Cha4 药物的含量测定方法与验证
第四章药物含量测定方法与验证
（二）荧光分光光度法
灵敏度高，可达10-12g/ml ～ 10-10g/ml 在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用
1. 特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减
灵敏度高，但干扰因素多。 制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。 用样品量少。
2. 荧光分析仪 有二个单色光器—激发单色光器与发射单色光 器；且激发光源、样品池和检测器成直角。
2、经（酸、碱）水解后测定法
方法原理（卤素）：将含卤素的有机药物溶于适 当溶剂中，加氢氧化钠或硝酸银溶液加热回流使 其水解，将有机结合的卤素，经水解作用转变为 无机卤素离子，然后采用间接银量法测定。如三 氯叔丁醇的测定。
间接银量法：定量加入过量的AgNO3 ，过量的 硝酸银以硫氰酸铵为滴定剂，硫酸铁铵为指示剂 滴定。
V × T × F ×平均片重
标示量%=
W ×标示量
×100 %
25.02 ×12.31/1000 ×0.1005/0.1×0.3584
=
×100 %
0.3729 ×0.3
= 99.17%
二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm) 灵敏度高，可达10-7g/ml ～ 10-4g/ml
计算分光光度法：VitA的三点校正法 比色法
硫喷妥钠的含量测定：取供试品0.2500g，用水稀释至500ml，
精密取1ml用0.4%NaOH溶液定量稀释至100ml，作为供试品
溶液；另取硫喷妥对照品用0.4%NaOH溶液配制浓度为
5.0µg/ml作为对照品溶液。照分光光度法，在304nm波长处
分别测得供试品和对照品的吸收度为0.520和0.545，已知1mg
1）不需要校正因子，不需要所有组分出峰 2）结果受进样量、进样重复性和操作条件影响大 →每次进样量应一致，否则产生误差
药物分析含量测定方法与验证
药物分析含量测定方法与验证选择合适的测定方法是药物分析含量测定的首要任务。
常用的测定方法包括色谱法、光谱法、电化学法和滴定法等。
在选择方法时，需要考虑以下几个因素：1.应用对象：考虑药物的理化性质和活性成分的特点，选择适合的分析方法。
例如，对于具有荧光特性的活性成分，可以选择荧光光谱法进行分析。
2.灵敏度和准确度：选取具有良好灵敏度和准确度的方法，以确保对样品中微量活性成分的准确测定。
例如，高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC)是常用的灵敏度高的色谱法。
3.可行性和经济性：考虑方法的可行性和经济性，选择合适的仪器设备和试剂，以确保分析成本和操作难度的控制。
在药物分析含量测定方法选择后，需要对方法进行验证以确保其准确性和可靠性。
药物分析含量测定方法的验证主要包括以下几个方面：1.精密度和重复性：重复测定多个样品，并计算其相对标准偏差(RSD)来评估方法的精密度。
RSD越小，说明方法的重复性越好。
2.准确度：与已知浓度的标准样品进行比较，计算方法的准确度。
一般使用回收率作为评价指标，回收率越接近100%，说明方法的准确度越高。
3.灵敏度和线性：测定一系列不同浓度的样品，并计算测定结果的线性相关性。
通常使用相关系数和回归方程来评估方法的线性。
4.特异性和选择性：分析样品中可能存在的干扰物质，并验证方法对活性成分的选择性。
一般通过添加干扰物质来测试方法的特异性。
5.稳定性：测试方法在不同条件下的稳定性，包括温度、湿度、光照等。
确保方法在不同条件下的测定结果一致。
除了以上验证的基本步骤，还需要根据具体的药物分析含量测定方法的特点和要求，进行其他适当的验证参数的测试。
在实际操作中，应制定详细的验证方案和实施计划，并按照规定的方案进行验证实验。
实验结果需要进行统计分析，并按规定的标准判断方法的验证结果。
综上所述，药物分析含量测定方法的选择和验证是确保药物质量稳定性和一致性的重要环节。
通过选择合适的方法和进行严格的验证，可以保证药物分析结果的准确性和可靠性，并为药物研发和生产提供科学依据。
04药物的含量测定方法与验证
04药物的含量测定方法与验证药物的含量测定方法与验证是保证药物质量的重要环节。
药物的含量测定方法可以通过物理方法、化学方法和仪器分析等不同手段来完成。
下面将对药物含量测定方法的几种常用技术进行介绍，并探讨验证这些方法的重要性。
一、药物的含量测定方法1.物理方法：物理方法主要通过质量法和体积法来测定药物的含量。
-质量法：通过称取一定质量的样品，然后溶解或者加热提取，根据所测得的质量差异来确定药物的含量。
-体积法：通过将药物溶于适量的溶剂，然后使用容量管或者酸碱滴定法来测定样品中所含的物质的体积，从而计算出药物的含量。
2.化学方法：化学方法主要是通过定量分析法来测定药物的含量。
-酸碱滴定法：将标准溶液滴加到药物样品中，通过观察溶液的变色点来确定药物的含量。
-还原滴定法：将氧化剂溶液滴加到药物样品中，通过观察溶液的变色点来确定药物的含量。
-吸光光度法：通过测量药物溶液在特定波长下的吸光度来确定药物的含量。
3.仪器分析：现代化学分析仪器可以通过多种分析技术来测定药物的含量。
-高效液相色谱法：通过将样品溶解于溶剂中，然后通过系统对样品进行分离和检测，从而测定药物的含量。
-气相色谱法：通过样品的汽化和分离，然后通过色谱柱对样品进行分离和检测，从而测定药物的含量。
-质谱法：通过对样品中的离子进行检测和分析，从而测定药物的含量。
二、药物含量测定方法的验证药物含量测定方法的验证是为了确认所选方法的准确性、可靠性和适用性，确保得到的结果符合相关法规和规定的要求，常见的验证方法有下面几个方面：1.选择药物含量测定方法：确认所选的测定方法适用于特定药物的含量测定，并能满足法规和规定的要求。
2.方法准确性验证：通过测定稳定样品的含量来评估方法的准确度。
可以使用标准品进行比对，验证方法的偏差是否在可接受范围内。
3.方法精密度验证：通过反复测定同一样品，评估方法的重复性和精密度。
可以计算相对标准偏差来评估方法的精密度。
4.方法选择性验证：通过测定样品中其他可能存在的干扰物质，评估方法的选择性。
第4章药物的含量测定的方法与验证1
内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
3. 测定方法
外标法测定供试品中主成分含量
标准曲线法 外标一点法
应用示例：
RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲 线法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；
头孢唑啉钠用外标一点法
（1）内标法加校正因子测定供试品中主成分 含量 • 内标法：将一个已知重量，样品中不含有的 纯物质，加至待测样品溶液中，以此纯物质 的量为标竿，对比测定待测i组分的含量的方 法谓内标法。优点：定量结果与进样量无关 （不超载条件下）。 • 对内标物的要求：1、内标物是原样品中不含 有的组分。2、内标物的保留时间应与待测成 分相近，分离度R≥1.5。3、内标物必须是纯 度合乎要求的纯物质。
(5) 测定法
要求供试品溶液的A应在0.3 ～0.7
【吸收系数法】 配制供试品溶液，在规定波长处测定其吸收度（A）， 再将供试品在规定条件下的吸收系数计算含量
Cx=Ax/ 100E1%1cm
原料药百分含量%=Cx×D/W×100%
W ——供试品的称取量；mg； Cx——供试品溶液的浓度，mg/ml； D——稀释体积
Cx=(Ax/Ar)Cr
原料药百分含量%=Cx×D/W×100%
W ——供试品的称取量；mg； Cx——供试品溶液的浓度，mg/ml； D——稀释体积
【对照品比较法】
固体制剂含量相当于标示量的百分数：
标示量（%）=Cx×D/W×W平均/B×100%
W ——供试品的称取量；mg； Cx——供试品溶液的浓度，mg/ml； D——稀释体积 W平均——单位制剂的平均重量（或装量） B——制剂的标示量
二、熟悉 定量分析样品的前处理方法。
第一节 定量分析方法的分类和特点
药物的含量测定方法与验证
药物的含量测定方法与验证一、化学分析法：化学分析法是目前最常用的药物含量测定方法，最常见的是滴定法和分光光度法。
滴定法是通过已知浓度的试剂与待测药物发生化学反应，从而进行定量测定。
而分光光度法是利用物质溶液对特定波长的光的吸收特性来进行定量测定。
二、色谱法：色谱法是目前药物分析中应用最为广泛的方法之一、其中，高效液相色谱法（HPLC）是最常用的色谱法之一、它通过将药物溶解于流动相中，经过固定相的作用，不同成分在流动相的驱动下以不同速度通过，从而分离和测定药物中的活性成分。
三、免疫学测定法：免疫学测定法主要是利用抗体与药物中的特定成分发生特异性反应，形成免疫复合物，然后通过染色、标记等方法进行定量测定。
如放射免疫测定（RIA）和酶联免疫测定（ELISA）等。
一、方法准确性验证：方法准确性是指测定结果与真实值之间的吻合程度。
验证方法准确性通常采用标准样品加测实验、自行合成样品以及与其他方法的比较等方法，来评估测定方法的准确性。
二、方法精密度验证：方法精密度是指同一样品在相同条件下进行重复测定的结果的分散程度。
验证方法精密度通常采用平行测定、应用统计方法进行数据处理等方法。
三、方法特异性和选择性验证：方法特异性和选择性是指说明测定方法的新颖性，以及该方法能将要测定的物质在样品中与其他干扰物质分开。
验证过程中需要进行对不同样品和干扰物进行测定，以确定测定结果不受其他物质的影响。
四、方法线性验证：方法线性是指测定方法在一定浓度范围内，测定结果与浓度之间的直线关系。
验证方法线性通常需要制备不同浓度的标准曲线，然后通过线性回归分析来确定测定方法的线性范围。
五、方法限度验证：方法限度是指测定方法能对样品中含量低至何种程度的物质进行定量分析。
验证方法限度通常采用比较检验，即比较待测样品中最低可检测含量与其他方法、药典或他国标准的要求。
六、稳定性验证：稳定性是指测定方法在一定条件下的稳定性和可重复性。
验证稳定性通常需要进行如温度、湿度等条件的变化实验，评估测定方法在不同条件下的结果的变化情况。
第四章 药物的含量测定方法与验证
第四章药物的含量测定方法与验证1、药物的含量：指药物中所含主成分的量，是评价药物质量的重要标准。
2、可供药物含量测定的分析方法：（1）容量分析法①优点：操作简便，结果准确，方法耐用性高。
②缺点：方法缺乏专属性。
③适用：适用于对结果准确度与精密度要求较高的样品的测定。
（2）光谱分析法①优点：简便，快速，灵敏度高，并具有一定的准确度。
②缺点：方法专属性稍差。
③适用：适用于对灵敏度要求较高、样本量较大的分析项目。
（3）色谱分析法①优点：高灵敏度与高专属性，并具有一定的准确度。
②缺点：结果计算需要对照品。
③适用：适用于对方法的专属性与灵敏度要求较高的复杂样品的含量测定。
3、为确保分析结果的可靠性，要求分析方法应准确、稳定、耐用。
4、验证内容包括：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
§4-1 定量分析方法的分类与特点一、容量分析法容量分析法：也称滴定法。
是将已知浓度的滴定液（标准物质溶液）由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当方法指示），然后根据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算出被测药物的含量。
当滴定液与被测药物完全作用时，反应达到化学计量点。
在进行容量分析时，当反应达到化学计量点时应停止滴定，并准确获取滴定液被消耗的体积。
但在滴定过程中反应体系常常无外观现象的变化，必须借助适当的方法指示化学计量点的到达。
其中，最常用的方法是借助指示剂的颜色或电子设备的电流或电压变化来判断化学计量点。
指示剂的颜色或检测设备的电信号的突变点通常被称为滴定终点。
但滴定终点与滴定反应的化学计量点不一定恰好符合，二者之差被称为滴定误差。
滴定误差是容量分析法中系统误差的重要来源之一，为了减少滴定误差，要选用合适的指示剂或指示方法（如在非水溶液中常见用电位滴定法），使滴定终点尽可能的接近滴定反应的化学计量点。
（一）容量分析法的特点与适用范围1、容量分析法的特点（1）方法简便易行：本法所用仪器廉价易得，操作简便、快速。
第四章药物的含量测定方法与验证
第四章药物的含量测定方法与验证第一节定量分析方法的分类与特点（自学）第二节样品分析的前处理方法（自学）第三节药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。
在建立药品质量标准时，分析方法需经验证；在药品生产工艺变更、制剂的组分改变、原分析方法进行修订时，质量标准分析方法也需进行验证，该验证过程亦被称为方法再验证，方法再验证的内容可以是全面验证或是部分验证。
方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草或修订说明中。
需验证的分析项目有：鉴别试验，杂质定量或限度检查，原料药或制剂中有效成分含量测定，以及制剂中其他成分（如防腐剂等）的测定。
药品溶出度、释放度等检查中，其溶出量等的测试方法也应作必要验证。
验证内容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。
视具体方法，拟定需要验证的内容。
表4-3中列出的分析项目和相应的验证内容要求，可供参考。
一、准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（％）表示。
准确度应在规定的范围内测试。
（一）含量测定方法的准确度1、原料药的含量测定：可用已知纯度的对照品或供试品进行测定，并按下式计算回收率；或用本法所得的结果与己知准确度的另一方法测定的结果进行比较。
加入量：加入对照品的量。
一般与制剂原有的含量按1:1加入。
如该分析方法已经测试并求得其精密度、线性和专属性，在准确度无法直接测试（采用对照品对照法计算含量的方法，如高效液相色谱法）或可推算出的情况下，该项目可不再进行验证。
2、制剂的含量测定：主要测试制剂中其他组分及辅料对含量测定方法的影响。
可用含已知量被测物的制剂各组分混合物（包括制剂辅料）进行测定，回收率的计算同原料药的含量测定项下。
如不能获得制剂的全部组分，则可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，回收率则应按下式计算；或用本法所得的结果与已知准确度的另一方法测定的结果进行比较。
Cha4 药物的含量测定方法与验证
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第四章 药物的含量测定方法与验证
8
定量分析方法的特点
2、定量方法：吸收系数法、对照品比较法、标准曲线法
例：维生素B2片含量测定 取20片，称重0.2408g（标示量10mg/片），研细，
吸 收 系 数 法
精密称取0.0110g，置于1000ml容量瓶中，加冰醋酸
5ml与水100ml，加热溶解后加4%NaOH 30ml，用水定 容至刻度，照分光光度法，在444nm处测吸光度为
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第四章 药物的含量测定方法与验证
4
定量分析方法的特点
（二）滴定分析法的计算
例：原料药异烟肼的含量计算
称取供试品0.2003g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻 度，摇匀；精密量取20ml，加水40ml、盐酸16ml与甲基橙指示液1
滴，用溴酸钾滴定液（0.01671mol/L）缓缓滴定（温度保持在
如维生素E。
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第四章 药物的含量测定方法与验证
24
药品分析方法的验证
§4.2 药品分析方法的验证
一、方法验证的目的
证明采用的方法准确、可靠、适合于相应的检测要求
二、分析方法验证应用对象
研究新药制定质量标准时需要对分析方法进行验证。
药物生产工艺变更、制剂组分变更、原分析方法修订
时需要对质量分析方法进行验证。 发表研究论文对建立的分析方法进行验证。
常用的定量分析方法： 滴定分析法、光谱分析法、色谱分析法。
一、滴定分析法
（一）特点
•用于常量组分测定； •准确度高（RSD<0.2%）、精密度好； •仪器设备简单、试验成本低及操作简便、快速。
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第四章 药物的含量测定方法与验证
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T
3.429mg/ml 0.01671mol/L 0.01667mol/L
3.437mg/ml
异烟肼%
3.437mg/ml
11.57ml
100ml 20ml
0.2003g
103 g/mg
100%
99.3%
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第四章 药物的含量测定方法与验证 5
定量分析方法的特点
（二）滴定分析法的计算
例：异烟肼片的含量计算 取异烟肼片20片，称重1.3882g（标示量60mg/片），研细，精
10.0 20.0 30.0 40.0 50.0
浓度（ug / mL)
含量%
CX D W
100%
第四章 药物的含量测定方法与验证 11
定量分析方法的特点
3、仪器的校正 4、特点
•灵敏度高，可达10-4g/ml ～ 10-7g/ml； •准确度高，RSD（%）为2% ～5%； •仪器价格低廉，操作简单，易普及； •应用范围广
定量分析方法的特点
2、定量方法：吸收系数法、对照品比较法、标准曲线法
对
供试品中被测成分的浓度
CX
AX AR
CR
照 品
原料药
含量%
CX D W
100%
比
较 法
制剂
含量%
CX D W WB
100%
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第四章 药物的含量测定方法与验证 10
定量分析方法的特点
2、定量方法：吸收系数法、对照品比较法、标准曲线法
1、原理： 根据Lambert -Beer定律物质对单色光吸收强弱与吸
光物质浓度、液层厚度都有关系
A lg T lg I I0
E1% 1cm
CL
每100ml溶液中所含被测物质的重量
百分吸收系数：当溶液浓度为1%（g/100ml）溶液厚度为1cm时的吸光度
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第四章 药物的含量测定方法与验证 7
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第四章 药物的特点
（二）滴定分析法的计算
例：原料药异烟肼的含量计算 称取供试品0.2003g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻
度，摇匀；精密量取20ml，加水40ml、盐酸16ml与甲基橙指示液1 滴，用溴酸钾滴定液（0.01671mol/L）缓缓滴定（温度保持在 18～25℃）至粉红色消失，消耗溴酸钾滴定液11.57ml。每1ml溴 酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。计算异 烟肼中异烟肼的百分含量。
异烟肼%
3.429mg/ml 0.01671mol/L 0.01667mol/L
11.57ml
0.2281g
0.06g / 片
100ml 20ml
103g/mg
1.3882g 20片
100%
100.8%
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第四章 药物的含量测定方法与验证 6
定量分析方法的特点
二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法
5ml与水100ml，加热溶解后加4%NaOH 30ml，用水定
容至刻度，照分光光度法，在444nm处测吸光度为
0.312，E11c%m 323 ，计算标示量%
0.312 1000ml 3231100
0.0110g
0.2408g 20片
10mg / 片
103
mg
/
g
100%
105.7%
第四章 药物的含量测定方法与验证 9
度，摇匀；精密量取20ml，加水40ml、盐酸16ml与甲基橙指示 液1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）缓缓滴定（温度保持 在18～25℃）至粉红色消失，消耗溴酸钾滴定液11.57ml。每1ml 溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。计算 异烟肼中异烟肼的百分含量。
密称取0.2281g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇 匀；精密量取20ml，加水40ml、盐酸16ml与甲基橙指示液1滴，用 溴酸钾滴定液（0.01671mol/L）缓缓滴定（温度保持在18～25℃） 至粉红色消失，消耗溴酸钾滴定液11.57ml。每1ml溴酸钾滴定液 （0.01667mol/L）相当于3.429mg的C6H7N3O。计算异烟肼片中异 烟肼的百分含量，并计算其含量为标示量的多少（%）。
定量分析方法的特点
2、定量方法：吸收系数法、对照品比较法、标准曲线法
含量%
E1% 1cm
AD 100 W
100%
吸 收 系 数 法
例：维生素B2的测定 取本品0.0752g，置烧杯中，加冰醋酸1ml与水
75ml，加热溶解后，加水稀释，放冷，移置500ml量瓶 中，加水稀释至刻度，混匀；精密量取10ml，置100ml 量瓶中，加4%氢氧化钠溶液7ml，并用水稀释至刻度， 摇匀，照分光光度法在444nm的波长处测吸收度，按
一、滴定分析法
（一）特点
•用于常量组分测定； •准确度高（RSD<0.2%）、精密度好； •仪器设备简单、试验成本低及操作简便、快速。
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第四章 药物的含量测定方法与验证 3
定量分析方法的特点
（二）滴定分析法的计算
➢滴定度 指每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物的质量。
例：原料药异烟肼的含量计算 称取供试品0.2003g，置100ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻
药物分析
Pharmaceutical Analysis
药物分析
第四章 药物的含量测定方法与验证
§4.1 定量分析方法的特点 §4.2 药品分析方法的验证 §4.3 定量分析样品的前处理方法
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第四章 药物的含量测定方法与验证 2
定量分析方法的特点
§4.1 定量分析方法的特点
常用的定量分析方法： 滴定分析法、光谱分析法、色谱分析法。
标 准 曲 线 法
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标样浓度 g / L
5.00 10.0 20.0
30.0 40.0 试样
吸收值
0.045 0.093 0.140 0.175 0.236 0.200
A
标准工作曲线
0.400 0.300 0.200 0.100 0.000
0.0
y = 0.0056x + 0.0161 R2 = 0.984
维生素B2的吸收系数为323计算含量。
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第四章 药物的含量测定方法与验证 8
定量分析方法的特点
2、定量方法：吸收系数法、对照品比较法、标准曲线法
吸 收 系 数 法
16:24
例：维生素B2片含量测定 取20片，称重0.2408g（标示量10mg/片），研细，
精密称取0.0110g，置于1000ml容量瓶中，加冰醋酸