反相高效液相色谱法快速测定梨中7种有机酸含量
高效液相色谱法检测食品中山梨酸的方案设计
高效液相色谱法检测食品中山梨酸的方案设计食品1002班李斯语学号：201035090206一实验目的：（1）进一步熟悉运用高效液相色谱的基本结构及操作方法。
（2）提高实验设计能力，以解决实际问题。
二实验原理：样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。
三实验仪器及试剂高效液相色仪(配有紫外检测器），微量进样器，超声波发生器，溶剂过滤器及过滤膜，六通阀（20μL定量环）容量瓶（10ml，10个），离心机。
甲醇：色谱纯；其余试剂：分析纯；实验用水电导率≤5μs/cm。
稀氨水1＋1：氨水加水等体积混合。
乙酸铵溶液0.02mol/L：称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经滤膜0.45μm过滤。
碳酸氢钠溶液20g/L：称取2g碳酸氢钠优级纯，加水至100mL，振摇溶解。
山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨酸，加碳酸氢钠溶液20g/L 5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。
山梨酸标准使用溶液：取山梨酸标准储备溶液各10.0mL，放入100mL 容量瓶中，加水至刻度。
此溶液含山梨酸0.1mg/mL。
经滤膜0.45μm 过滤。
四实验方法及步骤1.样品处理称取5.00～10.0g果汁类样品于100mL容量瓶中，加入约20mL 水，摇匀，超声10min。
用氨水1＋1调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜0.45μm过滤。
2.高效液相色谱参考条件色谱柱：C18 柱，5μm， 4.6mmх250mm或相当者。
流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵溶液（10：90）。
流速：1mL/min。
进样量：20μL。
检测器：紫外检测器，波长230μm，灵敏度0.2AUFS。
柱温：30℃根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
五、实验数据记录与处理1、记录实验条件。
高效测定水果中有机酸的反相液相色谱法
高效测定水果中有机酸的反相液相色谱法水果中的有机酸是水果特有的有机物质，它是水果的重要指标之一，因此，对于水果中有机酸的测定及其组成分析具有重要的意义。
近年来，由于分析技术的发展，液相色谱法已经成功地用于分析水果中的有机酸。
本文介绍了一种新的反相液相色谱法，即高效测定水果中有机酸的反相液相色谱法，立足于该法的特点，从实验设计、仪器设备、分析步骤几个方面对该法进行了总结和分析，为工作者提供了一套实用性、稳定性较好的分析方法。
一、实验设计1、样品选取本实验中，以苹果、梨、桃和橙4种水果为样品，测试它们中的有机酸含量，选用不同种类的水果，可以获得更为准确的测定成果。
2、实验条件（1）仪器设备：采用的是Agilent 1290反相液相色谱仪，其主要由液液分配器、柱箱、检测器和电脑（专门程序）组成，但目前市场上还有其他类型的色谱仪，比如ThermoDIONEX等；（2）柱箱：石英柱，500mm×4.6mm，内核外皮材料采用C18；（3）检测器：采用高效检测器，灵敏度较高；（4）分析模式：傅里叶变换红外光谱（FT-IR）分析模式，根据不同的有机化合物的吸收特性，可以分析出不同的有机酸组成成分；（5）流动相：甲醇/水混合溶液，其分配比例根据不同的有机酸有一定的调节。
二、仪器设备1、液液分配器液液分配器是液相色谱仪的基本组成部分，是整个实验过程中最重要的组成部分，简单说，液液分配器就是以电脑控制的，它的作用就是将样品和流动相按照一定的比例，混合在一起，然后以一定的流速通过柱箱的。
2、柱箱柱箱是色谱仪的基本部件，它的作用是在实验前，使样品和流动相在此处混合，然后按照一定的流动速度，通过这里，除去有机酸外，其余物质依次被除去，最终得到纯净的有机酸溶液。
3、检测器检测器是液相色谱仪的核心部分，它可以根据不同的物质的光谱或者振动特征，将其信号转化为电子信号，在检测到的物质分子能够经过形态转换而被分解之前，都可以被检测器检测到。
利用反相高效液相色谱法测定梨汁中有机酸的种类和含量_高海燕
有机酸是果汁中主要的风味营养物质 ,其 含量高低与果汁制品的品质有密切的关系 。此 外 ,果汁中的有机酸还可促进消化腺的活动 ,有 助于食物的吸收 ,改善患者的食欲 。天然果汁 营养丰富 ,深受消费者青睐 ,然而 ,由于水果原 料和生产成本的限制 ,果汁的掺假现象时有发 生 。在一定条件下 ,可以用测定各种有机酸含 量的方法来鉴别果汁饮料是否掺假 ,因此果汁 中有机酸含量的测定是国内外关注的问题之 一[1～3 ] 。梨是我国继苹果 、柑橘之后的第三大 水果 ,我国的梨品种资源非常丰富[4 ] , 但文献 中有关梨汁有机酸的组成及含量却未见有报 道。
21113 精密度与回收率试验 取同一梨汁样品 3 份 ,其中 1 份作本底 (梨
汁样品色谱图见图 2) ,另外 2 份分别添加一定 量的 11 种有机酸标品溶液后测定各成分含量 , 每份样品进行 6 次平行测定 ,考察测定方法的 回收率和精密度 ,结果表明本方法回收率高 ,重 现性好 (见表 2) 。 212 利用 HPLC 法测定梨汁中有机酸的种类及
C = - 010891 + 11846 ×10 - 5A C = - 010879 + 1114 ×10 - 4A C = 010568 + 4107 ×10 - 4A C = - 012998 + 21983 ×10 - 4A C = - 010036 + 51469 ×10 - 6A C = - 010019 + 21464 ×10 - 5A C = 013574 + 61898 ×10 - 4A C = - 010345 + 41915 ×10 - 4A C = 010158 + 41936 ×10 - 4A C = - 010007 + 41164 ×10 - 6A C = 01225 + 1105 ×10 - 3A
高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立
高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立沈 燕1，张正文1，刘兴凯1，王福成2，邵学东1*（1.君顶酒庄有限公司，山东烟台 265607；2.烟台市蓬莱区葡萄与葡萄酒产业发展服务中心，山东烟台 265699）摘 要：目的：建立了利用高效液相色谱测定葡萄及葡萄酒中7种有机酸的检测方法。
方法：色谱条件为Hi-Plex H色谱柱（300 mm×7.7 mm，8 μm），PL Hi-Plex H保护柱（50 mm×7.7 mm，8 μm）；紫外检测波长210 nm；流动相为0.006 mol·L-1的硫酸；流速0.6 mL·min-1；柱温55 ℃；进样量10 μL。
结果：草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸和乙酸出峰时间均在20 min以内；标准曲线线性关系良好，相关系数（R2）在0.999 9～1.000 0；检出限在0.031 4～0.722 3 mg·L-1；加标回收率在95.24%～102.04%，其相对标准偏差在0.16%～1.87%。
结论：该方法操作简单，检测时间短，具有较高的准确性和精确性。
关键词：有机酸；葡萄；葡萄酒；高效液相色谱；检测方法Establishment the Method of Seven Kinds of OrganicAcids in Grape and Wine by High Performance LiquidChromatographySHEN Yan1, ZHANG Zhengwen1, LIU Xingkai1, WANG Fucheng2, SHAO Xuedong1*(1.Junding Castle Co., Ltd., Yantai 265607, China; 2.Yantai Penglai District Grape and Wine Industry DevelopmentService Center, Yantai 265699, China)Abstract: Objective: To establish a HPLC method for the determination of 7 organic acids in grape and wine. Method: The chromatographic conditions were Hi-Plex H column (300 mm×7.7 mm, 8 μm) and PL Hi-Plex H protective column (50 mm×7.7 mm, 8 μm). UV detection wavelength 210 nm; sulfuric acid with 0.006 mol·L-1 mobile phase; flow rate 0.6 mL·min-1; column temperature 55 ℃. The sample size was 10 μL. Result: The peak time of oxalic acid, citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid and acetic acid were all within 20 min. The standard curve has a good linear relationship with the correlation coefficient（R2） ranging from 0.999 9 to 1.000 0. The detection limit was 0.031 4～0.722 3 mg·L-1. The recoveries ranged from 95.24% to 102.04%, and the relative standard deviations ranged from 0.16% to 1.87%. Conclusion: The method is simple to operate, short detection time, and has high accuracy and accuracy.Keywords: organic acid; grape; wine; high performance liquid chromatography; detection method有机酸是葡萄果实及葡萄酒中体现风味的主要物质之一，其含量是衡量葡萄果实成熟度和品质的重要参数，在葡萄酒的酿造中发挥着关键作用，对酒的感官质量有一定的影响，与酒的物理化学以及微生物稳定性有着紧密联系[1-4]。
采用反相高效液相色谱法同时测定杨梅果实中的有机酸
采用反相高效液相色谱法同时测定杨梅果实中的有机酸刘文静;潘葳【摘要】采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)研究了杨梅果实中有机酸的成分和含量,在C18柱(4.6mmID×250mm,4μm)上,采用紫外检测器(波长214 nm)进行检测,其流动相为0.04moL/L的KH2P04-H3P04缓冲液,nH2.4,流速0.8 ml/min,柱温35℃.检测所得7种有机酸标准曲线相关系数达0.999 0以上,平均回收率在88%～101%之间;变异系数RSD<3.06%.%A RP-HPLC method with a UV detector was established to determine the organic acids from the fruit of Myrica ruba.The chromatographic conditions were: Waters PhenomenexM C18(4.6 mmID×250 mm, 4 μm)used for the column(at 35 ℃)with0.04mol·L-1 KH2PO4-H3PO4 buffer(pH2.4)as the mobile phase, and the flow rate 0.8 mL·min-1,detector wavelength UV-214 nm.The correlation coefficient of the calibration graphs was 0.999 0-0.999 9.The recovery was 88％～101％, RSD＜3.06％.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2011(032)001【总页数】4页(P172-175)【关键词】反相高效液相色谱法;杨梅;有机酸【作者】刘文静;潘葳【作者单位】福建省农业科学院中心实验室,福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州350003;福建省农业科学院中心实验室,福建省精密仪器农业测试重点实验室,福建福州350003【正文语种】中文【中图分类】S667.6杨梅果肉中富含有机酸、蛋白质、维生素和果胶等营养成分，其中有机酸的种类和含量与果实品质密切相关[1]。
高效液相色谱法测定浸铀酸液中7种有机酸
图 ２ ８０％ 的甲醇水溶液为流动相测定七种有机酸的标准
ＨＰＬＣ 色谱图
Ｆｉｇ ２ Ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ｓｅｖｅｎ
ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｗｉｔｈ ８０％ ｍｅｔｈａｎｏｌ / ｗａｔｅｒ ａｓ ａ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ
ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄꎬ ｋｅｔｏｇｌｕｔａｒａｔｅꎬ ｃｉｔｒｉｃ ａｃｉｄꎬ ｓｕｃｃｉｎｉｃ ａｃｉｄꎬ ｆｕｍａｒｉｃ ａｃｉｄ) ｗｅｒｅ ｓｐａｒｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ － Ａｑ (４ ６ ｍｍ × ２５０
ｍｍꎬ ５ μｍ) ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ ｍａｄｅ ｉｎ ＵＳＡ ｗｉｔｈ ２０ ｍｍｏｌ / Ｌ ＮａＨ２ ＰＯ４ － Ｈ３ ＰＯ４ ｏｆ ｂｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｓ ｅｌｕｅｎｔꎬ ａｎｄ
Ｕｒａｎｉｕｍ Ｏｒｅｓ ｂｙ ＨＰＬＣ
ＬＩ Ｗｅｎ －ｊｕａｎꎬ ＬＩＵ Ｓｈａ －ｓｈａꎬ ＸＵ Ｌｉｎｇ －ｌｉｎｇꎬ ＧＯＮＧ Ｔｉａｎ
( Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｗａｔｅｒ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬ Ｅａｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ
柱 / 键合相ꎬ 所以此柱在酸性洗脱条件下能应用在完全含水的
溶液中ꎮ 用 ４０ μｇ / ｍＬ 的奈测定色谱柱的柱效见图 １ꎬ 萘的保留
时间为 ５ ５６４ ｍｉｎꎬ 与此柱出厂时安捷伦公司测定的 ５ ６００ ｍｉｎ
相差 ０ ０３６ ｍｉｎꎬ 且分离度良好ꎬ 可见 ＲＰＬＣ ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ－Ａｑ 柱
( ＲＰＬＣ) 条件下ꎬ 有机酸很难保留ꎬ 而离子抑制色谱法的应用
高效液相色谱法对果汁中有机酸含量的标准曲线的制作
高效液相色谱法对果汁中有机酸含量的标准曲线的制作一、引言果汁作为一种受欢迎的饮品，其质量以及营养成分的检测备受关注。
其中，有机酸是其中的一种重要成分，其含量的检测可以为果汁的质量控制提供重要的依据。
因此，本文将介绍一种高效液相色谱法（HPLC）来对果汁中有机酸含量进行检测，并说明制作标准曲线的方法。
二、实验设计为了制作有机酸标准曲线，我们需要以下实验设计：1. 实验仪器：高效液相色谱仪（HPLC）和外部标准品有机酸（如苹果酸、柠檬酸、草酸等）。
2. 实验步骤：（1）准备所需样品和标准品。
（2）进行液体色谱分析，采用C18反相色谱柱，流动相为含有0.5% H3PO4的水甲醇溶液。
（3）建立样品和标准品的色谱图，测定各有机酸的峰面积。
（4）根据标准品峰面积的测定值，制作有机酸的标准曲线。
3. 测量标准曲线：（1）根据标准曲线的浓度范围和间隔，分别取一定量的标准品，制备一系列不同浓度的标准溶液。
（2）将标准溶液进行色谱分析，测定各有机酸的峰面积。
（3）根据色谱图上的峰面积值和标准品的浓度，将数据输入计算机，进行数据回归和拟合，制作出有机酸的标准曲线。
4. 用标准曲线测定果汁中有机酸的含量。
（1）取一定量的果汁样品，经过预处理后，进行液体色谱分析。
（2）测定各有机酸的峰面积。
（3）根据标准曲线计算果汁中有机酸的含量。
三、结论通过上述实验设计，我们可以制作出果汁中有机酸的标准曲线，并用该曲线来检测果汁中有机酸的含量。
这种基于HPLC技术的方法不仅准确、速度快、操作简单，而且可靠性高，为果汁质量的检测提供了可靠的方法。
固相萃取-高效液相色谱法测定果醋中7种有机酸
固相萃取-高效液相色谱法测定果醋中7种有机酸薛霞;霍艳敏;王骏;张卉;祝建华【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2012(033)014【摘要】目的：建立果醋中7种有机酸同时测定的高效液相色谱方法。
方法：用水提取果醋中有机酸，后经LC-SAX固相萃取柱净化，以AtlantisT3cts色谱柱进行分离，二极管阵列检测器检测。
结果：在优化色谱条件下，7种有机酸在15min内分离良好，各组分回收率在97．5％～105．1％，相对标准偏差不大于1．31％，最低检出限在0．30～1．80μg／mL范围。
结论：该方法具有简便、快速、准确等优点，可应用于果醋中有机酸的测定。
【总页数】4页(P247-250)【作者】薛霞;霍艳敏;王骏;张卉;祝建华【作者单位】山东省产品质量监督检验研究院,国家加工食品质量监督检验中心山东,山东济南250103;山东省产品质量监督检验研究院,国家加工食品质量监督检验中心山东,山东济南250103;山东省产品质量监督检验研究院,国家加工食品质量监督检验中心山东,山东济南250103;山东省产品质量监督检验研究院,国家加工食品质量监督检验中心山东,山东济南250103;山东省产品质量监督检验研究院,国家加工食品质量监督检验中心山东,山东济南250103【正文语种】中文【中图分类】O657.7【相关文献】1.固相萃取-超高效液相色谱法测定黄酒中的有机酸 [J], 王琳;陈双;徐岩2.反相高效液相色谱法测定苹果醋中的有机酸 [J], 赵芳;孙国伟;郭志伟3.固相萃取-高效液相色谱法测定蜂蜜中的有机酸 [J], 朱晓玲;叶飞;杨洁;肖潇;文红;刘睿4.固相萃取-高效液相色谱法测定红糖中有机酸 [J], 陈其钊; 陈嘉敏; 陈红香; 王桂华; 李家威; 余构彬5.固相萃取-高效液相色谱法测定酱油中的7种有机酸 [J], 谭丽贤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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制， 水果 中的营养物质 的含量就受 到一定 的影 响 ， 从而
色泽及生物稳定性 ，所 以对水果 中有机酸的检测具有 重要意义， 的测定也是国内外关注 的问题之一 。目 它 前， 对有机 酸 的检测 方法 多种多 样［］ ５， － 检测 的对 象也 ７ 很多［ 但这些方法普遍 比较烦琐 ， 中有些 检测时间 ８ １ ， 其
摘 要 ： 立测 定 不 同品 种 梨 中主要 有机 酸 类 物质 的 高效 液相 色谱 法， 以 Ｃ８ 相 色谱 柱 、 建 在 ｌ 反 紫外 检测 器（ 长 ２０ ｍ） 波 ２ｎ ，
甲醇和磷酸盐缓 冲液（Ｈ＝ ．） ｐ ３０ 作为流动相梯度洗脱， 流速为 ０ Ｌｍｉ， ． ／ ｎ 柱温为 ３ ℃ 的 色谱 条件 下， ６ｍ ５ 一次 同时分析梨 中７种有机 酸仅 需 ５ ｉ， ． ｎ有机酸标准曲线相关 系数 均在 Ｏ ９ ５ｍ ．９ ９ ７以上， 回收率在 ８ ． ９ ． ２ ９％～ １ ２％之 间。 关键词 ： 反相 高效液相 色谱 ； 快速测定 ； 有机酸 ； 梨
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ａ ｕ ｎ ｉ ｔ ｅｈ ｇ ｅ ｏｍ ａ ｃ ｉｕ ｄ ｃ ｒ ｍａｏ ｒ ｐ ｙ ｍｅ ｈ ｄ ｗｉ ｓ ｒ ｃ ： ｑ ａ ｔｔ ｉ ｉｈ ｐ ｒ ｒ ｎ ｅ ｌ ｉ ｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｈ ｔｏ ｔ ＵＶ ｅｅ ｔ ｒｗａ ｅ ｅ ｏ ｅ ｒ ａｖ ｆ ｑ ｈ ｄ ｔｃｏ ｓｄ ｖ ｌｐ ｄ ｆ ｏ ｔ ｅｄ ｔｒ ｉａ ｉｎ ｏ ｅ ｅ ｒ ａ ｉ ｃｄ ｎ ｔｅｐ ａｓ Ａ ８ ｅ ｅ ｓ ｄ－ ｈ ｓ ｏｕ ｎｗａ ｐ ｌ ｄｗｉ ｔ ａ ｏ－ ｈ ｅｅｍ ｎ ｔ ｆｓ ｖ ｎｏ ｇ ｎ ｃａ ｉｓｉ ｅ ｒ ． Ｃｌｒ ｖ ｒｅ ｐ ａ ｅｃ ｌｍ ｓａ ｐ ｉ ｔ ｍｅｈ ｎ ｌ ｏ ｈ ｅ ｈ
在人们 的 日常生活 中 ，水果 虽然 比不上菜 篮子 、
收ｌ改善人们的食 欲 ， １ 】 ， 调节酸碱平衡 ， 影响水果 的 口感 、
米袋子那么重要 ， 但它也是生 活中不可缺少 的一部分 。 水果 中含有多种营养 物质 ，其 中主要含有 ：碳 水化合 物、 维生素 、 无机盐 、 香物质 、 芳 色素 和有 机酸 ， 以水 所 果深受人们青睐 。 然而， 由于受到生长环境 和产地 的限
一＝ １ ６ ２
第１第期 詈 ２ ３ 卷
食 研究 Ｊ 发 民 岍 与 Ⅸ 明 ． 品 开 丌
检 分 测析
反相高效液相色谱法快速测定 梨中 ７ 种有机酸含量
田林锋， 胡继伟 ｜ ， 黄先飞， 李存雄， 林陶 （ 贵州师范大学 省 山地环境信息系统与生态环境保护重点实验室 ， 贵州 贵 阳 ５ ０ １ ５０ ）
ｐ ｏｐ ａｅｂ ｆ ｒ ｏｕｉｎ （ Ｈ＝ ．）ａ ｅｍｏ ｉ ｈ ｓ ｔ ｏ ａｅｏ ． ／ ｎ Ｔ ｅｃ ｌｍｎｔｍｐ ｒｔｒ ｈ ｓ ｈ ｔ ｕｆ ｌｔ ｅｓ ｏ ｐ ３０ ｓｔ ｂｌ ｐ ａｅａ ｆ ｗ ｒｔ ｆ ６ｍＬｍｉ． ｈ ｏｕ ｈ ｅ ａｌ ０ ｅ ｅａｕｅ
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