硝酸盐还原实验试剂
硝酸还原酶(NR)活性测定试剂盒说明书
硝酸还原酶（NR）活性测定试剂盒说明书硝酸还原酶（Nitrate Reductase，NR）活性测定试剂盒说明书微量法100管/96样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做预测定测定意义：NR（ EC 1.7.1.3）广泛存在于植物中，是植物硝态氮转化为氨态氮的关键酶，也是诱导酶，对作物的产量和品质有影响。
测定原理：NR催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；产生的亚硝酸盐能够在酸性条件下，与对–氨基苯磺酸及α 萘胺定量生成红色偶氮化合物；生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：诱导剂储备液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，20℃保存。
试剂二：液体5mL×1瓶，20℃保存；试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存（如出现结晶析出，60℃90℃水浴溶解后使用）；试剂四：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：标准储备液1mL，20℃保存。
诱导剂应用液的配制：用时将诱导剂储备液稀释10倍，即取10mL诱导剂储备液加90mL蒸馏水，充分混匀。
0.1umol/mL的标准液的配制：用时将试剂五稀释100倍，即取 0.1ml试剂五加9.9mL蒸馏水，充分混匀。
样本前处理：动植物组织样品的前处理:（1）取适量诱导剂于烧杯中，将新鲜标本洗净，滤纸吸干，放入诱导剂应用液中（淹没即可），浸泡2h，取出样本，滤纸吸干。
（2）按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
硝酸还原酶活性测定实验报告
硝酸还原酶活性测定实验报告硝酸还原酶活性测定实验报告引言：硝酸还原酶是一种重要的酶类，在生物体内负责将硝酸盐还原为亚硝酸盐。
硝酸还原酶活性的测定对于研究生物体对硝酸盐的代谢和环境污染物的检测具有重要意义。
本实验旨在探究硝酸还原酶的活性测定方法，并通过实验验证其可行性和准确性。
材料与方法：1. 实验材料：- 0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.0）- 0.1 mol/L 硝酸钠溶液- 0.1 mol/L 硫酸铵溶液- 1% 硫胺素溶液- 10% 硝酸盐还原酶提取液- 10% 硝酸盐还原酶抑制剂- 2% 硝酸盐还原酶底物溶液- 0.1 mol/L 硫酸铵铵铁硫氰化物溶液- 0.1 mol/L 醋酸溶液- 蒸馏水2. 实验仪器：- 分光光度计- 定量移液器- 离心机- 恒温水浴槽- 试管架- 显微镜实验步骤：1. 提取硝酸盐还原酶：a. 取一定量的样品（如细胞或组织），加入磷酸盐缓冲液，用搅拌器充分破碎。
b. 将破碎后的样品转移至离心管中，以12000 rpm离心10分钟。
c. 取上清液，即为硝酸盐还原酶提取液。
2. 硝酸还原酶活性测定：a. 准备一组空白对照组，加入相同体积的磷酸盐缓冲液代替硝酸盐还原酶提取液。
b. 准备一组实验组，加入一定体积的硝酸盐还原酶提取液。
c. 分别加入一定体积的硝酸钠溶液、硫酸铵溶液、硫胺素溶液和硝酸盐还原酶底物溶液。
d. 在恒温水浴槽中，将反应体系恒温30分钟。
e. 加入硝酸盐还原酶抑制剂停止反应。
f. 加入硫酸铵铵铁硫氰化物溶液，使反应产生红色沉淀。
g. 加入醋酸溶液，混匀后离心10分钟。
h. 取上清液，以分光光度计测定其吸光度。
结果与讨论：通过实验测定，我们得到了一组吸光度数据。
根据吸光度与硝酸还原酶活性之间的关系，我们可以计算出样品中硝酸还原酶的活性。
在本实验中，我们采用了硫酸铵铵铁硫氰化物法测定硝酸还原酶活性。
该方法利用硝酸还原酶将硝酸盐还原为亚硝酸盐，再与硫酸铵铵铁硫氰化物反应生成红色沉淀。
细菌常用的几种试验
精选ppt课件
8
精选ppt课件
9
触酶试验
1.原理：具有触酶（过氧化氢酶）的细菌，能催 化过氧化氢，放出新生态氧，继而形成分子氧， 出现气泡。
2.方法：用接种环挑取固体培养基上的菌落置于 洁净的玻片上，然后滴加3%过氧化氢溶液一滴， 观察结果。
3.结果判断：在5秒内释放大量的气泡为阳性。
4.意义：大多数球菌触酶试验阳性，但链球菌为 阴性，主要用于鉴别葡萄球菌与链球菌。
3.结果判断：抑菌圈〉14mm为肺炎链球菌，无 或见很窄的抑菌圈为草绿色链球菌。
精选ppt课件
15
精选ppt课件
16
卫星试验
1.原理：流感嗜血杆菌生长时需要X、V两种因子，在血 平板上形成极小、圆形透明的菌落，若与金葡菌同时培养， 由于金葡菌产生V因子，促进流感嗜血杆菌的生长，在金 葡菌周围的细菌菌落较大，形成卫星生长现象。在普通培 养基上不生长。
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
精选ppt课件
22
精选ppt课件
23
硝酸盐还原试验
1.原理：某些细菌能还原培养基中的硝酸盐生成亚硝酸盐、 氨和氮等。亚硝酸盐与醋酸作用生成亚硝酸，亚硝酸再与 对氨基苯磺酸作用形成重氮苯磺酸，它可与a-萘胺结合成 红色的N-a-奈氨苯磺酸。
2.方法：将待检菌接种硝酸盐培养基中，35℃24小时， 加入硝酸盐还原试剂甲液（对氨基苯磺酸和醋酸）和乙液 （ a-萘胺和醋酸）各一滴后观察结果。
精选ppt课件
17
精选ppt课件
18
精选ppt课件
19
CAMP试验
1.原理：B群链球菌在血平板上能产生CAMP因子， 可促使金黄色葡萄球菌β 溶血素的活性，故在血 平板上两种细菌交界处溶血能力增强，形成箭头 状透明状溶血区。其他链球菌一般不产生CAMP 因子，故此试验可作为B群链球菌的鉴定指标之 一。
硝酸盐还原试验
硝酸盐还原试验
（1）原理：硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中，硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨，再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中，硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体。
能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物。
但硝酸盐还原的过程因细菌不同而异，有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如假单胞菌等。
硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸。
（2）培养基：硝酸盐培养基。
（3）试剂：甲液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸lOOml；乙液（α-奈胺0.5g + 5mol/L醋酸lOOml）。
（4）方法：被检菌接种于硝酸盐培养基中，于35℃培养l～4d.将甲、乙液等量混合后（约0.1m1）加入培养基内，立即观察结
果。
（5）结果：出现红色为阳性。
若加入试剂后无颜色反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，
如出现红色则表明试验确实为阴性。
若仍不产生红色，表示试验
为假阴性。
若要检查是否有氮气产生，可在培养基管内加一小倒管，如有气
泡产生，表示有氮气生成。
（6）应用：本试验在细菌鉴定中广泛应用。
肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性。
硫酸肼还原法测定硝态氮
硝酸盐氮测定（硫酸肼还原法）一、原理：在碱性条件下，铜-锌催化剂存在时，硫酸肼将硝酸根定量地还原成亚硝酸根。
亚硝酸根离子在酸性条件下与对氨基苯磺酰胺生成重氮化合物，后者与盐酸萘乙二胺偶合，生成紫红色偶氮化合物，比色定量。
二、试剂配制铜-锌催化溶液：取0.080g五水硫酸铜（CuSO4·5H2O，249.8）和 1.76g七水硫酸锌（ZnSO4·7H2O，287.56），加水溶解至1L。
0.07%的硫酸肼溶液：取0.07g硫酸肼，加100mL水溶解。
0.1%的盐酸萘乙二胺溶液：取0.1g盐酸萘乙二胺，加100mL水溶解。
1%的磺胺溶液：取2g对氨基苯磺酰胺，溶于60mL盐酸（1.19g/mL）和80mL水中，溶解后加水至200mL。
10%的氢氧化钠溶液硝酸盐氮标准溶液：称取在105-110℃烘烤2h的硝酸钾（KNO3，101.10）0.7218g加水溶解，定容至1L，并加入2mL氯仿做保存剂，此溶液1mL含0.100mgNO3-N，临用时稀释成1µg/mL。
三、实验步骤标准曲线：取6支25mL具塞比色管，分别加入标准溶液（1µg/mL）0、1、2、3、4、5mL，加水至10mL，加入10%的氢氧化钠溶液0.5mL，混匀，再加铜-锌催化液和硫酸肼溶液各1mL，混匀，于恒温水浴（36±1）℃1h，取出放冷（或用冷水冷却），加入磺胺溶液1mL，摇匀，5min后加入盐酸萘乙二胺溶液1mL，加水至25mL刻度线，混匀。
20min后于550nm 波长10mm比色皿中比色。
以吸光度对硝酸盐氮绘制标准曲线。
样品测定：吸取一定量试样（0.5-5µg硝酸盐氮）置于25mL比色管中，其它同标准曲线。
硝酸盐还原试验
硝酸盐还原试验
硝酸盐还原试验是一种化学检验方法，通过观察反应后的物质颜色变化来确定样品中是否存在硝酸盐。
硝酸盐还原试验由于其操作简单、准确、敏感等特点，广泛应用于环境、医药、工业等领域。
硝酸盐还原试验的原理是将硝酸盐还原成氮气。
在试验过程中，常用还原剂为亚硫酸钠或异硫氰酸铵，也可使用硫酸亚铁或亚硫酸氢钠等还原剂。
硝酸盐和还原剂经过反应后，产生的氮气可以通过气体收集管收集并测量体积，以确定反应的程度，从而判断硝酸盐是否存在。
硝酸盐还原试验具有以下优点：
1. 操作简便。
硝酸盐还原试验不需要复杂的实验设备，只需要简单的试剂和装置，操作简单方便。
2. 准确度高。
在试验中，亚硫酸钠或异硫氰酸铵都是高纯度的试剂，为了保证试验的准确，试剂的纯度要求非常高，因此试验准确度较高。
3. 敏感度高。
硝酸盐还原试验对于硝酸盐的检测十分敏感，只需极小的含量就可以被检测到。
4. 适用范围广。
硝酸盐还原试验适用于环境、医药、工业等领域。
例如，检测废水中硝酸盐浓度，检测食品中硝酸盐含量等。
硝酸盐还原试验可能存在的问题：
1. 试剂使用过程中易受环境影响。
如，试剂可能受到影响而影响准确度，例如与环境空气中的氮氧化物反应，导致无法正确检测到硝酸盐。
2. 小量检测难度大。
当样品中硝酸盐含量少时，检测的准确性会受到影响，因此需要多次重复试验以提高准确度和可信度。
总之，硝酸盐还原试验对于检测硝酸盐的含量和浓度具有良好的效果和应用前景，特别适用于农业、环境科学等领域。
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告
细菌鉴定中常用的生理生化反应实验报告一、引言在微生物学中，鉴定细菌的方法有很多种，其中生理生化反应实验是最常用的一种方法之一。
生理生化反应实验可以通过观察细菌对不同物质的代谢情况来确定其种类和特性。
本报告将介绍细菌鉴定中常用的生理生化反应实验。
二、目的本报告旨在介绍常用的生理生化反应实验，包括试剂、操作步骤、结果解释等内容，以帮助读者更好地了解和掌握这些实验。
三、材料与方法1. 大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）培养基；2. 硝酸盐还原试剂；3. 糖类试剂：葡萄糖、果糖、半乳糖；4. 氨基酸试剂：天冬氨酸、赖氨酸；5. 酶试剂：淀粉酶、蛋白酶；6. 无水硫酸铜溶液。
四、实验步骤及结果解释1. 硝酸盐还原试验步骤：（1）取一支细菌液体培养物，加入硝酸盐还原试剂；（2）观察液体颜色变化。
结果解释：若液体变为红色，则表示细菌能够还原硝酸盐为亚硝酸盐，是亚硝化菌。
若无颜色变化，则表示细菌不能还原硝酸盐。
2. 糖类代谢试验步骤：（1）取三个试管，分别加入葡萄糖、果糖、半乳糖；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在葡萄糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用葡萄糖进行发酵代谢；若在果糖或半乳糖试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用果糖或半乳糖进行发酵代谢。
3. 氨基酸代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入天冬氨酸和赖氨酸；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内气泡产生情况。
结果解释：若在天冬氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用天冬氨酸进行代谢；若在赖氨酸试管内产生了气泡，则表示该细菌能够利用赖氨酸进行代谢。
4. 酶代谢试验步骤：（1）取两个试管，分别加入淀粉和蛋白质；（2）加入相同量的细菌液体培养物；（3）观察试管内颜色变化情况。
结果解释：若在淀粉试管内出现了透明带，则表示该细菌能够分泌淀粉酶；若在蛋白质试管内出现了变色，则表示该细菌能够分泌蛋白酶。
实验13 生物化学鉴定
实验13 生物化学鉴定返回目录一、糖发酵试验【原理】各种细菌所含有的分解糖（苷、醇）的酶类不同，对糖（苷、醇）的分解能力各有差异。
对某一种糖有的细菌不分解，有的分解后仅产酸，有的分解后既产酸又产气，据此可用以鉴别细菌。
【试剂与器材】1.菌种大肠埃希菌、伤寒沙门菌2.培养基葡萄糖和乳糖发酵管【操作步骤】将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于葡萄糖、乳糖发酵管内，35℃培养18h～24h观察结果。
【结果】观察结果时，首先确定细菌是否生长，若细菌生长则培养基混浊，然后再观察细菌对糖类分解的结果：①不分解糖：培养基颜色与接种前相比无变化，记录时以“一”表示；②分解糖只产酸不产气：培养基中的指示剂（溴甲酚紫）由紫色变为黄色，液体培养基中的倒管未发现气泡；若为半固体培养基，则培养基内未见气泡或琼脂断裂，记录时以“+”表示；③分解糖既产酸又产气：除培养基中的指示剂颜色改变外，液体培养基中的倒管见有气泡；若为半固体培养基，则培养基内出现气泡或琼脂断裂，记录时以“⊕”表示。
本试验大肠埃希菌分解葡萄糖和乳糖产酸又产气“⊕”，伤寒沙门菌分解葡萄糖只产酸不产气“+”，不分解乳糖“-”。
【注意事项】配制糖发酵管时内装的小倒管在接种细菌前应是无气泡存在的，否则不宜接种细菌。
【思考题】糖发酵试验的原理及其结果判断。
二、甲基红试验【原理】甲基红是一种指示剂，PH在4.5以下时显示红色，PH在6.2以上是为黄色。
某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，使培养基的PH降至4.5以下，此时，加入甲基红指示剂后培养基呈红色（阳性）。
另一些细菌分解葡萄糖产生的酸可以进一步转化为醇、酮等非酸性物质，使培养基的PH在6.2以上，加入甲基红试剂后呈黄色（阴性）。
【试剂与器材】1.菌种大肠埃希菌、产气肠杆菌2.培养基葡萄糖蛋白胨水3.试剂甲基红试剂【操作步骤】1. 将大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，35℃培养24h，观察结果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
硝酸盐还原实验试剂
简介：
硝酸盐还原实验试剂主要由对氨基苯磺酸溶液和α-萘胺溶液组成，主要用于鉴别肠杆菌、假单胞菌等。
大肠埃希菌等细菌仅能使硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐与乙酸作用生成亚硝酸，亚硝酸盐与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者与α-萘胺结合生成红色产物；假单胞菌、沙雷菌等细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮或氧化氮，该作用被称为脱硝化或脱氮化作用，产生气泡，但无红色出现。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 被检细菌接种于硝酸盐培养基，培养1～4天。
2、 取适量的对氨基苯磺酸溶液和α-萘胺溶液等量混合后即为硝酸盐还原实验试剂。
3、 取0.1ml 硝酸盐还原实验试剂，加入培养基中，立即观察结果。
4、 如果实验呈阴性反应，在试管中加入少许锌粉，立即观察结果。
染色结果：
注意：加入试剂无颜色反应，可能原因：1、硝酸盐没有被还原，实验确为阴性；2、硝酸盐被还原为
氨和氮等其他物质，进而导致假阴性。
这时可加入少许锌粉，如出现红色则说明实验确为阴性，如果未出现红色则说明实验为假阴性。
注意事项：
1、 如果要检查是否有氮气产生，可在培养管内加一个小倒管，看有无气泡产生。
2、 取细菌培养和实验中，应注意自我防护。
编号 名称
DM0085 2×50ml Storage 试剂(A): 对氨基苯磺酸溶液 50ml RT 避光 试剂(B): α-萘胺溶液 50ml RT 避光 试剂(C): 锌粉 5g
RT 使用说明书
1份
未加锌粉呈红色 阳性(肠杆菌科细菌、韦荣球菌) 加锌粉呈红色 阴性
加锌粉不变色
假阴性(假单胞菌、沙雷菌等)
3、待检细菌培养时间也会影响染色，阳性菌培养时间过长或已死亡或细菌溶解，都常呈阴
性反应。
4、某些厌氧菌(韦荣球菌)亦呈阳性反应。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。