序列设计特定引物，并检测特异性。
总ＲNA 的提取根据北京天恩泽基因科技有限公司生产的Trizol 伴侣试剂盒的说明书步骤提取ＲNA 。
将提取到的烟草总ＲNA 进行反转录。
以纯化后的ＲNA 为模板，根据Takara 反转录试剂盒进行，反应体系总体积为20ul 。
以检测合格的cDNA 产物为模板，以10倍比例倍比稀释原液，制作目的标准曲线。
采用双标准曲线法对样品中的基因的表达量进行Ｒeal －Time PCＲ检测，每个待测样品设置3次重复，选用18S 作为内参基因。
1．6数据分析酶活性数据图、基因表达量数据图使用Excel 分析，相关酶活性多重比较使用SPSS 软件进行。
表1引物设计结果基因名称上游引物下游引物18S 5＇TTACGCCTTCCTATGCAATT3＇5＇G GCGCCACCACCTTGATCTTC3’V －inv 5＇A CTACCCGTGGACTAATGCTAT3＇5＇AGCCAATGGATCAAGTCCGTG3＇C －inv 5＇A TTTGAGTTGTTGGATGGGGTG3＇5＇A GGAATCCATTTACCAGCCACT3＇N －inv 5＇C ACATGGACTTTAGATTCTTCAC3＇5＇T CTCCAGAGCAGGGTAACATATT3＇Sus5＇ATTGAAAGCCACGGAAAAGGGA3＇5＇C AAATATTCAGGCACAGTCAGC3＇生物技术2017年第7期2结果与分析2．1引物设计结果2．2不同地区烤烟蔗糖分解酶活性动态变化规律及其差异2．2．1酸性转化酶由图1及表2可知，不同生态条件酶活性变现趋势不一，红花大金元方面泸州以及广元旺长期酶活性最高，到现蕾期时活性迅速下图1酸性转化酶活性变化图降，之后也维持在相对较低的活性水平。
攀西烟区则呈现出先升后降的趋势。
云烟87酶活性变化规律与红花大金元相似，泸州及广元在酶活性逐渐下降。
而攀西烟区转化酶活性迅速上升，现蕾期时达到峰值，打顶略后有下降，其中会理和米易酶活性较高。
图2蔗糖合成酶活性变化图表2各地区酸性转化酶酶活性多重比较表（LSD ）品种/地方酸性转化酶品种/地方酸性转化酶旺长期现蕾期成熟期旺长期现蕾期成熟期HGL 4．15a 3．05bcde 2．40f YJG 3．61a 5．30a 2．41e HJG 4．01ab 2．10g 2．75cdef YGL 3．30ab 5．25ab 2．15f HHL 3．00bc 4．85a 4．05a YHL 1．75bc 4．60abc 3．95a HMY 2．95cd 4．20abcd 3．85abc YMY 1．65c 4．10bcd 3．02bc HＲH 2．23de 4．64abcd 3．45bcde YXC 1．55c 3．82de 2．80bcd HXC 2．20e 4．75ab 3．91ab YMN 1．55c 2．31ef 2．65cde HMN2．15e4．65abc3．55abcdYＲH1．50c2．05f3．12b表3各地区蔗糖合成酶酶活性多重比较表（LSD ）品种/地方蔗糖合成酶品种/地方蔗糖合成酶旺长期现蕾期成熟期旺长期现蕾期成熟期HJG 1．83a 1．77a 2．82a YJG 1．59a 1．65a 2．25a HGL 1．41b 1．53bc 2．49b YGL 1．44b 1．47bc 2．16abcd HXC 1．35bc 1．51bcd 2．25c YHL 1．29bc 1．51ab 2．22ab HHL 1．32bcd 1．59b 2．19cd YXC 1．17cd 1．35bcd 2．17abc HMN 1．11cde 1．29cde 1．92e YMY 0．96de 0．99f 1．62f HＲH 1．02e 1．14e 1．95de YＲH 0．93e 1．17e 1．68def HMY0．99e1．2e1．71fYMN0．84e1．19cde1．98bcde2017年第7期生物技术2．2．2蔗糖合成酶各烟区红花大金元蔗糖合成酶变化趋势一致，都呈现逐渐升高的趋势，剑阁和古蔺在各个时期蔗糖合成酶活性均较高，仁和和米易蔗糖合成酶活性较低。