反相高效液相色谱法测定化妆品中的24种防腐剂
反相高效液相色谱法测定化妆品中防腐剂
反相高效液相色谱法测定化妆品中防腐剂谢华林;胡波年;苑世领;胡汉祥;李爱阳【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2004(34)6【摘要】采用反相高效液相色谱法测定化妆品中山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯等6种防腐剂,用Zorbax ODS(5μm,4.6 mmi.d.×150mm)柱,V(磷酸二氢钾):V(乙腈)为90:10作流动相,加入磷酸调pH值为2.0,检测波长为254 nm.样品用乙醇-水-冰乙酸(体积比为70:29.5:0.5)提取,回收率为90.8%～105.7%,相对标准偏差为3.1%～8.5%.【总页数】3页(P398-400)【作者】谢华林;胡波年;苑世领;胡汉祥;李爱阳【作者单位】中南大学,化学化工学院应用化学系,湖南,长沙,410083;湖南建材高等专科学校,化工系,湖南,衡阳,421008;湖南建材高等专科学校,化工系,湖南,衡阳,421008;山东大学,胶体与界面化学教育部重点实验室,山东,济南,250100;中南大学,化学化工学院应用化学系,湖南,长沙,410083;湖南建材高等专科学校,化工系,湖南,衡阳,421008【正文语种】中文【中图分类】TQ658【相关文献】1.反相高效液相色谱法测定化妆品中的24种防腐剂 [J], 武婷;王超;王星;马强;张帆;刘柳2.反相高效液相色谱法同时测定防晒化妆品中的防腐剂和防晒剂 [J], 李洁;康君行;吴大南3.反相高效液相色谱法测定化妆品中几种防腐剂 [J], 王健辉;胡家庆;张欣荣;尹笋君;刘小宇;杨峰4.反相高效液相色谱法测定食品中防腐剂和甜味剂探析 [J], 王棋棋5.反相高效液相色谱法联合测定食品中多种防腐剂、甜味剂及富马酸二甲酯 [J], 柏中波;王晶;张国莹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
反相高效液相色谱法测定化妆品中几种防腐剂
反相高效液相色谱法测定化妆品中几种防腐剂作者：王健辉， 胡家庆， 张欣荣， 尹笋君， 刘小宇， 杨峰， WANG Jian-hui， HU Jia-qing ， ZHANG Xin-rong， YIN Sun-jun， LIU Xiao-yu， YANG Feng作者单位：王健辉,张欣荣,尹笋君,杨峰,WANG Jian-hui,ZHANG Xin-rong,YIN Sun-jun,YANG Feng(第二军医大学药学院无机化学教研室,上海,200433)， 胡家庆,HU Jia-qing(海军医学研究所,上海,200433)， 刘小宇,LIU Xiao-yu(第二军医大学基碲部生物化学与分子生物学教研室,上海,200433)刊名：日用化学工业英文刊名：CHINA SURFACTANT DETERGENT & COSMETICS年，卷(期)：2009，39(2)被引用次数：1次1.中华人民共和国卫生部化妆品卫生规范 20022.SIRICHAI S.HASAJTTO C Separation of preservatives in cosmetic products by micellar electrokinetic chromatography 2004(12)3.OZTEKIN N.ERIM F B Determination of cationic surfactants as the preservatives in an oral solution and a cosmetic product by capillary electrophoresis 2005(05)4.MEMON N.BHANGER MI.KHUHAWER MY Determination of preservatives in cosmetics and food samples by micellar liquid chromatography 2005(07)5.DE ROSSI A.DESIDERIO C Fast capillary electrochromatographic analysis of parabens and 4-hydroxybenzoic acid in drugs and cosmetios 2002(19)6.龙朝阳.许秀敏食物中4种常用尼泊金酯的高效液相色谱法测定[期刊论文]-中国卫生检验杂志 2005(01)7.胡俊明.王骏反相离子对色谱法测定化妆品中溴硝丙醇等11种防腐剂[期刊论文]-色谱 1999(05)8.王萍.丁晓静胶束电动毛细管色谱快速测定化妆品中的防腐剂[期刊论文]-色谱 2005(03)9.谢华林.胡波年.苑世领反相高效液相色谱法测定化妆品中防腐剂[期刊论文]-日用化学工业 2004(06)10.张晓霞.周卯星.张高勇高效液相色谱法测定蛇床子萃取物中的蛇床子素[期刊论文]-日用化学工业 2006(06)1.期刊论文王超.马强.王星.WANG Chao.MA Qiang.WANG Xing反相高效液相色谱法同时测定化妆品中的16种激素-色谱2006,24(6)糖皮质激素对皮肤具有一定的嫩白作用,短时间使用含有糖皮质激素的化妆品可使皮肤光滑细腻、红润白嫩,有着较好的美容效果[1].但长期使用糖皮质激素,通过皮肤的吸收可引起全身的副作用,导致面部皮肤损害、骨质疏松、肌肉萎缩、生长发育迟缓、诱发或加重感染和消化性溃疡、情绪异常、代谢紊乱等各种不良反应.化妆品中添加雌激素、雄激素、孕激素等性激素能够在短时间内促进毛发生长,防止皮肤老化,有除皱、增加皮肤弹性等作用.但长久使用会导致色素沉积、产生黑斑、皮肤萎缩变薄,甚至具有致癌性,引发细胞癌、乳腺癌、卵巢癌等疾病.我国<化妆品卫生标准>[2]、<化妆品卫生规范>[3]和欧盟化妆品规程(Directive 76/768/EEC)[4]中均明确规定,糖皮质激素、雌激素、雄激素、孕激素等激素为化妆品组分中禁用物质.化妆品中激素的检验对于严格控制化妆品的产品质量,确保化妆品的使用安全,保障人民身体健康具有重要的意义.2.期刊论文郑艳明.郭新东.冼燕萍.杜志峰.罗海英.吴玉銮.李慧勇.ZHENG Yan-ming.GUO Xin-dong.XIAN Yan-ping.DU Zhi-feng.LUO Hai-ying.WU Yu-luan.LI Hui-yong化妆品中7种氟喹诺酮类药物的反相高效液相色谱法测定-分析测试学报2009,28(2)建立了反相高效液相色谱同时测定膏霜类化妆品中7种氟喹诺酮类药物(诺氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、双氟沙星)的方法.样品先用乙腈-水(0.1%甲酸)(体积比5 ∶ 95)溶液提取,经正己烷脱脂净化后用反相高效液相色谱法测定.添加水平为1.0 ～10.0 mg/kg时,回收率为87% ～108%,相对标准偏差为2.3% ～5.8%.结果表明,该法操作简便、灵敏、准确,适用于膏霜类化妆品中氟喹诺酮类药物的测定.3.期刊论文王小芳.王菁.任韧.虞爱旭.杨忠乔.孙华.Wang Xiao-fang.Wang Jing.Ren Ren.Yu Ai-xu.Yang Zhong-qiao.Sun Hua反相高效液相色谱法同时测定化妆品中的7种性激素-中国卫生检验杂志2008,18(11)目的:建立一种简单、准确、灵敏、同时测定化妆品中7种性激素(雌二醇、雌三醇、雌酮、睾酮、甲基睾酮、孕酮、己烯雌酚)的高效液相色谱检测方法.方法:样品经甲醇提取、净化后,在XTerra RP18色谱柱(5um,4.6 mm×150 mm)上,以水/甲醇/乙腈(50:30:20,v/v/v)为流动相,利用二极管阵列检测4.期刊论文武婷.王超.李楠.WU Ting.WANG Chao.LI Nan反相高效液相色谱法同时测定祛痘类化妆品中的禁用物质-色谱2006,24(6)建立了用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定祛痘类化妆品中禁用物质安体舒通、过氧化苯甲酰和维A酸的含量.采用甲醇超声提取,HPLC法分离测定.3种被测物在11 min内均得到良好的分离.在1～200 mg/L范围内其浓度与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.999 9);在添加质量浓度为1～10 mg/L时,回收率为88.2%～106.7%,相对标准偏差小于3.1%;最低检出限(S/N=3)为安体舒通0.101 μg,过氧化苯甲酰0.100 μg,维A酸0.107 μg.该法简便、快速、准确,可用于祛痘类化妆品中以上3种禁用物质的检测.5.期刊论文缪晓琴.金抒反相高效液相色谱法测定化妆品中的3-O-乙基维生素-日用化学工业2008,38(4)采用反相高效液相色谱法测定化妆品中的3-O-乙基维生素C,色谱条件:SHIMADZU Shim-pack VP-C18ODS(150 mm×4.6/mm,5μm)色谱柱;C18ODS保护柱芯;流动相V(甲醇):V(0.025 mol/L KH2PO4)=20:80;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;紫外检测器检测,检测池温度:40℃,波长:254 nm.结果表明,在此条件下,3-O-乙基维生素C在0～100 mg/L与相应的峰面积具有良好的线性关系(r=0.999 2),线性回归方程为A=31.170 3ρ,回收率在97.75%～100.60%,方法精密度RSD约为2.6%(n=5).6.期刊论文马杰.林雏宣.MA Jie.LIN Wei-xuan反相高效液相色谱法测定化妆品中的几种防晒剂-日用化学工业2010,40(3)采用反相高效液相色谱法测定化妆品中的10种防晒剂,用色谱柱为Waters Symmetry shield C18柱(250mm ×4.6 mm i.d,5 μm),V(甲醇):V(水)=85:15为流动相,检测波长310 nm,回收率为98.1%～101.0%,相对标准偏差小于5%.7.期刊论文何瑞云.王超.李楠.王星.武婷.陈娟.HE Rui-yun.WANG Chao.LI Nan.WANG Xing.WU Ting.CHEN Juan反相高效液相色谱法测定化妆品中11种禁用和限用有机含氯化合物-日用化学工业2008,38(5)建立了反相高效液相色谱法同时测定化妆品中11种禁用和限用有机含氯化合物的方法.以甲醇和柠檬酸水溶液为流动相(pH=2.56)进行梯度洗脱,Kromasil反相C18柱为分离柱,柱温42℃,采用程序可变波长检测,11种含氯化合物在20 min内被检出.检出限0.052 mg/L～0.498 mg/L(S/N=3),低、中、高3种质量浓度水平的加标回收率88.0%～109.2%,线性相关系数均在0.999 8以上.8.期刊论文谢华林.胡波年.苑世领.胡汉祥.李爱阳反相高效液相色谱法测定化妆品中防腐剂-日用化学工业2004,34(6)采用反相高效液相色谱法测定化妆品中山梨酸、苯甲酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯等6种防腐剂,用Zorbax ODS(5μm,4.6 mmi.d.×150mm)柱,V(磷酸二氢钾):V(乙腈)为90:10作流动相,加入磷酸调pH值为2.0,检测波长为254 nm.样品用乙醇-水-冰乙酸(体积比为70:29.5:0.5)提取,回收率为90.8%～105.7%,相对标准偏差为3.1%～8.5%.9.学位论文武婷化妆品中功能成分的检测技术研究2006本论文采用高效液相色谱法建立了三种化妆品检测方法，分别用于检测化妆品中芦荟蒽醌类、祛痘类禁用物质和四环素类抗生素三类物质的含量。
高效液相色谱法同时测定化妆品中12种防腐剂
［关键词 】高效 液相 色谱 法 ：化妆 品 ：防腐 剂
［中图 分类 号］ＴＱ
ｆ文献标 识码 １Ａ
［文章 编 号】１００７—１８６５（２０１８）０２—０１８１－０４
Ｓｉｍ ｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ｄ ｅｔｅｒｍ ｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ １ ２ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ ｉｎ Ｃｏｓｍ ｅｔｉｃｓ ｂｙ Ｈ ＰＬＣ
Ｚｈａｎｇ Ｆｅｉ ，Ｈｕａ Ｘ ｉａ （１．Ｓｉｃｈｕａｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｃｈｅｎｇｄｕ ６ １ ００４ １：２．Ａｎｋａｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ａｎｋａｎｇ ７２５０００，Ｃｈｉｎａ）
Ｋ ｅｙｗｏｒｄｓ：ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒ ｍ ａｎｃｅ Ｉｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍ ａｔｏｇｒａｐｈｙ： ｃｏｓｍ ｅｔｉｃｓ： ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ
防 腐剂 是化 妆 品中 为抑制 微生 物 生长 而加入 的物 质【 。化 妆 品 中富 含 多种 营养成 分 ，易滋 生微 生物 而 腐败 变质ｌ 】，部 分 商家 向 化妆 品 中添加 防腐 剂来 延长 产 品货 架期 【６＿ 。但 防腐 剂 的超剂 量 使 用会 使人 们使 用化 妆 品后 发生接 触 性皮 炎 、皮肤 过 敏等 不 良反 应 Ｉ９＿Ｉ 。 目前 ， 随着 人们 生 活 水平 的逐 步 提 高 ，化妆 品成 为不 町 缺 少的 日常 消 费品 ，超 剂量 防腐 剂 的添加 将给 消 费者 的 身心健 康 带来 巨大 的安全 隐患 ［１３－１４］。
ｌ 试 部 分
１．１仪 器 与试剂 Ｓｈｉｍａｚｕ ＬＣ一２０３０Ｃ ３Ｄ 型高 效液相 色谱 仪 ：ＡＵＷ２２０Ｄ 型 电
高效液相色谱法测定膏剂化妆品中的甲醛释放类防腐剂
高效液相色谱法测定膏剂化妆品中的甲醛释放类防腐剂李彦博;赵晓冬;陆军;郭春梅;陈晓辉【摘要】建立了同时测定膏剂化妆品中1,3-二羟甲基-5,5-二甲基乙内酰脲(DMDMH)、1-羟甲基-5,5-二甲基乙内酰脲(1-MDMH)和5,5-二甲基乙内酰脲(DMH)的高效液相色谱法.采用Waters Atlantis T3 C18液相色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈+0.1％甲酸溶液,流速1.0 mL/min,梯度洗脱;二极管阵列检测器,检测波长210 nm;柱温35℃.结果表明,DMDMH,1-MDMH和DMH质量浓度分别在17.86 ～ 595.20,17.65 ～588.39和18.05～601.67 mg/L 范围内与相应的峰面积具有良好的线性关系,相关系数分别为0.999 5,0.999 7和0.999 8,空白样品加标回收率分别为82.6％～106.2％,98.4％～ 110.7％和98.6％～ 113.0％.【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2015(045)005【总页数】4页(P294-297)【关键词】化妆品;高效液相色谱法;防腐剂【作者】李彦博;赵晓冬;陆军;郭春梅;陈晓辉【作者单位】沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016;辽宁省食品检验检测院理化所,辽宁沈阳110015;辽宁省药品检验检测院化妆品室,辽宁沈阳110023;辽宁省药品检验检测院化妆品室,辽宁沈阳110023;辽宁省药品检验检测院化妆品室,辽宁沈阳110023;沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016【正文语种】中文【中图分类】TQ658;TQ047.6化妆品中一般都含有丰富的营养物质，特别是近年来越来越多活性功效成分的加入使化妆品越来越容易受到微生物污染，从而破坏化妆品的感官和品质，危害消费者的健康。
甲醛缓释体防腐剂作为最早被广泛使用的防腐剂之一，已经有几十年的使用历史，其防腐效果已经获得了广泛的认同。
高效液相色谱法测定化妆品中7种4—羟基苯甲酸酯
高效液相色谱法测定化妆品中7种4—羟基苯甲酸酯作者：林晓佳何敏恒陈晓珍刘信嘉汪晨霞许丽珠吴钟玲来源：《当代化工》2017年第06期摘要：建立了对膏霜类、乳液类、水类、啫喱类和粉类化妆品产品4-羟基苯甲酸丙酯、4-羟基苯甲酸异丙酯、4-羟基苯甲酸丁酯、4-羟基苯甲酸异丁酯、4-羟基苯甲酸苯酯、4-羟基苯甲酸苄酯、4-羟基苯甲酸戊酯的高效液相色谱测定方法。
样品经Agilent Poroshell C18 （2.7 μm， 10 mm×4.6 mm）色谱柱，以乙腈/水为流动相进行检测。
在优化条件下，7种4-羟基苯甲酸酯的在0.10 ～ 50.0 mg/L范围内线性良好，相关系数（R2）均>0.999，方法回收率为85.1 %～106 %。
该方法检出限（波长252 nm， S/N=3）均为2 mg/kg，方法定量限（波长252 nm， S/N=10）均为6 mg/kg。
该方法操作简便，灵敏度高，可满足化妆品中7种4-羟基苯甲酸酯的测定。
关键词：化妆品；4-羟基苯甲酸酯；高效液相色谱法；防腐剂中图分类号：O 657 文献标识码： A 文章编号： 1671-0460（2017）06-1256-04Determination of Seven Parabens in Cosmetics by HighPerformance Liquid ChromatographyLIN Xiao-jia， HE Min-heng， CHEN Xiao-zhen， LIU Xin-jia， WANG Chen-xia， XV Li-zhu，WU Zhong-ling（Guangzhou Quality Supervision and Testing Institute，Guangdong Guangzhou 511447，China）Abstract： A method was established for determination of seven parabens including propyl 4-hydroxybenzoate， isopropyl 4-hydroxybenzoate， butyl 4-hydroxybenzoate， isobutyl 4-hydroxybenzoate， phenyl 4-hydroxybenzoate， benzyl 4-hydroxybenzoate， n-pentyl 4-hydroxybenzoate in cosmetics by HPLC（high performance liquid chromatography）. The samples were separated by Agilent Poroshell C18 （2.7 μm， 10 mm×4.6 mm） column， and determined with the mobile phase of acetonitrile/water. Under optimized conditions， seven parabens had good linear relationships in the range of 0.10 ～ 50.0 mg/L with the correlation coefficients of greater than 0.999，the recoveries were 85.1% ～106%. The limits of determination（LOD）（wave length was 252 nm，S/N=3） were 2 mg/kg；The limits of quantification（LOQ）（wave length was 252 nm，S/N=10） were 6 mg/kg. The method is simple， accurate， sensitive， which can be suitable for determination of seven parabens in cosmetics.Key words： Cosmetics；Parabens； High Performance liquid chromatography；Preservatives在中国宏观经济快速发展的环境下，化妆品及美容行业在中国得到迅速发展，并且保持着快速增长。
反相离子对色谱法测定化妆品中溴硝丙醇等11种防腐剂.
卡松是 氯 甲基 异噻唑 噻唑
Η Η 酮的混合物 ∀
Η 酮和 甲基 异
所示质量浓度的标准储备液 再用标准
Η
流动相
尼泊金甲酯即对羟基苯甲酸甲酯 其余依此类推 ∀
ισ ο ισ ο
Ù 磷酸二氢钠 Β ς 甲醇 Β ς 乙腈
结果与讨论
精密度和回收率 取不同类型的样品作为本底 分别加入低质量
浓度和高质量浓度的防腐剂 测定其精密度及回收
图
Φιγ 卡松
标准色谱图
οφ στανδαρδ σα λ ε
率 结果见表 ∀
苯甲醇 尼泊 尼泊金乙 尼泊
Χηρο ατογ ρα
样品的实际分析 用此方法对部分化妆品产品进行分析 并与其
溴硝 丙 醇 苯氧基乙醇 苯甲酸 尼 泊 金 异 丙 脂 ισο 尼 泊 金 异 丁 脂 ισο
∀
配方进行比较 结果见表 ∀
金 甲酯 酯
讨论 利用本法测定化妆品中的防腐剂 样品预处理
金 丙酯
操作简便 回收率高 色谱重复性好 分离速度快 ∀在 实验中发现脱氢乙酸和山梨酸对苯甲酸的测定有干 扰 当干扰组分在未知试样中同时存在时 可通过改
值为
∀
检测波长为
∀ 样品用甲醇超声提取 回收率为
相对标准偏
关键词 反相离子对色谱法 化妆品 防腐剂 中图分类号 文献标识码 文章编号 表
Ταβλ ε
前言
化妆品中的防腐剂是为了防止细菌污染而加入 的一种添加剂 ∀由于防腐剂种类繁多 且均有一定毒 性 因此我国化妆品卫生标准规定了 建立了 种防腐剂 种防腐剂检 以上 有很强 的使用限量 ∀为了给化妆品的检验 监督工作提供科 学依据 我们参照文献 测的反相离子对色谱法 ∀这 种防腐剂可覆盖市售
反相高效液相色谱法测定化妆品中的24种防腐剂
通过全波长扫描可得到２４种物质各自的吸收图谱。综合各物质在不同波长下的响应值和不同波 长对基线的影响，最终确定采用程序可变波长进行扫描（见表２），即根据不同组分的出峰顺序，在不同 时间段，分别用各组分的最佳吸收波长进行检测，从而提高检测的灵敏度，达到最佳的扫描效果。 ３．３样品提取方法的选择 ３．３．１样品提取溶剂的选择在相同的色谱条件下，比较了甲醇、乙醇、四氢呋喃和流动相等４种溶 剂对不同种类化妆品（膏霜类、水类、同体类）的提取效果。结果表明，乙醇和四氢呋喃提取后的色谱图 在２．０～４．５ ｍｉｎ的色谱峰的峰形欠佳，无法准确计算溴硝丙醇和水杨酸的含量，而流动相提取口红时， 不能将口红完全溶解，且在２８．２６ ｍｉｎ时基线干扰较大，影响被钡４物质含量的测定。从提取结果可看 出，乙醇、四氢呋喃和流动相对某些物质的提取率偏低，而甲醇对各物质的提取率都较高，提取效果最 佳，因此选择甲醇作为样品超声提取的溶剂。 ３．３．２超声波提取时间的选择研究了ｌＯ一６０ ｍｉｎ不同时间段内，超声波的提取率。发现３０ ｍｉｎ以 上对提取率没有明显增大，且随着超声时间的延长，会使超声波仪器内的水温上升，导致某些易挥发的 成分挥发，反而降低了提取率。所以，综合考虑，选择３０ ｍｉｎ为超声提取时间。图ｌ是２４种防腐剂在 确定的色谱条件下的液相色谱图。 ３．４线性关系、检出限、回收率和精密度
在确定的最佳分离色谱条件下，配制一系列不同浓度的混合标准溶液进行色谱测定，以各组分的峰 面积（ｙ）对浓度ｘ（ｍｇ／Ｌ）绘制标准曲线。当信噪比（－ｓ／Ⅳ）为３时，测得各防腐剂组分的检出限。各组 分的线性方程、相关系数和检出限见表３。
90365-仪器分析-反相高效液相色谱法测定化妆品中的防腐剂 (2)
反相高效液相色谱法测定化妆品中的防腐剂一实验目的1 了解高效液相色谱结构及工作原理及评价色谱柱方法2掌握反相高效液相色谱法及键合固定相的原理3掌握反相高效液相色谱法流动相的优化方法4掌握反相高效液相色谱法测定化妆品中的防腐剂二实验原理根据键合固定相与流动相相对极性的强弱，可将键合液相色谱法分为正相和反相法。
在正相键合液相色谱法中，固定相的极性大于流动相的极性，适用于分离油性或水溶性的极性和强极性化合物；在反相键合液相色谱法中，固定相的极性小于流动相的极性，适用于分离非极性、极性或离子型化合物，其应用范围比正相键合液相色谱法更广泛。
根据统计在高效液相色谱法中，约70%--80%的分析任务皆由反相键合液相色谱法来完成的。
评价色谱柱方法有：柱效（理论塔板数n）、容量因子（k’）、相对保留值（选择因子α）、分离度（R）。
为达到好的分离，我们希望n、α和R s值尽可能大，一般的分离（如α=1.2，R s=1.5），需n达到2000。
柱压一般为104 kPa 或更小一些。
1反相键合固定相色谱法的分离原理：它包括分配及吸附色谱原理（1）分配色谱原理假设在由水和有机溶剂组成的混合溶剂流动相中，极性弱的有机溶剂分子中的烷基官能团会被吸附在非极性固定相表面的烷基官能团上，而溶质分子在流动相中被溶剂化，并与吸附在固定相表面上的弱极性溶剂分子进行置换，从而构成溶质在固定相和流动相中的分配平衡。
Kp=Cs/Cm（2）吸附色谱原理当溶质分子进入极性流动相后，即占据流动相中相应的空间，而排挤部分溶剂分子，当溶质分子被流动相推动与固定相接触时，溶质分子的非极性部分（或非极性分子）会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开，而直接与非极性固定相上的烷基官能团相结合（吸附）形成締合物，构成单分子吸附层。
这种疏溶剂的斥力作用是可逆的，当流动相极性减少时，这种斥力下降，会发生解缔，并将溶质分子释放而被洗脱下来。
烷基键合固定相对每种溶质分子締合作用和解締作用能力之差，就决定了溶质分子在色谱过程的保留值。
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反相高效液相色谱法测定化妆品中的24种防腐剂
建立了同时检测化妆品中24种防腐剂含量的反相高效液相色谱法（RP2HPLC）。
采用KromasilC18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，以磷酸盐缓冲溶液（pH=4.26）为流动相，梯度洗脱。
样品经甲醇超声提取，然后采用RP2HPLC2二极管阵列检测法测定，对样品前处理和色谱条件进行研究和优化。
1引言化妆品中的防腐剂是为了使化妆品在生产、使用和保存过程中免受微生物污染的一类化妆品添加剂。
但大多数防腐剂对人的皮肤会产生不同程度的刺激。
因此，化妆品中防腐剂的用量必须以安全性作为前提。
我国《化妆品卫生规范》对化妆品中防腐剂的使用浓度和范围做了相关的规定。
目前，国内外对化妆品中防腐剂的测定一般多采用高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱质谱法、胶束电动色谱法、毛细管电泳法和伏安法等，而同时测定的防腐剂一般仅为4～8种，最多可同时测定18种，采用的方法均为气相色谱-质谱法。
本实验研究了化妆品中的24种常用防腐剂的样品前处理方法和HPLC分离条件，建立了化妆品中24种常用防腐剂同时检测的HPLC法。
结果表明，本方法简便、快速、准确，应用于实际化妆品中防腐剂的测定，结果满意。
2实验部分2.1仪器与试剂高效液相色谱仪（美国Agilent1100系列），由四元低压泵、柱温箱、二极管阵列检测器及自动进样器组成；KQ-600型超声波清洗仪器（昆山市超声仪器有限公司）。
对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、水杨酸、5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮、苯甲醇、苯氧基乙醇、4-氯-3-甲苯酚、三氯生及三氯卡班（Sigma公司）；苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯、苯甲酸苯酯及溴硝丙醇（AcrosOrgnics公司）；2，4-二氯-3，5-二甲酚、对羟基苯甲酸异丙酯、2-苯酚、4-氯-3，5-二甲酚、对羟基苯甲酸异丁酯及2-苄基-4-氯酚（东京化成工业株式会社）；苯甲酸、山梨酸（国家标准物质中心）。
乙腈为色谱纯，甲醇为优级纯；无水乙醇、四氢呋喃等试剂均为国产分析纯；Millipore超纯水。
2.2标准品混合溶液和供试品溶液的制备分别准确称取一定量的24种防腐剂标准品，用甲醇溶液定容，配制成2g/L的标准储备液。
分别移取一定体积的上述标准储备液至100mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配成混合标准储备液。
准确称取化妆品0.2g（精确到0.001g）于50mL锥形瓶中，加入10mL甲醇，超声提取30min，取部分溶液放入离心管中，在离心机上以5000r/min高速离心10min后，取上清液经0.22μm滤膜过滤，滤液供RP-HPLC检测。
2.3色谱条件色谱柱：伊利特KromasilC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：A.甲醇，B.0.025mol/LNaH2PO4溶液，pH4.26。
线性梯度洗脱条件见表1。
流速：1.0mL/min；柱温：25℃；检测波长：程序可变波长扫描；进样量：10μL。
3结果与讨论3.1流动相的选择3.1.1缓冲溶液pH的选择在24种防腐剂中，受pH影响的只有苯甲酸、山梨酸和水杨酸。
因此，着重考察了不同pH值（2.5～5.5）对以上3种酸分离情况的影响。
发现在pH4.26时，苯甲酸、山梨酸和水杨酸能与溴硝丙醇、苯甲醇、苯氧基乙醇和对羟基苯甲酸甲酯达到很好的分离，峰形良好。
3.1.2NaH2PO4浓度的选择在考察了0.01、0.025和0.05mol/LNaH2PO4溶液对分离的影响后，发现0.025mol/LNaH2PO4可达到较好的分离，且峰形良好。
3.2检测波长的选择通过全波长扫描可得到24种物质各自的吸收图谱。
综合各物质在不同波长下的响应值和不同波长对基线的影响，最终确定采用程序可变波长进行扫描，即根据不同组分的出峰顺序，在不同时间段，分别用各组分的最佳吸收波长进行检测，从而提高检测的灵敏度，达到最佳的扫描效果。
3.3样品提取方法的选择3.3.1样品提取溶剂的选择在相同的色谱条件下，比较了甲醇、乙醇、四氢呋喃和流动相等4种溶剂对不同种类化妆品（膏霜类、水类、固体类）的提取效果。
结果表明，乙醇和四氢呋喃提取后的色谱图在2.0～
4.5min的色谱峰的峰形欠佳，无法准确计算溴硝丙醇和水杨酸的含量，而流动相提取口红时，不能将口红完全溶解，且在28.26min时基线干扰较大，影响被测物质含量的测定。
从提取结果可看出，乙醇、四氢呋喃和流动相对某些物质的提取率偏低，而甲醇对各物质的提取率都较高，提取效果最佳，因此选择甲醇作为样品超声提取的溶剂。
3.3.2超声波提取时间的选择研究了10～60min不同时间段内，超声波的提取率。
发现30min以上对提取率没有明显增大，且随着超声时间的延长，会使超声波仪器内的水温上升，导致某些易挥发的成分挥发，反而降低了提取率。
所以，综合考虑，选择30min为超声提取时间。
图1是24种防腐剂在确定的色谱条件下的液相色谱图。
3.4线性关系、检出限、回收率和精密度在确定的最佳分离色谱条件下，配制一系列不同浓度的混合标准溶液进行色谱测定，以各组分的峰面积（Y）对浓度X（mg/L）绘制标准曲线。
当信噪比（S/N）为3时，测得各防腐剂组分的检出限。
各组分的线性方程、相关系数和检出限。
称取3种经测定含防腐剂较少，且基线干扰较小的化妆品0.2g（精确到0.001g），分别添加高、中、低3个浓度水平的混合标准溶液，每种样品重复6次，按上述实验条件进行样品处理和测定，计算回收率和精密度。
3.5实际样品分析用所建立的检测方法，对膏霜类、水类和固体类等9个实际化妆品样品进行测定，以标准样品色谱图中各防腐剂的保留时间对化妆品中的防腐剂进行定性，以样品中各防腐剂色谱峰的峰面积与标准曲线相对应进行定量分析。
表4仅列出了9个化妆品中检测出的9种防腐剂的结果（其余15种防腐剂均未检出）。
从结果可以发现，大多数化妆品中都含有对羟基苯甲酸酯类和苯氧基乙醇，其它种类的防腐剂较少。
其中以对羟基苯甲酸甲酯最常见，含量也较高。
综上所述，采用超声波提取，高效液相色谱分析，程序可变波长检测，同时测定化妆品中24种常用防腐剂含量的方法，操作简便，结果可靠。
用于化妆品质量控制，及进出口化妆品检验具有重要意义。