EDU染色

EDU检测细胞增殖

对递减，利用流式细胞仪在４８８ｎｍ激发光和荧光检测通道可对其进行分析。Ｂｒｄｕ检测法
Ｂｒｄｕ中文全名５－溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在ＤＮＡ合成期（Ｓ期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Ｂｒｄｕ单克隆抗体，ＩＣＣ染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。
ＭＴＴ检测法
ＭＴＴ检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的ＭＴＴ分解成兰紫色的甲（Ｆｏｒｍａｚａｎ），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比。
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（ＣＦＳＥ）检测法
C10311 Cell-LightTM EdU 流式细胞仪检测试剂盒 Tel: 028-81391685、13679094941
Ribobio
Cell-Light™ EdU 动物实验 3) 在组织水平上EdU对增殖细胞的标记
Ribobio
EdU适用于人、小鼠、大鼠等活体注射，全面分析组织或器官的细胞增殖情况，适用于石蜡或冰冻组织切片检测，对活体无副作用。
Ribobio
Cell-Light™ EdU 试验流程
检测方法简便，只需三步即可分析细胞增殖数据： 1）EdU孵育样品； 2）细胞固定化； 3）Apollo®染料检测EdU。
Tips:
1.建议使用50μM EdU培养基孵育，但您可以在预实验时根据细胞类型和实验目的,以一系列浓度(10~100μM)的EdU培养基孵育进行优化，细胞能太密，一般60％－70％。 2.不同细胞类型之间有一定差异，可以先做一个时间梯度，找出合适的孵育时间。 3.由于细胞之间的差异，最佳EdU的终浓度和培养时间可根据具体实验调整,(50μM EdU 培养基用细胞培养液以1：2000的比例稀释 EdU溶液)。 4. EdU孵育时间>24小时宜采用较低浓度，而EdU孵育时间<45分钟宜采用较高浓度。检测和DNA染色草种、孵育注意避光。 6.固定好的细胞，不染色，在4℃可存放1个月。组织切片如暂不检测就不要脱蜡。

瑞博EDU试剂盒C使用说明

表4配套染料的相关波长信息
C00031
Apollo®567
550nm
565nm
Cy3
C00041
Apollo®643
653nm
667nm
Cቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ5
C00033
Hoechst 33342
350nm
461nm
DAPI
注：1）荧光显微镜宜采用Hoechst 33342 和 Apollo® 567进行检测DNA复制活性；
•渗透剂(含% Triton X-100的PBS)
•甘氨酸溶液(2 mg/mL)（去离子水配置）
•细胞固定液(即含4% 多聚甲醛的PBS)
• 96/24/12/6孔培养板
注意：请使用一次性手套，废液请妥善处理。
实验参考
表1EdU培养基及染色反应液的使用量参考
EdU培养基
100 μl
150 μl
200 μl
300 μl
500 μl
2 mL
染色反应液
100 μl
150 μl
200 μl
300 μl
500 μl
2 mL
注：1）*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；2）悬浮细胞EdU用量请按培养体积而定。
表2EdU孵育时间取决于细胞生长速度
细胞系
细胞周期
~30min
~3h
瑞博EDU试剂盒C使用说明
产品简介
试剂盒应用EdU直接测定细胞内DNA的变化。EdU（5-Ethynyl -2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。

EdU法细胞增殖检测——Brdu方法的革命性突破

EdU法细胞增殖检测——Brdu方法的革命性突破细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。

其中EdU检测方法是zui新的细胞增殖检测方法。

一、什么是细胞增殖呢？细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。

单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。

多细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的细胞，用来补充体内衰老或死亡的细胞。

二、细胞增殖的意义和方式意义：细胞增殖是生活细胞的重要生理功能之一，是生物体的重要生命特征。

细胞的增殖是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。

方式：真核生物的分裂依据过程不同有三种方式，有有丝分裂，无丝分裂，减数分裂。

其中有丝分裂是人、动物、植物、真菌等一切真核生物中的一种zui为普遍的分裂方式，是真核细胞增殖的主要方式。

减数分裂是生殖细胞形成时的一种特殊的有丝分裂。

三、关于EdU检测方法EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。

与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。

EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象。

细胞增殖伴随着多细胞生物生命体运作的一生，越来越多的研究者们已经把目光集中到了细胞增殖检测，关于细胞增殖检测的方法也在不断更新。

那么到目前为止，研究细胞增殖有哪些手段呢？EdU法检测试剂盒是Brdu方法的革命性突破。

EdU（5-溴-2-脱氧尿嘧啶）试剂盒是一种嘧啶类似物，可以在DNA合成期整合入DNA双链。

通过以上原理图的对比，大家不难发现，EdU法检测细胞增殖，无须抗体，无变性步骤，保持细胞形态和DNA完整性，是一种简单，可靠，省事的创新方法。

BrdU染色原理和步骤

通常在第一种抗体呈色后，再经1%戊二醛固定5～ 10min，重复染色程序，均可获得较满意的染色结果，分裂细胞核呈棕褐色；显示其它抗原用ALP标记抗体，则细胞浆为红色（FR）或蓝色（FB）
操作步骤（1）
（1）细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35 mm培养皿中（内放置一盖玻片），培养1 d，用含0.4％FBS培养液同步化3 d，使绝大多数细胞处于G0期。（2）加入BrdU（储液：1.0 mg/ml,终浓度为0.03 μg/ml），37℃，孵育40min。（3）弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。（4）甲醇/醋酸固du单克隆抗体， ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性Brdu存在，所以Brdu应用较广
掺入双链DNA内的Brdu，以氢链与腺嘌呤结合，不能直接与抗Brdu抗体反应，需经解链使Brdu暴露方能被染色。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等，使 DNA双链部分单链化，抗Brdu小鼠单克隆抗体与增殖细胞核内的Brdu结合，再经酶标抗小鼠IgG抗体孵育、呈色，显示进入S期细胞的情况。
（5）经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2 -甲醇 30 min灭活内源性氧化酶。（6）5％正常兔血清封闭。（7）甲酰胺100℃，5 min变性核酸。（8）冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU 单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。（9）按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及 BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
BrdU staining protocol
Materials and reagents

EDU实验步骤

EdU细胞增殖(细胞成像)EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，通过基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及药物的细胞增殖筛选实验。

荧光显微镜检测方法(以96孔板，A549贴壁细胞为例)细胞培养取对数生长期细胞，以每孔4×103~1×105细胞接种于96孔板中，培养至正常生长阶段。

药物处理(可选)客户可以根据实验需要进行各种药物处理。

EdU标记1.1 用细胞培养基按1000：1的比例稀释EdU溶液(试剂A)，制备适量50μM EdU培养基；注：1)EdU浓度与孵育时间相关，短时间孵育(<2h)宜采用高浓度(10~50 μM)，长时间孵育(>24h)宜采用低浓度(1~10μM)；2)如果需配置10μM EdU培养基，需调整为5000：1稀释比例；3)配置好的培养基的保存时间取决于培养基的性质。

注：1)*表示贴壁细胞通常采用的培养容器，EdU培养基与染色反应液用量以覆盖细胞为宜；2)悬浮细胞EdU用量依据培养体积而定。

1.2 每孔加入100μL 50μM EdU培养基孵育2小时，弃培养基；注：1)最佳孵育时间与细胞周期相关(表2)，大多数细胞系均可采用2小时孵育时间；2)EdU培养基用量以没过细胞为宜，但需要保证EdU孵育时间内的营养物质持续供给(表1)；1.3 PBS清洗细胞1~2次，每次5分钟。

注：清洗目的是将未渗入DNA的EdU洗脱，清洗方式依据不同的细胞类型而定，贴壁不牢的细胞请降低清洗强度。

注：1)EdU孵育时间取决于细胞周期，一般为细胞周期的1/10至1/5，但大多数细胞系均可采用2h孵育时间。

EDU

EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。

细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。

EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。

超越BrdU传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法需要DNA变性，抗原修复，抗原抗体过夜孵育，操作步骤复杂繁琐。

并且由于BrdU抗体分子较大，嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU 抗体结合，必须先进行DNA变性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但变性的程度可能导致错误结果。

如果变性不充分，会导致BrdU难以暴露，无法检测，而且变性过程从边缘向中间渗透，会导致细胞核DNA的变性不均匀，边缘模糊不清。

如果变性过分，则会导致DNA断裂，甚至降解，导致核染不均一。

另外，不同抗体试剂公司的抗体质量不一致，造成难以确保实验重复性，且容易产生假阳性结果。

图1 BrdU需要DNA变性，但变性过分或没有变性都可能容易导致BrdU结果假阳性与BrdU方法相比，EdU检测方法无需DNA变性，无需抗原修复，无需抗原抗体反应，更简单、更灵敏、更快速、更准确，是细胞增殖检测的最佳选择。

细胞增殖检测方法

细胞增殖检测方法
细胞增殖是指细胞数量的增加。

检测细胞增殖可以通过多种方法，其中常用的方法包括：
1. 细胞计数：使用显微镜观察细胞培养物中的细胞数量，并通过计数来得出细胞增殖情况。

2. 晶紫染色法：晶紫染色可以染色细胞核，通过观察染色后细胞数量的增加来判断细胞增殖情况。

染色后的细胞可以在显微镜下观察，并可以使用图像处理软件进行图像分析。

3. DNA含量分析：细胞增殖时DNA含量也会增加，可以通过荧光染料如荧光素琥珀酰胺（Propidium Iodide）染色，使用流式细胞仪来分析DNA含量。

4. 噻吩蓝染色法（MTT法）：MTT法使用噻吩蓝（MTT）染料可以评估细胞活性和增殖能力。

活细胞将MTT染料转化为紫色的内盐，通过溶解细胞并测量溶液的吸光度来确定细胞增殖情况。

5. 细胞增殖标记物：细胞增殖标记物如脱氧尿苷（BrdU）或5-乙酰基-2'-脱氧尿苷（EdU）可以被细胞吸收并集成到新合成的DNA中。

这样，在染色时可以使用抗-BrdU或抗-EdU抗体染色，并通过观察标记物阳性细胞的数量来评估细胞增殖情况。

以上方法都可以用于检测细胞增殖情况，选择适合实验需求的方法进行研究。

需要注意的是，不同的方法可能具有不同的准确性和敏感性，因此在实验设计和数据分析过程中需要谨慎操作。

抗肿瘤药物筛选——细胞水平实验丨Edu细胞增殖检测

抗肿瘤药物筛选——细胞水平实验丨Edu细胞增殖检测细胞水平的细胞增殖是生物医学领域非常重要的表型，对细胞增殖的检测是检验药物对肿瘤细胞影响的最主要检测手段。

作为细胞水平检测增殖现象的传统方法，cck8比色法，Edu细胞增殖检测在细胞增殖检测中被广泛应用。

一、传统的肿瘤治疗方法1.外科手术治疗2.放射线治疗3.化学药物治疗众所周知，化疗会产生很多不良反应，比如：骨髓抑制(血细胞减少)、胃肠道反应、脱发、发热、皮疹、心脏毒性、肝脏毒性、神经毒性、泌尿道毒性、局部静脉炎、致畸、致突变、致癌等等。

那么持续不断地寻找更好的抗肿瘤药物势在必行。

天然产物在新药及新药先导化合物的发现中起着不可替代的作用，是结构新颖和作用独特的抗肿瘤化合物的重要来源。

美国国立癌症研究所(NCI)从1955年开始从天然产物中筛选抗肿瘤药物。

目前世界上被批准广泛使用的抗肿瘤药物中,50 %以上来源于天然产物。

那么问题来了~如何进行抗肿瘤药物的筛选？以及主要用到哪些实验方法？实际上，抗肿瘤药物的筛选体系复杂，涉及到宏观到微观水平的一系列实验。

在这里小编，就简要梳理一下抗肿瘤筛选的关键流程吧：二、动物水平的筛选流程：三、细胞水平的筛选①抑制肿瘤细胞增殖实验②诱导肿瘤细胞分化实验③诱导肿瘤细胞凋亡实验④抗肿瘤血管生成实验⑤肿瘤多药耐药性逆转实验⑥抗肿瘤侵袭和转移实验⑦诱导肿瘤细胞自噬实验四、抑制肿瘤细胞增殖实验细胞水平检测增殖现象的传统方法主要有：1）cck8比色法；2）Edu细胞增殖检测；1）cck8比色法CCK8是基于WST-8的一种细胞增殖检测方法，WST-8是一种水溶性四唑盐，常用于评估细胞的代谢活性。

在中性pH值及中间电子受体存在的情况下，被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的蓝/紫色甲臜产物（formazan）。

生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。

用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

edu实验解读

EDU实验是一种用于研究细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的技术。

通过EDU实验，可以定量测定细胞增殖速率和细胞周期，还可以研究细胞分化和细胞凋亡等现象。

在EDU实验中，通常会在特定的培养条件下，将标记有EDU的核苷酸引入细胞中，通过与DNA的结合，标记出DNA复制的区域。

随后，通过一系列的固定、洗涤和染色步骤，使用抗体检测出标记的DNA区域，最终通过显微镜观察和图像分析技术，对细胞的增殖情况进行定量分析。

通过EDU实验，可以获得许多有价值的信息，例如细胞增殖速率、细胞周期各时相的长度、细胞分化的方向和程度、细胞凋亡的发生和分布等。

这些信息对于理解细胞生命活动的规律和机制具有重要的意义，对于研究疾病的发生和发展机制、药物研发和癌症治疗等领域也具有广泛的应用价值。

细胞增殖凋亡检验方法

细胞增殖凋亡检验方法细胞增殖和凋亡是细胞生物学中两个重要的过程，对于细胞生长、发育和疾病发展起着关键作用。

因此，研究细胞增殖和凋亡的检验方法对于揭示相关生物学过程以及发现新的治疗靶点具有重要意义。

本文将介绍几种常用的细胞增殖和凋亡检验方法。

一、细胞增殖检验方法1.MTT法MTT法（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四氮唑溴化物）是一种常见的细胞增殖检验法。

MTT可以在活细胞内还原生成紫色的福尔马因酸化物，通过测定细胞活性来评估细胞增殖情况。

该方法的优点是简便、快速、应用广泛，但只能评估细胞整体增殖情况。

2. Bromodeoxyuridine（BrdU）标记法BrdU标记法是一种侵入法，可以评估细胞的DNA合成和增殖。

细胞在培养基中加入BrdU，细胞会将其代入新合成的DNA链中。

然后，可以使用抗BrdU抗体来检测BrdU标记的细胞。

该方法对于细胞周期和增殖动力学的研究非常有用。

标记法EdU标记法是一种新兴的细胞增殖检验方法。

与BrdU类似，EdU也是一种DNA合成的标记物，但是与BrdU相比，EdU标记更加简单快速。

EdU可以通过与荧光染料的偶联来进行检测，对于多通道染色非常适用。

1. Annexin V-FITC/PI染色法Annexin V-FITC/PI染色法是一种常用的细胞凋亡检验方法。

Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂酰丝氨酸的结合蛋白，在凋亡过程中会在细胞表面表达。

PI是一种DNA染料，用于区分凋亡和坏死细胞。

该方法可以通过流式细胞术或荧光显微镜来评估细胞的凋亡程度。

2. DNA Laddering检测法DNA Laddering检测法是一种检测凋亡的传统方法。

在细胞凋亡过程中，核酸会被酶切为200-300bp的碎片，形成明显的DNA阶梯状图案。

该方法通过DNA琼脂糖凝胶电泳来检测DNA断裂情况。

3.TUNEL法TUNEL法（dUTP尾部标记法）是一种直接检测DNA断裂的方法。