影响测定反相高效液相色谱流动相pH值的因素
反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸
反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸黄慧敏;张伟国【摘要】Reversed phase HPLC method was applied to determine organic acid in malic acid fermentation liquor in this paper. The chromatographic conditions are finally conformed to apply to all kinds of organic acid content deter-mination in the fermentation. The conditions are as follows：COSMOSIL 5C18 - PAQ column （4.6 mm I.D. × 250 mm） was used at 23℃. UV detection wavelength was 210 nm. Solution containing 1% acetonitrile and 20mmol/L KH2PO4 at pH 2.8 was used as mobile phase with flow rate of 0.5 mL/min. The seven organic acids in malic acid fermentation liquor were preferably separated under these conditions. The recovery ratio was 94.2% - 102.7% and the method had good accuracy and precision.%采用反相高效液相色谱法分析测定苹果酸发酵液中的有机酸，最终确定了适用于发酵液中各种有机酸含量测定的色谱条件，色谱柱：COSMOSIL5C18-PAQ（4．6mmI．D．×250mm）；紫外检测波长：210nm；流动相：1％乙腈-20mmol／L KH2PO4溶液（pH2．8）；流速：O．5mL／min；柱温：23℃。
液相色谱分离度影响因素
液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）的分离度是衡量样品中化合物分离的能力，它取决于多个因素。
以下是液相色谱分离度影响的主要因素：
柱填料性质：柱填料的性质直接影响分离度。
包括柱填料的化学性质、表面性质、孔径大小和密度等。
不同的填料可以选择性地吸附和分离化合物，影响分离度。
流动相组成：流动相的成分对分离度有很大影响。
不同的溶剂、缓冲盐和酸碱条件，以及它们的浓度和比例选择都会对分离度产生影响。
流速：流速是溶液在色谱柱中通过的速度。
较低的流速有助于提高分离度，因为它提供更多的时间进行分离。
然而，过低的流速可能导致分析时间过长。
柱温：柱温影响分离度和分离速度。
温度的升高可以提高分离速度，但要注意温度对填料和样品的稳定性的影响。
pH值：样品的pH值可以影响化合物的离子状态，进而影响分离度。
pH值的调节可以改变离子交换色谱和亲水性相互作用等分离机制。
柱长度和内径：柱的长度和内径对分离度有一定影响。
柱长度的增加可以提高分离度，但同时也会延长分析时间。
较小的柱内径可能提高效率，但也需要考虑液相压力和样品负载量的限制。
注入量：样品的注入量过大会导致峰形变宽和峰分离不清晰，从而降低分离度。
注入量的选择应根据柱填料和样品的特性进行优化。
除了上述因素，还有其他因素如溶剂纯度、洗脱梯度程序和系统的稳定性等也会对液相色谱的分离度产生影响。
因此，在设计和优化液相色谱方法时，需要综合考虑这些因素以达到最佳的分离效果。
简述高效液相色谱法中流动相的要求
简述高效液相色谱法中流动相的要求高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种用于分离和分析化学、生物和制药样品的色谱技术。
在高效液相色谱过程中，流动相的选择和性能对分析的准确性和分离效果有着重要的影响。
下面将详细介绍高效液相色谱法中流动相的要求。
1.基础流动相特性：流动相应具有一定的极性和溶解性能。
常用的流动相包括水和有机溶剂，如甲醇、乙醇和乙腈等。
流动相的选择应考虑到待分离组分的性质和分析目的，要保证样品能够溶解并很好的分离。
常用的流动相配比为水/有机溶剂（如乙腈）的比例，比如常见的70:30、50:50等。
2.pH值调节：根据待分离物和色谱柱的性质，适当调节流动相的pH值可以改变待分离物的电离状态，从而影响它们在色谱柱上的分配行为。
比如，对于具有酸性基团的分析物，可以通过酸或碱的加入来调节流动相的pH值，以影响它们与色谱固定相之间的相互作用。
3.离子强度调节：有些样品中可能存在电解质，其离子强度会对分离产生影响。
在这种情况下，可以通过添加相应的盐来调节流动相的离子强度，以改变分析物与色谱固定相的相互作用。
常用的盐有甲酸铵、硫酸铵、三氟乙酸等。
4.流速控制：流动相的流速也对色谱分离的效果有着重要的影响。
流速过快可能导致分离不充分，流速过慢则会增加分析时间。
流速的选择需根据待分离物的性质、色谱柱的尺寸和色谱仪的性能等因素综合考虑。
5.除气和过滤：流动相中的气泡和杂质会影响液相的流动性和检测信号的稳定性。
因此，在使用前应对流动相进行除气处理，以减小气泡对色谱分离的干扰。
同时，对流动相进行过滤处理，可以去除其中的固体颗粒和微生物等。
通常使用0.45μm的滤膜进行过滤。
6.流动相稳定性：流动相应具有良好的稳定性，以保证分析结果的准确性和重复性。
一般来说，流动相中的溶液成分要充分溶解，不发生相分离和析出现象。
所以，流动相的配制要求严格，要遵循相应的配方和混合方法，并在使用前进行充分的搅拌和均匀。
高效液相色谱流动相
高效液相色谱流动相高效液相色谱的流动相(Mobile Phase)液相色谱流动相通常是各种低沸点溶剂和水溶液。
与气相色谱相比较，液相色谱流动相不仅可选择范围比较大，而且它是影响分离的一个非常重要的可调节因素。
在实际工作中，流动相的选择和优化是确定色谱分析的主要工作。
一、流动相溶剂的选择高效液相色谱中所选用的流动相溶剂必须能保证该色谱系统的分离过程可重复进行:溶剂的纯度和化学特性必须满足色谱过程的稳定性和重复性的要求;溶剂应当不干扰检测器的工作;在制备分离中, 溶剂应当易于除去, 不干扰对分离组分的回收。
从实用角度考虑，溶剂应当价格低廉，容易购得，使用安全，纯度要高。
对液相色谱溶剂的要求: 1)溶剂要有一定的化学稳定性, 不与固定相和样品组分起反应。
2)溶剂应与检测器匹配，不影响检测器正常工作。
3)溶剂对样品要有足够的溶解能力，以提高检测灵敏度。
4) 溶剂的粘度要小，保证合适的柱压降。
5) 溶剂的沸点低，有利于制备色谱的样品回收。
液相色谱流动相溶剂的选择步骤选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等选择合适洗脱强度的溶剂:简单样品，2 ? k'? 5;复杂样品，0.5 ? k'? 20 改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值二、表征溶剂特性的重要参数 1)溶剂沸点、分子量、相对密度、介电常数、偶极距、折射指数、紫外吸收截止波长、与液相色谱分离密切相关的最重要的溶剂特性参数是溶剂强度参数?? ，溶解度参数?? ，极性参数P'和粘度η。
2) 溶剂洗脱强度溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力。
在吸附色谱中, "溶剂洗脱强度"与溶剂极性成正比;而在反相色谱中，溶剂极性越大, 洗脱能力越小。
在液相色谱常用混合溶剂作流动相。
混合溶剂的P'具有加和性: P'ab= ??aP'a，?? bP'b , ??为某一溶剂的体积分数。
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢
关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生命科学、化学、医药、环境等多个领域。
其中，流动相的选择对于色谱分离性能和分析结果的准确性有着重要的影响。
一、流动相的组成流动相是指用于在高效液相色谱仪中运载样品溶液，推动样品通过固定相柱的溶剂体系。
一般情况下，流动相由溶剂和缓冲剂组成。
溶剂用于将样品带入色谱柱，而缓冲剂则用于调整流动相的pH值。
在选择流动相的溶剂时，主要要考虑以下因素：1.溶剂极性：色谱柱的固定相特性和待分析的样品特性决定了所需的溶剂极性。
一般来说，溶剂可以选择非极性溶剂、极性溶剂或者两者的混合物，以适应不同的分析要求。
2.溶剂选择：常用的溶剂包括甲醇、乙醇、丙酮、乙腈等有机溶剂，以及水。
甲醇和乙腈是最常用的有机溶剂，由于它们的极性较低，因此溶解性广泛。
水是最常用的极性溶剂，可以提供更好的分离效果。
3.透过性：一些样品需要在其中一种溶剂中分离，因此选择适当的溶剂对于分析结果的准确性至关重要。
在选择缓冲剂时，需要考虑以下因素：1.pH值的调整：一些分析需要在特定的pH值下进行，需选择合适的缓冲剂，以维持所需的pH值。
2.缓冲能力：缓冲剂应具有良好的缓冲能力，以维持流动相的pH值的稳定性，避免pH值对分离效果的干扰。
3.溶解度：缓冲剂应具有较高的溶解度，以便在高浓度下使用，从而提供稳定的pH值。
二、常用的流动相系统1.等相流动相系统（Isocratic elution）：等相流动相系统是指流动相组成在整个分析过程中保持不变。
这种系统适用于分离度较差的样品，具有简单、稳定、易操作的特点。
2. 梯度流动相系统（Gradient elution）：梯度流动相系统是指在分析过程中，通过改变流动相组成来实现样品的分离。
这种系统适用于需要分离程度较高的样品，提供了更好的分离效果。
高效液相色谱常见故障及解决方案
高效液相色谱常见故障及解决方案1.压力过高或过低-压力过高可能是由于柱堵塞或流动阻力增加所致。
解决方案包括更换柱、清洗柱或检查管路是否存在问题。
-压力过低可能是由于泵的磁力搅拌器不工作或进样器封堵所致。
解决方案包括检查泵的磁力搅拌器是否工作正常，清洗进样器。
2.峰形不对称-峰形不对称可能是由于进样量不均匀或柱温度过高所致。
解决方案包括确保进样量均匀和降低柱温度。
3.峰尾或前肩-峰尾可能是由于柱温度过高、流速过快或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括降低柱温度、减慢流速或调整pH值。
-前肩可能是由于流动相中存在杂质或柱堵塞所致。
解决方案包括更换流动相或清洗柱。
4.杂峰或基线噪声-杂峰可能是由于样品纯度不高、固定相老化或试剂污染所致。
解决方案包括提高样品纯度、更换固定相或检查试剂是否污染。
-基线噪声可能是由于进样器密封不良、流动相气泡或电噪声所致。
解决方案包括检查进样器密封情况、减少流动相中的气泡或检查电子设备是否存在干扰。
5.柱寿命短-柱寿命短可能是由于样品预处理不彻底、柱收尾不当或流动相pH值不合适所致。
解决方案包括增加样品预处理步骤、正确收尾柱或选择合适的流动相pH值。
6.流量不稳定-流量不稳定可能是由于柱堵塞、进样器密封不良或流动相流速波动所致。
解决方案包括清洗柱、检查进样器密封情况或调整流动相流速稳定性。
7.进样量偏差-进样量偏差可能是由于进样器封堵、进样器针头磨损或进样器流速不稳定所致。
解决方案包括清洗进样器、更换进样器针头或调整进样器流速稳定性。
8.柱温度不稳定-柱温度不稳定可能是由于温控系统故障或环境温度变化所致。
解决方案包括检查温控系统是否工作正常或采取措施保持恒定环境温度。
这些是HPLC常见故障及其解决方案的例子。
在实际操作中，操作人员应该根据具体情况诊断和解决故障，并遵循相关的操作规程和安全操作指南。
液相色谱简介（反相）
高效液相色谱法（反相液相色谱）一、液相色谱法方法的分类和选择1、方法的分类：根据流动相和固定相极性的相对强弱，液相色谱法分为正相色谱法和反相色谱法。
两类色谱使用流动相极性顺序与物质的极性流出顺序恰好相反。
正相色谱法中通常固定相的极性较大，，如硅胶、氧化铝等，流动相极性小于固定相的极性。
实验时，流动相的选择从极性小到极性大递增，样品中极性弱的组分最先流出，随后是极性逐步增大的组分流出。
反相色谱中使用的固定相极性小，如C18键合的硅胶固定相，流动相的极性大于固定相的极性。
通常用水-甲醇作流动相时，样品中极性强的组分先流出，随后是极性较小的组分。
流动相的极性变化从最大的水开始，逐步增加甲醇的比例，流动相的极性逐步减弱。
在HPLC中应用最广泛的是反相分配色谱法（常称为反相色谱法）。
它是利用样品组分在流动相和固定相之间的溶解度之差进行分离。
在反相色谱柱中改变流动相组成、进行梯度淋洗和恢复柱子分配平衡容易实现，因此同一柱子可以长时间使用，柱效长久，重复性较好。
在反相色谱法中，极性大的组分先出峰，保留体积小，峰形扩散小，分离效率高，流动相价格便宜，毒性较小，容易得到。
正相色谱法大多利用吸附的原理进行分离，正相色谱法的柱子如使用强极性的流动相（如水、醇等溶剂）会使柱中吸附剂活性失去后很难恢复，特别是分离极性强的组分时，常常因为固定相的吸附作用使保留体积增大，引起峰的扩散和拖尾。
2、方法的选择：HPLC方法的选择主要取决于样品的组成、结构的类型、溶剂性能、相对分子质量范围等。
一般来讲相对分子质量大于2000的高分子化合物，主要采用凝胶色谱法进行分离。
相对分子质量小于2000的化合物可以利用它在水中和有机溶剂中的溶解度及溶解性质进行分离。
如极性大的水溶性化合物和在水中可解离的离子化合物，可用不同类型的色谱柱以离子色谱法进行分离；在水中溶解但不解离的化合物（如糖类）可用反相色谱法进行分离，以甲醇或乙睛-水作为流动相。
高效液相色谱法的原理及影响因素
高效液相色谱法的原理及影响因素高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种在液相中进行分离和分析的高效分析技术。
它具有高分辨率、高灵敏度、良好的线性范围和广泛的适用性。
以下是关于HPLC的原理和影响因素的详细介绍。
一、高效液相色谱的原理：高效液相色谱的原理基于物质在液态流动相中的分配和吸附特性，通过调节流动相的组成和性质，控制样品成分在固定相中的分离。
高效液相色谱的基本组成包括进样器、流动相系统、柱和检测器。
1.进样器：样品通过进样器引入色谱柱中。
进样器可以分为自动进样器和手动进样器两种类型。
2.流动相系统：流动相系统由溶剂混合器、溶剂泵和压力传递系统组成。
溶剂混合器用于混合不同溶剂的比例，以制备合适的流动相。
溶剂泵用于将流动相以一定的流速送入色谱柱中，常用的泵有恒压泵和梯度泵等。
3.柱：色谱柱是高效液相色谱的核心部件。
分离是通过样品成分在柱中的相互作用和分配系数的差异实现的。
色谱柱常见的填充物包括C18、C8和氨基硅胶等，不同填充物对于不同的样品具有不同的分离效果。
4.检测器：搭配不同的检测器可以对样品成分进行定性和定量分析。
常见的检测器包括紫外可见光谱检测器（UV）、荧光检测器（FLD）、电化学检测器和质谱检测器等。
五、高效液相色谱的影响因素：高效液相色谱的分离和分析结果受多种因素的影响，包括以下几个方面：1.流动相组成：流动相的组成直接影响样品成分在固定相上的分配系数，进而影响分离效果。
流动相的成分要根据样品的性质和需要进行选择。
常用的流动相包括纯溶剂、溶剂混合物和缓冲液等。
2.流动相性质：流动相的性质包括溶液的pH值、离子强度、流速和温度等。
其中，溶液的pH值和离子强度的变化可以影响分析物的离子态，进而影响分离效果。
流速的选择要根据分析物的种类和浓度进行调整。
温度的增加可以提高分子的扩散速度，加快分离过程。
3.色谱柱：色谱柱的类型、填充物和尺寸等也对分离效果有重要影响。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
９６
Modem Scientific Instruments 2005 1
４ 小 结
要准确调节流动相 ｐ Ｈ 值必须注意以下几点： １） 不能忽略 ２．４．２ 步骤，要仔细测好溶液温度，将 温度电位器调节好。 ２ ）由于高效液相色谱对流动相溶液的要求很严， 要求每次在配制流动相时的用水都必须是当天新鲜制 备的双蒸水（水的质量是至关重要的，否则会给后面的 色谱分离带来干扰）。刚烧好的双蒸水水温较高，一般 会达到 ４５℃，如果未让它冷却到室温就调节流动相 ｐＨ 值，会造成流动相 ｐ Ｈ 值的较大偏离，从而导致整个 色谱分析实验的偏差甚至失败。因此，刚烧好的双蒸 水一定要冷却到室温后再进行 ｐ Ｈ 值的调节。 ３）复合电极经较长时间使用，如发现仪器反应迟钝， 测量数字长时间飘移，不能稳定测量，一般情况很可能是 电极老化， 须更换新电极。它的使用寿命一般为一年。
柱 温：３０℃； 检测器：二极管阵列检测器； 检测波长：２１４ｎｍ； 流动相：０．４ｍｏＬ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４ 溶液，Ｈ３ＰＯ４ 调 ｐＨ 值至 ２．４。 在上述色谱条件下九种有机酸得到有效分离（见图 ２）。 ２．４ 流动相 ｐＨ 值调节 １） 酸度计电极插拔去 Ｑ９ 短路插；接上复合电极， 用蒸馏水冲洗电极，然后浸入邻苯二甲酸氢钾缓冲溶 液（ＧＲ 邻苯二甲酸氢钾 ２．５５ 克，溶解于 ２５０ｍＬ 的重蒸 馏水中）。 ２） 将“斜率”电位器顺时针旋到底，“选择”开 关置“Ｔ ”，将“温度”电位器调到数显所显示的温度 值为实测的溶液温度值。 ３） 再将“选择”开关置“ｐＨ”档，调节“定位” 电位器，使数显所显示的 ｐ Ｈ 值为该温度下缓冲溶液 的标准值（见表 １），仪器标定结束，此时“定位”等 各个旋扭就都不能动了。
［２］ 于世林． 高效液相色谱方法及应用，北京：化学工业出版社，２０００．８５ ［３］ 赵景婵，郭治安，常建华等．有机酸类化合物的反相高效液相色谱法的分
４） 在使用中，勿将复合电极顶部接触烧杯底部或其 它硬物，不使用时，应装在盛有 ３ｍｏＬＬ－１ＫＣＬ 溶液的塑料 套中。
５ ）仪器应避免在湿度较大的环境中使用。
参考文献
［１］ 郭根和，潘葳，苏德森，饶秋华，何志刚，陈涵贞． 反相高效液相色谱法测 定枇杷中的有机酸，福建农业学报，２００５，（已通过审稿 待发表）
２ 实验部分
２ ． １ 仪器
仪器：ＰＨＳ－３Ｃ数字式酸度计，Ｗａｔｅｒｓ ２６９５型高效液 相色谱仪，Ｗａｔｅｒｓ ２９９６ 二极管阵列检测器， Ｅｍｐｏｗｅｒ 色谱工作站，超声波清洗器， ＸＷ－８０Ａ 旋涡混合器，微 量可调移液器。 ２．２ 试剂
磷酸、磷酸二氢钾、有机酸标准品均为分析纯。 ０．０４ｍｏＬ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４－Ｈ３ＰＯ４缓冲溶液：称取分析纯磷酸 二氢钾 ５．４４ｇ，用水溶解并定容至 １０００ｍＬ，用磷酸调至 ｐＨ２．４。然后用 ０．４５ μｍ 水相滤膜过滤，再经超声波脱 气后用作流动相。 九种有机酸标准溶液的配制：分别准确地称取草 酸 ３００ｍｇ，酒石酸 ７００ ｍｇ，丙酮酸 ２０ ｍｇ，苹果酸 １ｇ， 柠檬酸 ２ｇ，琥珀酸 ６ｇ，富马酸 ３０ ｍｇ，乳酸 ５ｇ，乙酸 ５ｇ，置于 １００ｍＬ 棕色容量瓶中，用流动相溶液溶解并 定容至刻度。上述溶液经不同浓度稀释后，上机并绘 制各种有机酸的标准曲线。溶液用前经 ０．４５ μ ｍ 样品 过滤器过滤． 配制试剂所用的水均为二次蒸馏水。 ２ ． ３ 色谱分析条件 色谱柱：μＢｏｎｄａｐａｋＴＭ Ｃ１８ ３．９ｍｍ（ｉ．ｄ．）× ３００ｍｍ， １０ μｍ （Ｗａｔｅｒｓ）； 流 速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ；
影响测定反相高效液相色谱流动相 ｐ Ｈ 值的因素
宋永康 郭 嘉 潘 葳 （福建省农业科学院中心实验室 福州 ３５０００３）
E-mail:songlibby@
摘 要 以采用反相高效液相色谱法测定九种有机酸为例，探讨了流动相 ｐ Ｈ 值对分析结果的影响。实验结果表 明 ｐＨ＝２．４０ 时，九种有机酸得到有效分离，且峰形理想，而不同 ｐＨ 值对分析结果影响很大，不仅会大大改变各有机 酸的保留值，甚至会导致无法将各有机酸分离。本文分析了影响测定流动相 ｐ Ｈ 值的因素。
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ； ｐＨ ｖａｌｕｅ； ａｃｉｄｉｍｅｔｅｒ
１ 引 言
应用反相高效液相色谱（ＲＰ－ＨＰＬＣ） 进行分析测定 时，常常采用离子抑制法即向含水流动相中加入酸、 碱或缓冲溶液等改性剂，以使流动相的 ｐ Ｈ 值控制一 定数值，抑制溶质的离子化，减少谱带拖尾、改善峰 形，以提高分离的选择性［１］。例如在分析有机弱酸时， 常向流动相中加入磷酸（或乙酸、三氯乙酸、１％ 的甲 酸、硫酸），就可抑制溶质的离子化，获对称的色谱峰。 对于弱碱性样品，向流动相中加入 １ ％ 的三乙胺，也 可达到相同的效果［２￣６］。 虽然 ＲＰＣ 方法建立时最好选用 ｐＨ 微小改变不影响分离的流动相，但 ｐＨ 值的较大变 化往往会对分析结果产生很大影响，因此流动相 ｐＨ 值 的调节是分析过程中至关重要的一个环节，本文以反 相高效液相色谱法测定九种有机酸为例考察了不同流 动相 ｐ Ｈ 值对分析结果的影响，指出准确调节流动相 ｐ Ｈ 值的关键所在，有助于提高分析结果的准确性。
关键词 反相高效液相色谱；ｐＨ 值；酸度计 中图分类号 Ｏ６５７．７
The Factors of Affecting Determining pH Value of RP-HPLC Mobile Phase
Song Yongkang, Guo Jia, Pan Wei (Central Laboratory, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou 350003, China)
图 １ ｐ Ｈ 值为 ２ ． ２ ０ 时，９ 种有机酸的色谱图
图 ２ ｐＨ 值为 ２．４０ 时， ９ 种有机酸的色谱图
３ ． ２ 影响调节流动相 ｐ Ｈ 值的因素 ３．２．１ “温度”电位器的调节对 ｐＨ 值测定结果的影响
文中 ２．４．２）步骤，是准确测定 ｐＨ 值的非常关键的 环节。我们考察了某一流动相的实测温度值为 ２１．４℃， 按照 ２．４ 步骤测得的 ｐＨ 值为 ２．４０。调节“温度”电位 器，使数显所显示的温度值分别为 ５．０、１０．０、１５．０、２０． ０、２５．０、３０．０、３５．０、４０．０、４５．０、５０．０、５５．０、６０．０℃时， 测定相应的 ｐ Ｈ 值，测定结果见表 ２ 。
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ｔａｋｅｓ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎｇ ｎｉｎｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｂｙ ＲＰ－ＨＰＬＣ ａｓ ａｎ ｅｘａｍｐｌｅ ｔｏ ｄｉｓｃｕｓｓ ｔｈｅ ｒｅｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐＨ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ ｏｎ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｓ ｔｈａｔ ｎｉｎｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｃａｎ ｂｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｈａｐｅ ｏｆ ｐｅａｋ ｉｓ ｉｄｅａｌ ｗｈｅｎ ｐＨ＝２．４０， ｗｈｉｌｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐＨ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｈａｖｅ ｇｒｅａｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｓｕｌｔ． Ｔｈｅｙ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｃｈａｎｇｅ ｔｈｅ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ ｂｕｔ ａｌｓｏ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎ ｆａｉｌｉｎｇ ｔｏ ｓｅｐａｒａｔｅ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｉｃ ａｃｉｄｓ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｔｈｅ ａｄｊｕｓｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐＨ ｖａｌｕｅ ｏｆ ＲＰ－ＨＰＬＣ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｉｓ ｖｉｔａｌ ｉｎ ａｎａｌｙｓｉｓ． Ｔｈｉｓ ａｒｔｉｃｌｅ ａｎａｌｙｓｅｓ ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｔｈａｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｐＨ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ， ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｈｅｌｐ ｕｓ ｉｍｐｒｏｖｅ ｏｕｒ ａｃｃｕｒａｃｙ ｉｎ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ｗｏｒｋ．
流动相溶液温度（ ℃） ５．０ １０．０ １５．０ ２０．０ ２５．０ ３０．０ ３５．０ ４０．０ ４５．０ ５０．０ ５５．０ ６０．０
流动相 Ａ 实测 ｐ Ｈ 值 ２．２３ ２．２９ ２．２１ ２．１２ ２．０７ ２．０２ １．９６ １．９１ １．８６ １．８０ １．７５ １．７０
流动相 Ｂ 实测 ｐ Ｈ 值 ２．６１ ２．５２ ２．４８ ２．４０ ２．３８ ２．３２ ２．２８ ２．２４ ２．２０ ２．１５ ２．１１ ２．０７
表 １ 溶液 ｐ Ｈ 值与温度关系对照表 温度℃ ５ １０ １５ ２０ ２５ ３０ ３５ ４０ ４５ ５０ ５５ ６０ ｐ Ｈ 值 ４．０１ ４．００ ４．００ ４．０１ ４．０１ ４．０２ ４．０３ ４．０４ ４．０５ ４．０６ ４．０８ ４．１０
４） 将酸度计复合电极插入未知的被测溶液进行测量。
温度对 ｐ Ｈ 值测定结果的影响 温 度 ℃ ５．０ １０．０ １５．０ ２０．０ ２１．４ ２５．０ ３０．０ ３５．０ ４０．０ ４５．０ ５０．０ ５５．０ ６０．０ ｐ Ｈ 值 ２．１５ ２．２３ ２．３１ ２．３８ ２．４０ ２．４６ ２．５３ ２．６０ ２．６６ ２．７３ ２．７９ ２．８５ ２．９１
收稿日期：２ ０ ０ ４ － １ ２ 作者简介：宋永康，男，１ ９ ６ ３ 年生，现为福建农业科学院实验师。 现代科学仪器 ２００５ １ ９５
３ 结果和讨论
３．１ 流动相 ｐＨ 值对九种有机酸测定结果的影响 磷酸盐缓冲液系统是在十八烷基柱中应用最广
的流动相，适于分析有机酸。本实验采用磷酸二氢钾 缓冲溶液作为流动相，考察了不同 ｐ Ｈ 值对有机酸分 析影响的试验，考察了 ２．２、２．４、２．５、２．６、２．８、３．０ 这 ６ 种 ｐＨ 的流动相，发现流动相的 ｐＨ 值对有机酸保留时 间的影响很大， 不同 ｐＨ 值下的有机酸的保留时间都不 同， ｐＨ 值为 ２．２０ 时，九种有机酸中丙酮酸与苹果酸、 乳酸与乙酸、柠檬酸与琥珀酸的色谱峰无法有效分离 （见图 １）；ｐＨ 值为 ２．４０ 时九种有机酸得到有效分离，且 峰形理想（见图 ２）；ｐＨ 值为＞ ２．６０ 时有机酸的分离不 够理想，且九种有机酸出峰的先后顺序会发生颠倒， 峰形也不理想。