重组人免疫球蛋白DFc片段蛋白的构建
重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白-解释说明
重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分主要介绍本文的研究主题以及研究背景。
本文旨在探讨重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白的相关研究进展。
血小板生成素是一种重要的生物活性因子，对于血小板的产生和成熟起着关键作用。
然而，由于其天然来源有限且存在一定的局限性，研究人员开始利用生物技术手段进行重组血小板生成素的合成和改造，以满足临床需求。
近年来，拟肽-fc融合蛋白作为一种新型药物设计策略备受关注。
拟肽是一种具有生物活性的多肽序列，而Fc区域则是免疫球蛋白的结构域，可以增强融合蛋白的稳定性和药效。
将重组人血小板生成素与Fc区域融合，可以进一步提高其在体内的半衰期和药效，从而更好地发挥其临床应用的潜力。
本文将从背景介绍开始，系统地介绍重组人血小板生成素和拟肽-fc 融合蛋白的研究进展。
重点讨论重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白在临床治疗上的应用前景，并对其未来的研究方向进行展望。
总之，本文将通过对重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白的深入研究，为临床医学领域的治疗策略提供新的思路和方向。
通过对该领域的理论和实践研究进行梳理和总结，旨在促进相关领域的发展和应用。
1.2 文章结构本文主要以“重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白”为题，旨在对该融合蛋白的研究进行全面的介绍和归纳。
为了达到这一目的，本文将分为引言、正文和结论三个部分。
在引言部分，我们将首先对整篇文章进行概述，简要介绍重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白的相关背景和研究现状。
接着，我们将详细说明本文的文章结构，以便读者能够清晰地了解每个章节的内容。
最后，我们将明确本文的目的，即通过综合分析和总结已有的研究成果，提供对重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白研究的新的视角和思考。
在正文部分，我们将依次展开讲述背景介绍、重组人血小板生成素、拟肽-fc融合蛋白以及重组人血小板生成素拟肽-fc融合蛋白的研究进展。
在背景介绍中，我们将介绍与本课题相关的基本概念和研究背景，以便读者对该课题有一个全面的了解。
重组蛋白质类药物生产工艺流程
重组蛋白质类药物生产工艺流程1.首先，需要获得蛋白质的基因序列。
First, the gene sequence of the protein needs to be obtained.2.接下来，将蛋白质基因序列插入到表达载体中。
Next, the protein gene sequence is inserted into an expression vector.3.在转染宿主细胞前，需要构建表达载体。
Before transfecting the host cells, the expression vector needs to be constructed.4.然后，将表达载体导入宿主细胞中。
Then, the expression vector is introduced into the host cells.5.宿主细胞表达蛋白质的过程需要进行培养和表达。
The host cells need to be cultured and expressed to produce the protein.6.在蛋白质的生产中，需要定期检测细胞培养液中的蛋白质含量。
The protein content in the cell culture medium needs tobe regularly monitored during protein production.7.紧接着，需要提取和纯化表达的蛋白质。
Next, the expressed protein needs to be extracted and purified.8.在蛋白质甲氨基酸序列分析之后，确定正确的蛋白质结构。
The correct protein structure needs to be determinedafter analyzing the protein amino acid sequence.9.蛋白质类药物需要进行体内外药效学研究。
免疫球蛋白PPT演示课件
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二、单克隆抗体（McAb）
是应用杂交瘤技术制备的，针对单一抗 原表位，由一个B细胞分化增殖的子代细胞 集团合成的高特异性和高均一性抗体，称之 。
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本章重点
1、概念：抗体、免疫球蛋白、多克隆抗 体、单克隆抗体。 2、Ig的基本结构和功能。 4、免疫球蛋白的生物学功能。 5、各类Ig的主要特征及功能。
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㈡ 分泌型IgA（SIgA ）
1、为二聚体，由两 个 IgA 单 体 ， 一 个 J 链 和一个分泌片共同组 成。
2、婴儿可从初乳中 获得SIgA 。出生4~6个 月后开始合成IgA。
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四、IgE
1、以单体形式存在，在种系进化中最晚 出现，并且在血清中含量最低。
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（四）功能区
1、L链可分为可变区（VL）和恒定区（CL ）两个功能区。
2、H链功能区：IgG、IgA和IgD的H链各有 一个可变区（VH）和三个恒定区（CH1、CH2、 CH3）共四个功能区；IgM和IgE则多有一个CH4 共五个功能区。
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铰链区
高变区
图 免疫球蛋白的结构 2020/3/21
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3、CDR ：VH和VL的HVR区共同构成抗 原结合部位，因该部位在空间结构上与表位 （抗原决定基）形成精密的互补，故又称为 互补决定区（CDR）。
2020/3/21 图 抗体高变区与表位结合
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3、CDR ：VH和VL的HVR区共同构成抗 原结合部位，因该部位在空间结构上与表位 （抗原决定基）形成精密的互补，故又称为 互补决定区（CDR）。
第04章免疫球蛋白
多链糖蛋白， γ球蛋白
抗体（Antibody，Ab） BCR
B B
B B
特异性抗体
免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）：
具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白
免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig） 与抗体（antibody，Ab）
免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）：
MRC Laboratory of Molecular Biology in Cambridge
Gerald M. Edelman （1929-）
Frederick Sanger （1918—） United Kingdom
四、 水解片段
MRC Laboratory of Molecular Biology in Cambridge, 1948
二、 免疫球蛋白的结构域（功能区） （一）结构域
• 结构域： • H链和L链可通过链内二硫 键折叠成若干个球形结构
键内二硫键
（二）功能区
• CL和CH1： • 同种异型（不同个体） 的遗传标记 • CH2和CH2： • 补体结合位点
（三） 铰链区 （hinge region）
• 位于CH1～CH2之间； • 对蛋白酶敏感，易伸展弯曲
• 3、五种免疫球蛋白的分类是根据____ • A、H链和L链均不同 B、V区不同 C、L链不同 • D、H链不同 E、连接H链的二硫键位置和数目不同
• 4、免疫球蛋白的高变区位于_____ • A、VH 和CH B、VL 和VH • D、VH 和CL E、CL 和CH • • • • • • • • • • 5、CDR即为_____ A、Fab段 B、Fc段 D、HVR E、互补决定区
课堂测试
某大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(2055)
某大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 恶性肿瘤的迅速增长是由于细胞周期的时间变短，细胞分裂加快。
（）答案：错误解析：恶性肿瘤的迅速增长是因为肿瘤细失去了最高分裂次数，没有接触抑制现象，从而使得细胞分裂的速度加快。
2. 基因组印记是指基因组中某些基因的甲基化模式。
（）答案：错误解析：基因组印记是指基因根据亲代的不同而有不同的表达。
印记基因的存在能导致细胞中两个等位基因的一个表达而另一个不表达。
3. 激光扫描共焦显微术利用激光切割细胞产生光切片（optical section），从而得到该层的清晰图像。
（）答案：错误解析：激光扫描共焦显微镜利用光学切片即改变交点获得一系列细胞不同切面上的图像，经叠加后便可重构样品的三维结构，并不是利用激光对样本进行切割。
4. 胆固醇使得脂质在双层中堆积更紧密，但它并没有降低膜的流动性。
（）[复旦大学2019研]答案：正确解析：胆固醇使得脂质在双层中堆积更为紧密，但它并没有降低膜脂的流动性，在大部分动物细胞膜中高浓度的胆固醇还可以防止碳氢链聚合以及结晶态的形成。
5. 泛醌和细胞色素c都是可扩散的电子载体。
（）答案：正确解析：泛醌和细胞色素c均可在膜平面上迅速地移动。
6. 细胞在有充足营养条件下，从G1期进入M期。
（）[上海交通大学2007研]答案：正确解析：细胞具有自我保护意识，当周围的环境不适合分裂增殖时不会进入M期，只有当周围环境适合（如有充足营养条件）才会进入M 期。
7. 在内质网，脂质合成的部位和催化糖基化的部位都位于内质网腔面的一侧。
（）答案：错误解析：脂质合成发生在细胞质基质侧，糖基化修饰发生在内质网前面一侧。
8. 信号分子有水溶性和脂溶性之分，但它们的作用机理是相同的。
免疫学试题一
免疫学试题一work Information Technology Company.2020YEAR1、机体免疫系统识别和清除突变细胞的功能称为 ( )2、A、免疫调节B、免疫缺陷C、免疫耐受D、免疫防御E、免疫监视2、首次应用类毒素进行预防接种的科学家是 ( )A、PasteurB、BehringC、JennerD、BorderE、Burner3、最早提出克隆选择学说的科学家是 ( )A、KohlerB、BorderC、KochD、BurnetE、Pasteur4、参与固有性免疫应答的免疫分子是 ( )A、TCRB、BCRC、NK细胞D、补体E、Ab5、最早用人痘苗预防天花的国家是 ( )A、美国B、日本C、英国D、德国E、中国6、免疫对机体是 ( )A、有害的B、有利的C、正常条件下有利，异常条件下有害D、有利无害E、有害无利7、中枢免疫器官与外周免疫器官的区别是 ( )A、中枢免疫器官是T细胞分化成熟的场所B、外周免疫器官是B细胞分化成熟的场所C、中枢免疫器官是B细胞分化成熟的场所D、外周免疫器官是B细胞分化成熟的场所E、中枢免疫器官是免疫细胞产生、分化成熟的场所，而外周免疫器官是淋巴细胞分布、定居和产生免疫应答的场所8、人类B淋巴细胞分化成熟的场所是 ( )A、腔上囊B、脾C、胸腺D、淋巴结E、骨髓9、免疫系统的组成是 ( )A、中枢免疫器官、外周免疫器官B、免疫细胞、黏膜免疫系统、中枢免疫器官C、中枢免疫器官、免疫细胞、皮肤免疫系统D、免疫分子、黏膜免疫系统、皮肤免疫系统E、免疫器官和组织、免疫细胞、免疫分子10、人体免疫细胞产生、发育、分化成熟的场所是 ( )A、胸腺和淋巴结B、胸腺和骨髓C、淋巴结和脾D、骨髓和黏膜免疫系统E、脾和胸腺11、胸腺的作用是 ( )A、T细胞成熟、分化场所B、B细胞定居场所C、T细胞发生场所D、B细胞产生免疫应答的场所E、T细胞定居场所12、超抗原 ( )A、可以多克隆激活某些T细胞或B细胞B、须经抗原呈递细胞加工处理C、与自身免疫病无关D、有严格的MHC限制性E、只能活化一个相应的T细胞克隆13、下列关于抗原的叙述，哪一项是错误的 ( )A、大分子蛋白质抗原常含有多种不同的抗原决定基B、抗原诱导免疫应答必须有T细胞辅助C、不同的抗原之间可以有相同的抗原决定基D、抗原不一定只诱导正免疫应答E、半抗原虽无免疫原性，但可与相应抗体结合14、属于自身抗原的是 ( )A、ABO血型抗原B、肺炎球菌荚膜多糖C、类脂D、眼晶体蛋白E、破伤风类毒素15、某些抗原称为TI-Ag，这是因为 ( )A、抗原来源于非胸腺组织B、它诱生的抗体是在骨髓中产生的C、它诱生的抗体属于IgG类抗体D、抗原往往具有复杂和不相同的抗原决定簇E、它能直接刺激B细胞产生抗体，无需T细胞辅助16、属于异嗜性抗原的是 ( )A、Rh抗原与人的RBCB、AFP与乙肝病毒C、马血清与破伤风杆菌D、大肠杆菌O14型的多糖抗原与人结肠粘膜E、类毒素与抗毒素17、与载体偶联才具有免疫原性的物质称为 ( )A、变应原B、完全抗原C、载体D、佐剂E、半抗原18、动物血清抗毒素对人而言属于 ( )A、异种抗原B、同种异型抗原C、独特型抗原D、共同抗原E、合成抗原19、甲、乙两种抗原都能与某一抗体发生特异性结合反应，这两种抗原相互称为 ( )A、半抗原B、共同抗原C、TD-AgD、TI-AgE、完全抗原20、超抗原与T细胞结合的特点，下列哪项是错误的 ( )A、主要与CD4T细胞结合B、不需APC加工C、与TCRVβ链结合D、直接与APC的MHCⅡ类分子非多态区外侧结合E、有MHC限制性21、关于TI抗原哪项是错误的 ( )A、包括细菌脂多糖、肺炎球菌荚膜多糖、伤寒杆菌鞭毛抗原B、产生的抗体只能是IgMC、刺激机体不引起免疫记忆，故不表现再次应答D、不引起细胞免疫应答E、能刺激无胸腺或无T细胞机体产生抗体22、只具有与抗体结合能力，而单独不能诱导抗体产生的物质是 ( )A、自身抗原B、半抗原C、完全抗原D、胸腺依赖性抗原E、胸腺非依赖性抗原23、抗原的特异性取决于 ( )A、抗原决定基的性质、数目和空间构象B、抗原决定基的数目C、抗原的免疫反应性D、抗原的异物性E、抗原的分子量24、凡具有强免疫原性的物质，分子量一般为 ( )A、100kDB、<10kDC、<4kDD、≥l0kDE、10kD25、下列生物制品中对人无免疫原性的物质是 ( )A、人血浆丙种球蛋白B、BSAC、类毒素D、动物来源的抗毒素E、苯胺26、抗原在机体中不可能诱导出现 ( )A、免疫耐受B、超敏反应C、免疫缺陷D、自身免疫性疾病E、免疫排斥27、抗体对具有相同或相似决定基的不同抗原的反应称为 ( )A、特异性反应B、非特异性反应C、交叉反应D、过敏反应E、以上都是28、决定抗原与抗体反应特异性的物质基础是 ( )A、载体B、抗原决定基C、佐剂D、TI-AgE、TD-Ag29、阿司匹林引起服用者出现溶血现象是由于 ( )A、药物可引起人红细胞溶解B、由针对药物的抗体引起C.由细胞因子引起D、通过阿司匹林激活补体而使红细胞溶解E、载体-半抗原结合效应所致30、下列属于天然佐剂是 ( )A、多聚核苷酸B、内毒素C福氏完全佐剂D百日咳杆菌E、福氏不完全佐剂31、与载体蛋白偶联后可获得免疫原性的物质是 ( )A、超抗原B、完全抗原C、酵母多糖D、半抗原E、DNA32、B细胞识别抗原决定基的特点是 ( )A、特异性识别隐蔽抗原决定基B、特异性识别载体与隐蔽的抗原决定基C、特异性识别载体决定基D、特异性识别抗原分子表面的决定基E、特异性识别所有的抗原决定基33、兄弟姐妹间进行器官移植引起排斥反应的物质是 ( )A、异种抗原B、自身抗原C、异嗜性抗原D、同种异体抗原E、超抗原34、血清半衰期最长的Ig是 ( )A、IgAB、IgMC、IgED、IgDE、IgG35、下列哪种物质不是抗体 ( )A、抗毒素血清B、刀豆蛋白C、淋巴细胞抗血清D、胎盘丙种球蛋白E、白喉抗毒素36、下列分泌液中不含IgA的是 ( )A、唾液B、初乳C、支气管黏液D、肠道分泌液E、汗液37、下列成分有可能与大分子抗原结合而出现肉眼可见反应的是 ( )A、IgG的H链B、IgG的L链C、Fab段D、Fc段E、F(ab′)2段38、新生儿从母乳中获得的抗体是 ( )A、IgG类抗体B、IgM类抗体C、IgA类抗体D、IgD类抗体E、IgE类抗体39、在种系发生过程中最早出现的Ig是 ( )A、IgGB、IgDC、IgED、IgME、IgA40、天然ABO血型抗体属于 ( )A、IgAB、IgMC、IgGD、IgDE、IgE41、合成sIgA分泌片的细胞是 ( )A、巨噬细胞B、血管内皮细胞C、浆细胞D、黏膜上皮细胞E、肥大细胞42、不具有FcγR的细胞是 ( )A、单核细胞B、浆细胞C、中性粒细胞D、巨噬细胞E、NK细胞43、人体内开始合成IgM的时间是 ( )A、胎儿早期B、出生后1个月C、出生后3个月D、出生后6个月E、胎儿晚期44、脐血中哪类Ig增高提示胎儿有宫内感染 ( )A、IgGB、IgAC、IgGD、IgDE、IgE45、有四个重链恒定区的Ig是 ( )A、IgD和IgMB、IgA和IgMC、IgD和IgAD、IgM和IgEE、IgA和IgE46、3～6个月婴儿易患呼吸道感染主要是因为哪类Ig不足 ( )A、IgMB、IgGC、IgED、sIgAE、IgD47、儿童患肠道寄生虫病时血液和肠粘液中哪种Ig可增高 ( )A、IgGB、IgAC、IgMD、IgDE、IgE48、中和作用最强的Ig是 ( )A、IgMB、IgGC、IgED、IgAE、IgD49、IgG通过经典途径激活补体至少需要 ( )A、1个B、2个C、4个D、5个E、3个50、sIgA的J链的合成细胞是 ( )A巨噬细胞B淋巴结中的浆细胞C、B细胞D黏膜下浆细胞E、黏膜上皮细胞51、血清中含量最高的Ig是 ( )A、IgMB、IgEC、IgAD、IgDE、IgG52、人类IgD的主要分布细胞是 ( )A、B细胞B、DC细胞C、单核巨噬细胞D、T细胞E、肥大细胞53、关于抗体，下列描述错误的是 ( )A、抗体都是体外产生的B、抗体主要存在于血液、体液、黏膜表面及分泌液中C、抗体是能与相应抗原特异性结合的球蛋白D、抗体都是免疫球蛋白E、抗体是指具有免疫功能的球蛋白54、下列哪个部位的浆细胞一般情况下不能产生IgE ( )A、胃肠道黏膜B、鼻咽C、支气管D、扁桃体E、脾脏55、与抗原结合后，激活补体能力最强的Ig是 ( )A、IgAB、IgDC、IgGD、IgME、IgE56、在抗感染过程中，补体发挥作用依次出现的途径是 ( )A、经典途径--MBL途径--旁路途径B、旁路途径--经典途径--MBL途径C、旁路途径--MBL途径--经典途径D、经典途径--旁路途径--MBL途径E、MBL途径--经典途径--旁路途径57、能牢固地附着于细胞表面，但溶细胞能力有限的是 ( )A、C5bB、C5b6C、C5b67D、C5b678E、C5b678958、补体MBL途径的激活物是 ( )A、抗原抗体复合物B、脂多糖C、聚合IgAD、甘露聚糖E、酵母多糖59、全身性细菌感染时，补体活性片段发挥免疫效应作用主要通过 ( )A、溶解细胞作用B、ADCC作用C、调理作用D、清除免疫复合物E、引起炎症反应60、补体系统激活必须参加的成分是 ( )A、C1s、C1rB、C4和C2C、B因子和D因子D、C3 C5～C9E、D因子和P因子61、能与免疫球蛋白Fc段补体结合点相结合的补体分子是 ( )A、C1qB、C1sC、C3D、C1rE、以上都不是62、过敏毒素作用最强的补体裂解片段是 ( )A、C3bB、C2aC、C3aD、C4aE、C5a63、具有较强的趋化作用和过敏毒素作用的补体裂解片段是 ( )A、C3aB、C3bC、C4aD、C5aE、C2a64、能够激活补体旁路途径的Ig是 ( )A、IgG1B、IgG2C、IgG3D、IgME、凝聚的IgA65、在补体经典激活过程中，不被裂解的组分是 ( )A、C1B、C2C、C3D、C4E、C666、以下不参加旁路激活途径的是 ( )A、D因子、P因子B、C3、C5C、C4、C2D、C6、C7E、B因子、C967、能通过Fc段与C1q结合的Ig是 ( )A、IgG1、IgG3、IgG4、IgMB、IgG1、IgG2、IgG3、IgAC、IgG1、IgG2、IgD、IgM D、IgG1、IgG2、IgG3、IgME、IgG、IgA、IgM、IgG468、以下在补体激活效应的放大作用中起重要作用的是 ( )A、C3B、C2C、C1D、C5E、C469、经典途径中激活补体能力最强的Ig是 ( )A、IgMB、IgG3C、IgG2D、IgG1E、IgA70、关于补体描述正确的是 ( )A、参与凝集反应B、对热稳定C、在免疫病理过程中发挥重要作用D有免疫调节作用，无炎症介质作用E补体只在特异性免疫效应阶段发挥作用71、以下参与旁路激活途径的补体成分是 ( )A、C3～C9B、C1～C9C、C5～C9D、C1～C4E、C1、C2、C472、关于补体三条激活途径描述错误的是 ( )A、三条途径的膜攻击复合物相同B、旁路途径在感染后期发挥作用C、经典途径从C1激活开始D、旁路途径从C3激活开始E、MBL途径中形成的C3转化酶是C4b2b73、以下不参与旁路激活途径的是 ( )A、D因子B、B因子C、C1D、C3E、P因子74、血清中含量最高的补体固有成分是 ( )A、C1B、C9C、B因子D、C3E、C575、同时参与补体三种激活途径的成分是 ( )A、C1qB、C4和C2C、C3D、B因子E、D因子76、在经典激活途径中，补体的识别单位是 ( )A、C1qB、C2C、C4D、C1rE、C1s77、MBL活化途径的C3转化酶是 ( )A、C1sB、C4b2bC、C3bBbD、C3bBbPE、D因子78、与C5转化酶形成无关的补体成分是 ( )A、B因子B、C5C、C4D、C3E、C279、以下具有调理作用的补体裂解片段是 ( )A、C5aB、C5bC、C3aD、C3bE、C4a80、能协助清除IC的补体裂解片段是 ( )A、C3aB、C3dC、iC3bD、C5aE、C3b81、关于CK的作用特点叙述错误的是 ( )A、以特异性方式发挥作用B、合成和分泌是一种自我调控的过程C、主要参与免疫反应和炎症反应D、生物学效应强E产生和作用具有多向性82、可刺激多种造血细胞分化成熟的CK是 ( )A、TGFB、ILC、TNFD、IFNE、SCF83、属于CXC趋化性细胞因子，对中性粒细胞具有趋化作用的IL是 ( )A、IL-1B、IL-2C、IL-3D、IL-4E、IL-884、以下IL-2的主要产生细胞是 ( )A、巨噬细胞B、NK细胞C、树突状细胞D、肥大细胞E、活化T细胞85、集落刺激因子不包括 ( )A、EPOB、TNFC、TPOD、GM-CSFE、SCF86、与肿瘤病人进行性消瘦有关的CK是 ( )A、IL-8B、IFNC、IL-2D、TNF-αE、IL-187、在Ig类别转换中，能促进IgM转换为IgE的CK是 ( )A、IL-1B、IL-2C、IL-4D、IL-6E、TNF88、不属于CK特性的是 ( )A、重叠性B、拮抗性C、特异性D、多效性E、协同性89、CD4主要表达于 ( )A、CTLB、B细胞C、NK细胞D、ThE、Mφ90、CD8主要表达于 ( )A、CTLB、B细胞C、NK细胞D、ThE、APC91、CD2分子又称为 ( )A、LFA-1B、LFA-2C、LFA-3D、ICAM-1E、ICAM-292、CD28分子的配体是 ( )A、CD58B、ICAM-1C、MHCⅠ类分子D、TCRE、CD80／CD8693、CD4分子为单链跨膜糖蛋白，共有4个IgSF结构域，其中可与HIVgp120相结合的结构域是 ( )A、第1、2个V结构域B、第2个V结构域C、第2个C2结构域D、第1个V结构域E、第1个C2结构域94、特异性识别抗原的受体是 ( )A、CRB、T细胞受体C、B细胞受体D、NK细胞受体E、IgFc受体95、下列哪一种细胞不表达HLAⅠ类抗原 ( )A、T淋巴细胞B、B淋巴细胞C、成熟的红细胞D、上皮细胞E、中性粒细胞96、属于a型Ⅰ类的HLA基因是 ( )A、DP、DQ、DRB、A、B、CC、E、G、FD、K、D、LE、Eb、Ea.Ab、Aa97、MHC分子中不形成Ag结合槽的结构域是 ( )A、Ⅱ类分子的α1B、Ⅱ类分子的β1C、Ⅱ类分子的α2和β2D、Ⅰ类分子的α1E、Ⅰ类分子的α298、HLAⅠ类抗原的主要功能是 ( )A、向Th细胞提呈外源性抗原肽B、向Tc细胞提呈内源性抗原肽C、向Th细胞提呈外源性抗原肽D、向Tc细胞提呈外源性抗原肽E、向γδTc细胞提呈内源性抗原肽99、人类HLAⅠ类抗原β2m链编码基因的染色体定位是 ( )A、第2号染色体短臂B、第6号染色体长臂C、第9号染色体长臂D、第l5号染色体短臂E、第6号染色体短臂100、MHC分子中不参与构成Ag结合槽的结构域是 ( )A、Ⅰ类分子的α1B、Ⅰ类分子的α2C、Ⅰ类分子的α3D、Ⅱ类分子的α1E、Ⅱ类分子的β1101、抗原肽中与HLA肽结合区结合的氨基酸称为 ( )A、锚定残基B、可变区C、Ig样区D、共同基序E、跨膜区102、不属于MHC经典Ⅰ类和Ⅱ类基因的是 ( )A、HLA-AB、HLA-BC、HLA-ED、HLA-DRE、HLA-C103、下列可参与非特异性免疫作用的细胞是 ( )A、CD4Th1细胞B、CD4Th2细胞C、γδT细胞D、αβT细胞E、CD8Tc细胞（CTL细胞）104、感染期间患者体内产生的急性期蛋白是 ( )A、MBLB、乳铁蛋白C、热休克蛋白D、C4结合蛋白E、免疫球蛋白105、早期非特异性免疫应答阶段发生于感染后 ( )A、0－4小时之内B、0－24小时之内C、4－48小时之内D、4－96小时之内E、24－96小时之内106、对寄生虫具有吞噬杀伤作用的免疫细胞是 ( )A、中性粒细胞B、单核细胞C、嗜酸性粒细胞D、嗜碱性粒细胞E淋巴细胞107、巨噬细胞所不具备的受体是 ( )A、IgGFc受体B抗原识别受体C、细胞因子受体D、甘露糖受体E、C3b受体108、下列淋巴细胞中，不属固有免疫细胞的是 ( )A、γδT细胞B、αβT细胞C、NKT细胞D、NK细胞E、B1细胞选择题答案1、E2、B3、D4、D5、E6、C7、E8、E9、E 10、B11、A 12、A 13、B 14、D 15、E 16、D 17、E 18、A 19、B 20、E 21、B 22、B 23、A 24、A 25、E 26、D 27、C 28、B 29、E 30、D 31、D 32、D 33、D 34、E 35、B 36、E 37、E 38、A 39、D 40、B 41、D 42、B 43、E 44、A 45、D 46、D 47、 48、A 49、B 50、D 51、E 52、A 53、A 54、E 55、D 56、C 57、D 58、D 59、C 60、D 61、A 62、E 63、D 64、E 65、E 66、C 67、D 68、A 69、A 70、C 71、C 72、B 73、C 74、D 75、C 76、A 77、B 78、B 79、D 80、E 81、A 82、E 83、E 84、E 85、B 86、D 87、C 88、C 89、D 90、A 91、B 92、E 93、A 94、B/C 95、C 96、B 97、C 98、B、 99、D 100、C 101、A 102、C 103、C 104、C 105、C 106、A 107、B 108、B。
某大学生物工程学院《细胞生物学》考试试卷(1309)
某大学生物工程学院《细胞生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（50分，每题5分）1. 包围所有细胞的糖衣称为糖萼，它使细胞更润滑。
（）答案：正确解析：多糖是黏液的主要成分，由多糖和寡糖组成的糖萼是很重要的润滑剂。
2. 原核生物核糖体的大亚基可以与真核生物核糖体的小亚基重组。
（）答案：错误解析：原核生物核糖体的大亚基与真核生物核糖体的小亚基重组后的核糖体将丧失蛋白质合成的作用，所以两者不能重组。
3. 纤连蛋白以不溶的方式存在于血浆，以可溶的方式存在于细胞外基质。
（）答案：错误解析：纤连蛋白以不溶的方式存在于细胞外基质，以可溶的方式存在于血浆。
4. 当植物富含NADP＋时，会发生循环式光合磷酸化。
（）答案：错误解析：由于非循环式光合磷酸化消耗NADP＋，故当植物缺少NADP＋时，才会发生循环式光合磷酸化，只产生ATP。
5. 原生质是细胞内除了细胞核以外的所有生活物质。
（）答案：错误解析：原生质包括细胞内所有的生活物质，是细胞内生命物质的总称。
它的主要成分是糖类，蛋白质，核酸，脂质。
原生质分化产生细胞膜、细胞质和细胞核，构建成具有特定结构体系的原生质体，即细胞。
6. 146bp的DNA双螺旋盘绕组蛋白八聚体两圈整，并由组蛋白H1锁住核小体DNA的进出端。
（）答案：错误解析：146bp的DNA双螺旋盘绕组蛋白八聚体1.75圈；组蛋白H1在核心颗粒外结合额外的20bp DNA，锁住核小体DNA的进出端。
7. 钙泵即钙通道蛋白，可以对生物膜内外Ca2＋进行跨膜转运。
（）答案：错误解析：钙泵介导直接消耗ATP的主动运输，逆浓度梯度将Ca2＋由胞质（低浓度）泵入内质网或者细胞外（高浓度）。
而钙通道介导是被动运输，不消耗能量，顺浓度梯度协助扩散Ca2＋进入胞质。
免疫球蛋白的结构
第一节免疫球蛋白的结构（The Structure of Immunoglobulin)B淋巴细胞在抗原刺激下增殖分化为浆细胞，产生能与相应抗原发生特异性结合的免疫蛋白，这类免疫球蛋白被称为抗体（antibody, Ab）。
1937年，Tiselius用电泳方法将血清蛋白分为白蛋白、α1、α2、β及γ球蛋白等组分，其后又证明抗体的活性部分是在γ球蛋白部分。
因此，相当长一段时间内，抗体又被称为γ球蛋白（丙种球蛋白）。
实际上，抗体的活性除γ球蛋白外，还存在于α和β球蛋白处。
1968年和1972年的两次国际会议上，将具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。
Ig是化学结构的概念，它包括正常的抗体球蛋白和一些未证实抗体活性的免疫球蛋白，如骨髓瘤病人血清中的M蛋白及尿中的本周氏（Bence Jones, BJ）蛋白等。
免疫球蛋白可分为分泌型（secreted Ig,SIg）和膜型（membrane Ig, mIg）。
前者主要存在于血清及其他体液或外分泌液中，具有抗体的各种功能；后者是B细胞表面的抗原识别受体。
☆☆相关素材☆☆图片正常人血清电泳分离图一免疫球蛋白的基本结构 The basical structure of immunoglobulin免疫球蛋白分子是由两条相同的重链（heavy chain，H链）和两条相同的轻链（light chain，L链）通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。
X射线晶体结构分析发现，IgG分子由3个相同大小的节段组成，位于上端的两个臂由易弯曲的铰链区（hinge region）连接到主干上形成一个"Y"形分子，称为Ig分子的单体，是构成免疫球蛋白分子的基本单位。
☆☆相关素材☆☆图片免疫球蛋白分子的基本结构图片 IgG分子结构示意图（一）重链和轻链免疫球蛋白重链的分子量约为50～75kD，由450～550个氨基酸残基组成。
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ｃａｎｃｅｒ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＧＳＥ９４７１４ｄａｔａｆｒｏｍＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＯｍｎｉｂｕｓ(ＧＥＯ)ꎬｗｉｔｈＰＭＰ２２ｋｎｏｃｋｅｄｄｏｗｎｂｙｓｈｏｒｔｈａｉｒｐｉｎＲＮＡｓ(ｓｈＲＮＡｓ)ａｎｄｔｈａｔｗｉｔｈｏｕｔＰＭＰ２２ｂｅｉｎｇｋｎｏｃｋｅｄｄｏｗｎꎬｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘ￣ｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓ(ＤＥＧｓ)ｂｙＧＥＯ２Ｒ.ＡｆｔｅｒｓｅｌｅｃｔｅｄꎬＤＥＧｓｕｎｄｅｒｗｅｎｔｇｅｎｅｏｎｔｏｌｏｇｙａｎｄＫｙｏｔｏＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａｏｆＧｅｎｅｓａｎｄＧｅｎｏｍｅｓ(ＫＥＧＧ)ｐａｔｈｗａｙａｎａｌｙｓｉｓ.Ｐｒｏｔｅｉｎ￣ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ(ＰＰＩ)ｎｅｔｗｏｒｋｓｗｅｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｕｓｉｎｇＳｅａｒｃｈＴｏｏｌｆｏｒｔｈｅＲｅｔｒｉｅｖａｌｏｆＩｎｔｅｒａｃｔｉｎｇＧｅｎｅｓ(ＳＴＲＩＮＧ)ｄａｔａｂａｓｅ.ＭＣＯＤＥｉｎＣｙｔｏｓｃａｐｅｗａｓｕｔｉｌｉｚｅｄｔｏａｎａ￣ｌｙｚｅｓｕｂｍｏｄｕｌｅｓｏｆＰＰＩ.ＴｈｅＣｙｔｏＨｕｂｂａｐｌｕｇｉｎｗａｓｕｓｅｄｔｏｓｃｒｅｅｎｈｕｂｇｅｎｅｓｏｆＤＥＧｓ.ＴｈｅａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｒｅｌａｔｅｄｇｅｎｅｓａｎｄｄｒｕｇｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｕｓｉｎｇＧｅｎｏｍｉｃｓｏｆＤｒｕｇＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｉｎＣａｎｃｅｒ(ＧＤＳＣ)ｄａｔａｂａｓｅ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀３１４ＤＥＧｓｗｉｔｈ１０ｆｏｌｄｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｄｏｗｎｓｔｒｅａｍｏｆＰＭＰ２２ｗｅｒｅｆｏｕｎｄꎬｉｎｃｌｕｄｉｎｇ２８３ｕｐａｎｄ３１ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｅｎｅｓ.ＤＥＧｓｗｅｒｅｍａｉｎｌｙｅｎｒｉｃｈｅｄｉｎｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｕｃｈａｓｃｅｌｌ￣ｃｅｌｌａｄｈｅｒｅｎｓｊｕｎｃｔｉｏｎꎬｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｓｕｃｈａｓｃｅｌｌ￣ｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎꎬｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｕｎｃｔｉｏｎｓｕｃｈａｓＰｏｌｙＡＲＮＡｂｉｎｄｉｎｇꎬｐａｔｈｗａｙｓｓｕｃｈａｓｃｅｌｌｃｙｃｌｅ.４ｓｕｂｍｏｄｕｌｅｓｉｎＰＰＩｗｅｒｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｐａｔｈｗａｙｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍｅꎬｕｂｉｑｕｉｔｉｎｍｅｄｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ(Ｐ<０ ０１)ꎬａｎｄ３ＲＥＡＣＴＯＭＥｓ(Ｐ<０ ０５).ＨｕｂｇｅｎｅｓｓｕｃｈａｓＰＰＩＥꎬＨＮＲＮＰＡ１ꎬＹＢＸ１ｗｅｒｅｇｉｖｅｎｂｙＭＣＣａｌｇｏ￣ｒｉｔｈｍ.ＡＲＩＤ１ＡꎬＤＨＸ９ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｃｉｓｐｌａｔｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｉｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＰＭＰ２２ｄｅｖｅｌｏｐｓｃｈｅ￣ｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｙｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｂｙｍｕｌｔｉｐｌｅｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓꎬｍｏｌｅｃｕｌａｒｆｕｎｃｔｉｏｎｓꎬｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓａｎｄｐａｔｈ￣ｗａｙｓ.ＨｕｂｇｅｎｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇＡＲＩＤ１ＡｅｔｃａｎｄｐａｔｈｗａｙｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｃｅｌｌｃｙｃｌｅꎬｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍｅａｎｄｕｂｉｑｕｉｔｉｎｍｅｄｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓꎬｍａｙｂｅｔｈｅｔａｒｇｅｔｓｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇＰＭＰ２２ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｙｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ｓｔｏｍａｃｈｎｅｏｐｌａｓｍｓꎻｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎻＰＭＰ２２ꎻｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓａｎａｌｙｓｉｓꎻｈｕｂｇｅｎｅ网络出版时间:２０１９－３－２６１３:４４㊀网络出版地址:ｈｔｔｐ://ｋｎｓ.ｃｎｋｉ.ｎｅｔ/ｋｃｍｓ/ｄｅｔａｉｌ/３４.１０６５.Ｒ.２０１９０３２２.１７５９.００３.ｈｔｍｌ重组人免疫球蛋白Ｄ￣Ｆｃ片段蛋白的构建张㊀静ꎬ陈文生ꎬ胡晓曦ꎬ黄㊀琼ꎬ吴育晶ꎬ魏㊀伟摘要㊀目的㊀构建重组人免疫球蛋白Ｄ￣Ｆｃ(ＩｇＤ￣Ｆｃ)片段蛋白ꎬ检测ＩｇＤ受体(ＩｇＤＲ)在健康人ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４上的表达情况ꎬ检测ＩｇＤ￣Ｆｃ与ＩｇＤ竞争结合ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ的能力ꎮ方法㊀采用ＰＣＲ法得到人ＩｇＤ￣Ｆｃ目的基因ꎬ经原核蛋白表达和层析纯化ꎬ制备出重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白ꎮ流式细胞术检测ＩｇＤＲ在健康人ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４上的表达情况ꎬ以及ＩｇＤ㊁重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白与ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ的竞争结合情况ꎮ结果㊀成功构建含ＩｇＤ￣Ｆｃ基因片段的原核表达载体ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃꎬ得到重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片２０１９－０１－０２接收基金项目:国家自然科学基金(编号:８１３３００８１㊁８１６７３４４４㊁８１６０３１２１)ꎻ安徽医科大学博士科研资助项目(编号:ＸＪ２０１６２９)作者单位:安徽医科大学临床药理研究所ꎬ抗炎免疫药物教育部重点实验室ꎬ抗炎免疫药物安徽省协同创新中心ꎬ合肥㊀２３００３２作者简介:张㊀静ꎬ女ꎬ硕士研究生ꎻ魏㊀伟ꎬ男ꎬ博士ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ责任作者ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｗｗｅｉ＠ａｈｍｕ.ｅｄｕ.ｃｎꎻ吴育晶ꎬ女ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ责任作者ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｗｙｊ＠ａｈｍｕ.ｅｄｕ.ｃｎ段蛋白ꎮＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ与ＩｇＤ亲和力相近ꎬ重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白可与ＩｇＤ竞争性结合ＩｇＤＲꎮ结论㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白工艺成熟稳定ꎬ可与ＩｇＤ竞争性结合ＩｇＤＲꎬ可能成为针对ＩｇＤ水平升高的自身免疫性疾病的新型治疗药物ꎮ关键词㊀免疫球蛋白ＤꎻＩｇＤＲꎻ自身免疫性疾病ꎻ蛋白纯化中图分类号㊀Ｒ９６７文献标志码Ａ文章编号１０００－１４９２(２０１９)０４－０５１４－０６ｄｏｉ:１０.１９４０５/ｊ.ｃｎｋｉ.ｉｓｓｎ１０００－１４９２.２０１９.０４.００３㊀㊀免疫球蛋白Ｄ(ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤꎬＩｇＤ)作为一类免疫球蛋白ꎬ主要以膜结合形式作为Ｂ细胞受体发挥作用ꎬ也可少量以分泌形式作为抗体发挥作用[１]ꎮ病理状态下ＩｇＤ与Ｔ细胞上ＩｇＤ受体(Ｉｇ￣ＤＲ)的过度结合ꎬ可能导致自身抗体生成增多ꎬ自身免疫反应增强ꎬ从而介导自身免疫性疾病的发生[２]ꎮＩｇＤ在一些类风湿关节炎(ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉ￣ｔｉｓꎬＲＡ)㊁系统性红斑狼疮(ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａ￣ｔｏｓｕｓꎬＳＬＥ)患者中高水平表达[３]ꎮ因此ꎬ以ＩｇＤ￣Ｉｇ￣ＤＲ为治疗靶点研发针对治疗高水平ＩｇＤ的自身免疫性疾病的新型生物制剂具有较好的临床前景ꎮ该实验首次制备出重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白ꎬ并检测重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白在健康人ＣＤ４＋Ｔ细胞上与Ｉｇ￣ＤＲ结合的亲和力大小ꎬ起到与ＩｇＤ竞争ＩｇＤＲ的作用ꎬ为进一步研发针对高水平ＩｇＤ自身免疫性疾病的新型生物制剂奠定实验基础ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀样本㊀收集安徽医科大学健康志愿者外周血标本共２０例ꎬ经安徽医科大学伦理委员会批准ꎬ受试者知情同意并签署知情同意书ꎮ１.２㊀主要试剂及仪器㊀人ＩｇＤ蛋白(美国Ａｂｃａｍ公司)ꎻＪｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４细胞株(中国科学院上海细胞库)ꎻ胎牛血清(美国Ｇｉｂｃｏ公司)ꎻ红细胞裂解液(美国ＢＤ公司)ꎻＴＲＩｚｏｌ试剂(美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司)ꎻ人淋巴细胞分离液(天津灏洋生物制品有限公司)ꎻＣＤ４＋Ｔ细胞免疫分选磁珠(德国美天妮试剂公司)ꎻＨｉｓ￣Ｔａｇ亲和层析柱(美国ＧＥ公司)ꎻ１０ｋｕ蛋白超滤管(美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司)ꎻ琼脂糖胶回收试剂盒㊁质粒提取试剂盒(美国ＯＭＥＧＡ公司)ꎻＩＰＴＧ(美国Ｓｉｇｍａ公司)ꎻ超声细胞破碎仪(南京赛飞生物科技有限公司)ꎻ恒温摇菌箱(美国Ｔｈｅｒｍｏ公司)ꎻ蛋白纯化仪(美国ＧＥ公司)ꎻＦＣ５００流式细胞仪(美国ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ公司)ꎮ１.３㊀方法㊀１.３.１㊀ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ表达载体的构建１.３.１.１㊀健康人外周血ｃＤＮＡ获取㊀向１ｍｌ血液中加入３ｍｌ红细胞裂解液ꎬ室温放置１０ｍｉｎ后１００００ｒ/ｍｉｎ离心１ｍｉｎꎻ弃上清液ꎬ加入１ｍｌＴＲＩｚｏｌ试剂混匀ꎬ室温放置５ｍｉｎ后４ħ㊁１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎻ取上清液ꎬ加入０ ２ｍｌ氯仿ꎬ振荡１５ｓ后冰上放置３ｍｉｎꎻ４ħ㊁１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１５ｍｉｎꎬ吸取水相ꎬ加入等体积冰冷异丙醇ꎬ冰上放置２０ｍｉｎ后４ħ㊁１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎻ弃上清液ꎬ加入１ｍｌ７５％乙醇ꎬ４ħ㊁１００００ｒ/ｍｉｎ离心２ｍｉｎꎬ弃上清液ꎻ室温干燥１０ｍｉｎꎬ加入２０μｌＤＥＰＣ水ꎬ溶解ＲＮＡꎻ将ＲＮＡ反转录得到的ｃＤＮＡ保存在－２０ħ待用ꎮ１.３.１.２㊀ＩｇＤ￣Ｆｃ基因片段的扩增及重组表达载体的构建㊀设计上游引物:５ᶄ￣ＧＣＴＡＧＣＡＴＧＴＧＴＣ￣ＣＧＡＧＣＣ￣３ᶄꎬ下游引物:５ᶄ￣ＴＣＴＧＡＧＣＴＡＧＴＴＧＡＧ￣ＣＡＧＡＧＴＣＣＧ￣３ᶄꎬ以上步ｃＤＮＡ为模板ꎬ扩增条件为９４ħ变性５ｍｉｎꎬ９４ħ３０ｓꎬ５８ħ３０ｓꎬ７２ħ１ｍｉｎꎬ共３５个循环ꎬ７２ħ延伸１０ｍｉｎꎮＰＣＲ产物进行电泳检测并回收纯化目的片段ꎮ将ＩｇＤ￣ＦｃＰＣＲ产物与ｐＧＭＴ￣ｅａｓｙ克隆载体连接ꎬ转化至大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞后均匀涂布于含氨苄霉素的培养板ꎬ挑取单克隆菌落ꎬ３７ħ摇菌培养１２ｈ后碱裂解法抽提质粒ꎮＩｇＤ￣ＦｃｐＧＭＴ￣ｅａｓｙ克隆载体双酶切ꎬｐＥＴ２８ａ(＋)表达载体双酶切ꎬ凝胶电泳分离并回收酶切产物ꎬ将双酶切后的目的片段连接于ｐＥＴ２８ａ(＋)表达载体ꎬ转化至ＤＨ５ａꎬ提取质粒ꎬ进行ＩｇＤ￣Ｆｃ表达载体酶切初步验证和测序鉴定ꎮ１.３.２㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的诱导表达㊀将ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ原核表达载体转化至ＢＬ２１(ＤＥ３)感受态细胞中ꎬ挑取单菌落于含卡那霉素的ＬＢ培基中ꎬ１５０ｒ/ｍｉｎ扩大培养至ＯＤ６００ｎｍ值为０ ６时加入终浓度为０ ４ｍｍｏｌ/Ｌ的ＩＰＴＧꎬ２０ħ诱导表达６ｈꎮ１.３.３㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的亲和层析㊁分子筛纯化及产物测定㊀向离心后的菌液沉淀中加入适量裂菌液(ＮａＨ２ＰＯ４ ２Ｈ２Ｏ２０ｍｍｏｌ/ＬꎬＮａＣｌ５００ｍｍｏｌ/Ｌꎬ甘油１０％ꎬＴｒｉｔｏｎＸ￣１００１％ꎬＰＭＳＦ１ｍｍｏｌ/Ｌꎬ溶菌酶１ｍｇ/ｍｌ)并重悬ꎬ冰上裂解３０ｍｉｎ后冰浴超声破碎１５ｍｉｎꎬ４ħ㊁１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１５ｍｉｎꎬ上清液留存ꎬＳＤＳ￣ＰＡＧＥ分析ＩｇＤ￣Ｆｃ重组蛋白表达形式ꎮ采用Ｈｉｓ￣Ｔａｇ预装柱纯化ＩｇＤ￣Ｆｃ重组蛋白ꎬ收集洗脱产物后采用１０ｋｕ蛋白超滤管进行二次纯化ꎮ将蛋白产物经ＳＤＳ￣ＰＡＧＥꎬ考马斯亮蓝染色ꎬ通过扫描灰度值分析ＩｇＤ￣Ｆｃ重组蛋白纯度ꎮ１.３.４㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞的分离㊁Ｔ淋巴瘤细胞株的培养㊀密度梯度离心法分离血液中单个核细胞ꎬ每１０７细胞加５０μｌＣＤ４＋磁珠ꎬ混合均匀ꎬ３０ħ孵育３０ｍｉｎꎻ加入１ｍｌＢＤ清洗Ｂｕｆｆｅｒ混匀后放至磁力架上孵育１０ｍｉｎꎻ吸弃流式管内上清液ꎬ加入１ｍｌＢＤ清洗Ｂｕｆｆｅｒꎬ孵育５ｍｉｎꎬ并重复操作ꎻ重悬阳性成分ꎬ转入含５％胎牛血清的ＲＰＭＩ￣１６４０培养液中用于实验ꎮＴ淋巴瘤细胞株采用含１０％胎牛血清的ＲＰＭＩ￣１６４０㊁３７ħ㊁５％ＣＯ２进行培养ꎬ取对数生长期细胞用于实验ꎮ１.３.５㊀外周血ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ的表达㊀利用ＦＩＴＣ荧光标记试剂盒标记人ＩｇＤ蛋白(ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ)ꎬ具体操作参见说明书ꎬ向ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４细胞株中加入不同浓度的ＦＩＴＣ￣ＩｇＤꎬ共同３７ħ孵育１ｈꎬ并设置空白对照组ꎬＰＢＳ洗涤后适量重悬细胞ꎬ流式细胞仪检测荧光强度ꎮ１.３.６㊀ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ的亲和力实验㊀将ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４细胞以２ˑ１０６/孔的密度接种至６孔板ꎬ加入不同浓度ＦＩＴＣ￣ＩｇＤꎬ３７ħ孵育２ｈꎮＰＢＳ洗涤后适量重悬细胞ꎬ上机检测荧光强度ꎮ各浓度组的荧光强度减去空白对照组荧光强度ꎬ得到各浓度组ＩｇＤ的特异性结合量ꎬ分别以不同浓度ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ为Ｘ轴ꎬ特异性结合量为Ｙ轴ꎬ绘制饱和曲线ꎬ计算最大结合量(Ｂｍａｘ)和解离常数(ＫＤ)[４]ꎮ１.３.７㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞的ＩｇＤＲ竞争结合实验㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞以２ˑ１０６/孔的细胞密度铺６孔板ꎬ分别加入ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ(１０μｇ/ｍｌ)和不同浓度的重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白(０ ０３㊁０ １㊁０ ３㊁１㊁３㊁１０㊁３０μｇ/ｍｌ)ꎬ３７ħ孵育２ｈꎮＰＢＳ洗涤后适量重悬细胞ꎬ上机检测荧光强度ꎮ２㊀结果２.１㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的表达㊁纯化２.１.１㊀ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ原核表达载体构建㊀通过ＰＣＲ法扩增目的基因ꎬ连接克隆载体ꎬ双酶切ꎬ连接表达载体ꎮ经凝胶电泳检测(图１)㊁测序鉴定(图２)ꎬ序列正确ꎬ成功构建原核表达载体ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃꎮ２.１.２㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的表达㊀诱导后的上清在３４ｋｕ附近有一条明显的条带(图３)ꎬ与理论值相符ꎮ而未转化重组质粒的ＢＬ２１(ＤＥ３)野生菌株在３４ｋｕ附近无明显条带ꎮ表明重组质粒在ＢＬ２１(ＤＥ３)中诱导表达成功ꎬ且以可溶性蛋白形式存在ꎮ２.１.３㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的纯化㊀通过Ｈｉｓ￣图１㊀重组质粒ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ双酶切鉴定㊀㊀Ｍ:ＤＮＡＭａｒｋｅｒꎻ１:空载体ｐＥＴ￣２８ａ(＋)ꎻ２:重组质粒ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃꎻ３㊁４:经双酶切处理后的重组质粒ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣ＦｃＴａｇ亲和层析和分子筛层析两步纯化ꎬ得到纯度９５％以上的重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白(图４㊁５)ꎮ２.２㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞和Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ的表达㊀ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ与ＩｇＤＲ结合后ꎬ流式细胞仪检测细胞表面ＦＩＴＣ荧光强度ꎮ结果显示:随ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ浓度增高ꎬ流式峰图显著右移ꎬ证明ＣＤ４＋Ｔ细胞(图６)㊁Ｊｕｒｋａｔ和ＭＯＬＴ￣４细胞(图７㊁８)上均有ＩｇＤＲ表达ꎮ２.３㊀ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ的亲和力㊀不同浓度ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ与细胞共同孵育后流式细胞仪检测ＦＩＴＣ荧光强度ꎬ结果显示随ＦＩＴＣ￣ＩｇＤ浓度增加ꎬ结合到ＩｇＤＲ上的配体逐渐增多ꎬ结合到ＩｇＤＲ的ＩｇＤ可通过流式细胞仪检测其ＦＩＴＣ平均荧光强度(ＭＦＩ)并绘制饱和曲线(图９)ꎬ分别计算ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面ＩｇＤＲ结合的Ｂｍａｘ和ＫＤꎮ结果显示ꎬＣＤ４＋Ｔ细胞图２㊀原核表达载体ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ测序图图３㊀ＩｇＤ￣Ｆｃ重组蛋白表达产物的ＳＤＳ￣ＰＡＧＥ电泳检测㊀㊀Ｍ:蛋白Ｍａｒｋｅｒꎻ１㊁２㊁３:大肠杆菌ＢＬ２１(ＤＥ３)总蛋白ꎻ４㊁５㊁６:转化ｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣Ｆｃ的ＢＬ２１(ＤＥ３)总蛋白图４㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白Ｈｉｓ￣Ｔａｇ亲和层析纯化峰图图５㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白的纯化㊀㊀Ｍ:蛋白Ｍａｒｋｅｒꎻ１㊁２:大肠杆菌ＢＬ２１(ＤＥ３)总蛋白ꎻ３:亲和层析纯化产物ꎻ４:第二步纯化流穿产物ꎻ５:分子筛层析产物图６㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ表达图７㊀Ｊｕｒｋａｔ细胞表面ＩｇＤＲ表达图８㊀ＭＯＬＴ￣４细胞表面ＩｇＤＲ表达(Ｂｍａｘ＝４５０２ʃ１４４ ６ꎬＫＤ＝７ ２５４ʃ０ ９５６７ꎬＲ２＝０ ９７５１)㊁Ｊｕｒｋａｔ(Ｂｍａｘ＝２７２２ʃ１１２ ７ꎬＫＤ＝９ ８７６ʃ１ ５８９ꎬＲ２＝０ ９６３２)㊁ＭＯＬＴ￣４细胞(Ｂｍａｘ＝２７５１ʃ１００ ２ꎬＫＤ＝７ ８８ʃ１ １６１ꎬＲ２＝０ ９６８９)表面ＩｇＤＲ与ＩｇＤ亲和力相近ꎮ２.４㊀重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白、ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ的竞争结合实验㊀不同浓度重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白与１０μｇ/ｍｌＦＩＴＣ￣ＩｇＤ共同孵育ＣＤ４＋Ｔ细胞ꎬ流式细胞仪检测ＦＩＴＣ荧光强度ꎮ结果显示随蛋白浓度增加ꎬ细胞表面ＦＩＴＣ强度逐渐减弱ꎬ提示重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白浓度依赖性地降低了ＩｇＤ与ＩｇＤＲ的结合ꎮ根据ＦＩＴＣ荧光强度的变化绘制重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白针对ＩｇＤ/ＩｇＤＲ结合的抑制曲线(图１０)ꎬ分别计算ＩＣ５０值ꎬ结果显示ꎬ重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白(ＩＣ５０＝６ ９２７ꎬＬｏｇＩＣ５０＝０ ８４０５ʃ０ ０７７８９ꎬＲ２＝０ ８９３４)可竞争性结合ＩｇＤＲꎮ３㊀讨论㊀㊀人ＩｇＤ是由两条相同的轻链和重链组成具有Ｉｇ超家族特征的可变区(Ｖ)和恒定区(Ｃ)[５]ꎬ其Ｃδ３段由于部分脯氨酸残基缺失以及Ｎ端两个糖基化位点而区别于其他Ｉｇꎬ正是这种结构导致ＩｇＤ的特殊生物学特性[６]ꎮＩｇＤ的两个Ｆａｂ片段主要位于Ｆｃ片段两侧ꎬ由于半延伸铰链的灵活性ꎬＦａｂ可以围绕Ｆｃ片段自由旋转ꎬ因此能在较低浓度下促进抗原图９㊀ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞㊁Ｊｕｒｋａｔ细胞㊁ＭＯＬＴ￣４细胞上ＩｇＤＲ结合的饱和曲线Ａ:ＣＤ４＋Ｔ细胞ꎻＢ:Ｊｕｒｋａｔ细胞ꎻＣ:ＭＯＬＴ￣４细胞图１０㊀ＣＤ４＋Ｔ细胞上ＩｇＤＲ的竞争结合实验结合[７]ꎮ㊀㊀自身免疫性疾病是由于对自身抗原失去免疫耐受而引发的一种慢性疾病ꎬ表现为一种可能涉及宿主体内多个器官的异质性疾病群[８]ꎮ遗传易感性和环境诱因使Ｔ细胞逃避中枢和外周耐受性ꎬ对自身抗原产生自激反应ꎬ抵抗自身抗原的Ｔ细胞过度增殖而导致器官损伤[９]ꎮ临床显示ꎬ自身免疫性疾病患者血液中分泌型ＩｇＤ(ｓＩｇＤ)水平较高ꎬ如:ＲＡ㊁ＳＬＥ等[３]ꎮＮｇｕｙｅｎｅｔａｌ[１０]研究认为ꎬ抗ＩｇＤ抗体可以调节人固有和适应性细胞因子反应ꎬ以抗ＩｇＤ为靶点可能在自身免疫性疾病治疗中有一定的应用价值ꎮＴ细胞上ＩｇＤＲ交联可以抑制Ｔ细胞凋亡ꎬ且ＩｇＤＲ能够促进同源Ｔ细胞和初始Ｂ细胞间免疫突触的形成ꎬ增加抗原呈递和抗体产生ꎮＲＡ是一种炎症自身免疫性疾病ꎬ抑制Ｔ细胞过度活化被认为是ＲＡ的潜在临床治疗方法[１１]ꎮ研究[３ꎬ１２]显示ꎬ相比健康对照者ꎬＩｇＤ水平及ＩｇＤＲ的表达在ＲＡ患者中更高ꎬ且ＩｇＤ可诱导ＲＡ患者Ｔ细胞异常活化ꎮＩｇＤ也可促进健康人ＣＤ４＋Ｔ细胞增殖与活化[１３]和Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ㊁ＭＯＬＴ￣４的异常增殖ꎮ以上结果提示在自身免疫性疾病中Ｔ细胞处于过度活化状态ꎬ异常升高的ＩｇＤ和ＩｇＤＲ水平可能在Ｔ细胞异常增殖与活化过程中扮演重要角色ꎬ而ＩｇＤ￣ＩｇＤＲ可能成为ＩｇＤ水平升高的自身免疫性疾病治疗的新靶点ꎮ㊀㊀课题组在蛋白构建过程中ꎬ尝试了三种ＩｇＤ片段的重组:①全长ＩｇＤꎬ由于全长ＩｇＤ包含了ＩｇＤ的功能域与结合域ꎬ故表现出与ＩｇＤ相近的功能ꎬ未能起到阻断ＩｇＤ的促增殖作用ꎻ②ＩｇＤ￣Ｆｃ片段ꎬ去除了ＩｇＤ的Ｆａｂ段ꎬ仍未起到阻断ＩｇＤ功能的作用ꎬ提示ＩｇＤ￣Ｆｃ中包含了ＩｇＤ的功能域及结合域ꎻ③ＩｇＤ重链ＣＨ２￣ＣＨ３结构域ꎬ成功阻断了ＩｇＤ的促增殖作用ꎮ综上ꎬ经蛋白活性筛选ꎬ确定了ＩｇＤ￣ＣＨ２￣ＣＨ３重链结构域才是有药理活性的理想ＩｇＤ片段ꎮ本实验以ＩｇＤ￣ＩｇＤＲ为靶点ꎬ成功扩增出含人ＩｇＤ重链ＣＨ２￣ＣＨ３段结构域的基因片段ꎬ构建了含有该段基因的克隆及原核表达载体ꎬ并进行原核蛋白表达和层析纯化ꎬ制备出重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白ꎮ与分离天然来源和化学合成相比ꎬ在大肠杆菌中重组表达是一种更经济有效的大规模生产重组蛋白的方法[１４]ꎮ本实验采用低诱导温度(２０ħ)和低ＩＰＴＧ浓度(０ ４ｍｍｏｌ/Ｌ)ꎬ通过减慢蛋白合成速率ꎬ增加蛋白正确折叠ꎬ为重组蛋白的正确表达提供了更有利的条件ꎮｐＥＴ载体系统是一种能高效表达重组蛋白的载体蛋白ꎬ具有高度特异性和稳定性ꎬ在外源基因的原核表达中具有广泛的应用价值ꎮ㊀㊀本实验检测了ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ和ＭＯＬＴ￣４表面ＩｇＤＲ的表达情况ꎬ进行ＩｇＤ与ＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株Ｊｕｒｋａｔ和ＭＯＬＴ￣４表面ＩｇＤＲ的亲和力比较ꎬ以及重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白与ＣＤ４＋Ｔ细胞表面ＩｇＤＲ的竞争结合比较ꎮ结果表明ꎬＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面均有ＩｇＤＲ表达ꎬＣＤ４＋Ｔ细胞及Ｔ淋巴瘤细胞株表面Ｉｇ￣ＤＲ与ＩｇＤ亲和力相近ꎬ重组人ＩｇＤ￣Ｆｃ片段蛋白可以竞争性结合ＩｇＤＲꎬ浓度依赖性地降低ＩｇＤ与ＩｇＤＲ的结合ꎬ阻断ＩｇＤ￣ＩｇＤＲ通路ꎬ抑制ＩｇＤ诱导的Ｔ细胞过度活化ꎬ为进一步研发针对高水平ＩｇＤ的自身免疫性疾病的新型生物制剂奠定了实验基础ꎮ参考文献[１]㊀ＸｕＢꎬＷａｎｇＪꎬＺｈａｎｇＭꎬｅｔａｌ.Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆｉｍｍｕｎｏ￣ｇｌｏｂｕｌｉｎＤｉｎｃａｔｔｌｅ(Ｂｏｓｔａｕｒｕｓ)ꎬａｌａｒｇｅｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｅｄｕｎｇｕｌａｔｅ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１２ꎬ７(９):ｅ４４７１９.[２]㊀陈恒石ꎬ吴育晶ꎬ黄㊀琼ꎬ等.流式细胞术检测ＩｇＤ与ＩｇＤ受体结合实验方法的建立[Ｊ].安徽医科大学学报ꎬ２０１６ꎬ５１(８):１１０５－１０.[３]㊀ＷｕＹＪꎬＣｈｅｎＷＳꎬＣｈｅｎＨＳꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤＦｃｒｅｃｅｐｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｏｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ￣ｌｉｋｅｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓｆｒｏｍｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｈｅｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎ[Ｊ].ＡｃｔａＰｈａｒｍａｃｏｌＳｉｎꎬ２０１７ꎬ３８(１１):１４６６－７４.[４]㊀ＷｕＹＪꎬＣｈｅｎＨＳꎬＣｈｅｎＷＳꎬｅｔａｌ.ＣＰ￣２５ａｔｔｅｎｕａｔｅｓｔｈｅａｃｔｉ￣ｖａｔｉｏｎｏｆＣＤ４(＋)ＴｃｅｌｌｓｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｗｉｔｈｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤｉｎｈｕｍａｎ[Ｊ].ＦｒｏｎｔＰｈａｒｍａｃｏｌꎬ２０１８ꎬ９:４.[５]㊀ＢｒｅｚｓｋｉＲＪꎬＭｏｎｒｏｅＪＧ.Ｂ￣ｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒ[Ｊ].ＡｄｖＥｘｐＭｅｄＢｉｏｌꎬ２００８ꎬ６４０:１２－２１.[６]㊀陈文生ꎬ黄㊀琼ꎬ吴育晶ꎬ等.ＩｇＤ在自身免疫病中作用的研究进展[Ｊ].中国药理学通报ꎬ２０１４ꎬ３０(３):２９７－３００. [７]㊀ＣｈｅｎＫꎬＣｅｒｕｔｔｉＡ.Ｎｅｗｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｔｈｅｅｎｉｇｍａｏｆｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕ￣ｌｉｎＤ[Ｊ].ＩｍｍｕｎｏｌＲｅｖꎬ２０１０ꎬ２３７(１):１６０－７９. [８]㊀ＡｎａｙａＪＭ.Ｃｏｍｍｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓ(ｔｈｅａｕ￣ｔｏｉｍｍｕｎｅｔａｕｔｏｌｏｇｙ)[Ｊ].ＡｕｔｏｉｍｍｕｎＲｅｖꎬ２０１２ꎬ１１(１１):７８１－８４.[９]㊀ＫｈａｎＵꎬＧｈａｚａｎｆａｒＨ.Ｔｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓａｎｄａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ[Ｊ].ＩｎｔＲｅｖＣｅｌｌＭｏｌＢｉｏｌꎬ２０１８ꎬ３４１:１２５－６８.[１０]ＮｇｕｙｅｎＴＧꎬＬｉｔｔｌｅＣＢꎬＹｅｎｓｏｎＶＭꎬｅｔａｌ.Ａｎｔｉ￣ＩｇＤａｎｔｉｂｏｄｙａｔｔｅｎｕａｔｅｓｃｏｌｌａｇｅｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｂｙｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙｄｅｐｌｅｔｉｎｇｍａｔｕｒｅＢ￣ｃｅｌｌｓａｎｄｐｒｏｍｏｔｉｎｇｉｍｍｕｎｅｔｏｌｅｒａｎｃｅ[Ｊ].ＪＡｕｔｏｉｍｍｕｎꎬ２０１０ꎬ３５(１):８６－９７.[１１]ＤｕｌｉｃＳꎬＶａｓａｒｈｅｌｙｉＺꎬＳａｖａＦꎬｅｔａｌ.Ｔ￣ｃｅｌｌｓｕｂｓｅｔｓｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｐａｔｉｅｎｔｓｏｎｌｏｎｇ￣ｔｅｒｍａｎｔｉ￣ＴＮＦｏｒＩＬ￣６ｒｅｃｅｐｔｏｒｂｌｏｃｋｅｒｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].ＭｅｄｉａｔｏｒｓＩｎｆｌａｍｍꎬ２０１７ꎬ２０１７:６８９４３７４. [１２]ＷｕＹꎬＣｈｅｎＷꎬＣｈｅｎＨꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｅｌｅｖａｔｅｄｓｅｃｒｅｔｅｄｉｍｍｕｎｏ￣ｇｌｏｂｕｌｉｎＤｅｎｈａｎｃｅｄｔｈｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓｉｎｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１６ꎬ１１(１):ｅ１４７７８８.[１３]董小洁ꎬ吴育晶ꎬ张㊀静ꎬ等.ＩｇＤ对人外周血Ｔｈ１/Ｔｈ２㊁Ｔｈ１７/Ｔｒｅｇ亚群及核转录因子的影响[Ｊ].中国临床药理学与治疗学ꎬ２０１８ꎬ２３(５):４８８－９７.[１４]ＬｉＹ.ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｅｐｔｉｄｅｓｉｎＥｓｃｈｅ￣ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ:ａｒｅｖｉｅｗ[Ｊ].ＰｒｏｔｅｉｎＥｘｐｒＰｕｒｉｆꎬ２０１１ꎬ８０(２):２６０－７.ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤ￣ＦｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎＺｈａｎｇＪｉｎｇꎬＣｈｅｎＷｅｎｓｈｅｎｇꎬＨｕＸｉａｏｘｉꎬｅｔａｌ(ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙꎬＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｎｔｉ￣ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｎｄＩｍｍｕｎｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎꎬＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＣｅｎｔｅｒｏｆＡｎｔｉ￣ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙａｎｄＩｍｍｕｎｅＭｅｄｉｃｉｎｅｓꎬＨｅｆｅｉ㊀２３００３２)Ａｂｓｔｒａｃｔ㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｒｅｃｏｍｂｉｎｅｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＤ￣Ｆｃ(ＩｇＤ￣Ｆｃ)ｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎꎬｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓ￣ｓｉｏｎｏｆＩｇＤｒｅｃｅｐｔｏｒ(ＩｇＤＲ)ｏｎＣＤ４＋ＴｃｅｌｌｓｏｆｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓａｎｄＪｕｒｋａｔꎬＭＯＬＴ￣４ＴｌｙｍｐｈｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓꎬａｎｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆＩｇＤ￣ＦｃｃｏｍｐｅｔｉｎｇｗｉｔｈＩｇＤｔｏｂｉｎｄｔｏＩｇＤＲｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆＣＤ４＋Ｔｃｅｌｌｓ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＩｇＤ￣ＦｃｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙＰＣＲｍｅｔｈｏｄꎬａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＩｇＤ￣Ｆｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ.ＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩｇＤＲｏｎＣＤ４＋ＴｃｅｌｌｓｏｆｈｅａｌｔｈｙｃｏｎｔｒｏｌｓａｎｄＪｕｒｋａｔꎬＭＯＬＴ￣４ＴｌｙｍｐｈｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓꎬａｎｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆＩｇＤ￣ＦｃｃｏｍｐｅｔｉｎｇｗｉｔｈＩｇＤｔｏｂｉｎｄｔｏＩｇＤＲｏｎＣＤ４＋Ｔｃｅｌｌｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀Ｔｈｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓ￣ｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＥＴ２８ａ(＋)/ＩｇＤ￣ＦｃｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄꎬａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＩｇＤ￣ＦｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄꎬｔｈｅａｆｆｉｎｉｔｙｏｆＩｇＤｂｉｎｄｉｎｇｔｏＩｇＤＲｏｎｔｈｅｓｕｒｆａｃｅｏｆＣＤ４＋ＴｃｅｌｌｓａｎｄＴｌｙｍｐｈｏ￣ｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓｗａｓｓｉｍｉｌａｒꎬＩｇＤ￣ＦｃｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｃｏｕｌｄｃｏｍｐｅｔｉｎｇｗｉｔｈＩｇＤｔｏｂｉｎｄｉｎｇｗｉｔｈＩｇＤＲ.Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ㊀ＴｈｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＩｇＤ￣ＦｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｉｓｍａｔｕｒｅａｎｄｓｔａｂｌｅꎬｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＩｇＤ￣ＦｃｆｒａｇｍｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｃａｎｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｌｙｂｌｏｃｋＩｇＤｂｉｎｄｉｎｇｔｏＩｇＤＲꎬａｎｄｍａｙｂｅｃｏｍｅａｎｏｖｅｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔｆｏｒａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓｗｉｔｈｅｌｅｖａｔｅｄＩｇＤｌｅｖｅｌｓ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ㊀ｉｍｍｕｎｏｇｌｕｂｌｉｎＤꎻＩｇＤｒｅｃｅｐｔｏｒꎻａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅｓꎻｐｒｏｔｅｉｎｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ。